DEVELOPMENT OF STRATEGIES FOR OPTIMAL CRYOCONSERVATION OF OOCYTES AND BOVINE EMBRYOS (Q3177057)
Jump to navigation
Jump to search
Project Q3177057 in Spain
| Language | Label | Description | Also known as |
|---|---|---|---|
| English | DEVELOPMENT OF STRATEGIES FOR OPTIMAL CRYOCONSERVATION OF OOCYTES AND BOVINE EMBRYOS |
Project Q3177057 in Spain |
Statements
118,592.1 Euro
0 references
217,800.0 Euro
0 references
54.45 percent
0 references
30 December 2016
0 references
29 June 2021
0 references
UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BARCELONA
0 references
8193
0 references
LA CRIOPRESERVACION DE OVOCITOS Y EMBRIONES ES UNA TECNICA FUNDAMENTAL PARA LA PRESERVACION Y DIFUSION DE LOS RECURSOS GENETICOS ANIMALES. EXISTEN DOS METODOS PARA LA CRIOPRESERVACION: LA CONGELACION LENTA Y LA VITRIFICACION. ESTE ULTIMO ES UN METODO INNOVADOR, RAPIDO Y SENCILLO, ESPECIALMENTE UTIL CUANDO SE TRATA DE OVOCITOS O EMBRIONES PRODUCIDOS IN VITRO. SIN EMBARGO, LA VITRIFICACION TIENE UNA APLICACION PRACTICA LIMITADA EN REPRODUCCION ANIMAL DEBIDO A LA REDUCIDA COMPETENCIA DE DESARROLLO DE LOS OVOCITOS TRAS LA VITRIFICACION O A LA FALTA DE UNA METODOLOGIA ESTANDAR PARA LA VITRIFICACION DE EMBRIONES QUE FACILITE SU APLICACION PRACTICA EN GRANJA. A PESAR DE LOS AVANCES O ESTRATEGIAS QUE SE HAN DESARROLLADO EN LOS ULTIMOS AÑOS PARA ACERCAR LA VITRIFICACION A LAS ESPECIES DE INTERES GANADERO, LA SUPERVIVENCIA OVOCITARIA, EL DESARROLLO DEL EMBRION Y LAS TASAS DE GESTACION OBTENIDAS DESPUES DE LA VITRIFICACION DE OVOCITOS Y EMBRIONES PRODUCIDOS IN VITRO NO SON SATISFACTORIOS PARA LA MAYORIA DE ESPECIES Y AUN NO EXISTE UN PROTOCOLO "OPTIMO" PARA LA VITRICACION DE ESTAS CELULAS. PARA QUE LA VITRIFICACION TENGA EXITO SE REQUIEREN ELEVADAS CONCENTRACIONES DE CRIOPROTECTORES (CPAS) Y ALTAS TASAS DE ENFRIAMIENTO QUE PUEDEN A DAÑAR LAS CELULAS, PROBABLEMENTE DEBIDO A LA TOXICIDAD DE LOS CPAS, AL CHOQUE OSMOTICO O A LA FORMACION DE CRISTALES DE HIELO. PARA EVITARLO, SE REQUIERE DE UN CONOCIMIENTO MAS DETALLADO DE LAS VIAS QUE MOVILIZAN EL AGUA Y LOS CPAS DE FORMA RAPIDA A TRAVES DE LA MEMBRANA PLASMATICA DE OVOCITOS Y EMBRIONES PARA AYUDAR A DISMINUIR ASI EL ESTRES OSMOTICO Y REDUCIR AL MINIMO LOS DAÑOS POR EL ENFRIAMIENTO, CON ESPECIAL ATENCION AL PAPEL DE LAS ACUAPORINAS 3 (AQP3) Y 7 (AQP7). POR OTRA PARTE, LAS PROTEINAS ANTICONGELANTES (AFP) SE HAN UTILIZADO CON EXITO PARA LA VITRIFICACION DE GAMETOS Y EMBRIONES EN ALGUNAS ESPECIES DEBIDO A SU CAPACIDAD PARA INHIBIR EL CRECIMIENTO DEL HIELO, SU RECRISTALIZACION Y LA FUGA DE IONES A TRAVES DE LAS MEMBRANAS, PROTEGIENDO ASI SU MEMBRANA PLASMATICA. POR OTRA PARTE, UN ESTRES TERMICO SUAVE SUBLETAL, ADECUADAMENTE DEFINIDO Y APLICADO DE FORMA APROPIADA ANTES DE LA VITRIFICACION, PODRIA OPTIMIZAR LA CRIOTOLERANCIA DE OVOCITOS Y EMBRIONES A TRAVES DE MECANISMOS DE ADAPTACION, MEJORANDO ASI SU TOLERANCIA AL ESTRES POSTERIOR DE LA VITRIFICACION. ESTE MECANISMO ADAPTATIVO PODRIA ESTAR MEDIADO POR UN AUMENTO EN LA EXPRESION DE PROTEINAS DE ESTRES TERMICO (HSPS) QUE PUEDEN EXPERIMENTALMENTE SER SUMINISTRADAS DE FORMA DIRECTA A OVOCITOS Y EMBRIONES. TENIENDO EN CUENTA QUE SE PUEDEN DESARROLLAR A NIVEL CELULAR EFECTOS SIMILARES DE TERMOTOLERANCIA CON LA EXPOSICION A ESTRES TERMICO Y A ESTRES POR FRIO, ACTUALMENTE NO EXISTEN ESTUDIOS QUE HAYAN ANALIZADO LOS EFECTOS DE UNA EXPOSICION SUBLETAL AL ESTRES POR FRIO EN OVOCITOS Y EMBRIONES DE MAMIFEROS. LA EXPRESION DE LAS PROTEINAS DE ESTRES POR FRIO AUMENTA RAPIDA Y SUSTANCIALMENTE DURANTE UNA HIPOTERMIA LEVE, Y ESO PODRIA SER DETERMINANTE PARA EL DESARROLLO DE LA CRIOTOLERANCIA. LA PRINCIPAL FINALIDAD DE ESTE PROYECTO ES DESARROLLAR ESTRATEGIAS QUE TIENEN COMO OBJETIVO MEJORAR LA CRIOTOLERANCIA DE OVOCITOS BOVINOS MADURADOS IN VITRO O EMBRIONES PRODUCIDOS IN VITRO. PARA ELLO PROPONEMOS TRATAR DE FORMA PREVIA O DURANTE EL PROCESO DE VITRIFICACION A OVOCITOS Y EMBRIONES ESPECIFICAMENTE CON EL ESTUDIO DEL PAPEL DE LAS AQP3 Y AQP7 EN EL TRANSPORTE DE AGUA Y LA PERMEABILIDAD DE CPAS, EL TRATAMIENTO CON AFP, HSP O LA APLICACION DE CICLOS DE ESTRES POR FRIO. (Spanish)
0 references
CRYOPRESERVATION OF OOCYTES AND EMBRYOS IS A FUNDAMENTAL TECHNIQUE FOR THE PRESERVATION AND DIFFUSION OF ANIMAL GENETIC RESOURCES. THERE ARE TWO METHODS FOR CRYOPRESERVATION: SLOW FREEZING AND VITRIFICATION. THIS LAST METHOD IS AN INNOVATIVE, RAPID AND SIMPLE METHOD, ESPECIALLY USEFUL WHEN IT COMES TO OOCYTES OR EMBRYOS PRODUCED IN VITRO. HOWEVER, THE VITRIFICACION HAS A LIMITED PRACTICAL APPLICATION IN ANIMAL REPRODUCTION DUE TO THE REDUCED COMPETENCE OF DEVELOPMENT OF THE OOCYTES AFTER THE VITRIFICATION OR THE LACK OF A STANDARD METHODOLOGY FOR THE VITRIFICATION OF EMBRYOS THAT FACILITATES ITS PRACTICAL APPLICATION IN FARM. DESPITE THE ADVANCES OR STRATEGIES THAT HAVE BEEN DEVELOPED OVER THE LAST FEW YEARS TO BRING THE VITRIFICATION TO THE SPECIES OF LIVESTOCK INTEREST, THE OOCYTE SURVIVAL, THE DEVELOPMENT OF THE EMBRYO AND THE GESTATION RATES OBTAINED AFTER THE VITRIFICATION OF OOCYTES AND EMBRYOS PRODUCED IN VITRO ARE NOT SATISFACTORY FOR MOST SPECIES AND THERE IS STILL NO “OPTIMAL” PROTOCOL FOR THE VITRICATION OF THESE CELLS. HIGH CONCENTRATIONS OF CRYOPROTECTORS (CPAS) AND HIGH COOLING RATES THAT CAN DAMAGE CELLS, PROBABLY DUE TO CPAS TOXICITY, OSMOTIC SHOCK OR ICE CRYSTAL FORMATION ARE REQUIRED FOR VITRIFICATION TO BE SUCCESSFUL. TO AVOID THIS, A MORE DETAILED KNOWLEDGE OF THE PATHWAYS THAT MOBILISE WATER AND CPAS QUICKLY THROUGH THE PLASMA MEMBRANE OF OOCYTES AND EMBRYOS IS REQUIRED TO HELP REDUCE THE OSMOTIC STRESS AND REDUCE THE DAMAGE CAUSED BY COOLING TO THE MINIMUM, WITH PARTICULAR ATTENTION TO THE ROLE OF AQUAPORINS 3 (AQP3) AND 7 (AQP7). ON THE OTHER HAND, ANTIFREEZE PROTEINS (AFP) HAVE BEEN USED SUCCESSFULLY FOR THE VITRIFICATION OF GAMETES AND EMBRYOS IN SOME SPECIES DUE TO THEIR ABILITY TO INHIBIT ICE GROWTH, THEIR RECRISTALISATION AND THE LEAKAGE OF IONS THROUGH THE MEMBRANES, THUS PROTECTING THEIR PLASMA MEMBRANE. ON THE OTHER HAND, A SOFT SUBBLETAL THERMAL STRESS, PROPERLY DEFINED AND PROPERLY APPLIED BEFORE THE VITRIFICATION, COULD OPTIMISE THE CRYOTOLERANCE OF OOCYTES AND EMBRYOS THROUGH MECHANISMS OF ADAPTATION, THUS IMPROVING THEIR TOLERANCE TO THE SUBSEQUENT STRESS OF THE VITRIFICATION. THIS ADAPTIVE MECHANISM COULD BE MEDIATED BY AN INCREASE IN THE EXPRESSION OF THERMAL STRESS PROTEINS (HSPS) THAT CAN BE EXPERIMENTALLY SUPPLIED DIRECTLY TO OOCYTES AND EMBRYOS. GIVEN THAT SIMILAR THERMOTOLERANCE EFFECTS CAN BE DEVELOPED AT CELLULAR LEVEL WITH EXPOSURE TO THERMAL STRESS AND COLD STRESS, THERE ARE CURRENTLY NO STUDIES THAT HAVE ANALYSED THE EFFECTS OF A SUBLETAL EXPOSURE TO COLD STRESS IN OOCYTES AND MAMMALIAN EMBRYOS. EXPRESSION OF STRESS PROTEINS BY COLD INCREASES RAPIDLY AND SUBSTANTIALLY DURING MILD HYPOTHERMIA, AND THAT COULD BE DECISIVE FOR THE DEVELOPMENT OF CRYOTOLERANCE. THE MAIN PURPOSE OF THIS PROJECT IS TO DEVELOP STRATEGIES THAT AIM TO IMPROVE CRYOTOLERANCE OF IN VITRO MATURED BOVINE OOCYTES OR IN VITRO-PRODUCED EMBRYOS. TO THIS END, WE PROPOSE TO TREAT OOCYTES AND EMBRYOS BEFORE OR DURING THE VITRIFICATION PROCESS SPECIFICALLY WITH THE STUDY OF THE ROLE OF AQP3 AND AQP7 IN THE TRANSPORT OF WATER AND CPAS PERMEABILITY, TREATMENT WITH AFP, HSP OR THE APPLICATION OF STRESS CYCLES PER COLD. (English)
12 October 2021
0.7395979445902554
0 references
LA CRYOCONSERVATION DES OVOCYTES ET DES EMBRYONS EST UNE TECHNIQUE FONDAMENTALE POUR LA PRÉSERVATION ET LA DIFFUSION DES RESSOURCES GÉNÉTIQUES ANIMALES. IL EXISTE DEUX MÉTHODES DE CRYOCONSERVATION: GEL ET VITRIFICATION LENTS. CETTE DERNIÈRE MÉTHODE EST UNE MÉTHODE INNOVANTE, RAPIDE ET SIMPLE, PARTICULIÈREMENT UTILE EN CE QUI CONCERNE LES OVOCYTES OU LES EMBRYONS PRODUITS IN VITRO. CEPENDANT, LA VITRIFICACION A UNE APPLICATION PRATIQUE LIMITÉE DANS LA REPRODUCTION ANIMALE EN RAISON DE LA COMPÉTENCE RÉDUITE DU DÉVELOPPEMENT DES OVOCYTES APRÈS LA VITRIFICATION OU DE L’ABSENCE D’UNE MÉTHODOLOGIE STANDARD POUR LA VITRIFICATION DES EMBRYONS QUI FACILITE SON APPLICATION PRATIQUE DANS L’ÉLEVAGE. MALGRÉ LES PROGRÈS OU LES STRATÉGIES QUI ONT ÉTÉ DÉVELOPPÉS AU COURS DES DERNIÈRES ANNÉES POUR APPORTER LA VITRIFICATION AUX ESPÈCES D’INTÉRÊT DU BÉTAIL, LA SURVIE DES OVOCYTES, LE DÉVELOPPEMENT DE L’EMBRYON ET LES TAUX DE GESTATION OBTENUS APRÈS LA VITRIFICATION DES OVOCYTES ET DES EMBRYONS PRODUITS IN VITRO NE SONT PAS SATISFAISANTS POUR LA PLUPART DES ESPÈCES ET IL N’EXISTE TOUJOURS PAS DE PROTOCOLE «OPTIMAL» POUR LA VITRICATION DE CES CELLULES. DES CONCENTRATIONS ÉLEVÉES DE CRYOPROTECTEURS (CPAS) ET DES TAUX DE REFROIDISSEMENT ÉLEVÉS QUI PEUVENT ENDOMMAGER LES CELLULES, PROBABLEMENT EN RAISON DE LA TOXICITÉ DU CPAS, D’UN CHOC OSMOTIQUE OU DE LA FORMATION DE CRISTAUX DE GLACE, SONT NÉCESSAIRES POUR RÉUSSIR LA VITRIFICATION. POUR ÉVITER CELA, UNE CONNAISSANCE PLUS DÉTAILLÉE DES VOIES DE MOBILISATION DE L’EAU ET DES CPAS RAPIDEMENT À TRAVERS LA MEMBRANE PLASMATIQUE DES OVOCYTES ET DES EMBRYONS EST NÉCESSAIRE POUR AIDER À RÉDUIRE LE STRESS OSMOTIQUE ET RÉDUIRE AU MINIMUM LES DOMMAGES CAUSÉS PAR LE REFROIDISSEMENT, EN ACCORDANT UNE ATTENTION PARTICULIÈRE AU RÔLE DES AQUAPORINES 3 (AQP3) ET 7 (AQP7). D’AUTRE PART, LES PROTÉINES ANTIGEL (AFP) ONT ÉTÉ UTILISÉES AVEC SUCCÈS POUR LA VITRIFICATION DES GAMÈTES ET DES EMBRYONS CHEZ CERTAINES ESPÈCES EN RAISON DE LEUR CAPACITÉ À INHIBER LA CROISSANCE DE LA GLACE, DE LEUR RECRISTALISATION ET DE LA FUITE D’IONS À TRAVERS LES MEMBRANES, PROTÉGEANT AINSI LEUR MEMBRANE PLASMATIQUE. D’AUTRE PART, UNE CONTRAINTE THERMIQUE SUBBLÉTALE SOUPLE, BIEN DÉFINIE ET CORRECTEMENT APPLIQUÉE AVANT LA VITRIFICATION, POURRAIT OPTIMISER LA CRYOTOLERANCE DES OVOCYTES ET DES EMBRYONS PAR DES MÉCANISMES D’ADAPTATION, AMÉLIORANT AINSI LEUR TOLÉRANCE AU STRESS ULTÉRIEUR DE LA VITRIFICATION. CE MÉCANISME ADAPTATIF POURRAIT ÊTRE MÉDIÉ PAR UNE AUGMENTATION DE L’EXPRESSION DES PROTÉINES DE STRESS THERMIQUE (HSPS) QUI PEUVENT ÊTRE FOURNIES EXPÉRIMENTALEMENT DIRECTEMENT AUX OVOCYTES ET AUX EMBRYONS. ÉTANT DONNÉ QUE DES EFFETS SIMILAIRES DE THERMOTOLÉRANCE PEUVENT ÊTRE DÉVELOPPÉS AU NIVEAU CELLULAIRE AVEC L’EXPOSITION AU STRESS THERMIQUE ET AU STRESS AU FROID, AUCUNE ÉTUDE N’A ANALYSÉ LES EFFETS D’UNE EXPOSITION SUBLÉTALE AU STRESS AU FROID CHEZ LES OVOCYTES ET LES EMBRYONS DE MAMMIFÈRES. L’EXPRESSION DES PROTÉINES DE STRESS PAR LE FROID AUGMENTE RAPIDEMENT ET CONSIDÉRABLEMENT PENDANT UNE HYPOTHERMIE LÉGÈRE, CE QUI POURRAIT ÊTRE DÉTERMINANT POUR LE DÉVELOPPEMENT DE LA CRYOTOLERANCE. L’OBJECTIF PRINCIPAL DE CE PROJET EST DE DÉVELOPPER DES STRATÉGIES VISANT À AMÉLIORER LA CRYOTOLERANCE DES OVOCYTES BOVINS MATURES IN VITRO OU DES EMBRYONS PRODUITS IN VITRO. À CETTE FIN, NOUS PROPOSONS DE TRAITER LES OVOCYTES ET LES EMBRYONS AVANT OU PENDANT LE PROCESSUS DE VITRIFICATION EN PARTICULIER AVEC L’ÉTUDE DU RÔLE DE L’AQP3 ET DE L’AQP7 DANS LE TRANSPORT DE L’EAU ET DE LA PERMÉABILITÉ CPAS, LE TRAITEMENT PAR AFP, HSP OU L’APPLICATION DE CYCLES DE STRESS PAR FROID. (French)
4 December 2021
0 references
DIE KRYOKONSERVIERUNG VON EIZELLEN UND EMBRYONEN IST EINE GRUNDLEGENDE TECHNIK ZUR ERHALTUNG UND VERBREITUNG TIERGENETISCHER RESSOURCEN. ES GIBT ZWEI METHODEN ZUR KRYOKONSERVIERUNG: LANGSAMES EINFRIEREN UND VERGLASUNG. DIESE LETZTE METHODE IST EINE INNOVATIVE, SCHNELLE UND EINFACHE METHODE, BESONDERS NÜTZLICH, WENN ES UM EIZELLEN ODER EMBRYONEN IN VITRO PRODUZIERT. DIE VITRIFICACION HAT JEDOCH AUFGRUND DER GERINGEREN KOMPETENZ FÜR DIE ENTWICKLUNG DER EIZELLEN NACH DER VERGLASUNG ODER DES FEHLENS EINER STANDARDMETHODIK FÜR DIE VERGLASUNG VON EMBRYONEN EINE BEGRENZTE PRAKTISCHE ANWENDUNG IN DER TIERREPRODUKTION, DIE IHRE PRAKTISCHE ANWENDUNG IM BETRIEB ERLEICHTERT. TROTZ DER FORTSCHRITTE ODER STRATEGIEN, DIE IN DEN LETZTEN JAHREN ENTWICKELT WURDEN, UM DIE VITRIFIZIERUNG ZU DEN TIERARTEN ZU BRINGEN, SIND DAS ÜBERLEBEN DER OOZYTEN, DIE ENTWICKLUNG DES EMBRYOS UND DIE GESTATIONSRATEN, DIE NACH DER VITRIFIZIERUNG VON IN VITRO ERZEUGTEN EIZELLEN UND EMBRYONEN ERZIELT WURDEN, FÜR DIE MEISTEN ARTEN NICHT ZUFRIEDEN STELLEND UND ES GIBT NOCH KEIN „OPTIMALES“ PROTOKOLL FÜR DIE VITRICATION DIESER ZELLEN. HOHE KONZENTRATIONEN AN KRYOPROTEKTOREN (CPAS) UND HOHE KÜHLRATEN, DIE ZELLEN BESCHÄDIGEN KÖNNEN, SIND WAHRSCHEINLICH AUFGRUND DER CPAS-TOXIZITÄT, DES OSMOTISCHEN SCHOCKS ODER DER EISKRISTALLBILDUNG ERFORDERLICH, UM ERFOLGREICH ZU SEIN. UM DIES ZU VERMEIDEN, IST EINE DETAILLIERTERE KENNTNIS DER PFADE ERFORDERLICH, DIE WASSER UND CPAS SCHNELL DURCH DIE PLASMAMEMBRAN VON EIZELLEN UND EMBRYONEN MOBILISIEREN, UM DEN OSMOTISCHEN STRESS ZU REDUZIEREN UND DIE DURCH DIE KÜHLUNG VERURSACHTEN SCHÄDEN AUF EIN MINIMUM ZU REDUZIEREN, WOBEI BESONDERS AUF DIE ROLLE DER AQUAPORINE 3 (AQP3) UND 7 (AQP7) ZU ACHTEN IST. ANDERERSEITS WURDEN FROSTSCHUTZPROTEINE (AFP) IN EINIGEN ARTEN ERFOLGREICH ZUR VERGLASUNG VON GAMETEN UND EMBRYONEN EINGESETZT, DA SIE DAS EISWACHSTUM, IHRE RECRISTALISATION UND DAS AUSTRETEN VON IONEN DURCH DIE MEMBRANEN HEMMEN UND SO IHRE PLASMAMEMBRAN SCHÜTZEN. ANDERERSEITS KÖNNTE EIN VOR DER VERGLASUNG RICHTIG DEFINIERTER UND RICHTIG AUFGETRAGENER SUBBLETAL-THERMOSTRESS DIE KRYOTOLERANCE VON EIZELLEN UND EMBRYONEN DURCH ANPASSUNGSMECHANISMEN OPTIMIEREN UND SO IHRE TOLERANZ GEGENÜBER DER ANSCHLIESSENDEN BEANSPRUCHUNG DER VITRIFIKATION VERBESSERN. DIESER ADAPTIVE MECHANISMUS KÖNNTE DURCH EINE ZUNAHME DER EXPRESSION VON THERMISCHEN STRESSPROTEINEN (HSPS) VERMITTELT WERDEN, DIE EXPERIMENTELL DIREKT AN EIZELLEN UND EMBRYONEN GELIEFERT WERDEN KÖNNEN. ANGESICHTS DER TATSACHE, DASS ÄHNLICHE THERMOTOLERANZEFFEKTE AUF ZELLULÄRER EBENE MIT EXPOSITION GEGENÜBER THERMISCHEM STRESS UND KÄLTESTRESS ENTWICKELT WERDEN KÖNNEN, GIBT ES DERZEIT KEINE STUDIEN, DIE DIE AUSWIRKUNGEN EINER SUBLETALEN EXPOSITION GEGENÜBER KÄLTEBELASTUNG BEI OOZYTEN UND SÄUGETIEREMBRYONEN ANALYSIERT HABEN. DIE EXPRESSION VON STRESSPROTEINEN DURCH KÄLTE NIMMT BEI MILDER HYPOTHERMIE SCHNELL UND DEUTLICH ZU, UND DAS KÖNNTE ENTSCHEIDEND FÜR DIE ENTWICKLUNG VON CRYOTOLERANCE SEIN. HAUPTZIEL DIESES PROJEKTS IST DIE ENTWICKLUNG VON STRATEGIEN ZUR VERBESSERUNG DER CRYOTOLERANCE VON IN-VITRO GEREIFTEN RINDEROZYTEN ODER IN-VITRO-PRODUZIERTEN EMBRYONEN. ZU DIESEM ZWECK SCHLAGEN WIR VOR ODER WÄHREND DES VITRIFIZIERUNGSPROZESSES VOR ODER WÄHREND DES VITRIFIZIERUNGSPROZESSES VOR ODER WÄHREND DES VITRIFIZIERUNGSPROZESSES DIE BEHANDLUNG VON EIZELLEN UND EMBRYONEN VOR, INSBESONDERE MIT DER UNTERSUCHUNG DER ROLLE VON AQP3 UND AQP7 BEIM TRANSPORT VON WASSER UND CPAS-DURCHLÄSSIGKEIT, DER BEHANDLUNG MIT AFP, HSP ODER DER ANWENDUNG VON STRESSZYKLEN PRO KÄLTE. (German)
9 December 2021
0 references
CRYOPRESERVATIE VAN OÖCYTEN EN EMBRYO’S IS EEN FUNDAMENTELE TECHNIEK VOOR HET BEHOUD EN DE VERSPREIDING VAN DIERLIJKE GENETISCHE HULPBRONNEN. ER ZIJN TWEE METHODEN VOOR CRYOPRESERVATION: LANGZAME BEVRIEZING EN VERGLAZING. DEZE LAATSTE METHODE IS EEN INNOVATIEVE, SNELLE EN EENVOUDIGE METHODE, VOORAL HANDIG ALS HET GAAT OM OÖCYTEN OF EMBRYO’S DIE IN VITRO WORDEN GEPRODUCEERD. DE VITRIFICACIE HEEFT ECHTER EEN BEPERKTE PRAKTISCHE TOEPASSING BIJ DE VOORTPLANTING VAN DIEREN ALS GEVOLG VAN DE VERMINDERDE COMPETENTIE VAN DE ONTWIKKELING VAN DE OÖCYTEN NA DE VERGLAZING OF HET ONTBREKEN VAN EEN STANDAARDMETHODE VOOR DE VERGLAZING VAN EMBRYO’S DIE DE PRAKTISCHE TOEPASSING ERVAN OP HET BEDRIJF VERGEMAKKELIJKT. ONDANKS DE VOORUITGANG OF STRATEGIEËN DIE DE AFGELOPEN JAREN ZIJN ONTWIKKELD OM DE VERGLAZING NAAR DE DIERSOORT TE BRENGEN, ZIJN DE OVERLEVING VAN OÖCYTEN, DE ONTWIKKELING VAN HET EMBRYO EN DE DRACHTPERCENTAGES DIE NA DE VERGLAZING VAN IN VITRO GEPRODUCEERDE OÖCYTEN EN EMBRYO’S ZIJN VERKREGEN, VOOR DE MEESTE SOORTEN NIET BEVREDIGEND EN IS ER NOG STEEDS GEEN „OPTIMAAL” PROTOCOL VOOR DE VITRICATING VAN DEZE CELLEN. HOGE CONCENTRATIES VAN CRYOPROTECTORS (CPAS) EN HOGE KOELSNELHEDEN DIE CELLEN KUNNEN BESCHADIGEN, WAARSCHIJNLIJK ALS GEVOLG VAN CPAS-TOXICITEIT, OSMOTISCHE SCHOK OF IJSKRISTALVORMING ZIJN VEREIST VOOR EEN SUCCESVOLLE VERGLAZING. OM DIT TE VOORKOMEN, IS EEN MEER GEDETAILLEERDE KENNIS VAN DE ROUTES DIE WATER EN CPAS SNEL MOBILISEREN DOOR HET PLASMAMEMBRAAN VAN OÖCYTEN EN EMBRYO’S VEREIST OM DE OSMOTISCHE STRESS TE HELPEN VERMINDEREN EN DE SCHADE DIE WORDT VEROORZAAKT DOOR AFKOELING TOT HET MINIMUM TE BEPERKEN, MET BIJZONDERE AANDACHT VOOR DE ROL VAN AQUAPORINES 3 (AQP3) EN 7 (AQP7). ANDERZIJDS ZIJN ANTIVRIESEIWITTEN (AFP) MET SUCCES GEBRUIKT VOOR DE VERGLAZING VAN GAMETEN EN EMBRYO’S IN SOMMIGE SOORTEN VANWEGE HUN VERMOGEN OM IJSGROEI, HUN RECRISTALISATIE EN DE LEKKAGE VAN IONEN DOOR DE MEMBRANEN TE REMMEN, WAARDOOR HUN PLASMAMEMBRAAN WORDT BESCHERMD. ANDERZIJDS KAN EEN ZACHTE SUBBLETAL THERMISCHE SPANNING, DIE VÓÓR DE VERGLAZING NAAR BEHOREN IS GEDEFINIEERD EN OP DE JUISTE WIJZE WORDT TOEGEPAST, DE CRYOTOLERANCE VAN OÖCYTEN EN EMBRYO’S OPTIMALISEREN DOOR MIDDEL VAN AANPASSINGSMECHANISMEN, WAARDOOR HUN TOLERANTIE VOOR DE DAAROPVOLGENDE STRESS VAN DE VERGLAZING WORDT VERBETERD. DIT AANPASSINGSMECHANISME ZOU KUNNEN WORDEN GEMEDIEERD DOOR EEN TOENAME VAN DE EXPRESSIE VAN THERMISCHE STRESSPROTEÏNEN (HSPS) DIE EXPERIMENTEEL RECHTSTREEKS AAN OÖCYTEN EN EMBRYO’S KUNNEN WORDEN GELEVERD. AANGEZIEN VERGELIJKBARE THERMOTOLERANTIE-EFFECTEN KUNNEN WORDEN ONTWIKKELD OP CELLULAIR NIVEAU MET BLOOTSTELLING AAN THERMISCHE STRESS EN KOUDE STRESS, ZIJN ER MOMENTEEL GEEN STUDIES DIE DE EFFECTEN VAN EEN SUBLETALE BLOOTSTELLING AAN KOUDE STRESS IN OÖCYTEN EN EMBRYO’S VAN ZOOGDIEREN HEBBEN GEANALYSEERD. DE EXPRESSIE VAN STRESS-EIWITTEN DOOR VERKOUDHEID NEEMT SNEL EN AANZIENLIJK TOE TIJDENS MILDE ONDERKOELING, EN DAT KAN BESLISSEND ZIJN VOOR DE ONTWIKKELING VAN CRYOTOLERANCE. HET HOOFDDOEL VAN DIT PROJECT IS HET ONTWIKKELEN VAN STRATEGIEËN OM CRYOTOLERANCE VAN IN VITRO GERIJPTE RUNDEROECYTEN OF IN VITRO GEPRODUCEERDE EMBRYO’S TE VERBETEREN. DAARTOE STELLEN WIJ VOOR OM OÖCYTEN EN EMBRYO’S VOOR OF TIJDENS HET VERGLAZINGSPROCES SPECIFIEK TE BEHANDELEN MET HET ONDERZOEK NAAR DE ROL VAN AQP3 EN AQP7 BIJ HET VERVOER VAN WATER EN CPAS-DOORLAATBAARHEID, BEHANDELING MET AFP, HSP OF DE TOEPASSING VAN STRESSCYCLI PER KOUDE. (Dutch)
17 December 2021
0 references
LA CRIOCONSERVAZIONE DI OVOCITI ED EMBRIONI È UNA TECNICA FONDAMENTALE PER LA CONSERVAZIONE E LA DIFFUSIONE DELLE RISORSE GENETICHE ANIMALI. ESISTONO DUE METODI PER LA CRIOCONSERVAZIONE: CONGELAMENTO LENTO E VETRIFICAZIONE. QUEST'ULTIMO METODO È UN METODO INNOVATIVO, RAPIDO E SEMPLICE, PARTICOLARMENTE UTILE QUANDO SI TRATTA DI OVOCITI O EMBRIONI PRODOTTI IN VITRO. TUTTAVIA, LA VITRIFICACION HA UN'APPLICAZIONE PRATICA LIMITATA NELLA RIPRODUZIONE ANIMALE A CAUSA DELLA RIDOTTA COMPETENZA DI SVILUPPO DEGLI OVOCITI DOPO LA VITRIFICAZIONE O DELLA MANCANZA DI UNA METODOLOGIA STANDARD PER LA VITRIFICAZIONE DEGLI EMBRIONI CHE NE FACILITA L'APPLICAZIONE PRATICA IN AZIENDA. NONOSTANTE I PROGRESSI O LE STRATEGIE CHE SONO STATI SVILUPPATI NEGLI ULTIMI ANNI PER PORTARE LA VITRIFICAZIONE ALLE SPECIE DI INTERESSE ZOOTECNICO, LA SOPRAVVIVENZA DEGLI OVOCITI, LO SVILUPPO DELL'EMBRIONE E I TASSI DI GESTAZIONE OTTENUTI DOPO LA VITRIFICAZIONE DI OVOCITI ED EMBRIONI PRODOTTI IN VITRO NON SONO SODDISFACENTI PER LA MAGGIOR PARTE DELLE SPECIE E NON ESISTE ANCORA UN PROTOCOLLO "OTTIMO" PER LA VITRICAZIONE DI QUESTE CELLULE. ALTE CONCENTRAZIONI DI CRIOPROTETTORI (CPAS) E ALTI TASSI DI RAFFREDDAMENTO CHE POSSONO DANNEGGIARE LE CELLULE, PROBABILMENTE A CAUSA DI TOSSICITÀ CPAS, SHOCK OSMOTICO O FORMAZIONE DI CRISTALLI DI GHIACCIO SONO NECESSARI PER IL SUCCESSO DELLA VITRIFICAZIONE. PER EVITARE QUESTO, È NECESSARIA UNA CONOSCENZA PIÙ DETTAGLIATA DELLE VIE CHE MOBILITANO RAPIDAMENTE ACQUA E CPAS ATTRAVERSO LA MEMBRANA PLASMATICA DI OVOCITI ED EMBRIONI PER CONTRIBUIRE A RIDURRE LO STRESS OSMOTICO E RIDURRE AL MINIMO I DANNI CAUSATI DAL RAFFREDDAMENTO, CON PARTICOLARE ATTENZIONE AL RUOLO DELLE AQUAPORINE 3 (AQP3) E 7 (AQP7). D'ALTRA PARTE, LE PROTEINE ANTIGELO (AFP) SONO STATE UTILIZZATE CON SUCCESSO PER LA VITRIFICAZIONE DI GAMETI ED EMBRIONI IN ALCUNE SPECIE A CAUSA DELLA LORO CAPACITÀ DI INIBIRE LA CRESCITA DEL GHIACCIO, LA LORO RECRISTALISATION E LA PERDITA DI IONI ATTRAVERSO LE MEMBRANE, PROTEGGENDO COSÌ LA LORO MEMBRANA PLASMATICA. D'ALTRA PARTE, UNO STRESS TERMICO SUBBLETAL MORBIDO, ADEGUATAMENTE DEFINITO E CORRETTAMENTE APPLICATO PRIMA DELLA VETRIFICAZIONE, POTREBBE OTTIMIZZARE LA CRYOTOLERANCE DI OVOCITI ED EMBRIONI ATTRAVERSO MECCANISMI DI ADATTAMENTO, MIGLIORANDO COSÌ LA LORO TOLLERANZA AL SUCCESSIVO STRESS DELLA VITRIFICAZIONE. QUESTO MECCANISMO ADATTIVO POTREBBE ESSERE MEDIATO DA UN AUMENTO DELL'ESPRESSIONE DELLE PROTEINE DA STRESS TERMICO (HSPS) CHE POSSONO ESSERE FORNITE SPERIMENTALMENTE DIRETTAMENTE AGLI OVOCITI E AGLI EMBRIONI. DATO CHE SIMILI EFFETTI DI TERMOTOLLERANZA POSSONO ESSERE SVILUPPATI A LIVELLO CELLULARE CON ESPOSIZIONE ALLO STRESS TERMICO E ALLO STRESS FREDDO, ATTUALMENTE NON ESISTONO STUDI CHE ABBIANO ANALIZZATO GLI EFFETTI DI UN'ESPOSIZIONE SUBLETALE ALLO STRESS FREDDO NEGLI OVOCITI E NEGLI EMBRIONI DI MAMMIFERI. L'ESPRESSIONE DI PROTEINE DA STRESS DA FREDDO AUMENTA RAPIDAMENTE E SOSTANZIALMENTE DURANTE L'IPOTERMIA LIEVE, E CHE POTREBBE ESSERE DETERMINANTE PER LO SVILUPPO DI CRYOTOLERANCE. LO SCOPO PRINCIPALE DI QUESTO PROGETTO È QUELLO DI SVILUPPARE STRATEGIE VOLTE A MIGLIORARE LA CRYOTOLERANCE DEGLI OVOCITI BOVINI MATURATI IN VITRO O DEGLI EMBRIONI PRODOTTI IN VITRO. A TAL FINE, PROPONIAMO DI TRATTARE GLI OVOCITI E GLI EMBRIONI PRIMA O DURANTE IL PROCESSO DI VETRIFICAZIONE SPECIFICAMENTE CON LO STUDIO DEL RUOLO DI AQP3 E AQP7 NEL TRASPORTO DI ACQUA E PERMEABILITÀ CPAS, TRATTAMENTO CON AFP, HSP O L'APPLICAZIONE DI CICLI DI STRESS PER FREDDO. (Italian)
16 January 2022
0 references
Η ΚΡΥΟΣΥΝΤΉΡΗΣΗ ΩΟΚΥΤΤΆΡΩΝ ΚΑΙ ΕΜΒΡΎΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΊ ΘΕΜΕΛΙΏΔΗ ΤΕΧΝΙΚΉ ΓΙΑ ΤΗ ΔΙΑΤΉΡΗΣΗ ΚΑΙ ΤΗ ΔΙΆΔΟΣΗ ΤΩΝ ΖΩΙΚΏΝ ΓΕΝΕΤΙΚΏΝ ΠΌΡΩΝ. ΥΠΆΡΧΟΥΝ ΔΎΟ ΜΈΘΟΔΟΙ ΚΡΥΟΣΥΝΤΉΡΗΣΗΣ: ΑΡΓΉ ΚΑΤΆΨΥΞΗ ΚΑΙ ΥΑΛΟΠΟΊΗΣΗ. ΑΥΤΉ Η ΤΕΛΕΥΤΑΊΑ ΜΈΘΟΔΟΣ ΕΊΝΑΙ ΜΙΑ ΚΑΙΝΟΤΌΜΟΣ, ΤΑΧΕΊΑ ΚΑΙ ΑΠΛΉ ΜΈΘΟΔΟΣ, ΙΔΙΑΊΤΕΡΑ ΧΡΉΣΙΜΗ ΌΤΑΝ ΠΡΌΚΕΙΤΑΙ ΓΙΑ ΩΟΚΎΤΤΑΡΑ Ή ΈΜΒΡΥΑ ΠΟΥ ΠΑΡΆΓΟΝΤΑΙ IN VITRO. ΩΣΤΌΣΟ, Η VITRIFICACION ΈΧΕΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΈΝΗ ΠΡΑΚΤΙΚΉ ΕΦΑΡΜΟΓΉ ΣΤΗΝ ΑΝΑΠΑΡΑΓΩΓΉ ΤΩΝ ΖΏΩΝ ΛΌΓΩ ΤΗΣ ΜΕΙΩΜΈΝΗΣ ΙΚΑΝΌΤΗΤΑΣ ΑΝΆΠΤΥΞΗΣ ΤΩΝ ΩΟΚΥΤΤΆΡΩΝ ΜΕΤΆ ΤΗΝ ΥΑΛΟΠΟΊΗΣΗ Ή ΤΗΣ ΈΛΛΕΙΨΗΣ ΤΥΠΟΠΟΙΗΜΈΝΗΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΊΑΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΥΑΛΟΠΟΊΗΣΗ ΕΜΒΡΎΩΝ ΠΟΥ ΔΙΕΥΚΟΛΎΝΕΙ ΤΗΝ ΠΡΑΚΤΙΚΉ ΕΦΑΡΜΟΓΉ ΤΗΣ ΣΤΗΝ ΕΚΜΕΤΆΛΛΕΥΣΗ. ΠΑΡΆ ΤΗΝ ΠΡΌΟΔΟ Ή ΤΙΣ ΣΤΡΑΤΗΓΙΚΈΣ ΠΟΥ ΈΧΟΥΝ ΑΝΑΠΤΥΧΘΕΊ ΤΑ ΤΕΛΕΥΤΑΊΑ ΧΡΌΝΙΑ ΓΙΑ ΝΑ ΦΈΡΕΙ ΤΗΝ ΥΑΛΟΠΟΊΗΣΗ ΣΤΑ ΕΊΔΗ ΠΟΥ ΠΑΡΟΥΣΙΆΖΟΥΝ ΕΝΔΙΑΦΈΡΟΝ ΓΙΑ ΤΟ ΖΩΙΚΌ ΚΕΦΆΛΑΙΟ, Η ΕΠΙΒΊΩΣΗ ΤΩΝ ΩΟΚΥΤΤΆΡΩΝ, Η ΑΝΆΠΤΥΞΗ ΤΟΥ ΕΜΒΡΎΟΥ ΚΑΙ ΤΑ ΠΟΣΟΣΤΆ ΚΎΗΣΗΣ ΠΟΥ ΛΑΜΒΆΝΟΝΤΑΙ ΜΕΤΆ ΤΗΝ ΥΑΛΟΠΟΊΗΣΗ ΩΟΚΥΤΤΆΡΩΝ ΚΑΙ ΕΜΒΡΎΩΝ ΠΟΥ ΠΑΡΆΓΟΝΤΑΙ IN VITRO ΔΕΝ ΕΊΝΑΙ ΙΚΑΝΟΠΟΙΗΤΙΚΆ ΓΙΑ ΤΑ ΠΕΡΙΣΣΌΤΕΡΑ ΕΊΔΗ ΚΑΙ ΕΞΑΚΟΛΟΥΘΕΊ ΝΑ ΜΗΝ ΥΠΆΡΧΕΙ «ΒΈΛΤΙΣΤΟ» ΠΡΩΤΌΚΟΛΛΟ ΓΙΑ ΤΗ VITRICATION ΑΥΤΏΝ ΤΩΝ ΚΥΤΤΆΡΩΝ. ΓΙΑ ΤΗΝ ΕΠΙΤΥΧΊΑ ΤΗΣ ΥΑΛΟΠΟΊΗΣΗΣ ΑΠΑΙΤΟΎΝΤΑΙ ΥΨΗΛΈΣ ΣΥΓΚΕΝΤΡΏΣΕΙΣ ΚΡΥΟΠΡΟΣΤΑΤΕΥΤΏΝ (CPAS) ΚΑΙ ΥΨΗΛΆ ΠΟΣΟΣΤΆ ΨΎΞΗΣ ΠΟΥ ΜΠΟΡΟΎΝ ΝΑ ΠΡΟΚΑΛΈΣΟΥΝ ΒΛΆΒΗ ΣΤΑ ΚΎΤΤΑΡΑ, ΠΙΘΑΝΏΣ ΛΌΓΩ ΤΟΞΙΚΌΤΗΤΑΣ CPAS, ΩΣΜΩΤΙΚΟΎ ΣΟΚ Ή ΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟΎ ΚΡΥΣΤΑΛΛΙΚΏΝ ΚΡΥΣΤΆΛΛΩΝ ΠΆΓΟΥ. ΓΙΑ ΝΑ ΑΠΟΦΕΥΧΘΕΊ ΑΥΤΌ, ΑΠΑΙΤΕΊΤΑΙ ΛΕΠΤΟΜΕΡΈΣΤΕΡΗ ΓΝΏΣΗ ΤΩΝ ΟΔΏΝ ΠΟΥ ΚΙΝΗΤΟΠΟΙΟΎΝ ΓΡΉΓΟΡΑ ΤΟ ΝΕΡΌ ΚΑΙ ΤΑ CPAS ΜΈΣΩ ΤΗΣ ΜΕΜΒΡΆΝΗΣ ΠΛΆΣΜΑΤΟΣ ΩΟΚΥΤΤΆΡΩΝ ΚΑΙ ΕΜΒΡΎΩΝ, ΠΡΟΚΕΙΜΈΝΟΥ ΝΑ ΜΕΙΩΘΕΊ ΤΟ ΟΣΜΩΤΙΚΌ ΣΤΡΕΣ ΚΑΙ ΝΑ ΜΕΙΩΘΟΎΝ ΣΤΟ ΕΛΆΧΙΣΤΟ ΟΙ ΒΛΆΒΕΣ ΠΟΥ ΠΡΟΚΑΛΟΎΝΤΑΙ ΑΠΌ ΤΗΝ ΨΎΞΗ, ΜΕ ΙΔΙΑΊΤΕΡΗ ΠΡΟΣΟΧΉ ΣΤΟ ΡΌΛΟ ΤΩΝ ΥΔΑΤΑΠΟΡΙΝΏΝ 3 (AQP3) ΚΑΙ 7 (AQP7). ΑΠΌ ΤΗΝ ΆΛΛΗ ΠΛΕΥΡΆ, ΟΙ ΑΝΤΙΨΥΚΤΙΚΈΣ ΠΡΩΤΕΪ́ΝΕΣ (AFP) ΈΧΟΥΝ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΕΊ ΜΕ ΕΠΙΤΥΧΊΑ ΓΙΑ ΤΗΝ ΥΑΛΟΠΟΊΗΣΗ ΓΑΜΕΤΏΝ ΚΑΙ ΕΜΒΡΎΩΝ ΣΕ ΟΡΙΣΜΈΝΑ ΕΊΔΗ ΛΌΓΩ ΤΗΣ ΙΚΑΝΌΤΗΤΆΣ ΤΟΥΣ ΝΑ ΑΝΑΣΤΈΛΛΟΥΝ ΤΗΝ ΑΝΆΠΤΥΞΗ ΠΆΓΟΥ, ΤΗΝ ΑΝΑΓΝΩΣΗ ΤΟΥΣ ΚΑΙ ΤΗ ΔΙΑΡΡΟΉ ΙΌΝΤΩΝ ΜΈΣΩ ΤΩΝ ΜΕΜΒΡΑΝΏΝ, ΠΡΟΣΤΑΤΕΎΟΝΤΑΣ ΈΤΣΙ ΤΗ ΜΕΜΒΡΆΝΗ ΠΛΆΣΜΑΤΟΣ ΤΟΥΣ. ΑΠΌ ΤΗΝ ΆΛΛΗ ΠΛΕΥΡΆ, ΜΙΑ ΜΑΛΑΚΉ SUBBLETAL ΘΕΡΜΙΚΉ ΚΑΤΑΠΌΝΗΣΗ, ΣΩΣΤΆ ΚΑΘΟΡΙΣΜΈΝΗ ΚΑΙ ΚΑΤΆΛΛΗΛΑ ΕΦΑΡΜΟΖΌΜΕΝΗ ΠΡΙΝ ΑΠΌ ΤΗΝ ΥΑΛΟΠΟΊΗΣΗ, ΘΑ ΜΠΟΡΟΎΣΕ ΝΑ ΒΕΛΤΙΣΤΟΠΟΙΉΣΕΙ ΤΗΝ CRYOTOLERANCE ΤΩΝ ΩΟΚΥΤΤΆΡΩΝ ΚΑΙ ΤΩΝ ΕΜΒΡΎΩΝ ΜΈΣΩ ΜΗΧΑΝΙΣΜΏΝ ΠΡΟΣΑΡΜΟΓΉΣ, ΒΕΛΤΙΏΝΟΝΤΑΣ ΈΤΣΙ ΤΗΝ ΑΝΟΧΉ ΤΟΥΣ ΣΤΟ ΕΠΑΚΌΛΟΥΘΟ ΆΓΧΟΣ ΤΗΣ ΥΑΛΟΠΟΊΗΣΗΣ. ΑΥΤΌΣ Ο ΠΡΟΣΑΡΜΟΣΤΙΚΌΣ ΜΗΧΑΝΙΣΜΌΣ ΘΑ ΜΠΟΡΟΎΣΕ ΝΑ ΕΠΙΤΕΥΧΘΕΊ ΜΕ ΤΗΝ ΑΎΞΗΣΗ ΤΗΣ ΈΚΦΡΑΣΗΣ ΤΩΝ ΠΡΩΤΕΪΝΏΝ ΘΕΡΜΙΚΉΣ ΚΑΤΑΠΌΝΗΣΗΣ (HSPS) ΠΟΥ ΜΠΟΡΟΎΝ ΝΑ ΠΑΡΈΧΟΝΤΑΙ ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΆ ΑΠΕΥΘΕΊΑΣ ΣΕ ΩΟΚΎΤΤΑΡΑ ΚΑΙ ΈΜΒΡΥΑ. ΔΕΔΟΜΈΝΟΥ ΌΤΙ ΠΑΡΌΜΟΙΕΣ ΕΠΙΔΡΆΣΕΙΣ ΘΕΡΜΟΑΝΟΧΉΣ ΜΠΟΡΟΎΝ ΝΑ ΑΝΑΠΤΥΧΘΟΎΝ ΣΕ ΚΥΤΤΑΡΙΚΌ ΕΠΊΠΕΔΟ ΜΕ ΈΚΘΕΣΗ ΣΕ ΘΕΡΜΙΚΉ ΚΑΤΑΠΌΝΗΣΗ ΚΑΙ ΨΥΧΡΉ ΚΑΤΑΠΌΝΗΣΗ, ΕΠΊ ΤΟΥ ΠΑΡΌΝΤΟΣ ΔΕΝ ΥΠΆΡΧΟΥΝ ΜΕΛΈΤΕΣ ΠΟΥ ΝΑ ΈΧΟΥΝ ΑΝΑΛΎΣΕΙ ΤΑ ΑΠΟΤΕΛΈΣΜΑΤΑ ΜΙΑΣ ΥΠΟΔΕΙΚΤΙΚΉΣ ΈΚΘΕΣΗΣ ΣΕ ΨΥΧΡΉ ΚΑΤΑΠΌΝΗΣΗ ΣΤΑ ΩΟΚΎΤΤΑΡΑ ΚΑΙ ΤΑ ΈΜΒΡΥΑ ΘΗΛΑΣΤΙΚΏΝ. Η ΈΚΦΡΑΣΗ ΤΩΝ ΠΡΩΤΕΪΝΏΝ ΣΤΡΕΣ ΑΠΌ ΤΟ ΚΡΎΟ ΑΥΞΆΝΕΤΑΙ ΡΑΓΔΑΊΑ ΚΑΙ ΣΗΜΑΝΤΙΚΆ ΚΑΤΆ ΤΗ ΔΙΆΡΚΕΙΑ ΤΗΣ ΉΠΙΑΣ ΥΠΟΘΕΡΜΊΑΣ, ΚΑΙ ΑΥΤΌ ΘΑ ΜΠΟΡΟΎΣΕ ΝΑ ΕΊΝΑΙ ΚΑΘΟΡΙΣΤΙΚΌ ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΝΆΠΤΥΞΗ ΤΟΥ CRYOTOLERANCE. ΚΎΡΙΟΣ ΣΚΟΠΌΣ ΤΟΥ ΈΡΓΟΥ ΕΊΝΑΙ Η ΑΝΆΠΤΥΞΗ ΣΤΡΑΤΗΓΙΚΏΝ ΠΟΥ ΑΠΟΣΚΟΠΟΎΝ ΣΤΗ ΒΕΛΤΊΩΣΗ ΤΗΣ CRYOTOLERANCE ΤΩΝ IN VITRO ΩΡΙΜΑΣΜΈΝΩΝ ΩΟΚΥΤΤΆΡΩΝ ΒΟΟΕΙΔΏΝ Ή ΤΩΝ IN VITRO ΠΑΡΑΓΌΜΕΝΩΝ ΕΜΒΡΎΩΝ. ΓΙΑ ΤΟΝ ΣΚΟΠΌ ΑΥΤΌ, ΠΡΟΤΕΊΝΟΥΜΕ ΤΗ ΘΕΡΑΠΕΊΑ ΩΟΚΥΤΤΆΡΩΝ ΚΑΙ ΕΜΒΡΎΩΝ ΠΡΙΝ Ή ΚΑΤΆ ΤΗ ΔΙΆΡΚΕΙΑ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΊΑΣ ΥΑΛΟΠΟΊΗΣΗΣ, ΕΙΔΙΚΆ ΜΕ ΤΗ ΜΕΛΈΤΗ ΤΟΥ ΡΌΛΟΥ ΤΩΝ AQP3 ΚΑΙ AQP7 ΣΤΗ ΜΕΤΑΦΟΡΆ ΝΕΡΟΎ ΚΑΙ ΤΗΣ ΔΙΑΠΕΡΑΤΌΤΗΤΑΣ CPAS, ΤΗ ΘΕΡΑΠΕΊΑ ΜΕ AFP, HSP Ή ΤΗΝ ΕΦΑΡΜΟΓΉ ΚΎΚΛΩΝ ΆΓΧΟΥΣ ΑΝΆ ΚΡΎΟ. (Greek)
18 August 2022
0 references
KRYOPRÆSERVERING AF OOCYTTER OG EMBRYONER ER EN GRUNDLÆGGENDE TEKNIK TIL BEVARELSE OG UDBREDELSE AF DYREGENETISKE RESSOURCER. DER ER TO METODER TIL KRYOPRÆSERVERING: LANGSOM FRYSNING OG VITRIFIKATION. DENNE SIDSTE METODE ER EN INNOVATIV, HURTIG OG ENKEL METODE, ISÆR NÅR DET DREJER SIG OM OOCYTTER ELLER EMBRYONER PRODUCERET IN VITRO. VITRIFICACION HAR IMIDLERTID EN BEGRÆNSET PRAKTISK ANVENDELSE I DYREREPRODUKTION PÅ GRUND AF DEN BEGRÆNSEDE KOMPETENCE TIL UDVIKLING AF OOCYTTERNE EFTER FORGLASNINGEN ELLER MANGLEN PÅ EN STANDARDMETODE TIL FORGLASNING AF EMBRYONER, DER LETTER DEN PRAKTISKE ANVENDELSE PÅ BEDRIFTEN. PÅ TRODS AF DE FREMSKRIDT ELLER STRATEGIER, DER ER UDVIKLET I LØBET AF DE SENESTE ÅR FOR AT BRINGE VITRIFICERINGEN TIL DE ARTER, DER ER RELEVANTE FOR HUSDYRBESTANDEN, ER OOCYTOVERLEVELSEN, EMBRYOETS UDVIKLING OG DE DRÆGTIGHEDSRATER, DER ER OPNÅET EFTER VITRIFIKATION AF OOCYTTER OG EMBRYONER PRODUCERET IN VITRO, IKKE TILFREDSSTILLENDE FOR DE FLESTE ARTER, OG DER ER STADIG INGEN "OPTIMAL" PROTOKOL TIL VITRICATION AF DISSE CELLER. HØJE KONCENTRATIONER AF KRYOROTEKTORER (CPAS) OG HØJE AFKØLINGSHASTIGHEDER, DER KAN BESKADIGE CELLER, SANDSYNLIGVIS PÅ GRUND AF CPAS-TOKSICITET, OSMOTISK CHOK ELLER ISKRYSTALDANNELSE, ER NØDVENDIGE FOR, AT FORGLASNINGEN KAN LYKKES. FOR AT UNDGÅ DETTE ER DER BEHOV FOR ET MERE DETALJERET KENDSKAB TIL DE VEJE, DER MOBILISERER VAND OG CPAS HURTIGT GENNEM PLASMAMEMBRANEN AF OOCYTTER OG EMBRYONER, FOR AT BIDRAGE TIL AT REDUCERE OSMOTISK STRESS OG REDUCERE SKADER FORÅRSAGET AF KØLING TIL ET MINIMUM, MED SÆRLIG VÆGT PÅ ROLLEN SOM AQUAPORINER 3 (AQP3) OG 7 (AQP7). PÅ DEN ANDEN SIDE ER ANTIFROSTPROTEINER (AFP) BLEVET ANVENDT MED SUCCES TIL VITRIFICERING AF KØNSCELLER OG EMBRYONER I NOGLE ARTER PÅ GRUND AF DERES EVNE TIL AT HÆMME ISVÆKST, DERES RECRISTALISATION OG LÆKAGEN AF IONER GENNEM MEMBRANERNE OG DERMED BESKYTTE DERES PLASMAMEMBRAN. PÅ DEN ANDEN SIDE KUNNE EN BLØD, SUBBLETAL TERMISK STRESS, KORREKT DEFINERET OG KORREKT ANVENDT FØR FORGLASNINGEN, OPTIMERE OOCYTTERNES OG EMBRYONERNES KRYOTOLERANCE VED HJÆLP AF TILPASNINGSMEKANISMER OG DERMED FORBEDRE DERES TOLERANCE OVER FOR DEN EFTERFØLGENDE BELASTNING AF VITRIFIKATIONEN. DENNE ADAPTIVE MEKANISME KAN MEDIERES AF EN STIGNING I EKSPRESSIONEN AF TERMISK STRESSPROTEINER (HSPS), SOM KAN LEVERES DIREKTE TIL OOCYTTER OG EMBRYONER VED FORSØG. I BETRAGTNING AF AT LIGNENDE TERMOTOLERANCEEFFEKTER KAN UDVIKLES PÅ CELLENIVEAU MED EKSPONERING FOR TERMISK STRESS OG KOLD STRESS, ER DER I ØJEBLIKKET INGEN UNDERSØGELSER, DER HAR ANALYSERET VIRKNINGERNE AF EN SUBLETAL EKSPONERING FOR KOLD STRESS I OOCYTTER OG PATTEDYRS EMBRYONER. UDTRYK FOR STRESSPROTEINER VED KULDE STIGER HURTIGT OG VÆSENTLIGT UNDER MILD HYPOTERMI, OG DET KAN VÆRE AFGØRENDE FOR UDVIKLINGEN AF KRYOTOLERANCE. HOVEDFORMÅLET MED DETTE PROJEKT ER AT UDVIKLE STRATEGIER, DER HAR TIL FORMÅL AT FORBEDRE KRYOTOLERANCE AF IN VITRO-MODNE BOVIN OOCYTTER ELLER IN VITRO-PRODUCEREDE EMBRYONER. MED HENBLIK HERPÅ FORESLÅR VI AT BEHANDLE OOCYTTER OG EMBRYONER FØR ELLER UNDER FORGLASNINGSPROCESSEN SPECIFIKT MED UNDERSØGELSEN AF AQP3'S OG AQP7'S ROLLE I TRANSPORT AF VAND OG CPAS-PERMEABILITET, BEHANDLING MED AFP, HSP ELLER ANVENDELSE AF STRESSCYKLUSSER PR. KULDE. (Danish)
18 August 2022
0 references
MUNASOLUJEN JA ALKIOIDEN KRYOPRESERVAATIO ON KESKEINEN TEKNIIKKA ELÄINTEN GEENIVAROJEN SÄILYTTÄMISESSÄ JA LEVITTÄMISESSÄ. KRYOPRESERVAATIOSSA ON KAKSI MENETELMÄÄ: HIDAS JÄÄTYMINEN JA LASITUS. TÄMÄ VIIMEINEN MENETELMÄ ON INNOVATIIVINEN, NOPEA JA YKSINKERTAINEN MENETELMÄ, JOKA ON ERITYISEN HYÖDYLLINEN IN VITRO TUOTETTUJEN MUNASOLUJEN TAI ALKIOIDEN OSALTA. VITRIFICACIONIN KÄYTÄNNÖN KÄYTTÖ ELÄINTEN LISÄÄNTYMISESSÄ ON KUITENKIN RAJALLISTA, KOSKA MUNASOLUJEN KEHITYSKYKY ON HEIKENTYNYT LASITUKSEN JÄLKEEN TAI KOSKA ALKIOIDEN LASITUSTA VARTEN EI OLE VAKIOMENETELMÄÄ, JOKA HELPOTTAISI SEN KÄYTÄNNÖN SOVELTAMISTA TILALLA. HUOLIMATTA EDISTYKSESTÄ TAI STRATEGIOISTA, JOITA ON VIIME VUOSINA KEHITETTY VITRIFIKAATIOIDEN TUOMISEKSI KARJAN KANNALTA TÄRKEISIIN LAJEIHIN, MUNASOLUJEN ELOONJÄÄMINEN, ALKION KEHITTYMINEN JA IN VITRO TUOTETTUJEN MUNASOLUJEN JA ALKIOIDEN VITROITUMISEN JÄLKEEN SAAVUTETUT TIINEYSASTEET EIVÄT OLE TYYDYTTÄVIÄ USEIMMILLA LAJEILLA, EIKÄ NÄIDEN SOLUJEN VITRICATIONIA VARTEN OLE VIELÄKÄÄN OLEMASSA ”OPTIMAALISTA” PÖYTÄKIRJAA. KORKEAT PITOISUUDET KRYOSUOJAIMIA (CPAS) JA KORKEAT JÄÄHDYTYSNOPEUDET, JOTKA VOIVAT VAHINGOITTAA SOLUJA, TODENNÄKÖISESTI CPAS-MYRKYLLISYYDEN, OSMOOTTISEN ISKUN TAI JÄÄKIDEMUODOSTUKSEN VUOKSI, TARVITAAN, JOTTA LASITUS ONNISTUISI. TÄMÄN VÄLTTÄMISEKSI TARVITAAN YKSITYISKOHTAISEMPAA TIETOA REITEISTÄ, JOTKA MOBILISOIVAT VETTÄ JA CPAS:ÄÄ NOPEASTI MUNASOLUJEN JA ALKIOIDEN PLASMAKALVON KAUTTA, JOTTA VOIDAAN VÄHENTÄÄ OSMOOTTISTA STRESSIÄ JA VÄHENTÄÄ JÄÄHDYTYKSEN AIHEUTTAMIA VAHINKOJA MINIMIIN KIINNITTÄEN ERITYISTÄ HUOMIOTA AQUAPORIINIEN 3 (AQP3) JA 7 (AQP7) ROOLIIN. TOISAALTA JÄÄTYMISENESTOPROTEIINEJA (AFP) ON KÄYTETTY MENESTYKSEKKÄÄSTI TIETTYJEN LAJIEN SUKUSOLUJEN JA ALKIOIDEN VITRIFIKAATIOSSA, KOSKA NE KYKENEVÄT ESTÄMÄÄN JÄÄN KASVUA, NIIDEN RECRISTALISATION JA IONIEN VUOTAMISTA KALVOJEN LÄPI, MIKÄ SUOJAA NIIDEN PLASMAKALVOA. TOISAALTA PEHMEÄ SUBBLETAL LÄMPÖJÄNNITYS, ASIANMUKAISESTI MÄÄRITELTY JA ASIANMUKAISESTI SOVELLETTU ENNEN LASITUSTA, VOISI OPTIMOIDA MUNASOLUJEN JA ALKIOIDEN CRYOTOLERANCE SOPEUTUMISMEKANISMIEN AVULLA JA PARANTAA SITEN NIIDEN SIETOKYKYÄ LASITUKSEN MYÖHEMPÄÄ STRESSIÄ VASTAAN. TÄTÄ MUKAUTUVAA MEKANISMIA VOITAISIIN VÄLITTÄÄ LISÄÄMÄLLÄ LÄMPÖJÄNNITYKSEN PROTEIINEJA (HSPS), JOITA VOIDAAN TOIMITTAA KOKEELLISESTI SUORAAN MUNASOLUILLE JA ALKIOILLE. KOSKA SAMANLAISIA TERMOTULPPAVAIKUTUKSIA VOIDAAN KEHITTÄÄ SOLUTASOLLA ALTISTUMALLA LÄMPÖSTRESSILLE JA KYLMÄLLE STRESSILLE, TÄLLÄ HETKELLÄ EI OLE OLEMASSA TUTKIMUKSIA, JOISSA OLISI ANALYSOITU ALILETAALISEN ALTISTUMISEN VAIKUTUKSIA MUNASOLUJEN JA NISÄKKÄIDEN ALKIOIDEN KYLMÄLLE STRESSILLE. STRESSIPROTEIINIEN ILMENTYMINEN KYLMÄNÄ LISÄÄNTYY NOPEASTI JA MERKITTÄVÄSTI LIEVÄN HYPOTERMIAN AIKANA, JA SE VOISI OLLA RATKAISEVAA CRYOTOLERANCEN KEHITTYMISEN KANNALTA. HANKKEEN PÄÄTARKOITUKSENA ON KEHITTÄÄ STRATEGIOITA, JOILLA PYRITÄÄN PARANTAMAAN IN VITRO -KYPSYTETTYJEN NAUDAN MUNASOLUJEN TAI IN VITRO TUOTETTUJEN ALKIOIDEN CRYOTOLERANCE-MENETELMÄÄ. TÄTÄ VARTEN EHDOTAMME, ETTÄ MUNASOLUJA JA ALKIOITA KÄSITELLÄÄN ENNEN LASITUSPROSESSIA TAI SEN AIKANA ERITYISESTI TUTKIMALLA AQP3:N JA AQP7:N ROOLIA VEDEN JA CPAS:N LÄPÄISEVYYDEN KULJETUKSESSA, AFP:N, HSP:N TAI STRESSISYKLIEN SOVELTAMISESSA KYLMÄÄ KOHDEN. (Finnish)
18 August 2022
0 references
IL-KRIJOPRESERVAZZJONI TAL-OOĊITI U L-EMBRIJUNI HIJA TEKNIKA FUNDAMENTALI GĦALL-PRESERVAZZJONI U D-DIFFUŻJONI TAR-RIŻORSI ĠENETIĊI TAL-ANNIMALI. HEMM ŻEWĠ METODI GĦALL-KRIJOPRESERVAZZJONI: IFFRIŻAR BIL-MOD U VITRIFICATION. DAN L-AĦĦAR METODU HUWA METODU INNOVATTIV, RAPIDU U SEMPLIĊI, SPEĊJALMENT UTLI FIR-RIGWARD TAL-OOĊITI JEW L-EMBRIJUNI PRODOTTI IN VITRO. MADANKOLLU, IL-VITRIFICACION GĦANDHA APPLIKAZZJONI PRATTIKA LIMITATA FIR-RIPRODUZZJONI TAL-ANNIMALI MINĦABBA L-KOMPETENZA MNAQQSA TAL-IŻVILUPP TAL-OOĊITI WARA L-VITRIFIKAZZJONI JEW IN-NUQQAS TA’ METODOLOĠIJA STANDARD GĦALL-VITRIFIKAZZJONI TAL-EMBRIJUNI LI TIFFAĊILITA L-APPLIKAZZJONI PRATTIKA TAGĦHA FIR-RAZZETT. MINKEJJA L-AVVANZI JEW L-ISTRATEĠIJI LI ĠEW ŻVILUPPATI MATUL L-AĦĦAR FTIT SNIN BIEX IĠIBU L-VITRIFIKAZZJONI GĦALL-ISPEĊI TA’ INTERESS GĦALL-BHEJJEM, IS-SOPRAVIVENZA TAL-OOĊITI, L-IŻVILUPP TAL-EMBRIJU U R-RATI TA’ ĠESTAZZJONI MIKSUBA WARA L-VITTRIFIKAZZJONI TAL-OOĊITI U L-EMBRIJUNI PRODOTTI IN VITRO MHUMIEX SODISFAĊENTI GĦALL-BIĊĊA L-KBIRA TAL-ISPEĊI U GĦAD M’HEMMX PROTOKOLL “OTTIMALI” GĦALL-VITRICAZZJONI TA’ DAWN IĊ-ĊELLOLI. KONĊENTRAZZJONIJIET GĦOLJIN TA’ KRIJOPROTETTURI (CPAS) U RATI GĦOLJIN TA’ TKESSIĦ LI JISTGĦU JAGĦMLU ĦSARA LIĊ-ĊELLOLI, PROBABBILMENT MINĦABBA TOSSIĊITÀ TAS-CPAS, XOKK OSMOTIKU JEW FORMAZZJONI TA’ KRISTALLI TAS-SILĠ HUMA MEĦTIEĠA BIEX IL-VITRIFIKAZZJONI TKUN TA’ SUĊĊESS. BIEX DAN JIĠI EVITAT, GĦARFIEN AKTAR DETTALJAT TAL-MOGĦDIJIET LI JIMMOBILIZZAW L-ILMA U S-CPAS MALAJR PERMEZZ TAL-MEMBRANA TAL-PLAŻMA TAL-OOĊITI U L-EMBRIJUNI HUWA MEĦTIEĠ BIEX JGĦIN FIT-TNAQQIS TAL-ISTRESS OSMOTIKU U JNAQQAS IL-ĦSARA KKAWŻATA MIT-TKESSIĦ GĦALL-MINIMU, B’ATTENZJONI PARTIKOLARI GĦAR-RWOL TAL-AQUAPORINS 3 (AQP3) U 7 (AQP7). MIN-NAĦA L-OĦRA, PROTEINI ANTIFREEZE (AFP) ĠEW UŻATI B’SUĊĊESS GĦALL-VITRIFIKAZZJONI TA ‘GAMETI U EMBRIJUNI F’XI SPEĊI MINĦABBA L-ABBILTÀ TAGĦHOM LI JINIBIXXU T-TKABBIR TAS-SILĠ, RECRISTALISATION TAGĦHOM U T-TNIXXIJA TA’ JONI MILL-MEMBRANI, U B’HEKK JIPPROTEĠU L-MEMBRANA TAL-PLAŻMA TAGĦHOM. MIN-NAĦA L-OĦRA, STRESS TERMALI SUBBLETALI ARTAB, DEFINIT B’MOD XIERAQ U APPLIKAT SEW QABEL IL-VITTRIFIKAZZJONI, JISTA’ JOTTIMIZZA S-CRYOTOLERANCE TAL-OOĊITI U L-EMBRIJUNI PERMEZZ TA’ MEKKANIŻMI TA’ ADATTAMENT, U B’HEKK ITEJJEB IT-TOLLERANZA TAGĦHOM GĦALL-ISTRESS SUSSEGWENTI TAL-VITRIFIKAZZJONI. DAN IL-MEKKANIŻMU TA’ ADATTAMENT JISTA’ JIĠI MEDJAT MINN ŻIEDA FL-ESPRESSJONI TA’ PROTEINI TA’ STRESS TERMALI (HSPS) LI JISTGĦU JIĠU FORNUTI B’MOD SPERIMENTALI DIRETTAMENT LILL-OOĊITI U LILL-EMBRIJUNI. MINĦABBA LI JISTGĦU JIĠU ŻVILUPPATI EFFETTI SIMILI TA’ TERMTOLLERANZA FIL-LIVELL ĊELLULARI B’ESPONIMENT GĦAL STRESS TERMALI U STRESS KIESAĦ, BĦALISSA MA HEMM L-EBDA STUDJU LI ANALIZZA L-EFFETTI TA’ ESPONIMENT SUBLETALI GĦAL STRESS KIESAĦ FL-OOĊITI U FL-EMBRIJUNI TAL-MAMMIFERI. ESPRESSJONI TA ' PROTEINI TA ' STRESS MINN KESĦA TIŻDIED MALAJR U SOSTANZJALMENT MATUL IPOTERMJA ĦAFIFA, U LI JISTGĦU JKUNU DEĊIŻIVI GĦALL- IŻVILUPP TA ' CRYOTOLERANCE. L-GĦAN EWLIENI TA’ DAN IL-PROĠETT HUWA LI JIĠU ŻVILUPPATI STRATEĠIJI LI GĦANDHOM L-GĦAN LI JTEJBU CRYOTOLERANCE TA’ OOĊITI BOVINI MATURI IN VITRO JEW EMBRIJUNI PRODOTTI IN VITRO. GĦAL DAN IL-GĦAN, NIPPROPONU LI L-OOĊITI U L-EMBRIJUNI JIĠU TTRATTATI QABEL JEW MATUL IL-PROĊESS TAL-VITRIFIKAZZJONI SPEĊIFIKAMENT BL-ISTUDJU TAR-RWOL TAL-AQP3 U L-AQP7 FIT-TRASPORT TAL-ILMA U L-PERMEABILITÀ TAS-CPAS, IT-TRATTAMENT BL-AFP, L-HSP JEW L-APPLIKAZZJONI TA’ ĊIKLI TA’ STRESS GĦAL KULL KIESAĦ. (Maltese)
18 August 2022
0 references
OOCĪTU UN EMBRIJU KRIOKONSERVĒŠANA IR FUNDAMENTĀLA METODE DZĪVNIEKU ĢENĒTISKO RESURSU SAGLABĀŠANAI UN IZPLATĪŠANAI. IR DIVAS KRIOKONSERVĀCIJAS METODES: LĒNA SASALŠANA UN VITRIFIKĀCIJA. ŠĪ PĒDĒJĀ METODE IR NOVATORISKA, ĀTRA UN VIENKĀRŠA METODE, KAS IR ĪPAŠI NODERĪGA, JA RUNA IR PAR OLŠŪNĀM VAI EMBRIJIEM, KAS IEGŪTI IN VITRO. TOMĒR VITRIFICACION PRAKTISKAIS PIELIETOJUMS DZĪVNIEKU REPRODUKCIJAS JOMĀ IR IEROBEŽOTS, JO OOCĪTU ATTĪSTĪBAS KOMPETENCE PĒC VITRIFIKĀCIJAS IR SAMAZINĀJUSIES VAI EMBRIJU VITRIFIKĀCIJAI NAV STANDARTA METODIKAS, KAS ATVIEGLOTU TĀS PRAKTISKO PIELIETOJUMU SAIMNIECĪBĀ. NERAUGOTIES UZ PROGRESU VAI STRATĒĢIJĀM, KAS PĒDĒJO GADU LAIKĀ IR IZSTRĀDĀTAS, LAI PANĀKTU VITRIFIKĀCIJU MĀJLOPIEM INTERESĒJOŠĀS SUGAS, OOCĪTU IZDZĪVOŠANA, EMBRIJA ATTĪSTĪBA UN GRŪSNĪBAS RĀDĪTĀJI, KAS IEGŪTI PĒC OLŠŪNU UN IN VITRO RADĪTO EMBRIJU VITRIFIKĀCIJAS, NAV APMIERINOŠI LIELĀKAJAI DAĻAI SUGU, UN JOPROJĀM NAV “OPTIMĀLA” PROTOKOLA ŠO ŠŪNU VITRICĀCIJAI. LAI VITRIFIKĀCIJA BŪTU VEIKSMĪGA, NEPIECIEŠAMA AUGSTA KRIOPROTEKTORU (CPAS) KONCENTRĀCIJA UN AUGSTS DZESĒŠANAS ĀTRUMS, KAS VAR BOJĀT ŠŪNAS, IESPĒJAMS, CPAS TOKSICITĀTES, OSMOTISKĀ ŠOKA VAI LEDUS KRISTĀLA VEIDOŠANĀS DĒĻ. LAI NO TĀ IZVAIRĪTOS, IR VAJADZĪGAS SĪKĀKAS ZINĀŠANAS PAR CEĻIEM, KAS ĀTRI MOBILIZĒ ŪDENI UN CPAS CAUR OOCĪTU UN EMBRIJU PLAZMAS MEMBRĀNU, LAI PALĪDZĒTU SAMAZINĀT OSMOTISKO STRESU UN LĪDZ MINIMUMAM SAMAZINĀTU DZESĒŠANAS RADĪTO KAITĒJUMU, ĪPAŠU UZMANĪBU PIEVĒRŠOT AKVAPORĪNU 3 (AQP3) UN 7 (AQP7) LOMAI. NO OTRAS PUSES, ANTIFRĪZA PROTEĪNI (AFP) IR VEIKSMĪGI IZMANTOTI GAMETU UN EMBRIJU VITRIFIKĀCIJAI DAŽĀS SUGĀS, JO TIE SPĒJ KAVĒT LEDUS AUGŠANU, TO RECRISTALISATION UN JONU NOPLŪDI CAUR MEMBRĀNĀM, TĀDĒJĀDI AIZSARGĀJOT TO PLAZMAS MEMBRĀNU. NO OTRAS PUSES, MAIGS SUBBLETAL TERMISKAIS STRESS, KAS PAREIZI DEFINĒTS UN PAREIZI PIEMĒROTS PIRMS VITRIFIKĀCIJAS, VARĒTU OPTIMIZĒT OOCĪTU UN EMBRIJU CRYOTOLERANCE, IZMANTOJOT ADAPTĀCIJAS MEHĀNISMUS, TĀDĒJĀDI UZLABOJOT TO PANESAMĪBU PRET SEKOJOŠO VITRIFIKĀCIJAS STRESU. ŠO ADAPTĪVO MEHĀNISMU VARĒTU VEICINĀT TERMISKĀ STRESA PROTEĪNU (HSPS) EKSPRESIJAS PALIELINĀŠANĀS, KO VAR EKSPERIMENTĀLI PIEGĀDĀT TIEŠI OOCĪTIEM UN EMBRIJIEM. ŅEMOT VĒRĀ TO, KA LĪDZĪGU TERMOTOLERANCES EFEKTU VAR ATTĪSTĪT ŠŪNU LĪMENĪ, PAKĻAUJOT TERMISKO STRESU UN AUKSTUMU, PAŠLAIK NAV PĒTĪJUMU, KUROS ANALIZĒTA SUBLETĀLA IEDARBĪBA UZ AUKSTU STRESU OOCĪTU UN ZĪDĪTĀJU EMBRIJOS. STRESA PROTEĪNU EKSPRESIJA AR AUKSTUMU STRAUJI UN BŪTISKI PALIELINĀS VIEGLAS HIPOTERMIJAS LAIKĀ, UN TAM VARĒTU BŪT IZŠĶIROŠA NOZĪME CRYOTOLERANCE ATTĪSTĪBĀ. ŠĀ PROJEKTA GALVENAIS MĒRĶIS IR IZSTRĀDĀT STRATĒĢIJAS, KURU MĒRĶIS IR UZLABOT IN VITRO NOGATAVINĀTU LIELLOPU OOCĪTU VAI IN VITRO IEGŪTU EMBRIJU CRYOTOLERANCE. ŠAJĀ NOLŪKĀ MĒS IEROSINĀM APSTRĀDĀT OOCĪTUS UN EMBRIJUS PIRMS VITRIFIKĀCIJAS PROCESA VAI TĀ LAIKĀ, ĪPAŠI VEICOT PĒTĪJUMU PAR AQP3 UN AQP7 LOMU ŪDENS TRANSPORTĒŠANĀ UN CPAS CAURLAIDĪBĀ, APSTRĀDĒ AR AFP, HSP VAI STRESA CIKLU PIEMĒROŠANĀ UZ VIENU AUKSTUMU. (Latvian)
18 August 2022
0 references
KRYOKONZERVÁCIA OOCYTOV A EMBRYÍ JE ZÁKLADNOU TECHNIKOU ZACHOVANIA A ŠÍRENIA ŽIVOČÍŠNYCH GENETICKÝCH ZDROJOV. EXISTUJÚ DVE METÓDY NA KRYOKONZERVÁCIU: POMALÉ MRAZENIE A VITRIFIKÁCIA. TÁTO POSLEDNÁ METÓDA JE INOVATÍVNA, RÝCHLA A JEDNODUCHÁ METÓDA, OBZVLÁŠŤ UŽITOČNÁ, POKIAĽ IDE O OOCYTY ALEBO EMBRYÁ PRODUKOVANÉ IN VITRO. VITRIFIKÁCIA MÁ VŠAK OBMEDZENÉ PRAKTICKÉ UPLATNENIE V OBLASTI REPRODUKCIE ZVIERAT V DÔSLEDKU ZNÍŽENEJ SPÔSOBILOSTI VÝVOJA OOCYTOV PO VITRIFIKÁCII ALEBO CHÝBAJÚCEJ ŠTANDARDNEJ METODIKY NA VITRIFIKÁCIU EMBRYÍ, KTORÁ UĽAHČUJE ICH PRAKTICKÉ UPLATŇOVANIE NA FARME. NAPRIEK POKROKU ALEBO STRATÉGIÁM, KTORÉ SA VYVINULI V POSLEDNÝCH ROKOCH S CIEĽOM VITRIFIKÁCIE DRUHOV, KTORÉ SÚ PREDMETOM ZÁUJMU, NIE SÚ PREŽITIE OOCYTOV, VÝVOJ EMBRYA A MIERY GRAVIDITY ZÍSKANÉ PO VITRIFIKÁCII OOCYTOV A EMBRYÍ VYPRODUKOVANÝCH IN VITRO USPOKOJIVÉ PRE VÄČŠINU DRUHOV A STÁLE NEEXISTUJE „OPTIMÁLNY“ PROTOKOL PRE VITRICATION TÝCHTO BUNIEK. NA TO, ABY BOLA VITRIFIKÁCIA ÚSPEŠNÁ, SÚ POTREBNÉ VYSOKÉ KONCENTRÁCIE KRYOPROTEKTORY (CPAS) A VYSOKÁ RÝCHLOSŤ CHLADENIA, KTORÉ MÔŽU POŠKODIŤ BUNKY, PRAVDEPODOBNE V DÔSLEDKU TOXICITY CPAS, OSMOTICKÉHO ŠOKU ALEBO TVORBY ĽADOVÝCH KRYŠTÁLOV. ABY SA TOMU ZABRÁNILO, SÚ POTREBNÉ PODROBNEJŠIE POZNATKY O CESTÁCH, KTORÉ RÝCHLO MOBILIZUJÚ VODU A CPAS CEZ PLAZMOVÚ MEMBRÁNU OOCYTOV A EMBRYÍ, ABY SA PRISPELO K ZNÍŽENIU OSMOTICKÉHO STRESU A ZNÍŽENIU POŠKODENIA SPÔSOBENÉHO OCHLADENÍM NA MINIMUM, S OSOBITNÝM DÔRAZOM NA ÚLOHU AKVAPORÍNOV 3 (AQP3) A 7 (AQP7). NA DRUHEJ STRANE SA NEMRZNÚCE PROTEÍNY (AFP) ÚSPEŠNE POUŽILI NA VITRIFIKÁCIU GAMÉT A EMBRYÍ U NIEKTORÝCH DRUHOV Z DÔVODU ICH SCHOPNOSTI INHIBOVAŤ RAST ĽADU, ICH RECRISTALISATION A ÚNIKU IÓNOV CEZ MEMBRÁNY, ČÍM SA CHRÁNI ICH PLAZMATICKÁ MEMBRÁNA. NA DRUHEJ STRANE, MÄKKÁ TEPELNÁ ZÁŤAŽ SUBBLETAL, SPRÁVNE DEFINOVANÁ A SPRÁVNE APLIKOVANÁ PRED VITRIFIKÁCIOU, BY MOHLA OPTIMALIZOVAŤ CRYOTOLERANCE OOCYTOV A EMBRYÍ PROSTREDNÍCTVOM ADAPTAČNÝCH MECHANIZMOV, ČÍM BY SA ZLEPŠILA ICH TOLERANCIA VOČI NÁSLEDNÉMU STRESU Z VITRIFIKÁCIE. TENTO ADAPTÍVNY MECHANIZMUS BY MOHOL BYŤ SPROSTREDKOVANÝ ZVÝŠENÍM EXPRESIE PROTEÍNOV TEPELNÉHO STRESU (HSPS), KTORÉ SA MÔŽU EXPERIMENTÁLNE DODÁVAŤ PRIAMO DO OOCYTOV A EMBRYÍ. VZHĽADOM NA TO, ŽE PODOBNÉ ÚČINKY TERMOTOLERANCIE SA MÔŽU VYVINÚŤ NA BUNKOVEJ ÚROVNI S VYSTAVENÍM TEPELNÉMU STRESU A STUDENÉMU STRESU, V SÚČASNOSTI NEEXISTUJÚ ŽIADNE ŠTÚDIE, KTORÉ BY ANALYZOVALI ÚČINKY SUBLETÁLNEJ EXPOZÍCIE CHLADU V OOCYTOCH A EMBRYÁCH CICAVCOV. EXPRESIA STRESOVÝCH PROTEÍNOV CHLADOM SA RÝCHLO A PODSTATNE ZVYŠUJE POČAS MIERNEJ HYPOTERMIE, ČO BY MOHLO BYŤ ROZHODUJÚCE PRE VÝVOJ CRYOTOLERANCE. HLAVNÝM CIEĽOM TOHTO PROJEKTU JE VYPRACOVAŤ STRATÉGIE ZAMERANÉ NA ZLEPŠENIE CRYOTOLERANCE IN VITRO ZRELÝCH OOCYTOV HOVÄDZIEHO DOBYTKA ALEBO EMBRYÍ VYPRODUKOVANÝCH IN VITRO. NA TENTO ÚČEL NAVRHUJEME LIEČIŤ OOCYTY A EMBRYÁ PRED ALEBO POČAS PROCESU VITRIFIKÁCIE KONKRÉTNE ŠTÚDIOM ÚLOHY AQP3 A AQP7 PRI PREPRAVE VODY A PRIEPUSTNOSTI CPAS, OŠETRENÍ AFP, HSP ALEBO APLIKÁCIOU STRESOVÝCH CYKLOV NA CHLAD. (Slovak)
18 August 2022
0 references
IS TEICNÍC BHUNÚSACH É CRYOCHAÚ ÚICÍTÍ AGUS SUTHANNA CHUN ACMHAINNÍ GÉINITEACHA AINMHITHE A CHAOMHNÚ AGUS A SCAIPEADH. TÁ DHÁ MHODH ANN LE HAGHAIDH CRYOPRESERVATION: REO MALL AGUS VITRIFICATION. IS MODH NUÁLACH, TAPA AGUS SIMPLÍ É AN MODH DEIREANACH SEO, GO HÁIRITHE ÚSÁIDEACH MAIDIR LE HÚICÍTÍ NÓ SUTHANNA A THÁIRGTEAR IN VITRO. MAR SIN FÉIN, TÁ CUR I BHFEIDHM PRAITICIÚIL TEORANTA AG VITRIFICACION MAIDIR LE HATÁIRGEADH AINMHITHE MAR GHEALL AR LAGHDÚ AR INNIÚLACHT FORBARTHA NA N-ÚICÍTÍ TAR ÉIS AN FUINNEAMHAITHE NÓ EASPA MODHEOLAÍOCHTA CAIGHDEÁNAÍ CHUN SUTHANNA A DHAINGNIÚ A ÉASCAÍONN A GCUR I BHFEIDHM PRAITICIÚIL AR AN BHFEIRM. IN AINNEOIN AN DUL CHUN CINN NÓ NA STRAITÉISÍ A FORBRAÍODH LE BLIANTA BEAGA ANUAS CHUN AN FUINNEAMH A THABHAIRT DO NA SPEICIS AR DÍOL SPÉISE IAD Ó THAOBH BEOSTOIC DE, NÍL MARTHANAS NA N-ÚICÍTÍ, FORBAIRT AN TSUTHA AGUS NA RÁTAÍ IOMPAIR A FHAIGHTEAR TAR ÉIS D’ÚICÍTÍ AGUS SUTHANNA A THÁIRGTEAR IN VITRO A BHEITH SLÁN SÁSÚIL DON CHUID IS MÓ DE NA SPEICIS AGUS NÍL AON PHRÓTACAL “OPTAMACH” ANN FÓS MAIDIR LE VITRICATION NA GCEALL SIN. TEASTAÍONN TIÚCHAN ARD CRYOPROTECTORS (CPAS) AGUS RÁTAÍ FUARAITHE ARD AR FÉIDIR LEO DAMÁISTE A DHÉANAMH DO CHEALLA, IS DÓCHA MAR GHEALL AR THOCSAINEACHT CPAS, TURRAING OSMOTIC NÓ FOIRMIÚ CRIOSTAIL OIGHIR CHUN GO N-ÉIREOIDH LE VITRIFICATION. CHUN SEO A SHEACHAINT, TÁ GÁ LE HEOLAS NÍOS MIONSONRAITHE AR NA CONAIRÍ A SHLÓGANN UISCE AGUS CPAS GO TAPA TRÍ MEMBRANE PLASMA ÚICÍTÍ AGUS SUTHANNA CHUN CUIDIÚ LEIS AN STRUS OSMOTIC A LAGHDÚ AGUS AN DAMÁISTE A DHÉANANN FUARÚ A LAGHDÚ GO DTÍ AN T-ÍOSMHÉID, AGUS AIRD AR LEITH Á TABHAIRT AR RÓL AQUAPORINS 3 (AQP3) AGUS 7 (AQP7). AR AN LÁIMH EILE, BAINEADH ÚSÁID AS PRÓITÉINÍ ANTIFREEZE (AFP) GO RATHÚIL CHUN GAIMÉITÍ AGUS SUTHANNA A THREISIÚ I ROINNT SPEICEAS MAR GHEALL AR A GCUMAS BAC A CHUR AR FHÁS OIGHIR, AR A RECRISTALISATION AGUS AR SCEITHEADH IAN TRÍ NA SEICNÍ, RUD A CHOSNAÍONN A N-SCANNÁN PLASMA. AR AN LÁIMH EILE, D’FHÉADFADH STRUS TEIRMEACH BOG SUBBLETAL, ATÁ SAINITHE I GCEART AGUS CURTHA I BHFEIDHM I GCEART ROIMH AN VITRIFICATION, CRYOTOLERANCE NA N-ÚICÍTÍ AGUS NA SUTHANNA A BHARRFHEABHSÚ TRÍ SHÁSRAÍ OIRIÚNAITHE, RUD A D’FHEABHSÓDH A LAMHÁLTAS DON STRUS INA DHIAIDH SIN DEN VITRIFICATION. D’FHÉADFAÍ AN MHEICNÍOCHT OIRIÚNAITHEACH SEO A IDIRGHABHÁIL TRÍ MHÉADÚ AR LÉIRIÚ PRÓITÉINÍ STRUIS THEIRMIGH (HSPANNA) AR FÉIDIR IAD A SHOLÁTHAR GO DÍREACH D’ÚICÍTÍ AGUS SUTHANNA. ÓS RUD É GUR FÉIDIR ÉIFEACHTAÍ TEIRMEATÓIPE COMHCHOSÚLA A FHORBAIRT AR LEIBHÉAL CEALLACH LE NOCHTADH DO STRUS TEIRMEACH AGUS STRUS FUAR, NÍL AON STAIDÉIR ANN FAOI LÁTHAIR A BHFUIL ANAILÍS DÉANTA ACU AR ÉIFEACHTAÍ NOCHTA FHOLIGEANAIGH AR FHUAR-STRUS IN ÚICÍTÍ AGUS I SUTHANNA MAMACHA. MÉADAÍONN LÉIRIÚ PRÓITÉINÍ STRUIS TRÍ FHUAR GO TAPA AGUS GO SUBSTAINTIÚIL LE LINN HYPOTHERMIA ÉADROM, AGUS D’FHÉADFADH SÉ SIN A BHEITH CINNTITHEACH CHUN CRYOTOLERANCE A FHORBAIRT. IS É PRÍOMHCHUSPÓIR AN TIONSCADAIL SEO STRAITÉISÍ A FHORBAIRT A BHFUIL SÉ MAR AIDHM LEO FEABHAS A CHUR AR CHRÓITEALAS ÚICÍTÍ BÓ-AINMHITHE AIBITHE IN VITRO NÓ SUTHANNA A THÁIRGTEAR IN VITRO. CHUIGE SIN, MOLAIMID GO GCAITHFÍ LE HÚICÍTÍ AGUS SUTHANNA ROIMH AN BPRÓISEAS VITRIFICATION NÓ LENA LINN GO SONRACH LEIS AN STAIDÉAR AR RÓL AQP3 AGUS AQP7 IN IOMPAR UISCE AGUS CPAS TRÉSCAOILTEACHT, CÓIREÁIL LE AFP, HSP NÓ CUR I BHFEIDHM TIMTHRIALLTA STRUIS IN AGHAIDH AN FHUAR. (Irish)
18 August 2022
0 references
KRYOKONZERVACE OOCYTŮ A EMBRYÍ JE ZÁKLADNÍ TECHNIKOU PRO ZACHOVÁNÍ A ŠÍŘENÍ GENETICKÝCH ZDROJŮ ZVÍŘAT. EXISTUJÍ DVĚ METODY PRO KRYOKONZERVACI: POMALÉ ZMRZNUTÍ A VITRIFIKACE. TATO POSLEDNÍ METODA JE INOVATIVNÍ, RYCHLÁ A JEDNODUCHÁ METODA, ZVLÁŠTĚ UŽITEČNÁ, POKUD JDE O OOCYTY NEBO EMBRYA VYPRODUKOVANÁ IN VITRO. VITRIFICACION MÁ VŠAK OMEZENOU PRAKTICKOU APLIKACI PŘI REPRODUKCI ZVÍŘAT, A TO Z DŮVODU OMEZENÉ ZPŮSOBILOSTI VÝVOJE OOCYTŮ PO VITRIFIKACI NEBO NEEXISTENCE STANDARDNÍ METODIKY PRO VITRIFIKACI EMBRYÍ, KTERÁ USNADŇUJE JEJÍ PRAKTICKÉ POUŽITÍ V HOSPODÁŘSTVÍ. NAVZDORY POKROKU NEBO STRATEGIÍM, KTERÉ BYLY V POSLEDNÍCH NĚKOLIKA LETECH VYVINUTY S CÍLEM PŘINÉST VITRIFIKACI DO ZÁJMOVÉHO DRUHU HOSPODÁŘSKÝCH ZVÍŘAT, NEJSOU PŘEŽITÍ OOCYTŮ, VÝVOJ EMBRYA A BŘEZOST ZÍSKANÉ PO VITRIFIKACI OOCYTŮ A EMBRYÍ VYPRODUKOVANÝCH IN VITRO PRO VĚTŠINU DRUHŮ USPOKOJIVÉ A STÁLE NEEXISTUJE „OPTIMÁLNÍ“ PROTOKOL PRO VITRIKACE TĚCHTO BUNĚK. VYSOKÉ KONCENTRACE KRYOPROTEKTORŮ (CPAS) A VYSOKÁ RYCHLOST CHLAZENÍ, KTERÉ MOHOU POŠKODIT BUŇKY, PRAVDĚPODOBNĚ KVŮLI TOXICITĚ CPAS, OSMOTICKÉMU ŠOKU NEBO TVORBĚ LEDOVÝCH KRYSTALŮ, JSOU NEZBYTNÉ PRO ÚSPĚCH VITRIFIKACE. ABY SE TOMU ZABRÁNILO, JE TŘEBA PODROBNĚJŠÍ ZNALOSTI CEST, KTERÉ MOBILIZUJÍ VODU A CPAS RYCHLE PŘES PLAZMATICKOU MEMBRÁNU OOCYTŮ A EMBRYÍ, ABY POMOHLY SNÍŽIT OSMOTICKÝ STRES A SNÍŽIT POŠKOZENÍ ZPŮSOBENÉ CHLAZENÍM NA MINIMUM, SE ZVLÁŠTNÍM DŮRAZEM NA ÚLOHU AQUAPORINŮ 3 (AQP3) A 7 (AQP7). NAOPAK NEMRZNOUCÍ PROTEINY (AFP) BYLY ÚSPĚŠNĚ POUŽITY PRO VITRIFIKACI GAMET A EMBRYÍ U NĚKTERÝCH DRUHŮ KVŮLI JEJICH SCHOPNOSTI INHIBOVAT RŮST LEDU, JEJICH RECRISTALISATION A ÚNIKU IONTŮ PŘES MEMBRÁNY, ČÍMŽ CHRÁNÍ JEJICH PLAZMATICKOU MEMBRÁNU. NA DRUHÉ STRANĚ, MĚKKÝ SUBBLETAL TEPELNÝ STRES, SPRÁVNĚ DEFINOVANÝ A SPRÁVNĚ APLIKOVANÝ PŘED VITRIFIKACÍ, BY MOHL OPTIMALIZOVAT CRYOTOLERANCE OOCYTŮ A EMBRYÍ PROSTŘEDNICTVÍM MECHANISMŮ ADAPTACE, ČÍMŽ BY SE ZLEPŠILA JEJICH TOLERANCE VŮČI NÁSLEDNÉMU STRESU ZE SKLIZNĚ. TENTO ADAPTIVNÍ MECHANISMUS BY MOHL BÝT ZPROSTŘEDKOVÁN ZVÝŠENÍM EXPRESE PROTEINŮ TEPELNÉHO STRESU (HSPS), KTERÉ MOHOU BÝT EXPERIMENTÁLNĚ DODÁVÁNY PŘÍMO DO OOCYTŮ A EMBRYÍ. VZHLEDEM K TOMU, ŽE PODOBNÉ TERMOTOLERANČNÍ ÚČINKY LZE VYVINOUT NA BUNĚČNÉ ÚROVNI S EXPOZICÍ TEPELNÉMU STRESU A STRESU CHLADU, V SOUČASNÉ DOBĚ NEEXISTUJÍ ŽÁDNÉ STUDIE, KTERÉ BY ANALYZOVALY ÚČINKY SUBLETÁLNÍ EXPOZICE STUDENÉMU STRESU U OOCYTŮ A EMBRYÍ SAVCŮ. EXPRESE STRESOVÝCH PROTEINŮ STUDENÝM SE RYCHLE A PODSTATNĚ ZVYŠUJE BĚHEM MÍRNÉHO PODCHLAZENÍ, COŽ BY MOHLO BÝT ROZHODUJÍCÍ PRO VÝVOJ CRYOTOLERANCE. HLAVNÍM CÍLEM TOHOTO PROJEKTU JE VYVINOUT STRATEGIE ZAMĚŘENÉ NA ZLEPŠENÍ CRYOTOLERANCE ZRALÝCH OOCYTŮ SKOTU IN VITRO NEBO EMBRYÍ VYPRODUKOVANÝCH IN VITRO. ZA TÍMTO ÚČELEM NAVRHUJEME LÉČIT OOCYTY A EMBRYA PŘED NEBO BĚHEM PROCESU VITRIFIKACE, KONKRÉTNĚ STUDIEM ÚLOHY AQP3 A AQP7 V TRANSPORTU VODY A PROPUSTNOSTI CPAS, LÉČBĚ AFP, HSP NEBO APLIKACÍ STRESOVÝCH CYKLŮ NA CHLAD. (Czech)
18 August 2022
0 references
A CRIOPRESERVAÇÃO DE OÓCITOS E EMBRIÕES É UMA TÉCNICA FUNDAMENTAL PARA A PRESERVAÇÃO E DIFUSÃO DE RECURSOS GENÉTICOS ANIMAIS. EXISTEM DOIS MÉTODOS PARA CRIOPRESERVAÇÃO: CONGELAMENTO LENTO E VITRIFICAÇÃO. ESTE ÚLTIMO MÉTODO É UM MÉTODO INOVADOR, RÁPIDO E SIMPLES, ESPECIALMENTE ÚTIL QUANDO SE TRATA DE OÓCITOS OU EMBRIÕES PRODUZIDOS IN VITRO. NO ENTANTO, O VITRIFICACION TEM UMA APLICAÇÃO PRÁTICA LIMITADA NA REPRODUÇÃO ANIMAL DEVIDO À REDUZIDA COMPETÊNCIA DE DESENVOLVIMENTO DOS OÓCITOS APÓS A VITRIFICAÇÃO OU À FALTA DE UMA METODOLOGIA PADRÃO PARA A VITRIFICAÇÃO DE EMBRIÕES QUE FACILITE A SUA APLICAÇÃO PRÁTICA NA EXPLORAÇÃO. APESAR DOS AVANÇOS OU ESTRATÉGIAS DESENVOLVIDOS NOS ÚLTIMOS ANOS PARA TRAZER A VITRIFICAÇÃO ÀS ESPÉCIES DE INTERESSE PECUÁRIO, A SOBREVIVÊNCIA DOS OÓCITOS, O DESENVOLVIMENTO DO EMBRIÃO E AS TAXAS DE GESTAÇÃO OBTIDAS APÓS A VITRIFICAÇÃO DE OÓCITOS E EMBRIÕES PRODUZIDOS IN VITRO NÃO SÃO SATISFATÓRIOS PARA A MAIORIA DAS ESPÉCIES E AINDA NÃO EXISTE PROTOCOLO «ÓTIMO» PARA A VITRICAÇÃO DESSAS CÉLULAS. ALTAS CONCENTRAÇÕES DE CRIOPROTETORES (CPAS) E ALTAS TAXAS DE RESFRIAMENTO QUE PODEM DANIFICAR AS CÉLULAS, PROVAVELMENTE DEVIDO À TOXICIDADE DO CPAS, CHOQUE OSMÓTICO OU FORMAÇÃO DE CRISTAL DE GELO, SÃO NECESSÁRIAS PARA QUE A VITRIFICAÇÃO SEJA BEM-SUCEDIDA. PARA EVITAR ISSO, É NECESSÁRIO UM CONHECIMENTO MAIS DETALHADO DAS VIAS QUE MOBILIZAM ÁGUA E CPAS RAPIDAMENTE ATRAVÉS DA MEMBRANA PLASMÁTICA DE OÓCITOS E EMBRIÕES PARA AJUDAR A REDUZIR O ESTRESSE OSMÓTICO E REDUZIR AO MÍNIMO OS DANOS CAUSADOS PELO RESFRIAMENTO, COM ESPECIAL ATENÇÃO AO PAPEL DAS AQUAPORINAS 3 (AQP3) E 7 (AQP7). POR OUTRO LADO, AS PROTEÍNAS ANTICONGELANTES (AFP) TÊM SIDO USADAS COM SUCESSO PARA A VITRIFICAÇÃO DE GÂMETAS E EMBRIÕES EM ALGUMAS ESPÉCIES DEVIDO À SUA CAPACIDADE DE INIBIR O CRESCIMENTO DO GELO, SUA RECRISTALISATION E O VAZAMENTO DE ÍONS ATRAVÉS DAS MEMBRANAS, PROTEGENDO ASSIM SUA MEMBRANA PLASMÁTICA. POR OUTRO LADO, UM ESTRESSE TÉRMICO SUBBLETAL SUAVE, ADEQUADAMENTE DEFINIDO E APLICADO ANTES DA VITRIFICAÇÃO, PODERIA OTIMIZAR A CRIOTOLERANÇA DE OÓCITOS E EMBRIÕES ATRAVÉS DE MECANISMOS DE ADAPTAÇÃO, MELHORANDO ASSIM SUA TOLERÂNCIA AO ESTRESSE SUBSEQUENTE DA VITRIFICAÇÃO. ESSE MECANISMO ADAPTATIVO PODERIA SER MEDIADO POR UM AUMENTO NA EXPRESSÃO DE PROTEÍNAS DE ESTRESSE TÉRMICO (HSPS) QUE PODEM SER FORNECIDAS EXPERIMENTALMENTE DIRETAMENTE AOS OÓCITOS E EMBRIÕES. DADO QUE EFEITOS DE TERMOTOLERÂNCIA SEMELHANTES PODEM SER DESENVOLVIDOS A NÍVEL TELEMÓVEL COM EXPOSIÇÃO AO ESTRESSE TÉRMICO E AO ESTRESSE FRIO, ATUALMENTE NÃO EXISTEM ESTUDOS QUE TENHAM ANALISADO OS EFEITOS DE UMA EXPOSIÇÃO SUBLETAL AO ESTRESSE FRIO EM OÓCITOS E EMBRIÕES DE MAMÍFEROS. A EXPRESSÃO DE PROTEÍNAS DE ESTRESSE PELO FRIO AUMENTA RAPIDAMENTE E SUBSTANCIALMENTE DURANTE A HIPOTERMIA LEVE, O QUE PODERIA SER DECISIVO PARA O DESENVOLVIMENTO DA CRIOTOLERANÇA. O PRINCIPAL OBJETIVO DESTE PROJETO É DESENVOLVER ESTRATÉGIAS QUE VISEM MELHORAR A CRIOTOLERANÇA DE OÓCITOS BOVINOS MADUROS IN VITRO OU EMBRIÕES PRODUZIDOS IN VITRO. PARA ISSO, PROPOMOS TRATAR OÓCITOS E EMBRIÕES ANTES OU DURANTE O PROCESSO DE VITRIFICAÇÃO ESPECIFICAMENTE COM O ESTUDO DO PAPEL DO AQP3 E DO AQP7 NO TRANSPORTE DE ÁGUA E PERMEABILIDADE CPAS, TRATAMENTO COM AFP, HSP OU APLICAÇÃO DE CICLOS DE ESTRESSE POR FRIO. (Portuguese)
18 August 2022
0 references
OOTSÜÜTIDE JA EMBRÜOTE KRÜOPSÄILITAMINE ON LOOMADE GENEETILISTE RESSURSSIDE SÄILITAMISE JA LEVITAMISE PÕHILINE TEHNIKA. KRÜOPSÄILITAMISEKS ON KAKS MEETODIT: AEGLANE KÜLMUTAMINE JA VITRIFIKATSIOON. VIIMANE MEETOD ON UUENDUSLIK, KIIRE JA LIHTNE MEETOD, MIS ON ERITI KASULIK IN VITRO TOODETUD OOTSÜÜTIDE VÕI EMBRÜOTE PUHUL. SIISKI ON VITRIFICACION’I PRAKTILINE KASUTUS LOOMADE PALJUNDAMISEL PIIRATUD, SEST MUNARAKKUDE ARENEMISE PÄDEVUS ON PÄRAST KLAASISTUMIST VÄHENENUD VÕI PUUDUB STANDARDMEETOD EMBRÜOTE KLAASISTUMISEKS, MIS HÕLBUSTAKS SELLE PRAKTILIST RAKENDAMIST PÕLLUMAJANDUSETTEVÕTTES. VAATAMATA VIIMASTEL AASTATEL TEHTUD EDUSAMMUDELE VÕI STRATEEGIATELE, MILLE EESMÄRK ON TUUA KLAASISTUMINE HUVIPAKKUVATESSE LOOMALIIKIDESSE, EI OLE OOTSÜÜTIDE ELULEMUS, EMBRÜO ARENG JA IN VITRO TOODETUD OOTSÜÜTIDE JA EMBRÜOTE KLAASISTUMISE JÄRGSELT SAADUD TIINUSE MÄÄR ENAMIKU LIIKIDE PUHUL RAHULDAV NING NENDE RAKKUDE VITRICATION’I JAOKS EI OLE IKKA VEEL „OPTIMAALSET“ PROTOKOLLI. SELLEKS, ET VITRIFIKATSIOON OLEKS EDUKAS, ON VAJA KRÜOPROTEKTOREID (CPAS) JA KÕRGEID JAHUTUSKIIRUSI, MIS VÕIVAD RAKKE KAHJUSTADA, TÕENÄOLISELT CPAS-I TOKSILISUSE, OSMOOTILISE ŠOKI VÕI JÄÄKRISTALLIDE MOODUSTUMISE TÕTTU. SELLE VÄLTIMISEKS ON VAJA ÜKSIKASJALIKUMAID TEADMISI VEE JA CPASIDE KIIRE MOBILISEERIMISE KOHTA OOTSÜÜTIDE JA EMBRÜOTE PLASMAMEMBRAANI KAUDU, ET AIDATA VÄHENDADA OSMOOTILIST STRESSI JA VÄHENDADA JAHUTAMISEST PÕHJUSTATUD KAHJU MIINIMUMINI, PÖÖRATES ERILIST TÄHELEPANU AKVAPORIINIDE 3 (AQP3) JA 7 (AQP7) ROLLILE. TEISEST KÜLJEST ON ANTIFRIISIVALKE (AFP) EDUKALT KASUTATUD SUGURAKKUDE JA EMBRÜOTE KLAASISTAMISEKS MÕNEDE LIIKIDE PUHUL TÄNU NENDE VÕIMELE PÄRSSIDA JÄÄKASVU, NENDE RECRISTALISATION JA IOONIDE LEKKIMINE LÄBI MEMBRAANIDE, KAITSTES SEEGA NENDE PLASMAMEMBRAANI. TEISEST KÜLJEST VÕIB PEHME SUBBLETAL TERMOSTRESS, MIS ON ENNE KLAASISTUMIST KORRALIKULT MÄÄRATLETUD JA NÕUETEKOHASELT RAKENDATUD, OPTIMEERIDA OOTSÜÜTIDE JA EMBRÜOTE CRYOTOLERANCE’I KOHANEMISMEHHANISMIDE ABIL, PARANDADES SEELÄBI NENDE TALUVUST VITRIFIKATSIOONI HILISEMA STRESSI SUHTES. SEDA ADAPTIIVSET MEHHANISMI VÕIB VAHENDADA SELLISTE TERMOSTRESSVALKUDE (HSPS) EKSPRESSIOONI SUURENEMINE, MIDA SAAB KATSELISELT TARNIDA OTSE OOTSÜÜTIDELE JA EMBRÜOTELE. ARVESTADES, ET SARNASEID TERMOTALUVUSEFEKTE ON VÕIMALIK VÄLJA KUJUNEDA RAKUTASANDIL KOKKUPUUTEL TERMILISE STRESSI JA KÜLMA STRESSIGA, EI OLE PRAEGU UURINGUID, MILLES OLEKS ANALÜÜSITUD SUBLETAALSET KOKKUPUUDET KÜLMA STRESSIGA OOTSÜÜTIDES JA IMETAJATE EMBRÜOTES. STRESSIVALKUDE EKSPRESSIOON KÜLMAS SUURENEB KIIRESTI JA OLULISELT KERGE HÜPOTERMIA AJAL, MIS VÕIB OLLA OTSUSTAV CRYOTOLERANCE’I ARENGUS. PROJEKTI PEAMINE EESMÄRK ON TÖÖTADA VÄLJA STRATEEGIAD, MILLE EESMÄRK ON PARANDADA IN VITRO LAAGERDUNUD VEISTE MUNARAKKUDE VÕI IN VITRO TOODETUD EMBRÜOTE CRYOTOLERANCE’I. SELLEKS TEEME ETTEPANEKU TÖÖDELDA OOTSÜÜTE JA EMBRÜOID ENNE VITRIFIKATSIOONIPROTSESSI VÕI SELLE AJAL, UURIDES KONKREETSELT AQP3 JA AQP7 ROLLI VEE JA CPASIDE LÄBILASKVUSE, AFP- VÕI HSP-GA TÖÖTLEMISE VÕI KÜLMA KOHTA STRESSITSÜKLITE RAKENDAMISEL. (Estonian)
18 August 2022
0 references
A PETESEJTEK ÉS EMBRIÓK KRIOPREZERVÁLÁSA AZ ÁLLATI GENETIKAI ERŐFORRÁSOK MEGŐRZÉSÉNEK ÉS TERJESZTÉSÉNEK ALAPVETŐ TECHNIKÁJA. A KRIOPREZERVÁLÁSRA KÉT MÓDSZER LÉTEZIK: LASSÚ FAGYASZTÁS ÉS VITRIFIKÁCIÓ. EZ AZ UTOLSÓ MÓDSZER INNOVATÍV, GYORS ÉS EGYSZERŰ MÓDSZER, KÜLÖNÖSEN AZ IN VITRO ELŐÁLLÍTOTT PETESEJTEK VAGY EMBRIÓK ESETÉBEN. A VITRIFICACION AZONBAN KORLÁTOZOTT GYAKORLATI ALKALMAZÁSSAL RENDELKEZIK AZ ÁLLATOK REPRODUKCIÓJÁBAN, MIVEL AZ ÜVEGESEDÉST KÖVETŐEN CSÖKKENT A PETESEJTEK FEJLETTSÉGE, VAGY AZ EMBRIÓK VITRIFIKÁCIÓJÁRA VONATKOZÓ STANDARD MÓDSZERTAN HIÁNYA MIATT, AMELY MEGKÖNNYÍTI ANNAK GYAKORLATI ALKALMAZÁSÁT A GAZDASÁGBAN. ANNAK ELLENÉRE, HOGY AZ ELMÚLT NÉHÁNY ÉVBEN A VITRIFIKÁCIÓT AZ ÁLLATÁLLOMÁNY ÉRDEKLŐDÉSÉRE SZÁMOT TARTÓ FAJOKHOZ JUTTATTÁK, A PETESEJTEK TÚLÉLÉSE, AZ EMBRIÓ FEJLŐDÉSE ÉS AZ IN VITRO ELŐÁLLÍTOTT PETESEJTEK ÉS EMBRIÓK VITRIFIKÁCIÓJA UTÁN KAPOTT VEMHESSÉG MÉRTÉKE NEM KIELÉGÍTŐ A LEGTÖBB FAJ SZÁMÁRA, ÉS MÉG MINDIG NINCS „OPTIMÁLIS” PROTOKOLL E SEJTEK VITRICATION-JÁRA. A VITRIFIKÁCIÓ SIKERÉHEZ NAGY KONCENTRÁCIÓJÚ KRIOPROTEKTOROKRA (CPAS) ÉS MAGAS HŰTÉSI SEBESSÉGEKRE VAN SZÜKSÉG, AMELYEK VALÓSZÍNŰLEG A CPAS TOXICITÁS, AZ OZMOTIKUS SOKK VAGY A JÉGKRISTÁLYKÉPZŐDÉS MIATT KÁROSÍTHATJÁK A SEJTEKET. ENNEK ELKERÜLÉSE ÉRDEKÉBEN RÉSZLETESEBB ISMERETEKRE VAN SZÜKSÉG A PETESEJTEK ÉS EMBRIÓK PLAZMAMEMBRÁNJÁN KERESZTÜL A VIZET ÉS A CPAS-T MOZGÓSÍTÓ ÚTVONALAKRÓL, HOGY SEGÍTSEN CSÖKKENTENI AZ OZMOTIKUS STRESSZT, ÉS MINIMÁLISRA CSÖKKENTENI A HŰTÉS OKOZTA KÁROKAT, KÜLÖNÖS FIGYELMET FORDÍTVA AZ AQUAPORINOK 3 (AQP3) ÉS A 7 (AQP7) SZEREPÉRE. MÁSRÉSZT A FAGYÁLLÓ FEHÉRJÉKET (AFP) SIKERESEN ALKALMAZTÁK AZ IVARSEJTEK ÉS EMBRIÓK VITRIFIKÁCIÓJÁRA EGYES FAJOKBAN, MIVEL KÉPESEK MEGAKADÁLYOZNI A JÉGNÖVEKEDÉST, RECRISTALISATION ÉS IONOK SZIVÁRGÁSA A MEMBRÁNOKON KERESZTÜL, EZÁLTAL VÉDVE PLAZMAMEMBRÁNJUKAT. MÁSRÉSZT, A LÁGY SUBBLETAL HŐSTRESSZ, AMELYET A VITRIFIKÁCIÓ ELŐTT MEGFELELŐEN MEGHATÁROZTAK ÉS MEGFELELŐEN ALKALMAZNAK, ADAPTÁCIÓS MECHANIZMUSOK RÉVÉN OPTIMALIZÁLHATJA A PETESEJTEK ÉS EMBRIÓK CRYOTOLERANCE-JÁT, EZÁLTAL JAVÍTVA A VITRIFIKÁCIÓ KÉSŐBBI STRESSZÉVEL SZEMBENI TOLERANCIÁJUKAT. EZT AZ ADAPTÍV MECHANIZMUST A KÖZVETLENÜL A PETESEJTEK ÉS EMBRIÓK SZÁMÁRA KÍSÉRLETI ÚTON SZÁLLÍTHATÓ TERMIKUS STRESSZFEHÉRJÉK (HSPS) EXPRESSZIÓJÁNAK NÖVEKEDÉSÉVEL LEHETNE KÖZVETÍTENI. TEKINTETTEL ARRA, HOGY HASONLÓ TERMOTOLERANCIAHATÁSOK ALAKULHATNAK KI SEJTSZINTEN TERMIKUS STRESSZNEK ÉS HIDEG STRESSZNEK VALÓ KITETTSÉG MELLETT, JELENLEG NINCSENEK OLYAN VIZSGÁLATOK, AMELYEK A PETESEJTEKBEN ÉS EMLŐSÖK EMBRIÓIBAN A HIDEG STRESSZNEK VALÓ SZUBLETÁLIS EXPOZÍCIÓ HATÁSAIT ELEMEZTÉK VOLNA. A STRESSZFEHÉRJÉK HIDEG ÁLTALI EXPRESSZIÓJA GYORSAN ÉS JELENTŐSEN NŐ ENYHE HIPOTERMIA SORÁN, ÉS EZ DÖNTŐ LEHET A CRYOTOLERANCE KIALAKULÁSÁBAN. A PROJEKT FŐ CÉLJA OLYAN STRATÉGIÁK KIDOLGOZÁSA, AMELYEK CÉLJA AZ IN VITRO ÉRLELT SZARVASMARHA PETESEJTEK VAGY IN VITRO ELŐÁLLÍTOTT EMBRIÓK CRYOTOLERANCE-JÁNAK JAVÍTÁSA. ENNEK ÉRDEKÉBEN JAVASOLJUK A PETESEJTEK ÉS EMBRIÓK VITRIFIKÁCIÓS FOLYAMAT ELŐTTI VAGY ALATTI KEZELÉSÉT, KÜLÖNÖSEN AZ AQP3 ÉS AZ AQP7 VÍZSZÁLLÍTÁSBAN ÉS CPAS-ÁTERESZTŐKÉPESSÉGBEN, AFP-VEL, HSP-VEL VAGY HIDEG STRESSZCIKLUSOK ALKALMAZÁSÁVAL KAPCSOLATOS VIZSGÁLATÁVAL. (Hungarian)
18 August 2022
0 references
КРИООПАЗВАНЕТО НА ОВОЦИТИТЕ И ЕМБРИОНИТЕ Е ОСНОВНА ТЕХНИКА ЗА ЗАПАЗВАНЕ И РАЗПРОСТРАНЕНИЕ НА ЖИВОТИНСКИ ГЕНЕТИЧНИ РЕСУРСИ. СЪЩЕСТВУВАТ ДВА МЕТОДА ЗА КРИОКОНСЕРВАЦИЯ: БАВНО ЗАМРАЗЯВАНЕ И ВИТРИФИКАЦИЯ. ПОСЛЕДНИЯТ МЕТОД Е ИНОВАТИВЕН, БЪРЗ И ПРОСТ МЕТОД, ОСОБЕНО ПОЛЕЗЕН, КОГАТО СТАВА ВЪПРОС ЗА ОВОЦИТИ ИЛИ ЕМБРИОНИ, ПРОИЗВЕДЕНИ IN VITRO. ВЪПРЕКИ ТОВА, VITRIFICACION ИМА ОГРАНИЧЕНО ПРАКТИЧЕСКО ПРИЛОЖЕНИЕ ПРИ ВЪЗПРОИЗВОДСТВОТО НА ЖИВОТНИ ПОРАДИ НАМАЛЕНАТА КОМПЕТЕНТНОСТ ЗА РАЗВИТИЕ НА ОВОЦИТИТЕ СЛЕД ВИТРИФИКАЦИЯТА ИЛИ ЛИПСАТА НА СТАНДАРТНА МЕТОДОЛОГИЯ ЗА ВИТРИФИКАЦИЯ НА ЕМБРИОНИ, КОЯТО УЛЕСНЯВА ПРАКТИЧЕСКОТО МУ ПРИЛАГАНЕ В СТОПАНСТВОТО. ВЪПРЕКИ НАПРЕДЪКА ИЛИ СТРАТЕГИИТЕ, КОИТО БЯХА РАЗРАБОТЕНИ ПРЕЗ ПОСЛЕДНИТЕ НЯКОЛКО ГОДИНИ, ЗА ДА СЕ ВТВЪРДИ ВИДОВЕТЕ, КОИТО ПРЕДСТАВЛЯВАТ ИНТЕРЕС ЗА ДОБИТЪКА, ОЦЕЛЯВАНЕТО НА ОВОЦИТИТЕ, РАЗВИТИЕТО НА ЕМБРИОНА И СТЕПЕНТА НА БРЕМЕННОСТ, ПОЛУЧЕНИ СЛЕД ВИТРИФИКАЦИЯТА НА ОВОЦИТИТЕ И ЕМБРИОНИТЕ, ПРОИЗВЕДЕНИ IN VITRO, НЕ СА ЗАДОВОЛИТЕЛНИ ЗА ПОВЕЧЕТО ВИДОВЕ И ВСЕ ОЩЕ НЯМА „ОПТИМАЛЕН“ ПРОТОКОЛ ЗА VITRICATION НА ТЕЗИ КЛЕТКИ. ВИСОКИТЕ КОНЦЕНТРАЦИИ НА КРИОПРОТЕКТОРИ (CPAS) И ВИСОКАТА СКОРОСТ НА ОХЛАЖДАНЕ, КОИТО МОГАТ ДА УВРЕДЯТ КЛЕТКИТЕ, ВЕРОЯТНО ПОРАДИ ТОКСИЧНОСТТА НА CPAS, ОСМОТИЧНИЯ ШОК ИЛИ ОБРАЗУВАНЕТО НА ЛЕДЕНИ КРИСТАЛИ, СА НЕОБХОДИМИ ЗА УСПЕХА НА ВИТРИФИКАЦИЯТА. ЗА ДА СЕ ИЗБЕГНЕ ТОВА, Е НЕОБХОДИМО ПО-ПОДРОБНО ПОЗНАВАНЕ НА ПЪТИЩАТА, КОИТО МОБИЛИЗИРАТ ВОДА И CPAS БЪРЗО ПРЕЗ ПЛАЗМЕНАТА МЕМБРАНА НА ОВОЦИТИТЕ И ЕМБРИОНИТЕ, ЗА ДА СЕ НАМАЛИ ОСМОТИЧНИЯТ СТРЕС И ДА СЕ НАМАЛЯТ ДО МИНИМУМ УВРЕЖДАНИЯТА, ПРИЧИНЕНИ ОТ ОХЛАЖДАНЕТО, КАТО СЕ ОБЪРНЕ СПЕЦИАЛНО ВНИМАНИЕ НА РОЛЯТА НА АКВАПОРИНИ 3 (AQP3) И 7 (AQP7). ОТ ДРУГА СТРАНА, АНТИФРИЗНИТЕ ПРОТЕИНИ (АФП) СЕ ИЗПОЛЗВАТ УСПЕШНО ЗА ВИТРИФИКАЦИЯ НА ГАМЕТИ И ЕМБРИОНИ ПРИ НЯКОИ ВИДОВЕ ПОРАДИ СПОСОБНОСТТА ИМ ДА ИНХИБИРАТ РАСТЕЖА НА ЛЕДА, ТЯХНАТА RECRISTALISATION И ИЗТИЧАНЕТО НА ЙОНИ ПРЕЗ МЕМБРАНИТЕ, КАТО ПО ТОЗИ НАЧИН ПРЕДПАЗВАТ ПЛАЗМЕНАТА ИМ МЕМБРАНА. ОТ ДРУГА СТРАНА, МЕК SUBBLETAL ТЕРМИЧЕН СТРЕС, ПРАВИЛНО ОПРЕДЕЛЕН И ПРАВИЛНО ПРИЛОЖЕН ПРЕДИ ВИТРИФИКАЦИЯТА, БИ МОГЪЛ ДА ОПТИМИЗИРА CRYOTOLERANCE НА ОВОЦИТИТЕ И ЕМБРИОНИТЕ ЧРЕЗ МЕХАНИЗМИ НА АДАПТАЦИЯ, КАТО ПО ТОЗИ НАЧИН ПОДОБРИ ТЯХНАТА ПОНОСИМОСТ КЪМ ПОСЛЕДВАЩИЯ СТРЕС НА ВИТРИФИКАЦИЯТА. ТОЗИ АДАПТИВЕН МЕХАНИЗЪМ МОЖЕ ДА БЪДЕ МЕДИИРАН ЧРЕЗ УВЕЛИЧАВАНЕ НА ЕКСПРЕСИЯТА НА ТЕРМИЧНИ СТРЕСОВИ ПРОТЕИНИ (HSPS), КОИТО МОГАТ ДА СЕ ДОСТАВЯТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛНО ДИРЕКТНО НА ОВОЦИТИТЕ И ЕМБРИОНИТЕ. КАТО СЕ ИМА ПРЕДВИД, ЧЕ ПОДОБНИ ЕФЕКТИ НА ТЕРМОТОЛЕРАНТНОСТ МОГАТ ДА СЕ РАЗВИЯТ НА КЛЕТЪЧНО НИВО ПРИ ИЗЛАГАНЕ НА ТЕРМИЧЕН СТРЕС И СТУДЕН СТРЕС, ПОНАСТОЯЩЕМ НЯМА ПРОУЧВАНИЯ, КОИТО ДА АНАЛИЗИРАТ ЕФЕКТИТЕ ОТ ПОДЛЕТНАТА ЕКСПОЗИЦИЯ НА СТУДЕН СТРЕС ПРИ ОВОЦИТИТЕ И ЕМБРИОНИТЕ ОТ БОЗАЙНИЦИ. ЕКСПРЕСИЯТА НА СТРЕС ПРОТЕИНИ ЧРЕЗ СТУД СЕ УВЕЛИЧАВА БЪРЗО И ЗНАЧИТЕЛНО ПО ВРЕМЕ НА ЛЕКА ХИПОТЕРМИЯ И ТОВА МОЖЕ ДА БЪДЕ РЕШАВАЩО ЗА РАЗВИТИЕТО НА CRYOTOLERANCE. ОСНОВНАТА ЦЕЛ НА ТОЗИ ПРОЕКТ Е ДА СЕ РАЗРАБОТЯТ СТРАТЕГИИ, КОИТО ИМАТ ЗА ЦЕЛ ПОДОБРЯВАНЕ НА CRYOTOLERANCE НА ЗРЕЛИТЕ ОВОЦИТИ ОТ РОДА НА ЕДРИЯ РОГАТ ДОБИТЪК IN VITRO ИЛИ НА ЕМБРИОНИТЕ, ПРОИЗВЕДЕНИ IN VITRO. ЗА ТАЗИ ЦЕЛ ПРЕДЛАГАМЕ ОВОЦИТИТЕ И ЕМБРИОНИТЕ ДА БЪДАТ ТРЕТИРАНИ СПЕЦИАЛНО ПРЕДИ ИЛИ ПО ВРЕМЕ НА ПРОЦЕСА НА ВИТРИФИКАЦИЯ С ИЗСЛЕДВАНЕ НА РОЛЯТА НА AQP3 И AQP7 ПРИ ТРАНСПОРТИРАНЕТО НА ВОДА И ПРОПУСКЛИВОСТ НА CPAS, ТРЕТИРАНЕТО С AFP, HSP ИЛИ ПРИЛАГАНЕТО НА СТРЕС ЦИКЛИ НА СТУД. (Bulgarian)
18 August 2022
0 references
OOCITŲ IR EMBRIONŲ KRIOKONSERVAVIMAS YRA PAGRINDINIS GYVŪNŲ GENETINIŲ IŠTEKLIŲ IŠSAUGOJIMO IR SKLAIDOS METODAS. YRA DU KRIOKONSERVAVIMO METODAI: LĖTAS UŽŠALDYMAS IR STIKLINIMAS. ŠIS PASKUTINIS METODAS YRA NOVATORIŠKAS, GREITAS IR PAPRASTAS METODAS, YPAČ NAUDINGAS, KAI KALBAMA APIE OOCITUS AR EMBRIONUS, PAGAMINTUS IN VITRO. TAČIAU VITRIFICACION YRA MAŽAI PRAKTIŠKAI TAIKOMA GYVŪNŲ DAUGINIMUISI DĖL SUMAŽĖJUSIOS OOCITŲ VYSTYMOSI PO STIKLINIMO KOMPETENCIJOS ARBA DĖL TO, KAD NĖRA STANDARTINĖS EMBRIONŲ STIKLINIMO METODIKOS, KURI PALENGVINTŲ JOS PRAKTINĮ TAIKYMĄ ŪKYJE. NEPAISANT PAŽANGOS AR STRATEGIJŲ, KURIOS BUVO SUKURTOS PER PASTARUOSIUS KELERIUS METUS, KAD GYVULIUS DOMINANČIOS RŪŠYS BŪTŲ SUSTIPRĖJUSIOS, OOCITŲ IŠLIKIMAS, EMBRIONO VYSTYMASIS IR GESTACIJOS RODIKLIAI, GAUTI PO IN VITRO PAGAMINTŲ OOCITŲ IR EMBRIONŲ STIKLINIMO, NĖRA PATENKINAMI DAUGUMAI RŪŠIŲ IR VIS DAR NĖRA „OPTIMALAUS“ ŠIŲ LĄSTELIŲ VITRICATION PROTOKOLO. KAD STIKLINIMAS BŪTŲ SĖKMINGAS, REIKALINGA DIDELĖ KRIOPROTEKTORIŲ (CPAS) KONCENTRACIJA IR DIDELIS AUŠINIMO GREITIS, KURIS GALI PAŽEISTI LĄSTELES, TIKRIAUSIAI DĖL CPAS TOKSIŠKUMO, OSMOSINIO ŠOKO AR LEDO KRISTALŲ SUSIDARYMO. SIEKIANT TO IŠVENGTI, REIKIA IŠSAMESNIŲ ŽINIŲ APIE BŪDUS, KURIAIS VANDUO IR CPAS GREITAI MOBILIZUOJAMI PER OOCITŲ IR EMBRIONŲ PLAZMOS MEMBRANĄ, KAD BŪTŲ GALIMA SUMAŽINTI OSMOSINĮ STRESĄ IR IKI MINIMUMO SUMAŽINTI AUŠINIMO DAROMĄ ŽALĄ, YPATINGĄ DĖMESĮ SKIRIANT AKVAPORINŲ 3 (AQP3) IR 7 (AQP7) VAIDMENIUI. KITA VERTUS, ANTIFRIZO BALTYMAI (AFP) BUVO SĖKMINGAI NAUDOJAMI GAMETŲ IR EMBRIONŲ SUSTIPRĖJIMUI KAI KURIOSE RŪŠYSE DĖL JŲ GEBĖJIMO SLOPINTI LEDO AUGIMĄ, JŲ REKRISTALISACIJOS IR JONŲ NUTEKĖJIMO PER MEMBRANAS, TAIP APSAUGANT JŲ PLAZMINĘ MEMBRANĄ. KITA VERTUS, MINKŠTAS SUBBLETAL ŠILUMINIS STRESAS, TINKAMAI APIBRĖŽTAS IR TINKAMAI PRITAIKYTAS PRIEŠ STIKLINIMĄ, GALĖTŲ OPTIMIZUOTI OOCITŲ IR EMBRIONŲ CRYOTOLERANCE PER PRISITAIKYMO MECHANIZMUS IR TAIP PAGERINTI JŲ TOLERANCIJĄ VĖLESNIAM STIKLINIMO POVEIKIUI. ŠIS PRISITAIKYMO MECHANIZMAS GALI BŪTI SUSIJĘS SU PADIDĖJUSIA TERMINIO STRESO BALTYMŲ (HSPS), KURIE EKSPERIMENTINIU BŪDU GALI BŪTI TIEKIAMI TIESIOGIAI Į OOCITUS IR EMBRIONUS, EKSPRESIJA. ATSIŽVELGIANT Į TAI, KAD PANAŠUS TERMOTOLERANCIJOS POVEIKIS GALI PASIREIKŠTI LĄSTELIŲ LYGMENIU, ESANT TERMINIAM STRESUI IR ŠALTAJAM STRESUI, ŠIUO METU NĖRA TYRIMŲ, KURIUOSE BŪTŲ ANALIZUOJAMAS SUBBLETALINIO OOCITŲ IR ŽINDUOLIŲ EMBRIONŲ ŠALTOJO STRESO POVEIKIS. ŠALTO STRESO BALTYMŲ EKSPRESIJA GREITAI IR ŽYMIAI PADIDĖJA LENGVOS HIPOTERMIJOS METU IR TAI GALI BŪTI LEMIAMAS CRYOTOLERANCE VYSTYMASIS. PAGRINDINIS ŠIO PROJEKTO TIKSLAS – PARENGTI STRATEGIJAS, KURIOMIS SIEKIAMA PAGERINTI IN VITRO BRANDINTŲ GALVIJŲ OOCITŲ ARBA IN VITRO GAUTŲ EMBRIONŲ CRYOTOLERANCE. ŠIUO TIKSLU SIŪLOME GYDYTI OOCITUS IR EMBRIONUS PRIEŠ VITRIFIKACIJOS PROCESĄ ARBA JO METU, KONKREČIAI TIRIANT AQP3 IR AQP7 VAIDMENĮ TRANSPORTUOJANT VANDENĮ IR CPAS PRALAIDUMĄ, GYDYMĄ AFP, HSP ARBA STRESO CIKLŲ TAIKYMĄ PER ŠALTĮ. (Lithuanian)
18 August 2022
0 references
KRIOPREZERVACIJA JAJNIH STANICA I ZAMETAKA TEMELJNA JE TEHNIKA ZA OČUVANJE I ŠIRENJE ŽIVOTINJSKIH GENETSKIH RESURSA. POSTOJE DVIJE METODE ZA KRIOPREZERVACIJU: SPORO ZAMRZAVANJE I VITRIFIKACIJA. OVA POSLJEDNJA METODA JE INOVATIVNA, BRZA I JEDNOSTAVNA METODA, OSOBITO KORISNA KADA JE RIJEČ O JAJNIM STANICAMA ILI EMBRIJIMA PROIZVEDENIMA IN VITRO. MEĐUTIM, VITRIFICACION IMA OGRANIČENU PRAKTIČNU PRIMJENU U REPRODUKCIJI ŽIVOTINJA ZBOG SMANJENE SPOSOBNOSTI RAZVOJA JAJNIH STANICA NAKON VITRIFIKACIJE ILI NEDOSTATKA STANDARDNE METODOLOGIJE ZA VITRIFIKACIJU ZAMETAKA KOJA OLAKŠAVA NJEZINU PRAKTIČNU PRIMJENU NA FARMI. UNATOČ NAPRETKU ILI STRATEGIJAMA KOJE SU RAZVIJENE TIJEKOM POSLJEDNJIH NEKOLIKO GODINA KAKO BI SE VITRIFIKACIJA PRIBLIŽILA VRSTAMA OD INTERESA ZA STOKU, PREŽIVLJAVANJE JAJNIH STANICA, RAZVOJ EMBRIJA I BRZINE GESTACIJE DOBIVENE NAKON VITRIFIKACIJE JAJNIH STANICA I ZAMETAKA PROIZVEDENIH IN VITRO NISU ZADOVOLJAVAJUĆE ZA VEĆINU VRSTA I JOŠ UVIJEK NE POSTOJI „OPTIMALNI” PROTOKOL ZA VITRICATION TIH STANICA. VISOKE KONCENTRACIJE KRIOPROTEKTORA (CPAS) I VISOKE BRZINE HLAĐENJA KOJE MOGU OŠTETITI STANICE, VJEROJATNO ZBOG CPAS TOKSIČNOSTI, OSMOTSKOG ŠOKA ILI STVARANJA KRISTALA LEDA POTREBNE SU KAKO BI VITRIFIKACIJA BILA USPJEŠNA. KAKO BI SE TO IZBJEGLO, POTREBNO JE DETALJNIJE POZNAVANJE PUTOVA KOJI BRZO MOBILIZIRAJU VODU I CPAS KROZ PLAZMATSKU MEMBRANU JAJNIH STANICA I ZAMETAKA KAKO BI SE POMOGLO SMANJITI OSMOTSKI STRES I SMANJILA OŠTEĆENJA UZROKOVANA HLAĐENJEM NA MINIMUM, S POSEBNIM NAGLASKOM NA ULOGU AKVAPORINA 3 (AQP3) I 7 (AQP7). S DRUGE STRANE, PROTEINI ANTIFRIZA (AFP) USPJEŠNO SU KORIŠTENI ZA VITRIFIKACIJU GAMETA I ZAMETAKA KOD NEKIH VRSTA ZBOG NJIHOVE SPOSOBNOSTI DA INHIBIRAJU RAST LEDA, NJIHOVE RECRISTALISATION I CURENJA IONA KROZ MEMBRANE, ČIME SE ŠTITI NJIHOVA PLAZMATSKA MEMBRANA. S DRUGE STRANE, MEKANI SUBBLETAL TOPLINSKI STRES, PRAVILNO DEFINIRAN I PRAVILNO PRIMIJENJEN PRIJE VITRIFIKACIJE, MOGAO BI OPTIMIZIRATI CRYOTOLERANCE JAJNIH STANICA I ZAMETAKA MEHANIZMIMA PRILAGODBE, ČIME BI SE POBOLJŠALA NJIHOVA TOLERANCIJA NA NAKNADNI STRES VITRIFIKACIJE. OVAJ PRILAGODLJIVI MEHANIZAM MOGAO BI BITI POSREDOVAN POVEĆANJEM EKSPRESIJE PROTEINA TOPLINSKOG STRESA (HSPS) KOJI SE EKSPERIMENTALNO MOGU ISPORUČITI IZRAVNO JAJNIM STANICAMA I ZAMECIMA. S OBZIROM NA TO DA SE SLIČNI UČINCI TERMOTOLERANCIJE MOGU RAZVITI NA STANIČNOJ RAZINI S IZLOŽENOŠĆU TERMALNOM STRESU I HLADNOM STRESU, TRENUTAČNO NE POSTOJE STUDIJE KOJE SU ANALIZIRALE UČINKE SUBBLETALNE IZLOŽENOSTI HLADNOM STRESU U JAJNIH STANICA I EMBRIJA SISAVACA. EKSPRESIJA PROTEINA STRESA HLADNIM POVEĆAVA SE BRZO I ZNAČAJNO TIJEKOM BLAGE HIPOTERMIJE, A TO BI MOGLO BITI PRESUDNO ZA RAZVOJ CRYOTOLERANCE. GLAVNA SVRHA OVOG PROJEKTA JE RAZVOJ STRATEGIJA ČIJI JE CILJ POBOLJŠATI CRYOTOLERANCE IN VITRO ZRELIH JAJNIH STANICA GOVEDA ILI IN VITRO PROIZVEDENIH ZAMETAKA. U TU SVRHU PREDLAŽEMO LIJEČENJE JAJNIH STANICA I ZAMETAKA PRIJE ILI TIJEKOM PROCESA VITRIFIKACIJE, POSEBNO PROUČAVANJEM ULOGE AQP3 I AQP7 U TRANSPORTU VODE I PROPUSNOSTI CPAS-A, LIJEČENJU AFP-OM, HSP-OM ILI PRIMJENOM STRESNIH CIKLUSA PO HLADNOĆI. (Croatian)
18 August 2022
0 references
KRYOBEVARANDE AV OOCYTER OCH EMBRYON ÄR EN GRUNDLÄGGANDE TEKNIK FÖR BEVARANDE OCH SPRIDNING AV ANIMALISKA GENETISKA RESURSER. DET FINNS TVÅ METODER FÖR KRYOKONSERVERING: LÅNGSAM FRYSNING OCH VITRIFIKATION. DENNA SISTA METOD ÄR EN INNOVATIV, SNABB OCH ENKEL METOD, SÄRSKILT ANVÄNDBAR NÄR DET GÄLLER OOCYTER ELLER EMBRYON SOM PRODUCERAS IN VITRO. VITRIFICACION HAR DOCK EN BEGRÄNSAD PRAKTISK TILLÄMPNING INOM DJURREPRODUKTION PÅ GRUND AV DEN MINSKADE KOMPETENSEN FÖR OOCYTERNAS UTVECKLING EFTER VITRIFIERINGEN ELLER AVSAKNADEN AV EN STANDARDMETOD FÖR VITRIFIERING AV EMBRYON SOM UNDERLÄTTAR DESS PRAKTISKA TILLÄMPNING PÅ GÅRDEN. TROTS DE FRAMSTEG ELLER STRATEGIER SOM HAR UTVECKLATS UNDER DE SENASTE ÅREN FÖR ATT FÖRA VITRIFIERINGEN TILL DJURARTERNA ÄR OOCYTERNAS ÖVERLEVNAD, EMBRYOTS UTVECKLING OCH DRÄKTIGHETSHASTIGHETEN EFTER VITRIFIERINGEN AV OOCYTER OCH EMBRYON SOM PRODUCERATS IN VITRO INTE TILLFREDSSTÄLLANDE FÖR DE FLESTA ARTER OCH DET FINNS FORTFARANDE INGET ”OPTIMALT” PROTOKOLL FÖR VITRICATION AV DESSA CELLER. HÖGA KONCENTRATIONER AV KRYOTROTEKTORER (CPAS) OCH HÖGA KYLHASTIGHETER SOM KAN SKADA CELLER, FÖRMODLIGEN PÅ GRUND AV CPAS-TOXICITET, OSMOTISK CHOCK ELLER ISKRISTALLERBILDNING KRÄVS FÖR ATT VITRIFIERINGEN SKA BLI FRAMGÅNGSRIK. FÖR ATT UNDVIKA DETTA KRÄVS EN MER DETALJERAD KUNSKAP OM DE VÄGAR SOM MOBILISERAR VATTEN OCH CPAS SNABBT GENOM PLASMAMEMBRANET AV OOCYTER OCH EMBRYON FÖR ATT BIDRA TILL ATT MINSKA DEN OSMOTISKA STRESSEN OCH MINSKA DE SKADOR SOM ORSAKAS AV KYLNING TILL ETT MINIMUM, MED SÄRSKILD UPPMÄRKSAMHET PÅ ROLLEN AV AQUAPORINER 3 (AQP3) OCH 7 (AQP7). Å ANDRA SIDAN HAR FROSTSKYDDSPROTEINER (AFP) MED FRAMGÅNG ANVÄNTS FÖR VITRIFIERING AV GAMETER OCH EMBRYON I VISSA ARTER PÅ GRUND AV DERAS FÖRMÅGA ATT HÄMMA ISTILLVÄXT, DERAS RECRISTALISATION OCH LÄCKAGE AV JONER GENOM MEMBRANEN, VILKET SKYDDAR DERAS PLASMAMEMBRAN. Å ANDRA SIDAN KAN EN MJUK SUBBLETAL TERMISK STRESS, KORREKT DEFINIERAD OCH KORREKT TILLÄMPAD FÖRE VITRIFIERINGEN, OPTIMERA CRYOTOLERANCE AV OOCYTER OCH EMBRYON GENOM ANPASSNINGSMEKANISMER, VILKET FÖRBÄTTRAR DERAS TOLERANS MOT DEN EFTERFÖLJANDE STRESSEN AV VITRIFIERINGEN. DENNA ADAPTIVA MEKANISM SKULLE KUNNA FÖRMEDLAS AV EN ÖKNING AV UTTRYCKET FÖR TERMISKA STRESSPROTEINER (HSPS) SOM EXPERIMENTELLT KAN TILLFÖRAS DIREKT TILL OOCYTER OCH EMBRYON. MED TANKE PÅ ATT LIKNANDE TERMOTOLERANSEFFEKTER KAN UTVECKLAS PÅ CELLULÄR NIVÅ MED EXPONERING FÖR TERMISK STRESS OCH KALL STRESS, FINNS DET FÖR NÄRVARANDE INGA STUDIER SOM HAR ANALYSERAT EFFEKTERNA AV EN SUBLETAL EXPONERING FÖR KALL STRESS I OOCYTER OCH DÄGGDJURSEMBRYON. UTTRYCK AV STRESSPROTEINER GENOM KYLA ÖKAR SNABBT OCH AVSEVÄRT UNDER MILD HYPOTERMI, OCH DET KAN VARA AVGÖRANDE FÖR UTVECKLINGEN AV CRYOTOLERANCE. HUVUDSYFTET MED DETTA PROJEKT ÄR ATT UTVECKLA STRATEGIER SOM SYFTAR TILL ATT FÖRBÄTTRA CRYOTOLERANCE AV IN VITRO MOGNA BOVINA OOCYTER ELLER IN VITRO-PRODUCERADE EMBRYON. FÖR DETTA ÄNDAMÅL FÖRESLÅR VI ATT OOCYTER OCH EMBRYON BEHANDLAS FÖRE ELLER UNDER VITRIFIERINGSPROCESSEN SPECIFIKT MED STUDIEN AV AQP3:S OCH AQP7:S ROLL VID TRANSPORT AV VATTEN OCH CPAS PERMEABILITET, BEHANDLING MED AFP, HSP ELLER TILLÄMPNING AV STRESSCYKLER PER FÖRKYLNING. (Swedish)
18 August 2022
0 references
CRIOCONSERVAREA OOCITELOR ȘI EMBRIONILOR ESTE O TEHNICĂ FUNDAMENTALĂ PENTRU CONSERVAREA ȘI DIFUZAREA RESURSELOR GENETICE ANIMALE. EXISTĂ DOUĂ METODE DE CRIOCONSERVARE: CONGELARE LENTĂ ȘI VITRIFICARE. ACEASTĂ ULTIMĂ METODĂ ESTE O METODĂ INOVATOARE, RAPIDĂ ȘI SIMPLĂ, MAI ALES UTILĂ ATUNCI CÂND VINE VORBA DE OVOCITE SAU EMBRIONI PRODUȘI IN VITRO. CU TOATE ACESTEA, VITRIFICACION ARE O APLICARE PRACTICĂ LIMITATĂ ÎN CEEA CE PRIVEȘTE REPRODUCEREA ANIMALELOR DIN CAUZA COMPETENȚEI REDUSE DE DEZVOLTARE A OOCITELOR DUPĂ VITRIFICARE SAU A LIPSEI UNEI METODOLOGII STANDARD PENTRU VITRIFICAREA EMBRIONILOR CARE SĂ FACILITEZE APLICAREA SA PRACTICĂ ÎN FERMĂ. ÎN CIUDA PROGRESELOR SAU STRATEGIILOR CARE AU FOST DEZVOLTATE ÎN ULTIMII ANI PENTRU A ADUCE VITRIFICAREA SPECIILOR DE INTERES PENTRU CREȘTEREA ANIMALELOR, SUPRAVIEȚUIREA OOCITELOR, DEZVOLTAREA EMBRIONULUI ȘI RATELE DE GESTAȚIE OBȚINUTE DUPĂ VITRIFICAREA OOCITELOR ȘI EMBRIONILOR PRODUȘI IN VITRO NU SUNT SATISFĂCĂTOARE PENTRU MAJORITATEA SPECIILOR ȘI NU EXISTĂ ÎNCĂ UN PROTOCOL „OPTIM” PENTRU VITRICAREA ACESTOR CELULE. CONCENTRAȚIILE RIDICATE DE CRIOPROTECTOARE (CPAS) ȘI RATELE RIDICATE DE RĂCIRE CARE POT DETERIORA CELULELE, PROBABIL DIN CAUZA TOXICITĂȚII CPAS, A ȘOCULUI OSMOTIC SAU A FORMĂRII CRISTALELOR DE GHEAȚĂ SUNT NECESARE PENTRU CA VITRIFICAREA SĂ AIBĂ SUCCES. PENTRU A EVITA ACEST LUCRU, ESTE NECESARĂ O CUNOAȘTERE MAI DETALIATĂ A CĂILOR CARE MOBILIZEAZĂ RAPID APA ȘI CPAS PRIN MEMBRANA PLASMATICĂ A OOCITELOR ȘI EMBRIONILOR, PENTRU A CONTRIBUI LA REDUCEREA STRESULUI OSMOTIC ȘI A REDUCE DAUNELE CAUZATE DE RĂCIREA LA MINIMUM, ACORDÂND O ATENȚIE DEOSEBITĂ ROLULUI ACVAPORINELOR 3 (AQP3) ȘI 7 (AQP7). PE DE ALTĂ PARTE, PROTEINELE ANTIGEL (AFP) AU FOST UTILIZATE CU SUCCES PENTRU VITRIFICAREA GAMEȚILOR ȘI EMBRIONILOR LA UNELE SPECII DATORITĂ CAPACITĂȚII LOR DE A INHIBA CREȘTEREA GHEȚII, RECRISTALISAȚIA LOR ȘI SCURGERII DE IONI PRIN MEMBRANE, PROTEJÂNDU-LE ASTFEL MEMBRANA PLASMATICĂ. PE DE ALTĂ PARTE, UN STRES TERMIC MOALE SUBBLETAL, DEFINIT ÎN MOD CORESPUNZĂTOR ȘI APLICAT CORECT ÎNAINTE DE VITRIFICARE, AR PUTEA OPTIMIZA CRYOTOLERANȚA OOCITELOR ȘI EMBRIONILOR PRIN MECANISME DE ADAPTARE, ÎMBUNĂTĂȚIND ASTFEL TOLERANȚA ACESTORA LA STRESUL ULTERIOR AL VITRIFICĂRII. ACEST MECANISM ADAPTIV AR PUTEA FI MEDIAT PRINTR-O CREȘTERE A EXPRESIEI PROTEINELOR DE STRES TERMIC (HSPS) CARE POT FI FURNIZATE EXPERIMENTAL DIRECT OOCITELOR ȘI EMBRIONILOR. AVÂND ÎN VEDERE CĂ EFECTE SIMILARE DE TERMOTOLERANȚĂ POT FI DEZVOLTATE LA NIVEL CELULAR CU EXPUNERE LA STRES TERMIC ȘI LA STRES RECE, ÎN PREZENT NU EXISTĂ STUDII CARE SĂ FI ANALIZAT EFECTELE UNEI EXPUNERI SUBLETALE LA STRES RECE LA OOCITE ȘI EMBRIONI DE MAMIFERE. EXPRESIA PROTEINELOR DE STRES PRIN FRIG CREȘTE RAPID ȘI SUBSTANȚIAL ÎN TIMPUL HIPOTERMIEI UȘOARE, CEEA CE AR PUTEA FI DECISIV PENTRU DEZVOLTAREA CRYOTOLERANCE. SCOPUL PRINCIPAL AL ACESTUI PROIECT ESTE DE A DEZVOLTA STRATEGII CARE VIZEAZĂ ÎMBUNĂTĂȚIREA CRYOTOLERANCE A OOCITELOR BOVINE MATURATE IN VITRO SAU A EMBRIONILOR PRODUȘI IN VITRO. ÎN ACEST SCOP, PROPUNEM TRATAREA OOCITELOR ȘI EMBRIONILOR ÎNAINTE SAU ÎN TIMPUL PROCESULUI DE VITRIFICARE, ÎN SPECIAL PRIN STUDIUL ROLULUI AQP3 ȘI AQP7 ÎN TRANSPORTUL PERMEABILITĂȚII APEI ȘI CPAS, TRATAREA CU AFP, HSP SAU APLICAREA CICLURILOR DE STRES PER FRIG. (Romanian)
18 August 2022
0 references
KRIOPREHRANJEVANJE JAJČNIH CELIC IN ZARODKOV JE TEMELJNA TEHNIKA ZA OHRANJANJE IN ŠIRJENJE ŽIVALSKIH GENSKIH VIROV. OBSTAJATA DVE METODI ZA OHRANJANJE KRIOKONZERVACIJE: POČASNO ZAMRZOVANJE IN VITRIFIKACIJA. TA ZADNJA METODA JE INOVATIVNA, HITRA IN PREPROSTA METODA, ŠE POSEBEJ UPORABNA, KO GRE ZA JAJČNE CELICE ALI ZARODKE, PRIDOBLJENE IN VITRO. VENDAR IMA VITRIFICACION OMEJENO PRAKTIČNO UPORABO PRI REPRODUKCIJI ŽIVALI ZARADI ZMANJŠANE SPOSOBNOSTI RAZVOJA JAJČNIH CELIC PO VITRIFIKACIJI ALI POMANJKANJA STANDARDNE METODOLOGIJE ZA VITRIFIKACIJO ZARODKOV, KI BI OLAJŠALA NJEGOVO PRAKTIČNO UPORABO NA KMETIJI. KLJUB NAPREDKU ALI STRATEGIJAM, KI SO BILE RAZVITE V ZADNJIH NEKAJ LETIH ZA VITRIFIKACIJO ŽIVALI, PREŽIVETJE JAJČNIH CELIC, RAZVOJ ZARODKA IN STOPNJE GESTACIJE, PRIDOBLJENE PO VITRIFIKACIJI JAJČNIH CELIC IN ZARODKOV, PRIDOBLJENIH IN VITRO, ZA VEČINO VRST NISO ZADOVOLJIVI IN ŠE VEDNO NI „OPTIMALNEGA“ PROTOKOLA ZA VITRICATION TEH CELIC. ZA USPEŠNO VITRIFIKACIJO SO POTREBNE VISOKE KONCENTRACIJE KRIOPROTEKTORJEV (CPAS) IN VISOKE STOPNJE HLAJENJA, KI LAHKO POŠKODUJEJO CELICE, VERJETNO ZARADI TOKSIČNOSTI CPAS, OSMOTSKEGA ŠOKA ALI NASTAJANJA LEDENIH KRISTALOV. DA BI SE TEMU IZOGNILI, JE POTREBNO PODROBNEJŠE POZNAVANJE POTI, KI HITRO MOBILIZIRAJO VODO IN CPAS SKOZI PLAZEMSKO MEMBRANO JAJČNIH CELIC IN ZARODKOV, DA BI POMAGALI ZMANJŠATI OSMOTSKI STRES IN ČIM BOLJ ZMANJŠALI ŠKODO, KI JO POVZROČI HLAJENJE, S POSEBNIM POUDARKOM NA VLOGI AKVAPORINOV 3 (AQP3) IN 7 (AQP7). PO DRUGI STRANI PA SO BILE BELJAKOVINE PROTI ZMRZOVANJU (AFP) USPEŠNO UPORABLJENE ZA VITRIFIKACIJO GAMET IN ZARODKOV PRI NEKATERIH VRSTAH ZARADI NJIHOVE SPOSOBNOSTI ZAVIRANJA RASTI LEDU, NJIHOVE RECRISTALISATION IN UHAJANJA IONOV SKOZI MEMBRANE, S ČIMER SE ŠČITI NJIHOVA PLAZEMSKA MEMBRANA. PO DRUGI STRANI PA BI MEHAK SUBBLETALNI TOPLOTNI STRES, KI JE USTREZNO OPREDELJEN IN PRAVILNO UPORABLJEN PRED VITRIFIKACIJO, LAHKO OPTIMIZIRAL CRYOTOLERANCE JAJČNIH CELIC IN ZARODKOV Z MEHANIZMI PRILAGAJANJA, S ČIMER BI SE IZBOLJŠALA NJIHOVA TOLERANCA NA POZNEJŠI STRES ZARADI VITRIFIKACIJE. TA PRILAGODITVENI MEHANIZEM BI LAHKO POSREDOVALI S POVEČANJEM IZRAŽANJA BELJAKOVIN TERMIČNEGA STRESA (HSPS), KI SE LAHKO EKSPERIMENTALNO DOBAVLJAJO NEPOSREDNO JAJČNIM CELICAM IN ZARODKOM. GLEDE NA TO, DA SE PODOBNI TERMOTOLERANCI LAHKO RAZVIJEJO NA CELIČNI RAVNI Z IZPOSTAVLJENOSTJO TERMIČNEMU STRESU IN HLADNEMU STRESU, TRENUTNO NI ŠTUDIJ, KI BI ANALIZIRALE UČINKE SUBLETALNE IZPOSTAVLJENOSTI MRAZU V JAJČNIH CELICAH IN ZARODKIH SESALCEV. EKSPRESIJA STRESNIH PROTEINOV Z MRAZOM SE HITRO IN ZNATNO POVEČA MED BLAGO HIPOTERMIJO, KAR BI LAHKO BILO ODLOČILNO ZA RAZVOJ ZDRAVILA CRYOTOLERANCE. GLAVNI NAMEN TEGA PROJEKTA JE RAZVITI STRATEGIJE, KATERIH CILJ JE IZBOLJŠATI CRYOTOLERANCE IN VITRO ZORJENIH GOVEJIH OOCITOV ALI ZARODKOV, PRIDOBLJENIH IN VITRO. V TA NAMEN PREDLAGAMO ZDRAVLJENJE OOCITOV IN ZARODKOV PRED ALI MED POSTOPKOM VITRIFIKACIJE POSEBEJ S ŠTUDIJO VLOGE AQP3 IN AQP7 PRI TRANSPORTU VODE IN PREPUSTNOSTI CPAS, ZDRAVLJENJU Z AFP, HSP ALI UPORABI STRESNIH CIKLOV NA MRAZ. (Slovenian)
18 August 2022
0 references
KRIOPREZERWACJA OOCYTÓW I ZARODKÓW JEST PODSTAWOWĄ TECHNIKĄ OCHRONY I ROZPOWSZECHNIANIA ZWIERZĘCYCH ZASOBÓW GENETYCZNYCH. ISTNIEJĄ DWIE METODY KRIOPREZERWACJI: POWOLNE ZAMRAŻANIE I WITRYFIKACJA. TA OSTATNIA METODA JEST INNOWACYJNĄ, SZYBKĄ I PROSTĄ METODĄ, SZCZEGÓLNIE PRZYDATNĄ W PRZYPADKU OOCYTÓW LUB ZARODKÓW WYTWARZANYCH IN VITRO. JEDNAKŻE VITRIFICACION MA OGRANICZONE PRAKTYCZNE ZASTOSOWANIE W ZAKRESIE REPRODUKCJI ZWIERZĄT ZE WZGLĘDU NA OGRANICZONE KOMPETENCJE W ZAKRESIE ROZWOJU OOCYTÓW PO WITRYFIKACJI LUB BRAK STANDARDOWEJ METODYKI WITRYFIKACJI ZARODKÓW, KTÓRA UŁATWIA JEJ PRAKTYCZNE STOSOWANIE W GOSPODARSTWIE. POMIMO POSTĘPÓW LUB STRATEGII, KTÓRE ZOSTAŁY OPRACOWANE W CIĄGU OSTATNICH KILKU LAT W CELU ZAPEWNIENIA WITRYFIKACJI GATUNKOM ZWIERZĄT GOSPODARSKICH, PRZETRWANIE OOCYTÓW, ROZWÓJ EMBRIONU I WSKAŹNIKI CIĄŻY UZYSKANE PO WITRYFIKACJI OOCYTÓW I ZARODKÓW WYPRODUKOWANYCH IN VITRO NIE SĄ ZADOWALAJĄCE DLA WIĘKSZOŚCI GATUNKÓW I NADAL NIE MA „OPTYMALNEGO” PROTOKOŁU DO WITRYKACJI TYCH KOMÓREK. WYSOKIE STĘŻENIA KRIOPROTEKTORÓW (CPAS) I WYSOKIE WSKAŹNIKI CHŁODZENIA, KTÓRE MOGĄ USZKODZIĆ KOMÓRKI, PRAWDOPODOBNIE ZE WZGLĘDU NA TOKSYCZNOŚĆ CPAS, WSTRZĄS OSMOTYCZNY LUB TWORZENIE KRYSZTAŁÓW LODU, SĄ NIEZBĘDNE DO POWODZENIA WITRYFIKACJI. ABY TEGO UNIKNĄĆ, POTRZEBNA JEST BARDZIEJ SZCZEGÓŁOWA WIEDZA NA TEMAT DRÓG SZYBKIEGO MOBILIZOWANIA WODY I CPAS PRZEZ BŁONĘ OOCYTÓW I ZARODKÓW W CELU ZMNIEJSZENIA STRESU OSMOTYCZNEGO I ZMNIEJSZENIA DO MINIMUM USZKODZEŃ SPOWODOWANYCH CHŁODZENIEM, ZE SZCZEGÓLNYM UWZGLĘDNIENIEM ROLI AQUAPORIN 3 (AQP3) I 7 (AQP7). Z DRUGIEJ STRONY, BIAŁKA PRZECIW ZAMARZANIU (AFP) ZOSTAŁY Z POWODZENIEM WYKORZYSTANE DO WITRYFIKACJI GAMET I EMBRIONÓW U NIEKTÓRYCH GATUNKÓW ZE WZGLĘDU NA ICH ZDOLNOŚĆ DO HAMOWANIA WZROSTU LODU, ICH RECRISTALISATION I WYCIEK JONÓW PRZEZ BŁONY, CHRONIĄC W TEN SPOSÓB ICH BŁONĘ PLAZMOWĄ. NATOMIAST MIĘKKIE NAPRĘŻENIE TERMICZNE SUBBLETAL, ODPOWIEDNIO ZDEFINIOWANE I ODPOWIEDNIO ZASTOSOWANE PRZED WITRYFIKACJĄ, MOGŁOBY ZOPTYMALIZOWAĆ CRYOTOLERANCE OOCYTÓW I ZARODKÓW POPRZEZ MECHANIZMY ADAPTACJI, POPRAWIAJĄC W TEN SPOSÓB ICH TOLERANCJĘ NA PÓŹNIEJSZE NAPRĘŻENIA WITRYFIKACJI. TEN MECHANIZM ADAPTACYJNY MOŻE BYĆ WSPOMAGANY PRZEZ ZWIĘKSZENIE EKSPRESJI BIAŁEK STRESU TERMICZNEGO (HSPS), KTÓRE MOGĄ BYĆ DOŚWIADCZALNIE DOSTARCZANE BEZPOŚREDNIO DO OOCYTÓW I ZARODKÓW. BIORĄC POD UWAGĘ, ŻE PODOBNE EFEKTY TERMOTOLERANCJI MOGĄ BYĆ ROZWIJANE NA POZIOMIE KOMÓRKOWYM PRZY NARAŻENIU NA STRES CIEPLNY I NAPRĘŻENIE ZIMNE, OBECNIE NIE MA BADAŃ, KTÓRE PRZEANALIZOWAŁY SKUTKI NARAŻENIA PODNAJMU NA STRES NA ZIMNO W OOCYTACH I EMBRIONACH SSAKÓW. EKSPRESJA BIAŁEK STRESOWYCH PRZEZ ZIMNO SZYBKO I ZNACZNIE WZRASTA PODCZAS ŁAGODNEJ HIPOTERMII, CO MOŻE MIEĆ DECYDUJĄCE ZNACZENIE DLA ROZWOJU CRYOTOLERANCE. GŁÓWNYM CELEM TEGO PROJEKTU JEST OPRACOWANIE STRATEGII MAJĄCYCH NA CELU POPRAWĘ CRYOTOLERANCE DOJRZAŁYCH OOCYTÓW BYDŁA IN VITRO LUB ZARODKÓW WYPRODUKOWANYCH IN VITRO. W TYM CELU PROPONUJEMY LECZENIE OOCYTÓW I ZARODKÓW PRZED LUB W TRAKCIE PROCESU WITRYFIKACJI, SZCZEGÓLNIE POPRZEZ BADANIE ROLI AQP3 I AQP7 W TRANSPORCIE WODY I PRZEPUSZCZALNOŚCI CPAS, LECZENIE AFP, HSP LUB STOSOWANIE CYKLI STRESU NA ZIMNO. (Polish)
18 August 2022
0 references
Cerdanyola del Vallès
0 references
20 December 2023
0 references
Identifiers
AGL2016-79802-P
0 references