STUDY OF THE FUNCTIONAL IMPLICATIONS OF OVOCITARY AND OVIDUCTAL PROTEINS IN FERTILISATION AND EMBRYONIC DEVELOPMENT IN THE RABBIT THROUGH THE USE OF CRISP GENIC EDITION (Q3151075)
Jump to navigation
Jump to search
Project Q3151075 in Spain
| Language | Label | Description | Also known as |
|---|---|---|---|
| English | STUDY OF THE FUNCTIONAL IMPLICATIONS OF OVOCITARY AND OVIDUCTAL PROTEINS IN FERTILISATION AND EMBRYONIC DEVELOPMENT IN THE RABBIT THROUGH THE USE OF CRISP GENIC EDITION |
Project Q3151075 in Spain |
Statements
146,216.39 Euro
0 references
181,500.0 Euro
0 references
80.56 percent
0 references
1 January 2019
0 references
31 December 2021
0 references
UNIVERSIDAD DE MURCIA
0 references
30071
0 references
LA REPRODUCCION SEXUAL ES UN PROCESO COMPLEJO QUE IMPLICA LA FORMACION Y PARTICIPACION DE DOS CELULAS ALTAMENTE ESPECIALIZADAS QUE SON LOS GAMETOS QUE DARA LUGAR A UN CIGOTO CON SU PROPIA IDENTIDAD GENETICA. EN EL CASO DE LOS MAMIFEROS, DE REPRODUCCION INTERNA, LA FECUNDACION Y EL DESARROLLO EMBRIONARIO PREIMPLANTACIONAL SE PRODUCE EN UN CONDUCTO ESPECIALIZADO DENOMINADO OVIDUCTO (O TROMPA DE FALOPIO). EL ESCLARECIMIENTO DE LOS MECANISMOS QUE ESTAN IMPLICADOS EN LA FORMACION DE GAMETOS, RECONOCIMIENTO ENTRE GAMETOS, FECUNDACION, INTERACCION CON EL OVIDUCTO DE LOS GAMETOS Y EMBRIONES PREIMPLANTACIONALES ES DE GRAN RELEVANCIA CIENTIFICA, TECNOLOGICA, CLINICA Y SOCIAL. PARA LA CONSECUCION DE ESTOS OBJETIVOS NOS PLANTEAMOS UN ABORDAJE NOVEDOSO COMO ES EL USO DE LA TECNOLOGIA CRISPR-CAS9 EN LA CONEJA. ESTA TECNOLOGIA NOS PERMITE GENERAR ANIMALES KNOCK-OUT (KO) AL IMPEDIR LA EXPRESION DE UN GEN FUNCIONAL. ESTA APROXIMACION EXPERIMENTAL APORTA UNA DE LAS EVIDENCIAS CIENTIFICAS MAS ROBUSTAS Y FIABLES. ASI, DESDE HACE UNOS AÑOS EL CONOCIMIENTO EN EL CAMPO DE LA REPRODUCCION SE HA VISTO PROFUNDAMENTE MODIFICADO DEBIDO AL USO DE ANIMALES KO. LA TECNOLOGIA CRISPR-CAS9 PERMITE GENERAR KO EN OTROS ANIMALES QUE NO SEAN EL RATON DE UN MODO EFICIENTE Y SE HA DESARROLLADO RECIENTEMENTE EN LA CONEJA. EN EL PRESENTE PROYECTO VAMOS A UTILIZAR EL CONEJO COMO ANIMAL EXPERIMENTAL PUESTO QUE TIENE UNAS CARACTERISTICAS REPRODUCTIVAS QUE EN ALGUNOS ASPECTOS SON MUY DIFERENTES AL DEL RATON Y PARECIDAS A OTRAS ESPECIES DE ANIMALES DOMESTICOS COMO LA CERDA, VACA, GATA, PERRA E INCLUSO LA ESPECIE HUMANA. ASI, LA CONEJA PRESENTA UNA ZONA PELUCIDA (ZP) QUE RODEA AL OVULO COMPUESTA POR 4 PROTEINAS INCLUYENDO LA PROTEINA ZP4 QUE NO SE ENCUENTRA EN EL RATON (ZP1, ZP2 Y ZP3). ADEMAS, EXISTEN DATOS CONTRADICTORIOS EN BIBLIOGRAFIA EN RELACION AL PAPEL BIOLOGICO DESEMPEÑADO POR OVGP1 QUE ES LA PROTEINA MAS ABUNDANTE SECRETADA POR EL EPITELIO OVIDUCTAL. ASI, OVGP1 TIENE UNA ALTA AFINIDAD POR LA ZP DE OVOCITOS DE CONEJA, VACA, CERDA E INCLUSO LA ESPECIE HUMANA; SIN EMBARGO, EN EL RATON ESTA PROTEINA TIENE UNA ESCASA AFINIDAD POR LA ZP. EN EL PRESENTE PROYECTO QUEREMOS ANALIZAR MEDIANTE EL USO DE ANIMALES KO EL PAPEL JUGADO POR DOS PROTEINAS DE LA ZP (ZP1 Y ZP4) EN UN MODELO DE ZP CON 4 PROTEINAS Y EL PAPEL JUGADO POR OVGP1. EN ESTE PROYECTO SE UTILIZARAN ADEMAS OTRAS TECNOLOGIAS PUNTERAS COMO SON DE ANALISIS PROTEOMICO, EXPRESION GENICA (MICROMATRICES Y PCR) ADEMAS DE MICROSCOPIA CONFOCAL Y ELECTRONICA ENTRE OTRAS. LOS POTENCIALES RESULTADOS OBTENIDOS NOS APORTARAN UNA INFORMACION DE GRAN RELEVANCIA ACERCA DE LOS MECANISMOS IMPLICADOS DE UN MODO GENERAL EN LA FECUNDACION. ESTA INFORMACION SERA CLAVE PARA EL DESARROLLO DE NUEVAS METODOLOGIAS DE DIAGNOSTICO DE INFERTILIDAD, CALIDAD ESPERMATICA, SELECCION ESPERMATICA Y MEJORA DE MEDIOS DE CULTIVOS PARA LA FECUNDACION IN VITRO PARA AUMENTAR LA EFICIENCIA DE LAS TECNICAS DE REPRODUCCION ASISTIDA. ADEMAS, ESTA INFORMACION PUEDE SER CLAVE PARA EL DESARROLLO DE VACUNAS ANTICONCEPTIVAS MAS EFICIENTE PARA EL CONTROL DE POBLACIONES DE ANIMALES SALVAJES CON UN IMPORTANTE IMPACTO SOCIAL, ECOLOGICO Y ECONOMICO. (Spanish)
0 references
SEXUAL REPRODUCTION IS A COMPLEX PROCESS THAT INVOLVES THE FORMATION AND PARTICIPATION OF TWO HIGHLY SPECIALIZED CELLS, THE GAMETES, THAT WILL GIVE RISE TO A ZYGOTE WITH ITS OWN GENETIC IDENTITY. IN THE CASE OF MAMMALS, WITH AN INTERNAL REPRODUCTION, FERTILIZATION AND PREIMPLANTATION EMBRYONIC DEVELOPMENT OCCURS IN A SPECIALIZED TUBE CALLED THE OVIDUCT (OR FALLOPIAN TUBE). THE CLARIFICATION OF THE MECHANISMS THAT ARE INVOLVED IN THE FORMATION OF GAMETES, RECOGNITION AMONG GAMETES, FERTILIZATION, INTERACTION WITH THE OVIDUCT OF GAMETES AND PREIMPLANTATION EMBRYOS IS OF GREAT SCIENTIFIC, TECHNOLOGICAL, CLINICAL AND SOCIAL RELEVANCE. TO ACHIEVE THESE OBJECTIVES, WE SET OUT A NOVEL APPROACH, SUCH AS THE USE OF CRISPR-CAS9 TECHNOLOGY IN THE RABBIT. THIS TECHNOLOGY ALLOWS US TO GENERATE KNOCKOUT (KO) ANIMALS BY PREVENTING THE EXPRESSION OF A FUNCTIONAL GENE. THIS EXPERIMENTAL APPROACH PROVIDES ONE OF THE MOST ROBUST AND RELIABLE SCIENTIFIC EVIDENCE. THUS, FOR A FEW YEARS THE KNOWLEDGE IN THE FIELD OF REPRODUCTION HAS BEEN PROFOUNDLY MODIFIED DUE TO THE USE OF KO ANIMALS. THE CRISPR-CAS9 TECHNOLOGY ALLOWS TO GENERATE KO IN OTHER ANIMALS THAN THE MOUSE IN AN EFFICIENT METHOD AND IT HAS BEEN RECENTLY DEVELOPED IN THE RABBIT. IN THE PRESENT PROJECT, WE WILL USE THE RABBIT AS AN EXPERIMENTAL ANIMAL SINCE IT HAS REPRODUCTIVE CHARACTERISTICS THAT IN SOME ASPECTS ARE VERY DIFFERENT FROM THE MOUSE AND SIMILAR TO OTHER DOMESTIC ANIMALS SUCH AS THE SOW, COW, CAT, BITCH AND EVEN THE HUMAN SPECIES . THUS, THE RABBIT PRESENTS A ZONA PELLUCIDA (ZP) SURROUNDING THE OVUM COMPOSED OF 4 PROTEINS INCLUDING THE ZP4 PROTEIN THAT IS NOT FOUND IN THE MOUSE (ZP1, ZP2 AND ZP3). IN ADDITION, THERE ARE CONTRADICTORY DATA IN THE LITERATURE REGARDING THE BIOLOGICAL ROLE PLAYED BY OVGP1, WHICH IS THE MOST ABUNDANT PROTEIN SECRETED BY THE OVIDUCTAL EPITHELIUM. THUS, OVGP1 HAS A HIGH AFFINITY FOR THE ZP OF OOCYTES OF RABBIT, COW, SOW AND EVEN THE HUMAN SPECIES; HOWEVER, IN THE MOUSE THIS PROTEIN HAS A LOW AFFINITY FOR ZP. IN THE PRESENT PROJECT WE WANT TO ANALYZE THROUGH THE USE OF KO ANIMALS THE ROLE PLAYED BY TWO ZP PROTEINS (ZP1 AND ZP4) IN A ZP MODEL WITH 4 PROTEINS AND THE ROLE PLAYED BY OVGP1. THIS PROJECT WILL ALSO USE OTHER LEADING TECHNOLOGIES SUCH AS PROTEOMIC ANALYSIS, GENE EXPRESSION (MICROARRAYS AND PCR) AS WELL AS CONFOCAL AND ELECTRON MICROSCOPY AMONG OTHERS. THE POTENTIAL RESULTS OBTAINED WILL PROVIDE US WITH HIGHLY RELEVANT INFORMATION ABOUT THE MECHANISMS INVOLVED IN FERTILIZATION. THIS INFORMATION WILL BE KEY FOR THE DEVELOPMENT OF NEW DIAGNOSTIC METHODOLOGIES FOR INFERTILITY, SPERM QUALITY, SPERM SELECTION AND THE IMPROVEMENT OF CULTURE MEDIA FOR IN VITRO FERTILIZATION TO INCREASE THE EFFICIENCY OF THE ASSISTED REPRODUCTIVE TECHNOLOGY. IN ADDITION, THIS INFORMATION MAY BE KEY TO THE DEVELOPMENT OF MORE EFFICIENT CONTRACEPTIVE VACCINES FOR THE CONTROL OF WILD ANIMAL POPULATIONS WITH A SIGNIFICANT SOCIAL, ECOLOGICAL AND ECONOMIC IMPACT. (English)
0.1288176052679912
0 references
LA REPRODUCTION SEXUELLE EST UN PROCESSUS COMPLEXE QUI IMPLIQUE LA FORMATION ET LA PARTICIPATION DE DEUX CELLULES HAUTEMENT SPÉCIALISÉES QUI SONT LES GAMÈTES QUI DONNERONT NAISSANCE À UN ZYGOTE AVEC SA PROPRE IDENTITÉ GÉNÉTIQUE. DANS LE CAS DES MAMMIFÈRES, LA REPRODUCTION INTERNE, LA FÉCONDATION ET LE DÉVELOPPEMENT EMBRYONNAIRE PRÉIMPLANTATOIRE SE PRODUISENT DANS UN CANAL SPÉCIALISÉ APPELÉ OVIDUCT (OU TUBE DE FALLOPE). LA CLARIFICATION DES MÉCANISMES IMPLIQUÉS DANS LA FORMATION DES GAMÈTES, LA RECONNAISSANCE ENTRE LES GAMÈTES, LA FÉCONDATION, L’INTERACTION AVEC L’OVIDUCTE DES GAMÈTES ET EMBRYONS DE PRÉIMPLANTATION EST D’UNE GRANDE PERTINENCE SCIENTIFIQUE, TECHNOLOGIQUE, CLINIQUE ET SOCIALE. POUR ATTEINDRE CES OBJECTIFS, NOUS PROPOSONS UNE APPROCHE NOVATRICE TELLE QUE L’UTILISATION DE LA TECHNOLOGIE CRISPR-CAS9 CHEZ LE LAPIN. CETTE TECHNOLOGIE NOUS PERMET DE GÉNÉRER DES ANIMAUX KO (KO) EN EMPÊCHANT L’EXPRESSION D’UN GÈNE FONCTIONNEL. CETTE APPROCHE EXPÉRIMENTALE FOURNIT L’UNE DES PREUVES SCIENTIFIQUES LES PLUS SOLIDES ET LES PLUS FIABLES. AINSI, DEPUIS QUELQUES ANNÉES, LES CONNAISSANCES DANS LE DOMAINE DE LA REPRODUCTION ONT ÉTÉ PROFONDÉMENT MODIFIÉES EN RAISON DE L’UTILISATION DES ANIMAUX KO. LA TECHNOLOGIE CRISPR-CAS9 PERMET DE GÉNÉRER KO DANS D’AUTRES ANIMAUX QUE LE RATON D’UNE MANIÈRE EFFICACE ET A RÉCEMMENT ÉTÉ DÉVELOPPÉE CHEZ LE LAPIN. DANS LE PRÉSENT PROJET, NOUS UTILISERONS LE LAPIN COMME ANIMAL EXPÉRIMENTAL PUISQU’IL A DES CARACTÉRISTIQUES DE REPRODUCTION QUI, À CERTAINS ÉGARDS, SONT TRÈS DIFFÉRENTES DU RATON ET SIMILAIRES À D’AUTRES ESPÈCES D’ANIMAUX DOMESTIQUES COMME LA TRUIE, LA VACHE, LE CHAT, LA SALOPE ET MÊME L’ESPÈCE HUMAINE. AINSI, LE LAPIN A UNE ZONE POILUE (ZP) QUI ENTOURE L’OVULE COMPOSÉ DE 4 PROTÉINES DONT LA PROTÉINE ZP4 QUI NE SE TROUVE PAS DANS LE RATON (ZP1, ZP2 ET ZP3). EN OUTRE, IL EXISTE DES DONNÉES CONTRADICTOIRES DANS LA BIBLIOGRAPHIE SUR LE RÔLE BIOLOGIQUE JOUÉ PAR OVGP1, QUI EST LA PROTÉINE LA PLUS ABONDANTE SÉCRÉTÉE PAR L’ÉPITHÉLIUM OVIDUCTAL. AINSI, OVGP1 A UNE AFFINITÉ ÉLEVÉE POUR LE ZP DES OVOCYTES DE LAPINS, DE VACHES, DE TRUIES ET MÊME DE L’ESPÈCE HUMAINE; CEPENDANT, DANS LE RATON, CETTE PROTÉINE A UNE FAIBLE AFFINITÉ POUR LE ZP. DANS CE PROJET, NOUS VOULONS ANALYSER EN UTILISANT LES ANIMAUX KO LE RÔLE JOUÉ PAR DEUX PROTÉINES ZP (ZP1 ET ZP4) DANS UN MODÈLE DE ZP AVEC 4 PROTÉINES ET LE RÔLE JOUÉ PAR OVGP1. CE PROJET UTILISERA ÉGALEMENT D’AUTRES TECHNOLOGIES DE POINTE TELLES QUE L’ANALYSE PROTÉOMIQUE, L’EXPRESSION GÉNIQUE (MICROMATRICS ET PCR) EN PLUS DE LA MICROSCOPIE CONFOCALE ET DE L’ÉLECTRONIQUE, ENTRE AUTRES. LES RÉSULTATS POTENTIELS OBTENUS NOUS FOURNIRONT DES INFORMATIONS TRÈS IMPORTANTES SUR LES MÉCANISMES IMPLIQUÉS D’UNE MANIÈRE GÉNÉRALE DANS LA FÉCONDATION. CES INFORMATIONS SERONT ESSENTIELLES AU DÉVELOPPEMENT DE NOUVELLES MÉTHODES DE DIAGNOSTIC DE L’INFERTILITÉ, DE QUALITÉ SPERMATICA, DE SÉLECTION SPERMATICA ET D’AMÉLIORATION DES MILIEUX DE CULTURE POUR LA FÉCONDATION IN VITRO AFIN D’ACCROÎTRE L’EFFICACITÉ DES TECHNIQUES DE REPRODUCTION ASSISTÉE. EN OUTRE, CES INFORMATIONS PEUVENT ÊTRE ESSENTIELLES À LA MISE AU POINT DE VACCINS CONTRACEPTIFS PLUS EFFICACES POUR LUTTER CONTRE LES POPULATIONS D’ANIMAUX SAUVAGES AYANT UN IMPACT SOCIAL, ÉCOLOGIQUE ET ÉCONOMIQUE IMPORTANT. (French)
2 December 2021
0 references
SEXUELLE REPRODUKTION IST EIN KOMPLEXER PROZESS, DER DIE BILDUNG UND BETEILIGUNG VON ZWEI HOCHSPEZIALISIERTEN ZELLEN BEINHALTET, DIE GAMETEN SIND, DIE ZU EINER ZYGOTE MIT IHRER EIGENEN GENETISCHEN IDENTITÄT FÜHREN. BEI SÄUGETIEREN TRITT DIE INNERE FORTPFLANZUNG, BEFRUCHTUNG UND PRÄIMPLANTATION EMBRYONALE ENTWICKLUNG IN EINEM SPEZIALISIERTEN KANAL NAMENS OVIDUCT (ODER EILEITER) AUF. DIE KLÄRUNG DER MECHANISMEN, DIE AN DER BILDUNG VON GAMETEN BETEILIGT SIND, DIE ERKENNUNG VON GAMETEN, DIE BEFRUCHTUNG, DIE INTERAKTION MIT DEM OVIDUKT VON PRÄIMPLANTATIONSGAMETEN UND EMBRYONEN IST VON GROSSER WISSENSCHAFTLICHER, TECHNOLOGISCHER, KLINISCHER UND SOZIALER RELEVANZ. ZUR ERREICHUNG DIESER ZIELE SCHLAGEN WIR EINEN NEUARTIGEN ANSATZ VOR, WIE Z. B. DIE ANWENDUNG DER CRISPR-CAS9-TECHNOLOGIE IM KANINCHEN. DIESE TECHNOLOGIE ERMÖGLICHT ES UNS, KNOCK-OUT (KO) TIERE ZU ERZEUGEN, INDEM WIR DIE EXPRESSION EINES FUNKTIONELLEN GENS VERHINDERN. DIESER EXPERIMENTELLE ANSATZ LIEFERT EINEN DER ROBUSTESTEN UND ZUVERLÄSSIGSTEN WISSENSCHAFTLICHEN ERKENNTNISSE. SO HAT SICH DAS WISSEN AUF DEM GEBIET DER FORTPFLANZUNG SEIT EINIGEN JAHREN DURCH DEN EINSATZ VON KO-TIER GRUNDLEGEND VERÄNDERT. DIE CRISPR-CAS9-TECHNOLOGIE ERMÖGLICHT DIE EFFIZIENTE ERZEUGUNG VON KO BEI ANDEREN TIEREN ALS DEM RATON UND WURDE KÜRZLICH IM KANINCHEN ENTWICKELT. IM VORLIEGENDEN PROJEKT WERDEN WIR DAS KANINCHEN ALS VERSUCHSTIER VERWENDEN, DA ES REPRODUKTIVE EIGENSCHAFTEN AUFWEIST, DIE SICH IN EINIGEN ASPEKTEN SEHR VON RATON UNTERSCHEIDEN UND ANDEREN TIERARTEN WIE SAUEN, KUH, KATZE, HÜNDIN UND SOGAR DEN MENSCHLICHEN ARTEN ÄHNLICH SIND. SO HAT DAS KANINCHEN EINE BEHAARTE FLÄCHE (ZP), DIE DAS OVUM UMGIBT, DAS AUS 4 PROTEINEN BESTEHT, EINSCHLIESSLICH DES ZP4-PROTEINS, DAS NICHT IM RATON (ZP1, ZP2 UND ZP3) GEFUNDEN WIRD. DARÜBER HINAUS GIBT ES WIDERSPRÜCHLICHE DATEN IN DER BIBLIOGRAPHIE ÜBER DIE BIOLOGISCHE ROLLE, DIE OVGP1 SPIELT, DAS AM HÄUFIGSTEN DURCH DAS OVIDUCTALE EPITHEL ABGESONDERTE PROTEIN IST. SO HAT OVGP1 EINE HOHE AFFINITÄT ZUM ZP VON OOZYTEN VON KANINCHEN, KÜHEN, SAUEN UND SOGAR DEN MENSCHLICHEN ARTEN; IM RATON WEIST DIESES PROTEIN JEDOCH EINE GERINGE AFFINITÄT FÜR ZP AUF. IN DIESEM PROJEKT WOLLEN WIR MIT HILFE VON KO-TIER DIE ROLLE ZWEIER ZP-PROTEINE (ZP1 UND ZP4) IN EINEM ZP-MODELL MIT 4 PROTEINEN UND DIE ROLLE VON OVGP1 ANALYSIEREN. IN DIESEM PROJEKT WERDEN NEBEN DER KONFOKALEN MIKROSKOPIE UND ELECTRONICA UNTER ANDEREM AUCH ANDERE SPITZENTECHNOLOGIEN WIE PROTEOMANALYSE, GENENE EXPRESSION (MICROMATRICS UND PCR) EINGESETZT. DIE POTENZIELLEN ERGEBNISSE WERDEN UNS SEHR WICHTIGE INFORMATIONEN ÜBER DIE MECHANISMEN LIEFERN, DIE IN EINER ALLGEMEINEN ART UND WEISE AN DER DÜNGUNG BETEILIGT SIND. DIESE INFORMATIONEN WERDEN ENTSCHEIDEND FÜR DIE ENTWICKLUNG NEUER METHODEN ZUR DIAGNOSE VON UNFRUCHTBARKEIT, SPERMATICA QUALITÄT, AUSWAHL SPERMATICA UND VERBESSERUNG DER KULTURMEDIEN FÜR IN-VITRO-FERTILISATION SEIN, UM DIE EFFIZIENZ DER ASSISTIERTEN REPRODUKTIONSTECHNIKEN ZU ERHÖHEN. DARÜBER HINAUS KÖNNEN DIESE INFORMATIONEN FÜR DIE ENTWICKLUNG EFFIZIENTERER VERHÜTUNGSIMPFSTOFFE ZUR BEKÄMPFUNG WILDLEBENDER TIERPOPULATIONEN MIT WICHTIGEN SOZIALEN, ÖKOLOGISCHEN UND WIRTSCHAFTLICHEN AUSWIRKUNGEN VON ENTSCHEIDENDER BEDEUTUNG SEIN. (German)
9 December 2021
0 references
SEKSUELE VOORTPLANTING IS EEN COMPLEX PROCES DAT DE VORMING EN DEELNAME VAN TWEE ZEER GESPECIALISEERDE CELLEN DIE DE GAMETEN ZIJN DIE AANLEIDING GEVEN TOT EEN ZYGOTE MET ZIJN EIGEN GENETISCHE IDENTITEIT. IN HET GEVAL VAN ZOOGDIEREN VINDT INWENDIGE VOORTPLANTING, BEVRUCHTING EN PRE-IMPLANTATIE EMBRYONALE ONTWIKKELING PLAATS IN EEN GESPECIALISEERD KANAAL GENAAMD OVIDUCT (OF EILEIDERSBUIS). DE VERDUIDELIJKING VAN DE MECHANISMEN DIE BETROKKEN ZIJN BIJ DE VORMING VAN GAMETEN, HERKENNING TUSSEN GAMETEN, BEVRUCHTING, INTERACTIE MET HET OVIDUCT VAN PREIMPLANTATIE GAMETEN EN EMBRYO’S IS VAN GROOT WETENSCHAPPELIJK, TECHNOLOGISCH, KLINISCH EN SOCIAAL BELANG. VOOR DE VERWEZENLIJKING VAN DEZE DOELSTELLINGEN STELLEN WIJ EEN NIEUWE AANPAK VOOR, ZOALS HET GEBRUIK VAN CRISPR-CAS9-TECHNOLOGIE BIJ HET KONIJN. DEZE TECHNOLOGIE STELT ONS IN STAAT OM KNOCK-OUT (KO) DIEREN TE GENEREREN DOOR DE EXPRESSIE VAN EEN FUNCTIONEEL GEN TE VOORKOMEN. DEZE EXPERIMENTELE AANPAK BIEDT EEN VAN DE MEEST ROBUUSTE EN BETROUWBARE WETENSCHAPPELIJKE BEWIJZEN. ZO IS DE KENNIS OP HET GEBIED VAN DE VOORTPLANTING SINDS ENKELE JAREN INGRIJPEND VERANDERD DOOR HET GEBRUIK VAN KO-DIEREN. DE CRISPR-CAS9 TECHNOLOGIE MAAKT HET MOGELIJK OM KO TE GENEREREN IN ANDERE DIEREN DAN DE RATON OP EEN EFFICIËNTE MANIER EN IS ONLANGS ONTWIKKELD IN HET KONIJN. IN HET HUIDIGE PROJECT ZULLEN WE HET KONIJN ALS PROEFDIER GEBRUIKEN OMDAT HET REPRODUCTIEVE EIGENSCHAPPEN HEEFT DIE IN SOMMIGE OPZICHTEN STERK VERSCHILLEN VAN DE RATON EN VERGELIJKBAAR ZIJN MET ANDERE SOORTEN HUISDIEREN ZOALS ZEUG, KOE, KAT, TEEF EN ZELFS DE MENSELIJKE SOORT. ZO HEEFT HET KONIJN EEN BEHAARD GEBIED (ZP) DAT DE EICEL OMRINGT DIE BESTAAT UIT 4 EIWITTEN, WAARONDER HET ZP4-EIWIT DAT NIET VOORKOMT IN DE RATON (ZP1, ZP2 EN ZP3). DAARNAAST ZIJN ER TEGENSTRIJDIGE GEGEVENS IN DE BIBLIOGRAFIE OVER DE BIOLOGISCHE ROL VAN OVGP1, HET MEEST VOORKOMENDE EIWIT DAT DOOR HET OVIDUCTALE EPITHEEL WORDT UITGESCHEIDEN. OVGP1 HEEFT DUS EEN HOGE AFFINITEIT VOOR DE ZP VAN OÖCYTEN VAN KONIJNEN, KOEIEN, ZEUGEN EN ZELFS DE MENSELIJKE SOORT; ECHTER, IN DE RATON HEEFT DIT EIWIT EEN LAGE AFFINITEIT VOOR ZP. IN DIT PROJECT WILLEN WE MET BEHULP VAN KO-DIEREN DE ROL VAN TWEE ZP-EIWITTEN (ZP1 EN ZP4) ANALYSEREN IN EEN MODEL VAN ZP MET 4 EIWITTEN EN DE ROL VAN OVGP1. DIT PROJECT ZAL OOK GEBRUIK MAKEN VAN ANDERE GEAVANCEERDE TECHNOLOGIEËN ZOALS PROTEOMISCHE ANALYSE, GENIC EXPRESSIE (MICROMATRICS EN PCR) NAAST CONFOCALE MICROSCOPIE EN ELECTRONICA. DE POTENTIËLE RESULTATEN ZULLEN ONS ZEER BELANGRIJKE INFORMATIE VERSCHAFFEN OVER DE MECHANISMEN DIE IN HET ALGEMEEN BIJ DE BEMESTING BETROKKEN ZIJN. DEZE INFORMATIE ZAL VAN CRUCIAAL BELANG ZIJN VOOR DE ONTWIKKELING VAN NIEUWE METHODEN VOOR DE DIAGNOSE VAN ONVRUCHTBAARHEID, SPERMATICA-KWALITEIT, SELECTIE SPERMATICA EN VERBETERING VAN CULTUURMEDIA VOOR IN-VITROFERTILISATIE OM DE EFFICIËNTIE VAN GEASSISTEERDE VOORTPLANTINGSTECHNIEKEN TE VERHOGEN. BOVENDIEN KAN DEZE INFORMATIE ESSENTIEEL ZIJN VOOR DE ONTWIKKELING VAN EFFICIËNTERE ANTICONCEPTIEVACCINS VOOR DE BESTRIJDING VAN WILDE DIERENPOPULATIES MET EEN BELANGRIJKE SOCIALE, ECOLOGISCHE EN ECONOMISCHE IMPACT. (Dutch)
17 December 2021
0 references
LA RIPRODUZIONE SESSUALE È UN PROCESSO COMPLESSO CHE COINVOLGE LA FORMAZIONE E LA PARTECIPAZIONE DI DUE CELLULE ALTAMENTE SPECIALIZZATE CHE SONO I GAMETI CHE DARANNO ORIGINE AD UNO ZIGOTE CON LA PROPRIA IDENTITÀ GENETICA. NEL CASO DEI MAMMIFERI, LA RIPRODUZIONE INTERNA, LA FECONDAZIONE E LO SVILUPPO EMBRIONALE PREIMPIANTO AVVIENE IN UN CONDOTTO SPECIALIZZATO CHIAMATO OVIDOTTO (O TUBE DI FALLOPPIO). LA CHIARIFICAZIONE DEI MECCANISMI COINVOLTI NELLA FORMAZIONE DEI GAMETI, NEL RICONOSCIMENTO TRA GAMETI, NELLA FECONDAZIONE, NELL'INTERAZIONE CON L'OVDOTTO DEI GAMETI PREIMPIANTO E DEGLI EMBRIONI È DI GRANDE RILEVANZA SCIENTIFICA, TECNOLOGICA, CLINICA E SOCIALE. PER IL RAGGIUNGIMENTO DI QUESTI OBIETTIVI PROPONIAMO UN NUOVO APPROCCIO COME L'USO DELLA TECNOLOGIA CRISPR-CAS9 NEL CONIGLIO. QUESTA TECNOLOGIA CI PERMETTE DI GENERARE ANIMALI KNOCK-OUT (KO) IMPEDENDO L'ESPRESSIONE DI UN GENE FUNZIONALE. QUESTO APPROCCIO SPERIMENTALE FORNISCE UNA DELLE PROVE SCIENTIFICHE PIÙ SOLIDE E AFFIDABILI. COSÌ, PER ALCUNI ANNI LA CONOSCENZA NEL CAMPO DELLA RIPRODUZIONE È STATA PROFONDAMENTE ALTERATA A CAUSA DELL'USO DI ANIMALI KO. LA TECNOLOGIA CRISPR-CAS9 CONSENTE DI GENERARE KO IN ALTRI ANIMALI DIVERSI DAL RATON IN MODO EFFICIENTE ED È STATA RECENTEMENTE SVILUPPATA NEL CONIGLIO. NEL PRESENTE PROGETTO USEREMO IL CONIGLIO COME ANIMALE SPERIMENTALE POICHÉ HA CARATTERISTICHE RIPRODUTTIVE CHE IN ALCUNI ASPETTI SONO MOLTO DIVERSE DAL RATON E SIMILI AD ALTRE SPECIE DI ANIMALI DOMESTICI COME LA SCROFA, LA MUCCA, IL GATTO, LA CAGNA E PERSINO LE SPECIE UMANE. COSÌ, IL CONIGLIO HA UNA ZONA PELOSA (ZP) CHE CIRCONDA L'OVULO COMPOSTO DA 4 PROTEINE TRA CUI LA PROTEINA ZP4 CHE NON SI TROVA NEL RATON (ZP1, ZP2 E ZP3). INOLTRE, CI SONO DATI CONTRADDITTORI NELLA BIBLIOGRAFIA SUL RUOLO BIOLOGICO SVOLTO DA OVGP1, CHE È LA PROTEINA PIÙ ABBONDANTE SECRETA DALL'EPITELIO OVIDUTO. PERTANTO, L'OVGP1 HA UN'ELEVATA AFFINITÀ PER LA ZP DEGLI OVOCITI DI CONIGLI, MUCCHE, SCROFE E PERSINO PER LE SPECIE UMANE; TUTTAVIA, NEL RATON QUESTA PROTEINA HA UNA BASSA AFFINITÀ PER ZP. IN QUESTO PROGETTO VOGLIAMO ANALIZZARE UTILIZZANDO GLI ANIMALI KO IL RUOLO SVOLTO DA DUE PROTEINE ZP (ZP1 E ZP4) IN UN MODELLO DI ZP CON 4 PROTEINE E IL RUOLO SVOLTO DA OVGP1. QUESTO PROGETTO UTILIZZERÀ ANCHE ALTRE TECNOLOGIE ALL'AVANGUARDIA COME L'ANALISI PROTEOMICA, L'ESPRESSIONE GENICA (MICROMATRICS E PCR) OLTRE ALLA MICROSCOPIA CONFOCALE E ALL'ELETTRONICA TRA GLI ALTRI. I POTENZIALI RISULTATI OTTENUTI CI FORNIRANNO INFORMAZIONI MOLTO IMPORTANTI SUI MECCANISMI COINVOLTI IN MODO GENERALE NELLA FECONDAZIONE. QUESTE INFORMAZIONI SARANNO FONDAMENTALI PER LO SVILUPPO DI NUOVI METODI DI DIAGNOSI DI INFERTILITÀ, QUALITÀ SPERMATICA, SELEZIONE SPERMATICA E MIGLIORAMENTO DEI MEZZI DI COLTURA PER LA FECONDAZIONE IN VITRO PER AUMENTARE L'EFFICIENZA DELLE TECNICHE DI RIPRODUZIONE ASSISTITA. INOLTRE, QUESTE INFORMAZIONI POSSONO ESSERE FONDAMENTALI PER LO SVILUPPO DI VACCINI CONTRACCETTIVI PIÙ EFFICIENTI PER IL CONTROLLO DELLE POPOLAZIONI DI ANIMALI SELVATICI CON UN IMPORTANTE IMPATTO SOCIALE, ECOLOGICO ED ECONOMICO. (Italian)
16 January 2022
0 references
SEKSUAALNE PALJUNEMINE ON KEERULINE PROTSESS, MIS HÕLMAB KAHE VÄGA SPETSIALISEERITUD RAKU, SUGURAKKUDE MOODUSTUMIST JA OSALEMIST, MIS PÕHJUSTAB OMA GENEETILISE IDENTITEEDIGA SÜGOOTI. IMETAJATE PUHUL TOIMUB SISEMISE PALJUNEMISE, VILJASTAMISE JA EELIMPLANTATSIOONI EMBRÜONAALNE ARENG SPETSIAALSES TORUS, MIDA NIMETATAKSE MUNANDIKS (VÕI MUNAJUHAKS). SUGURAKKUDE MOODUSTUMISEGA SEOTUD MEHHANISMIDE SELGITAMINE, SUGURAKKUDE ÄRATUNDMINE, VILJASTAMINE, SUHTLEMINE SUGURAKKUDE JA IMPLANTATSIOONIEELSETE EMBRÜOTE MUNANDIGA ON SUURE TEADUSLIKU, TEHNOLOOGILISE, KLIINILISE JA SOTSIAALSE TÄHTSUSEGA. NENDE EESMÄRKIDE SAAVUTAMISEKS SÄTESTASIME UUDSE LÄHENEMISVIISI, NAGU CRISPR-CAS9 TEHNOLOOGIA KASUTAMINE KÜÜLIKUTEL. SEE TEHNOLOOGIA VÕIMALDAB MEIL LUUA NOKAUTI (KO) LOOMI, TAKISTADES FUNKTSIONAALSE GEENI EKSPRESSIOONI. SELLINE EKSPERIMENTAALNE LÄHENEMISVIIS ON ÜKS KINDLAMAID JA USALDUSVÄÄRSEMAID TEADUSLIKKE TÕENDEID. SEEGA ON PAARI AASTA JOOKSUL PALJUNEMISALASEID TEADMISI KO-LOOMADE KASUTAMISE TÕTTU PÕHJALIKULT MUUDETUD. CRISPR-CAS9 TEHNOLOOGIA VÕIMALDAB TÕHUSA MEETODI ABIL TOOTA KOT TEISTEL LOOMADEL PEALE HIIRE JA SEE ON HILJUTI KÜÜLIKUL VÄLJA TÖÖTATUD. KÄESOLEVAS PROJEKTIS KASUTAME KÜÜLIKUT KATSELOOMANA, KUNA SELLEL ON PALJUNEMISOMADUSED, MIS MÕNES ASPEKTIS ERINEVAD HIIREST JA SARNANEVAD TEISTE KODULOOMADEGA, NAGU EMINE, LEHM, KASS, LIB JA ISEGI INIMLIIK. SEEGA ON KÜÜLIKUL MUNARAKKE ÜMBRITSEV VÖÖND (ZP), MIS KOOSNEB NELJAST VALGUST, SEALHULGAS ZP4-VALGUST, MIDA HIIRTEL EI LEIDU (ZP1, ZP2 JA ZP3). LISAKS ON KIRJANDUSES VASTUOLULISI ANDMEID OVGP1 BIOLOOGILISE ROLLI KOHTA, MIS ON KÕIGE RIKKALIKUM VALK, MIDA SEKRETEERIB MUNAJUHA EPITEEL. SEEGA ON OVGP1 KÜÜLIKU, LEHMA, EMISE JA ISEGI INIMLIIKIDE OOTSÜÜTIDE ZP SUHTES KÕRGE AFIINSUS; KUID HIIRE SEE VALK ON MADAL AFIINSUS ZP. KÄESOLEVAS PROJEKTIS SOOVIME KO LOOMADE KASUTAMISE KAUDU ANALÜÜSIDA KAHE ZP VALGU (ZP1 JA ZP4) ROLLI 4 VALGUGA ZP MUDELIS JA OVGP1 ROLLI. PROJEKTIS KASUTATAKSE KA MUID JUHTIVAID TEHNOLOOGIAID, NAGU PROTEOOMILINE ANALÜÜS, GEENIEKSPRESSIOON (MIKROARRAYD JA PCR) NING KONFOKAALNE JA ELEKTRONMIKROSKOOPIA. VÕIMALIKUD TULEMUSED ANNAVAD MEILE VÄGA ASJAKOHAST TEAVET VÄETAMISEGA SEOTUD MEHHANISMIDE KOHTA. SEE TEAVE ON VÄGA OLULINE UUTE DIAGNOSTILISTE MEETODITE VÄLJATÖÖTAMISEKS VILJATUSE, SPERMA KVALITEEDI, SPERMA VALIKU JA IN VITRO VILJASTAMISE SÖÖTME PARANDAMISEKS, ET SUURENDADA KUNSTLIKU VILJASTAMISE TEHNOLOOGIA TÕHUSUST. LISAKS VÕIB SEE TEAVE OLLA KESKSE TÄHTSUSEGA TÕHUSAMATE RASESTUMISVASTASTE VAKTSIINIDE VÄLJATÖÖTAMISEKS METSLOOMAPOPULATSIOONIDE TÕRJEKS, MILLEL ON MÄRKIMISVÄÄRNE SOTSIAALNE, ÖKOLOOGILINE JA MAJANDUSLIK MÕJU. (Estonian)
4 August 2022
0 references
SEKSUALINĖ REPRODUKCIJA YRA SUDĖTINGAS PROCESAS, APIMANTIS DVIEJŲ LABAI SPECIALIZUOTŲ LĄSTELIŲ, GAMETŲ, FORMAVIMĄSI IR DALYVAVIMĄ, KURIS SUKELS ZIGOTĄ SU SAVO GENETINE TAPATYBE. ŽINDUOLIŲ, KURIŲ VIDINĖ REPRODUKCIJA, APVAISINIMAS IR PREIMPLANTACIJOS EMBRIONO VYSTYMASIS VYKSTA SPECIALIAME MĖGINTUVĖLYJE, VADINAMAME KIAUŠINTAKIAIS (ARBA KIAUŠINTAKIAIS). MECHANIZMŲ, SUSIJUSIŲ SU GAMETŲ FORMAVIMUSI, LYTINIŲ LĄSTELIŲ ATPAŽINIMU, APVAISINIMU, SĄVEIKA SU GAMETŲ KIAUŠIALĄSTĖMIS IR EMBRIONAIS PRIEŠ IMPLANTACIJĄ, IŠAIŠKINIMAS YRA LABAI SVARBUS MOKSLINIU, TECHNOLOGINIU, KLINIKINIU IR SOCIALINIU POŽIŪRIU. SIEKDAMI ŠIŲ TIKSLŲ, NUSTATĖME NAUJĄ POŽIŪRĮ, PVZ., CRISPR-CAS9 TECHNOLOGIJOS NAUDOJIMĄ TRIUŠYJE. ŠI TECHNOLOGIJA LEIDŽIA MUMS GENERUOTI NOKAUTO (KO) GYVŪNUS, UŽKERTANT KELIĄ FUNKCINIO GENO IŠRAIŠKAI. ŠIS EKSPERIMENTINIS METODAS YRA VIENAS IŠ PATIKIMIAUSIŲ IR PATIKIMIAUSIŲ MOKSLINIŲ ĮRODYMŲ. TAIGI, KELERIUS METUS DĖL KO GYVŪNŲ NAUDOJIMO ŽINIOS REPRODUKCIJOS SRITYJE BUVO LABAI PAKEISTOS. CRISPR-CAS9 TECHNOLOGIJA LEIDŽIA EFEKTYVIAI GENERUOTI KO KITIEMS GYVŪNAMS, IŠSKYRUS PELĘ, IR NESENIAI JI BUVO SUKURTA TRIUŠIAMS. ŠIAME PROJEKTE TRIUŠIS BUS NAUDOJAMAS KAIP EKSPERIMENTINIS GYVŪNAS, NES JIS TURI REPRODUKCINES SAVYBES, KURIOS KAI KURIAIS ASPEKTAIS LABAI SKIRIASI NUO PELĖS IR PANAŠIOS Į KITUS NAMINIUS GYVŪNUS, PVZ., PARŠAVEDĘ, KARVĘ, KATĘ, KALĘ IR NET ŽMOGAUS RŪŠĮ. TAIGI TRIUŠIS PRISTATO ZONA PELLUCIDA (ZP) APLINK KIAUŠIALĄSTĘ, SUDARYTĄ IŠ 4 BALTYMŲ, ĮSKAITANT ZP4 BALTYMĄ, KURIO NĖRA PELIŲ (ZP1, ZP2 IR ZP3). BE TO, LITERATŪROJE YRA PRIEŠTARINGŲ DUOMENŲ APIE OVGP1, KURIS YRA GAUSIAUSIAS KIAUŠINTAKIŲ EPITELIO IŠSKIRIAMAS BALTYMAS, BIOLOGINĮ VAIDMENĮ. TAIGI OVGP1 TURI DIDELĮ AFINITETĄ TRIUŠIŲ, KARVIŲ, PARŠAVEDŽIŲ IR NET ŽMOGAUS RŪŠIŲ OOCITŲ ZP; TAČIAU PELIŲ ŠIS BALTYMAS TURI MAŽĄ AFINITETĄ ZP. ŠIAME PROJEKTE NORIME IŠANALIZUOTI DVIEJŲ ZP BALTYMŲ (ZP1 IR ZP4) VAIDMENĮ ZP MODELYJE SU 4 BALTYMAIS, NAUDOJANT KO GYVŪNUS, IR OVGP1 VAIDMENĮ. ŠIAME PROJEKTE TAIP PAT BUS NAUDOJAMOS KITOS PIRMAUJANČIOS TECHNOLOGIJOS, TOKIOS KAIP PROTEOMINĖ ANALIZĖ, GENŲ EKSPRESIJA (MIKROMATRICOS IR PGR), TAIP PAT KONFOKALINĖ IR ELEKTRONŲ MIKROSKOPIJA. POTENCIALŪS GAUTI REZULTATAI SUTEIKS MUMS LABAI SVARBIOS INFORMACIJOS APIE TRĘŠIMO MECHANIZMUS. ŠI INFORMACIJA BUS LABAI SVARBI KURIANT NAUJAS DIAGNOSTIKOS METODIKAS, SKIRTAS NEVAISINGUMUI, SPERMOS KOKYBEI, SPERMATOZOIDŲ ATRANKAI IR KULTŪROS TERPĖS TOBULINIMUI IN VITRO APVAISINIMUI, SIEKIANT PADIDINTI PAGALBINIO APVAISINIMO TECHNOLOGIJOS EFEKTYVUMĄ. BE TO, ŠI INFORMACIJA GALI BŪTI LABAI SVARBI KURIANT VEIKSMINGESNES KONTRACEPCINES VAKCINAS LAUKINIŲ GYVŪNŲ POPULIACIJOMS KONTROLIUOTI, TURINČIAS DIDELĮ SOCIALINĮ, EKOLOGINĮ IR EKONOMINĮ POVEIKĮ. (Lithuanian)
4 August 2022
0 references
SEKSUALNA REPRODUKCIJA JE SLOŽEN PROCES KOJI UKLJUČUJE FORMIRANJE I SUDJELOVANJE DVIJU VISOKO SPECIJALIZIRANIH STANICA, GAMETA, KOJI ĆE DOVESTI DO ZIGOTA S VLASTITIM GENETSKIM IDENTITETOM. U SLUČAJU SISAVACA, S UNUTARNJOM REPRODUKCIJOM, OPLODNJOM I PREIMPLANTACIJSKIM EMBRIONALNIM RAZVOJEM DOLAZI U SPECIJALIZIRANOJ CIJEVI NAZIVA OVIDUKT (ILI JAJOVOD). POJAŠNJENJE MEHANIZAMA KOJI SU UKLJUČENI U FORMIRANJE GAMETA, PREPOZNAVANJE MEĐU GAMETAMA, OPLODNJA, INTERAKCIJA S OVIDUKTOM GAMETA I PREIMPLANTACIJSKI EMBRIJI OD VELIKE JE ZNANSTVENE, TEHNOLOŠKE, KLINIČKE I DRUŠTVENE VAŽNOSTI. KAKO BISMO POSTIGLI TE CILJEVE, POSTAVILI SMO NOVI PRISTUP, KAO ŠTO JE PRIMJENA CRISPR-CAS9 TEHNOLOGIJE U KUNIĆA. OVA TEHNOLOGIJA NAM OMOGUĆUJE GENERIRANJE NOKAUT (KO) ŽIVOTINJA SPREČAVANJEM EKSPRESIJE FUNKCIONALNOG GENA. TAJ EKSPERIMENTALNI PRISTUP JEDAN JE OD NAJPOUZDANIJIH I NAJPOUZDANIJIH ZNANSTVENIH DOKAZA. TAKO SE ZNANJE IZ PODRUČJA REPRODUKCIJE VEĆ NEKOLIKO GODINA DUBOKO MIJENJA ZBOG KORIŠTENJA KO ŽIVOTINJA. CRISPR-CAS9 TEHNOLOGIJA OMOGUĆUJE GENERIRANJE KO KOD DRUGIH ŽIVOTINJA OSIM MIŠA UČINKOVITOM METODOM I NEDAVNO JE RAZVIJENA KOD KUNIĆA. U OVOM PROJEKTU, KUNIĆA ĆEMO KORISTITI KAO POKUSNU ŽIVOTINJU JER IMA REPRODUKTIVNE KARAKTERISTIKE KOJE SU U NEKIM ASPEKTIMA VRLO RAZLIČITE OD MIŠA I SLIČNE DRUGIM DOMAĆIM ŽIVOTINJAMA KAO ŠTO SU KRMAČA, KRAVA, MAČKA, KUJA, PA ČAK I LJUDSKA VRSTA. DAKLE, KUNIĆ PREDSTAVLJA ZONA PELLUCIDA (ZP) KOJA OKRUŽUJE OVUM KOJI SE SASTOJI OD 4 PROTEINA, UKLJUČUJUĆI ZP4 PROTEIN KOJI NIJE PRONAĐEN U MIŠU (ZP1, ZP2 I ZP3). OSIM TOGA, U LITERATURI POSTOJE PROTURJEČNI PODACI O BIOLOŠKOJ ULOZI OVGP1, ŠTO JE NAJOBILNIJI PROTEIN IZLUČEN OVIDUKTIVNIM EPITELOM. STOGA OVGP1 IMA VISOK AFINITET PREMA ZP-U JAJNIH STANICA KUNIĆA, KRAVA, KRMAČA, PA ČAK I LJUDSKE VRSTE; MEĐUTIM, U MIŠU OVAJ PROTEIN IMA NIZAK AFINITET ZA ZP. U OVOM PROJEKTU ŽELIMO KROZ KORIŠTENJE KO ŽIVOTINJA ANALIZIRATI ULOGU KOJU IMAJU DVA ZP PROTEINA (ZP1 I ZP4) U MODELU ZP S 4 PROTEINA I ULOGU OVGP1. U OKVIRU OVOG PROJEKTA KORISTIT ĆE SE I DRUGE VODEĆE TEHNOLOGIJE KAO ŠTO SU PROTEOMSKA ANALIZA, EKSPRESIJA GENA (MIKROARRAYS I PCR) TE, MEĐU OSTALIM, CONFOCAL I ELECTRON MICROSCOPY. POTENCIJALNI DOBIVENI REZULTATI PRUŽIT ĆE NAM VRLO VAŽNE INFORMACIJE O MEHANIZMIMA KOJI SU UKLJUČENI U GNOJIDBU. TE ĆE INFORMACIJE BITI KLJUČNE ZA RAZVOJ NOVIH DIJAGNOSTIČKIH METODOLOGIJA ZA NEPLODNOST, KVALITETU SPERMIJA, ODABIR SPERME I POBOLJŠANJE MEDIJA KULTURE ZA OPLODNJU IN VITRO KAKO BI SE POVEĆALA UČINKOVITOST TEHNOLOGIJE POTPOMOGNUTE OPLODNJE. OSIM TOGA, TE INFORMACIJE MOGU BITI KLJUČNE ZA RAZVOJ UČINKOVITIJIH KONTRACEPCIJSKIH CJEPIVA ZA KONTROLU POPULACIJA DIVLJIH ŽIVOTINJA SA ZNATNIM DRUŠTVENIM, EKOLOŠKIM I GOSPODARSKIM UČINKOM. (Croatian)
4 August 2022
0 references
Η ΣΕΞΟΥΑΛΙΚΉ ΑΝΑΠΑΡΑΓΩΓΉ ΕΊΝΑΙ ΜΙΑ ΣΎΝΘΕΤΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΊΑ ΠΟΥ ΠΕΡΙΛΑΜΒΆΝΕΙ ΤΟ ΣΧΗΜΑΤΙΣΜΌ ΚΑΙ ΤΗ ΣΥΜΜΕΤΟΧΉ ΔΎΟ ΕΞΑΙΡΕΤΙΚΆ ΕΞΕΙΔΙΚΕΥΜΈΝΩΝ ΚΥΤΤΆΡΩΝ, ΤΩΝ ΓΑΜΕΤΏΝ, ΠΟΥ ΘΑ ΔΗΜΙΟΥΡΓΉΣΟΥΝ ΈΝΑ ΖΥΓΌ ΜΕ ΤΗ ΔΙΚΉ ΤΟΥ ΓΕΝΕΤΙΚΉ ΤΑΥΤΌΤΗΤΑ. ΣΤΗΝ ΠΕΡΊΠΤΩΣΗ ΤΩΝ ΘΗΛΑΣΤΙΚΏΝ, ΜΕ ΕΣΩΤΕΡΙΚΉ ΑΝΑΠΑΡΑΓΩΓΉ, ΓΟΝΙΜΟΠΟΊΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΕΜΦΎΤΕΥΣΗ ΕΜΒΡΥΪΚΉ ΑΝΆΠΤΥΞΗ ΣΥΜΒΑΊΝΕΙ ΣΕ ΈΝΑΝ ΕΞΕΙΔΙΚΕΥΜΈΝΟ ΣΩΛΉΝΑ ΠΟΥ ΟΝΟΜΆΖΕΤΑΙ ΩΑΓΩΓΌΣ (Ή ΣΆΛΠΙΓΓΑ). Η ΑΠΟΣΑΦΉΝΙΣΗ ΤΩΝ ΜΗΧΑΝΙΣΜΏΝ ΠΟΥ ΕΜΠΛΈΚΟΝΤΑΙ ΣΤΟ ΣΧΗΜΑΤΙΣΜΌ ΓΑΜΕΤΏΝ, Η ΑΝΑΓΝΏΡΙΣΗ ΤΩΝ ΓΑΜΕΤΏΝ, Η ΓΟΝΙΜΟΠΟΊΗΣΗ, Η ΑΛΛΗΛΕΠΊΔΡΑΣΗ ΜΕ ΤΟ ΩΟΕΙΔΈΣ ΤΩΝ ΓΑΜΕΤΏΝ ΚΑΙ ΤΑ ΈΜΒΡΥΑ ΠΡΟΕΜΦΎΤΕΥΣΗΣ ΕΊΝΑΙ ΜΕΓΆΛΗΣ ΕΠΙΣΤΗΜΟΝΙΚΉΣ, ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΉΣ, ΚΛΙΝΙΚΉΣ ΚΑΙ ΚΟΙΝΩΝΙΚΉΣ ΣΗΜΑΣΊΑΣ. ΓΙΑ ΤΗΝ ΕΠΊΤΕΥΞΗ ΑΥΤΏΝ ΤΩΝ ΣΤΌΧΩΝ, ΚΑΘΟΡΊΣΑΜΕ ΜΙΑ ΝΈΑ ΠΡΟΣΈΓΓΙΣΗ, ΌΠΩΣ Η ΧΡΉΣΗ ΤΗΣ ΤΕΧΝΟΛΟΓΊΑΣ CRISPR-CAS9 ΣΤΟ ΚΟΥΝΈΛΙ. ΑΥΤΉ Η ΤΕΧΝΟΛΟΓΊΑ ΜΑΣ ΕΠΙΤΡΈΠΕΙ ΝΑ ΔΗΜΙΟΥΡΓΉΣΟΥΜΕ ΝΟΚ-ΆΟΥΤ (KO) ΖΏΑ ΕΜΠΟΔΊΖΟΝΤΑΣ ΤΗΝ ΈΚΦΡΑΣΗ ΕΝΌΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΚΟΎ ΓΟΝΙΔΊΟΥ. ΑΥΤΉ Η ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΉ ΠΡΟΣΈΓΓΙΣΗ ΠΑΡΈΧΕΙ ΈΝΑ ΑΠΌ ΤΑ ΠΛΈΟΝ ΑΞΙΌΠΙΣΤΑ ΚΑΙ ΑΞΙΌΠΙΣΤΑ ΕΠΙΣΤΗΜΟΝΙΚΆ ΣΤΟΙΧΕΊΑ. ΈΤΣΙ, ΕΔΏ ΚΑΙ ΛΊΓΑ ΧΡΌΝΙΑ Η ΓΝΏΣΗ ΣΤΟΝ ΤΟΜΈΑ ΤΗΣ ΑΝΑΠΑΡΑΓΩΓΉΣ ΈΧΕΙ ΤΡΟΠΟΠΟΙΗΘΕΊ ΡΙΖΙΚΆ ΛΌΓΩ ΤΗΣ ΧΡΉΣΗΣ ΤΩΝ ΖΏΩΝ KO. Η ΤΕΧΝΟΛΟΓΊΑ CRISPR-CAS9 ΕΠΙΤΡΈΠΕΙ ΤΗΝ ΠΑΡΑΓΩΓΉ KO ΣΕ ΆΛΛΑ ΖΏΑ ΕΚΤΌΣ ΤΟΥ ΠΟΝΤΙΚΟΎ ΜΕ ΜΙΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΙΚΉ ΜΈΘΟΔΟ ΚΑΙ ΑΝΑΠΤΎΧΘΗΚΕ ΠΡΌΣΦΑΤΑ ΣΤΟ ΚΟΥΝΈΛΙ. ΣΤΟ ΠΑΡΌΝ ΈΡΓΟ, ΘΑ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΉΣΟΥΜΕ ΤΟ ΚΟΥΝΈΛΙ ΩΣ ΠΕΙΡΑΜΑΤΌΖΩΟ ΔΕΔΟΜΈΝΟΥ ΌΤΙ ΈΧΕΙ ΑΝΑΠΑΡΑΓΩΓΙΚΆ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΆ ΤΑ ΟΠΟΊΑ ΣΕ ΟΡΙΣΜΈΝΕΣ ΠΤΥΧΈΣ ΕΊΝΑΙ ΠΟΛΎ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΆ ΑΠΌ ΤΟ ΠΟΝΤΊΚΙ ΚΑΙ ΠΑΡΌΜΟΙΑ ΜΕ ΆΛΛΑ ΟΙΚΌΣΙΤΑ ΖΏΑ, ΌΠΩΣ Η ΧΟΙΡΟΜΗΤΈΡΑ, Η ΑΓΕΛΆΔΑ, Η ΓΆΤΑ, Η ΣΚΎΛΑ, ΑΚΌΜΗ ΚΑΙ ΤΟ ΑΝΘΡΏΠΙΝΟ ΕΊΔΟΣ. ΈΤΣΙ, ΤΟ ΚΟΥΝΈΛΙ ΠΑΡΟΥΣΙΆΖΕΙ ΜΙΑ ΔΙΑΦΑΝΉ ΖΏΝΗ (ZP) ΠΟΥ ΠΕΡΙΒΆΛΛΕΙ ΤΟ ΩΆΡΙΟ ΑΠΟΤΕΛΟΎΜΕΝΟ ΑΠΌ 4 ΠΡΩΤΕΪ́ΝΕΣ, ΣΥΜΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΟΜΈΝΗΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪ́ΝΗΣ ZP4 ΠΟΥ ΔΕΝ ΒΡΊΣΚΕΤΑΙ ΣΤΟ ΠΟΝΤΊΚΙ (ZP1, ZP2 ΚΑΙ ZP3). ΕΠΙΠΛΈΟΝ, ΥΠΆΡΧΟΥΝ ΑΝΤΙΦΑΤΙΚΆ ΣΤΟΙΧΕΊΑ ΣΤΗ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΊΑ ΣΧΕΤΙΚΆ ΜΕ ΤΟΝ ΒΙΟΛΟΓΙΚΌ ΡΌΛΟ ΠΟΥ ΔΙΑΔΡΑΜΑΤΊΖΕΙ ΤΟ OVGP1, ΤΟ ΟΠΟΊΟ ΕΊΝΑΙ Η ΠΙΟ ΆΦΘΟΝΗ ΠΡΩΤΕΪ́ΝΗ ΠΟΥ ΕΚΚΡΊΝΕΤΑΙ ΑΠΌ ΤΟ ΩΟΕΙΔΈΣ ΕΠΙΘΉΛΙΟ. ΩΣ ΕΚ ΤΟΎΤΟΥ, ΤΟ OVGP1 ΈΧΕΙ ΥΨΗΛΉ ΣΥΓΓΈΝΕΙΑ ΜΕ ΤΟ ZP ΩΟΚΥΤΤΆΡΩΝ ΚΟΥΝΕΛΙΟΎ, ΑΓΕΛΆΔΑΣ, ΧΟΙΡΟΜΗΤΈΡΩΝ, ΑΚΌΜΗ ΚΑΙ ΑΝΘΡΏΠΙΝΩΝ ΕΙΔΏΝ· ΩΣΤΌΣΟ, ΣΤΟ ΠΟΝΤΊΚΙ ΑΥΤΉ Η ΠΡΩΤΕΪ́ΝΗ ΈΧΕΙ ΧΑΜΗΛΉ ΣΥΓΓΈΝΕΙΑ ΜΕ ΤΟ ZP. ΣΤΟ ΠΑΡΌΝ ΈΡΓΟ ΘΈΛΟΥΜΕ ΝΑ ΑΝΑΛΎΣΟΥΜΕ ΜΈΣΩ ΤΗΣ ΧΡΉΣΗΣ ΤΩΝ ΖΏΩΝ KO ΤΟΝ ΡΌΛΟ ΠΟΥ ΔΙΑΔΡΑΜΑΤΊΖΟΥΝ ΔΎΟ ΠΡΩΤΕΪ́ΝΕΣ ZP (ZP1 ΚΑΙ ZP4) ΣΕ ΈΝΑ ΜΟΝΤΈΛΟ ZP ΜΕ 4 ΠΡΩΤΕΪ́ΝΕΣ ΚΑΙ ΤΟΝ ΡΌΛΟ ΠΟΥ ΔΙΑΔΡΑΜΑΤΊΖΕΙ ΤΟ OVGP1. ΤΟ ΈΡΓΟ ΑΥΤΌ ΘΑ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΉΣΕΙ ΕΠΊΣΗΣ ΆΛΛΕΣ ΚΟΡΥΦΑΊΕΣ ΤΕΧΝΟΛΟΓΊΕΣ, ΌΠΩΣ Η ΠΡΩΤΕΩΜΙΚΉ ΑΝΆΛΥΣΗ, Η ΓΟΝΙΔΙΑΚΉ ΈΚΦΡΑΣΗ (ΜΙΚΡΟΣΥΣΤΟΙΧΊΕΣ ΚΑΙ PCR), ΚΑΘΏΣ ΚΑΙ Η ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΊΑ ΣΥΝΟΜΟΤΑΞΊΑΣ ΚΑΙ ΗΛΕΚΤΡΟΝΊΩΝ, ΜΕΤΑΞΎ ΆΛΛΩΝ. ΤΑ ΠΙΘΑΝΆ ΑΠΟΤΕΛΈΣΜΑΤΑ ΠΟΥ ΘΑ ΠΡΟΚΎΨΟΥΝ ΘΑ ΜΑΣ ΠΑΡΈΧΟΥΝ ΕΞΑΙΡΕΤΙΚΆ ΣΗΜΑΝΤΙΚΈΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΊΕΣ ΣΧΕΤΙΚΆ ΜΕ ΤΟΥΣ ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΎΣ ΠΟΥ ΕΜΠΛΈΚΟΝΤΑΙ ΣΤΗ ΓΟΝΙΜΟΠΟΊΗΣΗ. ΟΙ ΠΛΗΡΟΦΟΡΊΕΣ ΑΥΤΈΣ ΘΑ ΕΊΝΑΙ ΚΑΊΡΙΑΣ ΣΗΜΑΣΊΑΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΝΆΠΤΥΞΗ ΝΈΩΝ ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΏΝ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΏΝ ΓΙΑ ΤΗ ΣΤΕΙΡΌΤΗΤΑ, ΤΗΝ ΠΟΙΌΤΗΤΑ ΤΟΥ ΣΠΈΡΜΑΤΟΣ, ΤΗΝ ΕΠΙΛΟΓΉ ΣΠΈΡΜΑΤΟΣ ΚΑΙ ΤΗ ΒΕΛΤΊΩΣΗ ΤΩΝ ΜΈΣΩΝ ΚΑΛΛΙΈΡΓΕΙΑΣ ΓΙΑ ΤΗ ΓΟΝΙΜΟΠΟΊΗΣΗ IN VITRO, ΏΣΤΕ ΝΑ ΑΥΞΗΘΕΊ Η ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΙΚΌΤΗΤΑ ΤΗΣ ΤΕΧΝΟΛΟΓΊΑΣ ΥΠΟΒΟΗΘΟΎΜΕΝΗΣ ΑΝΑΠΑΡΑΓΩΓΉΣ. ΕΠΙΠΛΈΟΝ, ΟΙ ΠΛΗΡΟΦΟΡΊΕΣ ΑΥΤΈΣ ΜΠΟΡΕΊ ΝΑ ΕΊΝΑΙ ΚΑΊΡΙΑΣ ΣΗΜΑΣΊΑΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΝΆΠΤΥΞΗ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΙΚΌΤΕΡΩΝ ΑΝΤΙΣΥΛΛΗΠΤΙΚΏΝ ΕΜΒΟΛΊΩΝ ΓΙΑ ΤΟΝ ΈΛΕΓΧΟ ΤΩΝ ΠΛΗΘΥΣΜΏΝ ΆΓΡΙΩΝ ΖΏΩΝ ΜΕ ΣΗΜΑΝΤΙΚΌ ΚΟΙΝΩΝΙΚΌ, ΟΙΚΟΛΟΓΙΚΌ ΚΑΙ ΟΙΚΟΝΟΜΙΚΌ ΑΝΤΊΚΤΥΠΟ. (Greek)
4 August 2022
0 references
SEXUÁLNA REPRODUKCIA JE KOMPLEXNÝ PROCES, KTORÝ ZAHŔŇA TVORBU A ÚČASŤ DVOCH VYSOKO ŠPECIALIZOVANÝCH BUNIEK, GAMÉT, KTORÉ POVEDÚ K VZNIKU ZYGOTY S VLASTNOU GENETICKOU IDENTITOU. V PRÍPADE CICAVCOV SA S VNÚTORNOU REPRODUKCIOU, OPLODNENÍM A PREDIMPLANTÁCIOU EMBRYONÁLNY VÝVOJ VYSKYTUJE V ŠPECIALIZOVANEJ SKÚMAVKE NAZÝVANEJ VAJCOVOD (ALEBO VAJCOVOD). OBJASNENIE MECHANIZMOV, KTORÉ SA PODIEĽAJÚ NA TVORBE GAMÉT, ROZPOZNÁVANÍ GAMÉT, OPLODNENÍ, INTERAKCII S OVOCÍM GAMÉT A PREDIMPLANTAČNÝCH EMBRYÁCH MÁ VEĽKÝ VEDECKÝ, TECHNOLOGICKÝ, KLINICKÝ A SOCIÁLNY VÝZNAM. NA DOSIAHNUTIE TÝCHTO CIEĽOV SME STANOVILI NOVÝ PRÍSTUP, AKO JE POUŽITIE TECHNOLÓGIE CRISPR-CAS9 U KRÁLIKA. TÁTO TECHNOLÓGIA NÁM UMOŽŇUJE VYTVÁRAŤ KNOCKOUT (KO) ZVIERATÁ TÝM, ŽE ZABRAŇUJE EXPRESII FUNKČNÉHO GÉNU. TENTO EXPERIMENTÁLNY PRÍSTUP POSKYTUJE JEDEN Z NAJSPOĽAHLIVEJŠÍCH A NAJSPOĽAHLIVEJŠÍCH VEDECKÝCH DÔKAZOV. TAK, PO DOBU NIEKOĽKÝCH ROKOV VEDOMOSTI V OBLASTI REPRODUKCIE BOLI HLBOKO UPRAVENÉ V DÔSLEDKU POUŽITIA KO ZVIERAT. TECHNOLÓGIA CRISPR-CAS9 UMOŽŇUJE GENEROVAŤ KO U INÝCH ZVIERAT AKO MYŠ V EFEKTÍVNEJ METÓDE A NEDÁVNO BOLA VYVINUTÁ U KRÁLIKA. V SÚČASNOM PROJEKTE BUDEME KRÁLIKA POUŽÍVAŤ AKO POKUSNÉ ZVIERA, PRETOŽE MÁ REPRODUKČNÉ VLASTNOSTI, KTORÉ SÚ V NIEKTORÝCH ASPEKTOCH VEĽMI ODLIŠNÉ OD MYŠI A PODOBNÉ INÝM DOMÁCIM ZVIERATÁM, AKO JE PRASNICA, KRAVA, MAČKA, SUKA A DOKONCA AJ ĽUDSKÝ DRUH. KRÁLIK TAK PREDSTAVUJE ZONA PELLUCIDA (ZP) OBKLOPUJÚCU VAJÍČKA ZLOŽENÉ ZO 4 PROTEÍNOV VRÁTANE PROTEÍNU ZP4, KTORÝ SA NENACHÁDZA U MYŠÍ (ZP1, ZP2 A ZP3). OKREM TOHO SÚ V LITERATÚRE PROTICHODNÉ ÚDAJE O BIOLOGICKEJ ÚLOHE, KTORÚ ZOHRÁVA OVGP1, KTORÝ JE NAJPOČETNEJŠÍM PROTEÍNOM VYLUČOVANÝM OVIDUKČNÝM EPITELOM. OVGP1 MÁ TEDA VYSOKÚ AFINITU K ZP OOCYTOV KRÁLIKA, KRAVY, PRASNICE A DOKONCA AJ ĽUDSKÉHO DRUHU; AVŠAK, U MYŠÍ MÁ TENTO PROTEÍN NÍZKU AFINITU K ZP. V SÚČASNOM PROJEKTE CHCEME POMOCOU KO ZVIERAT ANALYZOVAŤ ÚLOHU DVOCH ZP PROTEÍNOV (ZP1 A ZP4) V MODELI ZP SO 4 PROTEÍNMI A ÚLOHU, KTORÚ ZOHRÁVA OVGP1. V RÁMCI TOHTO PROJEKTU SA BUDÚ VYUŽÍVAŤ AJ ĎALŠIE ŠPIČKOVÉ TECHNOLÓGIE, AKO NAPRÍKLAD PROTEOMICKÁ ANALÝZA, EXPRESIA GÉNOV (MIKROARRAYS A PCR), AKO AJ KONFOKÁLNA A ELEKTRÓNOVÁ MIKROSKOPIA. ZÍSKANÉ POTENCIÁLNE VÝSLEDKY NÁM POSKYTNÚ VEĽMI DÔLEŽITÉ INFORMÁCIE O MECHANIZMOCH HNOJENIA. TIETO INFORMÁCIE BUDÚ KĽÚČOVÉ PRE VÝVOJ NOVÝCH DIAGNOSTICKÝCH METODÍK PRE NEPLODNOSŤ, KVALITU SPERMIÍ, VÝBER SPERMIÍ A ZLEPŠENIE KULTIVAČNÝCH MÉDIÍ NA OPLODNENIE IN VITRO S CIEĽOM ZVÝŠIŤ ÚČINNOSŤ TECHNOLÓGIE ASISTOVANEJ REPRODUKCIE. OKREM TOHO TIETO INFORMÁCIE MÔŽU BYŤ KĽÚČOM K VÝVOJU ÚČINNEJŠÍCH ANTIKONCEPČNÝCH VAKCÍN NA KONTROLU POPULÁCIÍ VOĽNE ŽIJÚCICH ZVIERAT S VÝZNAMNÝM SOCIÁLNYM, EKOLOGICKÝM A HOSPODÁRSKYM VPLYVOM. (Slovak)
4 August 2022
0 references
SEKSUAALINEN LISÄÄNTYMINEN ON MONIMUTKAINEN PROSESSI, JOHON KUULUU KAHDEN PITKÄLLE ERIKOISTUNEEN SOLUN, SUKUSOLUJEN, MUODOSTUMINEN JA OSALLISTUMINEN, JOKA SYNNYTTÄÄ TSYGOOTIN, JOLLA ON OMA GENEETTINEN IDENTITEETTINSÄ. NISÄKKÄIDEN TAPAUKSESSA HEDELMÖITYS JA ESIIMPLANTAATIO ALKION KEHITTYMINEN TAPAHTUU OLKIKANAVAN (TAI MUNANJOHTIMEN) ERITYISPUTKESSA, JOSSA ON SISÄINEN LISÄÄNTYMINEN. SUKUSOLUJEN MUODOSTUMISEEN, SUKUSOLUJEN TUNNISTAMISEEN, HEDELMÖITTYMISEEN, SUKUSOLUJEN LAMPAIDEN JA ESIIMPLANTAATIOALKIOIDEN KANSSA VUOROVAIKUTUKSEEN LIITTYVIEN MEKANISMIEN SELKEYTTÄMISELLÄ ON SUURTA TIETEELLISTÄ, TEKNOLOGISTA, KLIINISTÄ JA YHTEISKUNNALLISTA MERKITYSTÄ. NÄIDEN TAVOITTEIDEN SAAVUTTAMISEKSI ESITIMME UUDENLAISEN LÄHESTYMISTAVAN, KUTEN CRISPR-CAS9-TEKNOLOGIAN KÄYTÖN KANISSA. TÄMÄN TEKNOLOGIAN AVULLA VOIMME LUODA TYRMÄYSELÄIMIÄ (KO) ESTÄMÄLLÄ FUNKTIONAALISEN GEENIN ILMENTYMISEN. TÄMÄ KOKEELLINEN LÄHESTYMISTAPA ON YKSI LUOTETTAVIMMISTA JA LUOTETTAVIMMISTA TIETEELLISISTÄ TODISTEISTA. NÄIN OLLEN MUUTAMAN VUODEN AJAN TIETÄMYSTÄ LISÄÄNTYMISESTÄ ON MUUTETTU PERUSTEELLISESTI KO-ELÄINTEN KÄYTÖN VUOKSI. CRISPR-CAS9-TEKNIIKKA MAHDOLLISTAA KO:N TUOTTAMISEN MUILLE ELÄIMILLE KUIN HIIRELLE TEHOKKAALLA MENETELMÄLLÄ, JA SE ON ÄSKETTÄIN KEHITETTY KANIIN. TÄSSÄ HANKKEESSA KÄYTÄMME KANIA KOE-ELÄIMENÄ, KOSKA SILLÄ ON LISÄÄNTYMISOMINAISUUKSIA, JOTKA OVAT JOILTAKIN OSIN HYVIN ERILAISIA KUIN HIIRELLÄ JA MUISTUTTAVAT MUITA KOTIELÄIMIÄ, KUTEN EMAKKOA, LEHMÄÄ, KISSAA, NARTTUA JA JOPA IHMISLAJIA. NÄIN OLLEN KANI ESITTÄÄ ZONA PELLUCIDA (ZP) YMPÄRÖIVÄN MUNASOLUN, JOKA KOOSTUU NELJÄSTÄ PROTEIINISTA, MUKAAN LUKIEN ZP4-PROTEIINI, JOTA EI LÖYDY HIIRESTÄ (ZP1, ZP2 JA ZP3). LISÄKSI KIRJALLISUUDESSA ON RISTIRIITAISIA TIETOJA OVGP1:N BIOLOGISESTA ROOLISTA. OVGP1 ON LAMPUKALISEN EPITEELIN ENITEN ERITTÄMÄ PROTEIINI. NÄIN OLLEN OVGP1:LLÄ ON SUURI AFFINITEETTI KANIN, LEHMÄN, EMAKON JA JOPA IHMISLAJIN MUNASOLUJEN ZP:HEN; KUITENKIN HIIRELLÄ TÄMÄ PROTEIINI ON ALHAINEN AFFINITEETTI ZP. TÄSSÄ HANKKEESSA HALUAMME ANALYSOIDA KO-ELÄINTEN KÄYTÖN AVULLA KAHDEN ZP-PROTEIININ (ZP1 JA ZP4) ROOLIA ZP-MALLISSA, JOSSA ON 4 PROTEIINIA, JA OVGP1:N ROOLIA. HANKKEESSA HYÖDYNNETÄÄN MYÖS MUITA JOHTAVIA TEKNOLOGIOITA, KUTEN PROTEOMINEN ANALYYSI, GEENIEN ILMENTYMINEN (MIKRORAUSTEET JA PCR) SEKÄ KONFOKAALINEN JA ELEKTRONIMIKROSKOPIA. SAADUT MAHDOLLISET TULOKSET ANTAVAT MEILLE ERITTÄIN MERKITYKSELLISTÄ TIETOA LANNOITTAMISEEN LIITTYVISTÄ MEKANISMEISTA. NÄMÄ TIEDOT OVAT KESKEISESSÄ ASEMASSA KEHITETTÄESSÄ UUSIA DIAGNOSTISIA MENETELMIÄ HEDELMÄTTÖMYYDEN, SIITTIÖIDEN LAADUN, SIITTIÖIDEN VALINNAN JA IN VITRO -HEDELMÖITYSVILJELYN VILJELYVÄLINEIDEN PARANTAMISEKSI AVUSTETUN LISÄÄNTYMISTEKNOLOGIAN TEHOSTAMISEKSI. LISÄKSI NÄMÄ TIEDOT VOIVAT OLLA AVAINASEMASSA KEHITETTÄESSÄ TEHOKKAAMPIA EHKÄISYROKOTTEITA SELLAISTEN LUONNONVARAISTEN ELÄINPOPULAATIOIDEN TORJUMISEKSI, JOILLA ON MERKITTÄVIÄ SOSIAALISIA, EKOLOGISIA JA TALOUDELLISIA VAIKUTUKSIA. (Finnish)
4 August 2022
0 references
ROZMNAŻANIE SEKSUALNE JEST ZŁOŻONYM PROCESEM, KTÓRY OBEJMUJE TWORZENIE I UDZIAŁ DWÓCH WYSOCE WYSPECJALIZOWANYCH KOMÓREK, GAMETY, KTÓRE BĘDĄ PROWADZIĆ DO ZYGOTU Z WŁASNĄ TOŻSAMOŚCIĄ GENETYCZNĄ. W PRZYPADKU SSAKÓW, Z WEWNĘTRZNYM ROZMNAŻANIEM, ZAPŁODNIENIEM I PREIMPLANTACJĄ ROZWÓJ EMBRIONALNY WYSTĘPUJE W WYSPECJALIZOWANEJ RURCE ZWANEJ JAJOWODEM (LUB JAJOWODÓW). WYJAŚNIENIE MECHANIZMÓW ZWIĄZANYCH Z TWORZENIEM GAMET, ROZPOZNAWANIEM GAMET, ZAPŁODNIENIEM, INTERAKCJĄ Z JAJNIKIEM GAMET I EMBRIONÓW PRZEDIMPLANTACYJNYCH MA DUŻE ZNACZENIE NAUKOWE, TECHNOLOGICZNE, KLINICZNE I SPOŁECZNE. ABY OSIĄGNĄĆ TE CELE, OKREŚLILIŚMY NOWATORSKIE PODEJŚCIE, TAKIE JAK ZASTOSOWANIE TECHNOLOGII CRISPR-CAS9 U KRÓLIKA. TECHNOLOGIA TA POZWALA NAM GENEROWAĆ ZWIERZĘTA NOKAUTUJĄCE (KO) POPRZEZ ZAPOBIEGANIE EKSPRESJI GENU FUNKCJONALNEGO. TO EKSPERYMENTALNE PODEJŚCIE STANOWI JEDEN Z NAJBARDZIEJ SOLIDNYCH I WIARYGODNYCH DOWODÓW NAUKOWYCH. TAK WIĘC OD KILKU LAT WIEDZA W DZIEDZINIE ROZMNAŻANIA JEST GŁĘBOKO MODYFIKOWANA ZE WZGLĘDU NA WYKORZYSTANIE ZWIERZĄT KO. TECHNOLOGIA CRISPR-CAS9 POZWALA NA GENEROWANIE KO U ZWIERZĄT INNYCH NIŻ MYSZ W EFEKTYWNEJ METODZIE I ZOSTAŁA NIEDAWNO OPRACOWANA U KRÓLIKA. W OBECNYM PROJEKCIE BĘDZIEMY UŻYWAĆ KRÓLIKA JAKO ZWIERZĘCIA DOŚWIADCZALNEGO, PONIEWAŻ MA CECHY REPRODUKCYJNE, KTÓRE W NIEKTÓRYCH ASPEKTACH BARDZO RÓŻNIĄ SIĘ OD MYSZY I PODOBNE DO INNYCH ZWIERZĄT DOMOWYCH, TAKICH JAK MACICA, KROWA, KOT, SUKA, A NAWET GATUNEK LUDZKI. KRÓLIK PRZEDSTAWIA ZATEM ZONA PELLUCIDA (ZP) OTACZAJĄCĄ KOMÓRKI JAJOWE SKŁADAJĄCE SIĘ Z 4 BIAŁEK, W TYM BIAŁKA ZP4, KTÓRE NIE WYSTĘPUJE U MYSZY (ZP1, ZP2 I ZP3). PONADTO W LITERATURZE ISTNIEJĄ SPRZECZNE DANE DOTYCZĄCE ROLI BIOLOGICZNEJ ODGRYWANEJ PRZEZ OVGP1, KTÓRA JEST NAJBARDZIEJ OBFITYM BIAŁKIEM WYDZIELANYM PRZEZ NABŁONEK JAJOWODOWY. W ZWIĄZKU Z TYM OVGP1 WYKAZUJE WYSOKIE POWINOWACTWO DO ZP OOCYTÓW KRÓLIKA, KROWY, MACIORY, A NAWET GATUNKU LUDZKIEGO; JEDNAK U MYSZY BIAŁKO TO WYKAZUJE NISKIE POWINOWACTWO DO ZP. W OBECNYM PROJEKCIE CHCEMY PRZEANALIZOWAĆ POPRZEZ WYKORZYSTANIE ZWIERZĄT KO ROLĘ ODGRYWANĄ PRZEZ DWA BIAŁKA ZP (ZP1 I ZP4) W MODELU ZP Z 4 BIAŁKAMI ORAZ ROLĘ ODGRYWANĄ PRZEZ OVGP1. W RAMACH TEGO PROJEKTU WYKORZYSTANE ZOSTANĄ RÓWNIEŻ INNE WIODĄCE TECHNOLOGIE, TAKIE JAK ANALIZA PROTEOMICZNA, EKSPRESJA GENOWA (MIKROARRAYE I PCR), A TAKŻE MIKROSKOPIA KONFOKALNA I ELEKTRONOWA. POTENCJALNE UZYSKANE WYNIKI ZAPEWNIĄ NAM BARDZO ISTOTNE INFORMACJE NA TEMAT MECHANIZMÓW ZWIĄZANYCH Z NAWOŻENIEM. INFORMACJE TE BĘDĄ MIAŁY KLUCZOWE ZNACZENIE DLA OPRACOWANIA NOWYCH METOD DIAGNOSTYCZNYCH DOTYCZĄCYCH NIEPŁODNOŚCI, JAKOŚCI PLEMNIKÓW, DOBORU PLEMNIKÓW I POPRAWY POŻYWEK DO ZAPŁODNIENIA IN VITRO W CELU ZWIĘKSZENIA SKUTECZNOŚCI TECHNOLOGII WSPOMAGANEGO ROZRODU. PONADTO INFORMACJE TE MOGĄ MIEĆ KLUCZOWE ZNACZENIE DLA OPRACOWANIA SKUTECZNIEJSZYCH SZCZEPIONEK ANTYKONCEPCYJNYCH W CELU ZWALCZANIA DZIKICH POPULACJI ZWIERZĄT O ZNACZĄCYM WPŁYWIE SPOŁECZNYM, EKOLOGICZNYM I GOSPODARCZYM. (Polish)
4 August 2022
0 references
A SZEXUÁLIS REPRODUKCIÓ EGY ÖSSZETETT FOLYAMAT, AMELY MAGÁBAN FOGLALJA KÉT ERŐSEN SPECIALIZÁLT SEJT, AZ IVARSEJTEK KIALAKULÁSÁT ÉS RÉSZVÉTELÉT, AMELYEK SAJÁT GENETIKAI IDENTITÁSSAL RENDELKEZŐ ZIGÓTÁT EREDMÉNYEZNEK. AZ EMLŐSÖK ESETÉBEN A BELSŐ REPRODUKCIÓ, A MEGTERMÉKENYÍTÉS ÉS A PREIMPLANTÁCIÓS EMBRIONÁLIS FEJLŐDÉS AZ OVIDUCT (VAGY PETEVEZETÉK) NEVŰ SPECIÁLIS CSŐBEN TÖRTÉNIK. AZ IVARSEJTEK KÉPZŐDÉSÉBEN RÉSZT VEVŐ MECHANIZMUSOK TISZTÁZÁSA, AZ IVARSEJTEK KÖZÖTTI ELISMERÉS, A MEGTERMÉKENYÍTÉS, AZ IVARSEJTEK OVIDUCTUMÁVAL VALÓ KÖLCSÖNHATÁS ÉS A PREIMPLANTÁCIÓS EMBRIÓK NAGY TUDOMÁNYOS, TECHNOLÓGIAI, KLINIKAI ÉS TÁRSADALMI JELENTŐSÉGGEL BÍRNAK. E CÉLOK ELÉRÉSE ÉRDEKÉBEN ÚJ MEGKÖZELÍTÉST HATÁROZTUNK MEG, PÉLDÁUL A CRISPR-CAS9 TECHNOLÓGIÁT A NYÚLBAN. EZ A TECHNOLÓGIA LEHETŐVÉ TESZI SZÁMUNKRA, HOGY KIÜTÉSES (KO) ÁLLATOKAT GENERÁLJUNK AZÁLTAL, HOGY MEGAKADÁLYOZZÁK A FUNKCIONÁLIS GÉN KIFEJEZŐDÉSÉT. EZ A KÍSÉRLETI MEGKÖZELÍTÉS AZ EGYIK LEGMEGBÍZHATÓBB ÉS LEGMEGBÍZHATÓBB TUDOMÁNYOS BIZONYÍTÉK. ÍGY NÉHÁNY ÉVE A SZAPORODÁSI ISMERETEKET A KO ÁLLATOK HASZNÁLATA MIATT JELENTŐSEN MÓDOSÍTOTTÁK. A CRISPR-CAS9 TECHNOLÓGIA LEHETŐVÉ TESZI A KO GENERÁLÁSÁT MÁS ÁLLATOKBAN, MINT AZ EGÉR EGY HATÉKONY MÓDSZERREL, ÉS A KÖZELMÚLTBAN FEJLESZTETTÉK KI A NYÚLBAN. EBBEN A PROJEKTBEN KÍSÉRLETI ÁLLATKÉNT FOGJUK HASZNÁLNI A NYULAT, MIVEL SZAPORODÁSI TULAJDONSÁGOKKAL RENDELKEZIK, AMELYEK BIZONYOS SZEMPONTBÓL NAGYON KÜLÖNBÖZNEK AZ EGÉRTŐL, ÉS HASONLÓAK MÁS HÁZIÁLLATOKHOZ, PÉLDÁUL A KOCÁHOZ, A TEHÉNHEZ, A MACSKAHOZ, A RIBANCHOZ ÉS MÉG AZ EMBERI FAJHOZ IS. ÍGY A NYÚL EGY ZONA PELLUCIDÁT (ZP) MUTAT BE A PETESEJT KÖRÜL, AMELY 4 FEHÉRJÉBŐL ÁLL, BELEÉRTVE AZ EGÉRBEN NEM TALÁLHATÓ ZP4 FEHÉRJÉT (ZP1, ZP2 ÉS ZP3). EMELLETT AZ IRODALOMBAN ELLENTMONDÁSOS ADATOK ÁLLNAK RENDELKEZÉSRE AZ OVGP1 BIOLÓGIAI SZEREPÉRŐL, AMELY AZ OVIDUCTALIS EPITHELIUM ÁLTAL KIVÁLASZTOTT LEGBŐSÉGESEBB FEHÉRJE. ÍGY AZ OVGP1 NAGY AFFINITÁSSAL RENDELKEZIK A NYÚL, TEHÉN, KOCA ÉS MÉG AZ EMBERI FAJ PETESEJTJEINEK ZP-JÉHEZ; AZONBAN AZ EGÉRBEN EZ A FEHÉRJE ALACSONY AFFINITÁSSAL RENDELKEZIK A ZP-HEZ. EBBEN A PROJEKTBEN A KO ÁLLATOK HASZNÁLATÁVAL SZERETNÉNK ELEMEZNI KÉT ZP FEHÉRJE (ZP1 ÉS ZP4) SZEREPÉT EGY 4 FEHÉRJÉVEL RENDELKEZŐ ZP MODELLBEN ÉS AZ OVGP1 SZEREPÉT. EZ A PROJEKT MÁS VEZETŐ TECHNOLÓGIÁKAT IS FELHASZNÁL, MINT PÉLDÁUL A PROTEOMIKUS ANALÍZIST, A GÉNEXPRESSZIÓT (MIKROARRAY-EK ÉS PCR), VALAMINT A KONOCÁLIS ÉS ELEKTRONMIKROSZKÓPIÁT. A LEHETSÉGES EREDMÉNYEK RENDKÍVÜL RELEVÁNS INFORMÁCIÓKKAL SZOLGÁLNAK MAJD A MEGTERMÉKENYÍTÉS MECHANIZMUSAIRÓL. EZEK AZ INFORMÁCIÓK KULCSFONTOSSÁGÚAK LESZNEK A MEDDŐSÉGRE, A SPERMÁK MINŐSÉGÉRE, A SPERMIUMOK KIVÁLASZTÁSÁRA, VALAMINT AZ IN VITRO MEGTERMÉKENYÍTÉST SZOLGÁLÓ TÁPTALAJOK JAVÍTÁSÁRA VONATKOZÓ ÚJ DIAGNOSZTIKAI MÓDSZEREK KIFEJLESZTÉSÉHEZ A TÁMOGATOTT REPRODUKCIÓS TECHNOLÓGIA HATÉKONYSÁGÁNAK NÖVELÉSE ÉRDEKÉBEN. EZEN TÚLMENŐEN EZEK AZ INFORMÁCIÓK KULCSFONTOSSÁGÚAK LEHETNEK A JELENTŐS TÁRSADALMI, ÖKOLÓGIAI ÉS GAZDASÁGI HATÁSSAL BÍRÓ VADON ÉLŐ ÁLLATPOPULÁCIÓK ELLENI HATÉKONYABB FOGAMZÁSGÁTLÓ VAKCINÁK KIFEJLESZTÉSÉHEZ. (Hungarian)
4 August 2022
0 references
SEXUÁLNÍ REPRODUKCE JE KOMPLEXNÍ PROCES, KTERÝ ZAHRNUJE TVORBU A ÚČAST DVOU VYSOCE SPECIALIZOVANÝCH BUNĚK, GAMET, KTERÉ ZPŮSOBÍ VZNIK ZYGOTY S VLASTNÍ GENETICKOU IDENTITOU. U SAVCŮ S VNITŘNÍ REPRODUKCÍ DOCHÁZÍ K OPLODNĚNÍ A PREIMPLANTACI EMBRYONÁLNÍHO VÝVOJE VE SPECIALIZOVANÉ TRUBICI ZVANÉ VEJCOVOD (NEBO VEJCOVOD). VYJASNĚNÍ MECHANISMŮ, KTERÉ SE PODÍLEJÍ NA TVORBĚ GAMET, ROZPOZNÁVÁNÍ MEZI GAMETY, OPLODNĚNÍ, INTERAKCI S VAJEČNÍKY GAMET A PREIMPLANTAČNÍCH EMBRYÍ, MÁ VELKÝ VĚDECKÝ, TECHNOLOGICKÝ, KLINICKÝ A SPOLEČENSKÝ VÝZNAM. K DOSAŽENÍ TĚCHTO CÍLŮ JSME STANOVILI NOVÝ PŘÍSTUP, JAKO JE POUŽITÍ TECHNOLOGIE CRISPR-CAS9 U KRÁLÍKA. TATO TECHNOLOGIE NÁM UMOŽŇUJE GENEROVAT KNOCKOUT (KO) ZVÍŘATA TÍM, ŽE BRÁNÍ EXPRESE FUNKČNÍHO GENU. TENTO EXPERIMENTÁLNÍ PŘÍSTUP POSKYTUJE JEDEN Z NEJPEVNĚJŠÍCH A NEJSPOLEHLIVĚJŠÍCH VĚDECKÝCH DŮKAZŮ. ZNALOSTI V OBLASTI REPRODUKCE SE TAK JIŽ NĚKOLIK LET VÝRAZNĚ MODIFIKUJÍ V DŮSLEDKU POUŽÍVÁNÍ ZVÍŘAT KO. TECHNOLOGIE CRISPR-CAS9 UMOŽŇUJE GENEROVAT KO U JINÝCH ZVÍŘAT NEŽ MYŠÍ EFEKTIVNÍ METODOU A BYLA NEDÁVNO VYVINUTA U KRÁLÍKA. V SOUČASNÉM PROJEKTU BUDEME KRÁLÍKA POUŽÍVAT JAKO POKUSNÉ ZVÍŘE, PROTOŽE MÁ REPRODUKČNÍ VLASTNOSTI, KTERÉ SE V NĚKTERÝCH OHLEDECH VELMI LIŠÍ OD MYŠÍ A PODOBNÉ OSTATNÍM DOMÁCÍM ZVÍŘATŮM, JAKO JSOU PRASNICE, KRÁVA, KOČKA, FENA A DOKONCE I LIDSKÉ DRUHY. KRÁLÍK TAK PŘEDSTAVUJE ZONA PELLUCIDA (ZP) OBKLOPUJÍCÍ VAJÍČKO SLOŽENOU ZE 4 PROTEINŮ VČETNĚ PROTEINU ZP4, KTERÝ SE V MYŠÍCH NENACHÁZÍ (ZP1, ZP2 A ZP3). KROMĚ TOHO EXISTUJÍ V LITERATUŘE PROTICHŮDNÉ ÚDAJE O BIOLOGICKÉ ÚLOZE OVGP1, COŽ JE NEJBOHATŠÍ PROTEIN VYLUČOVANÝ VEJCOVODOVÝM EPITELEM. OVGP1 MÁ TEDY VYSOKOU AFINITU K ZP OOCYTŮ KRÁLÍKŮ, KRAV, PRASNIC A DOKONCE I LIDSKÝCH DRUHŮ; NICMÉNĚ, U MYŠI MÁ TENTO PROTEIN NÍZKOU AFINITU K ZP. V SOUČASNÉM PROJEKTU CHCEME POMOCÍ ZVÍŘAT KO ANALYZOVAT ROLI DVOU ZP PROTEINŮ (ZP1 A ZP4) V MODELU ZP SE 4 PROTEINY A ROLE, KTEROU HRAJE OVGP1. TENTO PROJEKT BUDE VYUŽÍVAT I DALŠÍ ŠPIČKOVÉ TECHNOLOGIE, JAKO JE PROTEOMICKÁ ANALÝZA, GENOVÁ EXPRESE (MIKROARRAY A PCR), JAKOŽ I KONFOKÁLNÍ A ELEKTRONOVÁ MIKROSKOPIE. POTENCIÁLNÍ ZÍSKANÉ VÝSLEDKY NÁM POSKYTNOU VYSOCE RELEVANTNÍ INFORMACE O MECHANISMECH, KTERÉ SE PODÍLEJÍ NA HNOJENÍ. TYTO INFORMACE BUDOU KLÍČOVÉ PRO VÝVOJ NOVÝCH DIAGNOSTICKÝCH METODIK PRO NEPLODNOST, KVALITU SPERMIÍ, VÝBĚR SPERMIÍ A ZLEPŠENÍ KULTIVAČNÍCH MÉDIÍ PRO OPLODNĚNÍ IN VITRO S CÍLEM ZVÝŠIT ÚČINNOST TECHNOLOGIE ASISTOVANÉ REPRODUKCE. KROMĚ TOHO MOHOU BÝT TYTO INFORMACE KLÍČOVÉ PRO VÝVOJ ÚČINNĚJŠÍCH ANTIKONCEPČNÍCH OČKOVACÍCH LÁTEK PRO KONTROLU POPULACÍ VOLNĚ ŽIJÍCÍCH ZVÍŘAT SE ZNAČNÝM SOCIÁLNÍM, EKOLOGICKÝM A EKONOMICKÝM DOPADEM. (Czech)
4 August 2022
0 references
SEKSUĀLĀ REPRODUKCIJA IR SAREŽĢĪTS PROCESS, KAS IETVER DIVU ĻOTI SPECIALIZĒTU ŠŪNU — GAMETU — VEIDOŠANOS UN LĪDZDALĪBU, KAS RADĪS ZIGOTU AR SAVU ĢENĒTISKO IDENTITĀTI. ZĪDĪTĀJU GADĪJUMĀ AR IEKŠĒJO VAIROŠANOS, APAUGĻOŠANU UN PREIMPLANTĀCIJU EMBRIONĀLĀ ATTĪSTĪBA NOTIEK SPECIALIZĒTĀ CAURULĒ, KO SAUC PAR OLVADU (VAI OLVADU). TO MEHĀNISMU PRECIZĒŠANAI, KAS IR IESAISTĪTI GAMETU VEIDOŠANĀ, GAMETU ATPAZĪŠANAI, APAUGĻOŠANAI, MIJIEDARBĪBAI AR GAMETU OLVADIEM UN PREIMPLANTĀCIJAS EMBRIJIEM, IR LIELA ZINĀTNISKA, TEHNOLOĢISKA, KLĪNISKA UN SOCIĀLA NOZĪME. LAI SASNIEGTU ŠOS MĒRĶUS, MĒS NORĀDĪJĀM JAUNU PIEEJU, PIEMĒRAM, CRISPR-CAS9 TEHNOLOĢIJAS IZMANTOŠANU TRUŠIEM. ŠĪ TEHNOLOĢIJA ĻAUJ MUMS RADĪT NOKAUTU (KO) DZĪVNIEKUS, NOVĒRŠOT FUNKCIONĀLA GĒNA IZPAUSMI. ŠĪ EKSPERIMENTĀLĀ PIEEJA SNIEDZ VIENU NO SPĒCĪGĀKAJIEM UN TICAMĀKAJIEM ZINĀTNISKAJIEM PIERĀDĪJUMIEM. TĀDĒJĀDI DAŽUS GADUS ZINĀŠANAS VAIROŠANĀS JOMĀ IR BŪTISKI PĀRVEIDOTAS SAKARĀ AR KO DZĪVNIEKU IZMANTOŠANU. CRISPR-CAS9 TEHNOLOĢIJA ĻAUJ RAŽOT KO CITIEM DZĪVNIEKIEM, NEVIS PELĒM EFEKTĪVĀ METODĒ, UN TĀ IR NESEN IZSTRĀDĀTA TRUŠIEM. ŠAJĀ PROJEKTĀ MĒS IZMANTOSIM TRUŠU KĀ EKSPERIMENTĀLU DZĪVNIEKU, JO TAM IR REPRODUKTĪVĀS ĪPAŠĪBAS, KAS DAŽOS ASPEKTOS IR ĻOTI ATŠĶIRĪGAS NO PELĒM UN LĪDZĪGAS CITIEM MĀJDZĪVNIEKIEM, PIEMĒRAM, SIVĒNMĀTEI, GOVĪM, KAĶIM, KUCEI UN PAT CILVĒKU SUGĀM. TĀDĒJĀDI TRUŠAM IR ZOLE PELLUCIDA (ZP) AP OLŠŪNU, KAS SASTĀV NO 4 OLBALTUMVIELĀM, IESKAITOT ZP4 PROTEĪNU, KAS NAV ATRODAMS PELĒ (ZP1, ZP2 UN ZP3). TURKLĀT LITERATŪRĀ IR PRETRUNĪGI DATI PAR OVGP1 BIOLOĢISKO LOMU, KAS IR VISBAGĀTĀKAIS OLBALTUMVIELA, KO IZDALA OLBALTUMVIELA. TĀDĒJĀDI OVGP1 IR AUGSTA AFINITĀTE PRET TRUŠU, GOVJU, SIVĒNMĀŠU UN PAT CILVĒKU SUGU OOCĪTU ZP; TOMĒR PELĒ ŠIM PROTEĪNAM IR ZEMA AFINITĀTE PRET ZP. ŠAJĀ PROJEKTĀ, IZMANTOJOT KO DZĪVNIEKUS, MĒS VĒLAMIES ANALIZĒT DIVU ZP PROTEĪNU (ZP1 UN ZP4) LOMU ZP MODELĪ AR 4 PROTEĪNIEM UN OVGP1 LOMU. ŠAJĀ PROJEKTĀ CITA STARPĀ TIKS IZMANTOTAS ARĪ CITAS VADOŠĀS TEHNOLOĢIJAS, PIEMĒRAM, PROTEOMIKA, GĒNU EKSPRESIJA (MIKROAUGI UN PĶR), KĀ ARĪ KONFOKĀLĀ UN ELEKTRONU MIKROSKOPIJA. POTENCIĀLIE IEGŪTIE REZULTĀTI SNIEGS MUMS ĻOTI BŪTISKU INFORMĀCIJU PAR MĒSLOŠANAS PROCESĀ IESAISTĪTAJIEM MEHĀNISMIEM. ŠĪ INFORMĀCIJA BŪS BŪTISKA, LAI IZSTRĀDĀTU JAUNAS DIAGNOSTIKAS METODES NEAUGLĪBAS, SPERMAS KVALITĀTES, SPERMAS ATLASES UN KULTŪRAS VIDES UZLABOŠANAI IN VITRO APAUGĻOŠANAI, LAI PALIELINĀTU MĀKSLĪGĀS REPRODUKTĪVĀS TEHNOLOĢIJAS EFEKTIVITĀTI. TURKLĀT ŠĪ INFORMĀCIJA VAR BŪT BŪTISKA, LAI IZSTRĀDĀTU EFEKTĪVĀKAS PRETAPAUGĻOŠANĀS VAKCĪNAS SAVVAĻAS DZĪVNIEKU POPULĀCIJU KONTROLEI AR IEVĒROJAMU SOCIĀLO, EKOLOĢISKO UN EKONOMISKO IETEKMI. (Latvian)
4 August 2022
0 references
IS ATÁIRGEADH GNÉASACH PRÓISEAS CASTA A BHAINEANN LE FOIRMIÚ AGUS RANNPHÁIRTÍOCHT DHÁ CHEALLA AN-SPEISIALAITHE, NA GAMETES, A THABHAIRT AR CHÚIS LE ZYGOTE LENA FHÉINIÚLACHT GHÉINITEACH FÉIN. I GCÁS MAMAIGH, LE ATÁIRGEADH INMHEÁNACH, TOIRCHIÚ AGUS RÉAMHPHLANDÚ THARLAÍONN FORBAIRT SUTHACH I BHFEADÁN SPEISIALAITHE AR A DTUGTAR AN OVIDUCT (NÓ AN FEADÁN FALLOPIAN). TÁ TÁBHACHT MHÓR EOLAÍOCH, THEICNEOLAÍOCH, CHLINICIÚIL AGUS SHÓISIALTA AG BAINT LE SOILÉIRIÚ NA MEICNÍOCHTAÍ A BHFUIL BAINT ACU LE FOIRMIÚ GAIMÉITÍ, AITHEANTAS I MEASC GAIMÉITÍ, TOIRCHIÚ, IDIRGHNÍOMHAÍOCHT LE HOVIDUCT GAIMÉITÍ AGUS SUTHANNA RÉAMHPHLANDÚCHÁIN. CHUN NA CUSPÓIRÍ SIN A BHAINT AMACH, LEAGAMAR AMACH CUR CHUIGE NUA, AMHAIL TEICNEOLAÍOCHT CRISPR-CAS9 A ÚSÁID SA CHOINÍN. LIGEANN AN TEICNEOLAÍOCHT SEO DÚINN AINMHITHE KNOCKOUT (KO) A GHINIÚINT TRÍ CHOSC A CHUR AR LÉIRIÚ GÉINE FEIDHME. SOLÁTHRAÍONN AN CUR CHUIGE TURGNAMHACH SEO CEANN DEN FHIANAISE EOLAÍOCH IS LÁIDRE AGUS IS IONTAOFA. DÁ BHRÍ SIN, AR FEADH CÚPLA BLIAIN TÁ AN T-EOLAS I RÉIMSE AN ATÁIRGTHE MODHNAITHE GO MÓR MAR GHEALL AR ÚSÁID A BHAINT AS KO AINMHITHE. CEADAÍONN TEICNEOLAÍOCHT CRISPR-CAS9 KO A GHINIÚINT IN AINMHITHE EILE SEACHAS AN LUCH I MODH ÉIFEACHTACH AGUS FORBRAÍODH É LE DÉANAÍ SA CHOINÍN. SA TIONSCADAL REATHA, BAINFIMID ÚSÁID AS AN COINÍN MAR AINMHÍ TURGNAMHACH ÓS RUD É GO BHFUIL TRÉITHE ATÁIRGTHE AIGE GO BHFUIL I ROINNT GNÉITHE AN-DIFRIÚIL ÓN LUCH AGUS COSÚIL LE HAINMHITHE INTÍRE EILE AMHAIL AN CRÁNACH, AN BÓ, AN CAT, AN SOITH AGUS FIÚ AN SPEICEAS DAONNA. DÁ BHRÍ SIN, CUIREANN AN COINÍN PELLUCIDA ZONA (ZP) TIMPEALL AR AN OVUM COMHDHÉANTA DE 4 PHRÓITÉIN LENA N-ÁIRÍTEAR PRÓITÉIN ZP4 NACH BHFUIL LE FÁIL SA LUCH (ZP1, ZP2 AGUS ZP3). INA THEANNTA SIN, TÁ SONRAÍ CONTRÁRTHA SA LITRÍOCHT MAIDIR LEIS AN RÓL BITHEOLAÍOCH ATÁ AG OVGP1, ARB É AN PRÓITÉIN IS FLÚIRSEACH SECRETED AG AN EPITHELIUM OVIDUCTAL. DÁ BHRÍ SIN, TÁ CLEAMHNAS ARD AG OVGP1 DO ZP ÚICÍTÍ COINÍN, BÓ, CRÁNACH AGUS FIÚ AN SPEICEAS DAONNA; MAR SIN FÉIN, SA LUCH TÁ CLEAMHNAS ÍSEAL AG AN PRÓITÉIN SEO DO ZP. SA TIONSCADAL REATHA BA MHAITH LINN ANAILÍS A DHÉANAMH TRÍ ÚSÁID A BHAINT AS KO AINMHITHE AN RÓL A BHÍ AG DHÁ PHRÓITÉIN ZP (ZP1 AGUS ZP4) I SAMHAIL ZP LE PRÓITÉINÍ 4 AGUS RÓL OVGP1. BAINFIDH AN TIONSCADAL SEO ÚSÁID FREISIN AS TEICNEOLAÍOCHTAÍ CEANNRÓDAÍOCHA EILE AMHAIL ANAILÍS PHRÓITÉAMAÍOCH, LÉIRIÚ GÉINE (MICRIARRAYS AGUS PCR) CHOMH MAITH LE MICREASCÓPACHT CHÓFÚIL AGUS LEICTREON, I MEASC NITHE EILE. CUIRFIDH NA TORTHAÍ FÉIDEARTHA EOLAS AN-ÁBHARTHA AR FÁIL DÚINN FAOI NA MEICNÍOCHTAÍ A BHAINEANN LE TOIRCHIÚ. BEIDH AN FHAISNÉIS SEO RÍTHÁBHACHTACH CHUN MODHEOLAÍOCHTAÍ DIAGNÓISEACHA NUA A FHORBAIRT MAIDIR LE NEAMHTHORTHÚLACHT, CÁILÍOCHT SPERM, ROGHNÚ SPEIRM AGUS FEABHAS A CHUR AR NA MEÁIN CHULTÚIR LE HAGHAIDH TOIRCHITHE IN VITRO CHUN ÉIFEACHTÚLACHT NA TEICNEOLAÍOCHTA ATÁIRGTHE CUIDITHE A MHÉADÚ. INA THEANNTA SIN, D’FHÉADFADH AN FHAISNÉIS SIN A BHEITH RÍTHÁBHACHTACH CHUN VACSAÍNÍ FRITHGHINIÚNACHA NÍOS ÉIFEACHTÚLA A FHORBAIRT CHUN POBAIL AINMHITHE FIÁINE A BHFUIL TIONCHAR SUNTASACH SÓISIALTA, ÉICEOLAÍOCH AGUS EACNAMAÍOCH ACU A RIALÚ. (Irish)
4 August 2022
0 references
SPOLNA REPRODUKCIJA JE KOMPLEKSEN PROCES, KI VKLJUČUJE OBLIKOVANJE IN SODELOVANJE DVEH VISOKO SPECIALIZIRANIH CELIC, GAMET, KI BO POVZROČILO ZYGOTE Z LASTNO GENETSKO IDENTITETO. V PRIMERU SESALCEV, Z NOTRANJO REPRODUKCIJO, OPLODITEV IN PREDIMPLANTACIJO EMBRIONALNI RAZVOJ SE POJAVI V SPECIALIZIRANI EPRUVETI, IMENOVANI OVIDUKT (ALI JAJCEVOD). RAZJASNITEV MEHANIZMOV, KI SO VKLJUČENI V OBLIKOVANJE GAMET, PREPOZNAVANJE MED GAMETAMI, OPLODITEV, INTERAKCIJA Z OVIDUKTOM GAMET IN PREDIMPLANTACIJSKIMI ZARODKI, IMA VELIK ZNANSTVENI, TEHNOLOŠKI, KLINIČNI IN DRUŽBENI POMEN. ZA DOSEGO TEH CILJEV SMO DOLOČILI NOV PRISTOP, KOT JE UPORABA TEHNOLOGIJE CRISPR-CAS9 PRI KUNCIH. TA TEHNOLOGIJA NAM OMOGOČA, DA USTVARIMO KNOCKOUT (KO) ŽIVALI S PREPREČEVANJEM IZRAŽANJA FUNKCIONALNEGA GENA. TA EKSPERIMENTALNI PRISTOP JE EDEN NAJZANESLJIVEJŠIH IN NAJZANESLJIVEJŠIH ZNANSTVENIH DOKAZOV. TAKO SE ZNANJE NA PODROČJU RAZMNOŽEVANJA ŽE NEKAJ LET TEMELJITO SPREMINJA ZARADI UPORABE ŽIVALI KO. TEHNOLOGIJA CRISPR-CAS9 OMOGOČA PRIDOBIVANJE KOJA PRI ŽIVALIH, KI NISO MIŠI, Z UČINKOVITO METODO IN JE BILA PRED KRATKIM RAZVITA PRI KUNCIH. V TEM PROJEKTU BOMO ZAJCA UPORABILI KOT POSKUSNO ŽIVAL, SAJ IMA REPRODUKTIVNE ZNAČILNOSTI, KI SE V NEKATERIH POGLEDIH ZELO RAZLIKUJEJO OD MIŠI IN SO PODOBNE DRUGIM DOMAČIM ŽIVALIM, KOT SO SVINJA, KRAVA, MAČKA, PSICA IN CELO ČLOVEŠKA VRSTA. TAKO ZAJEC PREDSTAVLJA ZONA PELLUCIDA (ZP), KI OBKROŽA JAJČNO CELICO, SESTAVLJENO IZ 4 BELJAKOVIN, VKLJUČNO Z BELJAKOVINO ZP4, KI JE NE NAJDEMO V MIŠIH (ZP1, ZP2 IN ZP3). POLEG TEGA SO V LITERATURI PROTISLOVNI PODATKI O BIOLOŠKI VLOGI OVGP1, KI JE NAJBOLJ RAZŠIRJENA BELJAKOVINA, KI JO IZLOČA OVIDUKTNI EPITEL. TAKO IMA OVGP1 VELIKO AFINITETO ZA ZP OOCITOV KUNCEV, KRAV, SVINJ IN CELO ČLOVEŠKE VRSTE; VENDAR PA IMA TA BELJAKOVINA PRI MIŠIH NIZKO AFINITETO ZA ZP. V TEM PROJEKTU ŽELIMO Z UPORABO ŽIVALI KO ANALIZIRATI VLOGO DVEH ZP PROTEINOV (ZP1 IN ZP4) V ZP MODELU S 4 BELJAKOVINAMI IN VLOGO OVGP1. TA PROJEKT BO UPORABLJAL TUDI DRUGE VODILNE TEHNOLOGIJE, KOT SO PROTEOMSKA ANALIZA, IZRAŽANJE GENOV (MIKROARRAYI IN PCR) TER KONFOKALNA IN ELEKTRONSKA MIKROSKOPIJA. MOREBITNI DOBLJENI REZULTATI NAM BODO ZAGOTOVILI ZELO POMEMBNE INFORMACIJE O MEHANIZMIH, VKLJUČENIH V GNOJENJE. TE INFORMACIJE BODO KLJUČNE ZA RAZVOJ NOVIH DIAGNOSTIČNIH METODOLOGIJ ZA NEPLODNOST, KAKOVOST SPERME, SELEKCIJO SEMENČIC IN IZBOLJŠANJE GOJIŠČA ZA OPLODITEV IN VITRO, DA SE POVEČA UČINKOVITOST TEHNOLOGIJE ASISTIRANE REPRODUKCIJE. POLEG TEGA SO LAHKO TE INFORMACIJE KLJUČNE ZA RAZVOJ UČINKOVITEJŠIH KONTRACEPCIJSKIH CEPIV ZA NADZOR NAD POPULACIJAMI PROSTOŽIVEČIH ŽIVALI Z ZNATNIM DRUŽBENIM, EKOLOŠKIM IN GOSPODARSKIM VPLIVOM. (Slovenian)
4 August 2022
0 references
СЕКСУАЛНОТО РАЗМНОЖАВАНЕ Е СЛОЖЕН ПРОЦЕС, КОЙТО ВКЛЮЧВА ФОРМИРАНЕТО И УЧАСТИЕТО НА ДВЕ ВИСОКО СПЕЦИАЛИЗИРАНИ КЛЕТКИ — ГАМЕТИТЕ, КОИТО ЩЕ ДОВЕДАТ ДО ЗИГОТА СЪС СОБСТВЕНА ГЕНЕТИЧНА ИДЕНТИЧНОСТ. В СЛУЧАЙ НА БОЗАЙНИЦИ, С ВЪТРЕШНА РЕПРОДУКЦИЯ, ОПЛОЖДАНЕТО И ЕМБРИОНАЛНОТО РАЗВИТИЕ НА ПРЕДИМПЛАНТАЦИЯТА СЕ СЛУЧВАТ В СПЕЦИАЛИЗИРАНА ТРЪБА, НАРЕЧЕНА ЯЙЦЕДУКТ (ИЛИ ФАЛОПИЕВА ТРЪБА). ИЗЯСНЯВАНЕТО НА МЕХАНИЗМИТЕ, КОИТО УЧАСТВАТ В ОБРАЗУВАНЕТО НА ГАМЕТИ, РАЗПОЗНАВАНЕТО СРЕД ГАМЕТИ, ОПЛОЖДАНЕТО, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕТО С ЯЙЦЕДУКТА НА ГАМЕТИ И ЕМБРИОНИТЕ ОТ ПРЕДИМПЛАНТАЦИЯ Е ОТ ГОЛЯМО НАУЧНО, ТЕХНОЛОГИЧНО, КЛИНИЧНО И СОЦИАЛНО ЗНАЧЕНИЕ. ЗА ПОСТИГАНЕТО НА ТЕЗИ ЦЕЛИ ОПРЕДЕЛИХМЕ НОВ ПОДХОД, КАТО НАПРИМЕР ИЗПОЛЗВАНЕТО НА ТЕХНОЛОГИЯТА CRISPR-CAS9 В ЗАЙЦИТЕ. ТАЗИ ТЕХНОЛОГИЯ НИ ПОЗВОЛЯВА ДА ГЕНЕРИРАМЕ НОКАУТ (КО) ЖИВОТНИ, КАТО ПРЕДОТВРАТЯВА ЕКСПРЕСИЯТА НА ФУНКЦИОНАЛЕН ГЕН. ТОЗИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЕН ПОДХОД ПРЕДОСТАВЯ ЕДНО ОТ НАЙ-НАДЕЖДНИТЕ И НАДЕЖДНИ НАУЧНИ ДОКАЗАТЕЛСТВА. ПО ТОЗИ НАЧИН В ПРОДЪЛЖЕНИЕ НА НЯКОЛКО ГОДИНИ ЗНАНИЯТА В ОБЛАСТТА НА РАЗМНОЖАВАНЕТО СА ДЪЛБОКО ПРОМЕНЕНИ ПОРАДИ ИЗПОЛЗВАНЕТО НА ЖИВОТНИ КО. ТЕХНОЛОГИЯТА CRISPR-CAS9 ПОЗВОЛЯВА ГЕНЕРИРАНЕТО НА KO ПРИ ДРУГИ ЖИВОТНИ, РАЗЛИЧНИ ОТ МИШКАТА, ПО ЕФЕКТИВЕН МЕТОД И НАСКОРО Е РАЗРАБОТЕН ПРИ ЗАЙЦИТЕ. В НАСТОЯЩИЯ ПРОЕКТ ЩЕ ИЗПОЛЗВАМЕ ЗАЕКА КАТО ЕКСПЕРИМЕНТАЛНО ЖИВОТНО, ТЪЙ КАТО ТОЙ ИМА РЕПРОДУКТИВНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ, КОИТО В НЯКОИ АСПЕКТИ СА МНОГО РАЗЛИЧНИ ОТ МИШКАТА И ПОДОБНИ НА ДРУГИ ДОМАШНИ ЖИВОТНИ КАТО СВИНЯТА, КРАВАТА, КОТКАТА, КУЧКАТА И ДОРИ ЧОВЕШКИЯ ВИД. ПО ТОЗИ НАЧИН ЗАЕКЪТ ПРЕДСТАВЯ ZONA PELLUCIDA (ZP) ОКОЛО ЯЙЦЕКЛЕТКАТА, СЪСТАВЕНА ОТ 4 ПРОТЕИНА, ВКЛЮЧИТЕЛНО ZP4 ПРОТЕИНА, КОЙТО НЕ СЕ ОТКРИВА В МИШКИТЕ (ZP1, ZP2 И ZP3). ОСВЕН ТОВА В ЛИТЕРАТУРАТА ИМА ПРОТИВОРЕЧИВИ ДАННИ ОТНОСНО БИОЛОГИЧНАТА РОЛЯ НА OVGP1, КОЙТО Е НАЙ-БОГАТИЯТ ПРОТЕИН, СЕКРЕТИРАН ОТ ЕПИТЕЛА НА ХАЙДУКТА. ПО ТОЗИ НАЧИН OVGP1 ИМА ВИСОК АФИНИТЕТ КЪМ ZP НА ОВОЦИТИТЕ НА ЗАЙЦИТЕ, КРАВИТЕ, СВИНЕТЕ И ДОРИ ЧОВЕШКИЯ ВИД; ВЪПРЕКИ ТОВА, В МИШКАТА ТОЗИ ПРОТЕИН ИМА НИСЪК АФИНИТЕТ КЪМ ZP. В НАСТОЯЩИЯ ПРОЕКТ ИСКАМЕ ДА АНАЛИЗИРАМЕ ЧРЕЗ ИЗПОЛЗВАНЕТО НА KO ЖИВОТНИ РОЛЯТА НА ДВА ZP ПРОТЕИНА (ZP1 И ZP4) В ZP МОДЕЛ С 4 ПРОТЕИНА И РОЛЯТА НА OVGP1. ТОЗИ ПРОЕКТ ЩЕ ИЗПОЛЗВА И ДРУГИ ВОДЕЩИ ТЕХНОЛОГИИ КАТО ПРОТЕОМИЧЕН АНАЛИЗ, ГЕННА ЕКСПРЕСИЯ (МИКРОАРЕСИ И PCR), КАКТО И КОНФОКАЛНА И ЕЛЕКТРОННА МИКРОСКОПИЯ, НАРЕД С ДРУГОТО. ПОЛУЧЕНИТЕ ПОТЕНЦИАЛНИ РЕЗУЛТАТИ ЩЕ НИ ПРЕДОСТАВЯТ ИЗКЛЮЧИТЕЛНО ВАЖНА ИНФОРМАЦИЯ ЗА МЕХАНИЗМИТЕ, УЧАСТВАЩИ В ОПЛОЖДАНЕТО. ТАЗИ ИНФОРМАЦИЯ ЩЕ БЪДЕ ОТ КЛЮЧОВО ЗНАЧЕНИЕ ЗА РАЗРАБОТВАНЕТО НА НОВИ ДИАГНОСТИЧНИ МЕТОДИКИ ЗА БЕЗПЛОДИЕ, КАЧЕСТВО НА СПЕРМАТОЗОИДИТЕ, СЕЛЕКЦИЯ НА СПЕРМАТОЗОИДИТЕ И ПОДОБРЯВАНЕ НА СРЕДАТА ЗА ИН ВИТРО ОПЛОЖДАНЕ, ЗА ДА СЕ ПОВИШИ ЕФЕКТИВНОСТТА НА ТЕХНОЛОГИЯТА ЗА АСИСТИРАНА РЕПРОДУКЦИЯ. ОСВЕН ТОВА ТАЗИ ИНФОРМАЦИЯ МОЖЕ ДА БЪДЕ ОТ КЛЮЧОВО ЗНАЧЕНИЕ ЗА РАЗРАБОТВАНЕТО НА ПО-ЕФЕКТИВНИ ПРОТИВОЗАЧАТЪЧНИ ВАКСИНИ ЗА КОНТРОЛ НА ПОПУЛАЦИИТЕ ОТ ДИВИ ЖИВОТНИ СЪС ЗНАЧИТЕЛНО СОЦИАЛНО, ЕКОЛОГИЧНО И ИКОНОМИЧЕСКО ВЪЗДЕЙСТВИЕ. (Bulgarian)
4 August 2022
0 references
RIPRODUZZJONI SESSWALI HUWA PROĊESS KUMPLESS LI JINVOLVI L-FORMAZZJONI U L-PARTEĊIPAZZJONI TA ‘ŻEWĠ ĊELLOLI SPEĊJALIZZATI ĦAFNA, IL-GAMETI, LI SE JAGĦTI LOK GĦAL ZYGOTE BL-IDENTITÀ ĠENETIKA TAGĦHA STESS. FIL-KAŻ TA’ MAMMIFERI, IR-RIPRODUZZJONI INTERNA, IL-FERTILIZZAZZJONI U L-IŻVILUPP EMBRIJONIKU TA’ QABEL L-IMPJANTAZZJONI JSEĦĦU F’TUBU SPEĊJALIZZAT IMSEJJAĦ L-OVIDUCT (JEW IT-TUBU FALLOPJAN). IL-KJARIFIKA TAL-MEKKANIŻMI LI HUMA INVOLUTI FIL-FORMAZZJONI TAL-GAMETI, IR-RIKONOXXIMENT FOST IL-GAMETI, IL-FERTILIZZAZZJONI, L-INTERAZZJONI MAL-OVIDUCT TAL-GAMETI U L-EMBRIJUNI TA’ QABEL L-IMPJANTAZZJONI HIJA TA’ RILEVANZA XJENTIFIKA, TEKNOLOĠIKA, KLINIKA U SOĊJALI KBIRA. BIEX JINKISBU DAWN L-OBJETTIVI, AĦNA STABBILIXXEJNA APPROĊĊ ĠDID, BĦALL-UŻU TAT-TEKNOLOĠIJA CRISPR-CAS9 FIL-FENEK. DIN IT-TEKNOLOĠIJA TIPPERMETTILNA LI JIĠĠENERAW KNOCKOUT (KO) ANNIMALI BILLI JIPPREVJENU L-ESPRESSJONI TA ‘ĠENE FUNZJONALI. DAN L-APPROĊĊ SPERIMENTALI JIPPROVDI WIEĦED MILL-AKTAR EVIDENZA XJENTIFIKA ROBUSTA U AFFIDABBLI. GĦALHEKK, GĦAL FTIT SNIN L-GĦARFIEN FIL-QASAM TAR-RIPRODUZZJONI ĠIE MODIFIKAT PROFONDAMENT MINĦABBA L-UŻU TA ‘ANNIMALI KO. IT-TEKNOLOĠIJA CRISPR-CAS9 TIPPERMETTI LI JIĠI ĠĠENERAT KO F’ANNIMALI OĦRA MINBARRA L-ĠURDIEN B’METODU EFFIĊJENTI U DAN L-AĦĦAR ĠIET ŻVILUPPATA FIL-FENEK. F’DAN IL-PROĠETT, SE NUŻAW IL-FENEK BĦALA ANNIMAL SPERIMENTALI PERESS LI GĦANDU KARATTERISTIĊI RIPRODUTTIVI LI F’XI ASPETTI HUMA DIFFERENTI ĦAFNA MILL-ĠURDIEN U SIMILI GĦAL ANNIMALI DOMESTIĊI OĦRA BĦALL-ĦANŻIRA, IL-BAQRA, IL-QATTUS, IL-KELBA U ANKE L-ISPEĊI UMANA. GĦALHEKK, IL-FENEK JIPPREŻENTA ZONA PELLUCIDA (ZP) MADWAR L-OVUM MAGĦMUL MINN 4 PROTEINI INKLUŻ IL-PROTEINA ZP4 LI MA TINSTABX FIL-ĠURDIEN (ZP1, ZP2 U ZP3). BARRA MINN HEKK, HEMM DEJTA KONTRADITTORJA FIL-LETTERATURA DWAR IR-RWOL BIJOLOĠIKU LI KELLU L-OVGP1, LI HIJA L-PROTEINA L-AKTAR ABBUNDANTI MNIXXIJA MILL-EPITELJU OVIDUCTAL. GĦALHEKK, OVGP1 GĦANDU AFFINITÀ KBIRA GĦAŻ-ZP TA’ OOĊITI TAL-FENEK, TAL-BAQRA, TAL-MAJJAL U ANKE TAL-ISPEĊI TAL-BNIEDEM; MADANKOLLU, FIL-ĠURDIEN DIN IL-PROTEINA GĦANDHA AFFINITÀ BAXXA GĦAL ZP. FIL-PROĠETT PREŻENTI RRIDU NANALIZZAW PERMEZZ TAL-UŻU TAL-ANNIMALI KO R-RWOL LI GĦANDHOM ŻEWĠ PROTEINI ZP (ZP1 U ZP4) F’MUDELL ZP B’4 PROTEINI U R-RWOL LI KELLU L-OVGP1. DAN IL-PROĠETT SE JUŻA WKOLL TEKNOLOĠIJI EWLENIN OĦRA BĦALL-ANALIŻI PROTEOMIKA, L-ESPRESSJONI TAL-ĠENI (MIKROARRAYS U PCR) KIF UKOLL IL-MIKROSKOPIJA KONFOKALI U TAL-ELETTRONI FOST L-OĦRAJN. IR-RIŻULTATI POTENZJALI MIKSUBA SE JIPPROVDULNA INFORMAZZJONI RILEVANTI ĦAFNA DWAR IL-MEKKANIŻMI INVOLUTI FIL-FERTILIZZAZZJONI. DIN L-INFORMAZZJONI SE TKUN KRUĊJALI GĦALL-IŻVILUPP TA’ METODOLOĠIJI DIJANJOSTIĊI ĠODDA GĦALL-INFERTILITÀ, IL-KWALITÀ TAL-ISPERMA, L-GĦAŻLA TAL-ISPERMA U T-TITJIB TAL-MEZZI TAL-KULTURA GĦALL-FERTILIZZAZZJONI IN VITRO BIEX TIŻDIED L-EFFIĊJENZA TAT-TEKNOLOĠIJA TAR-RIPRODUZZJONI ASSISTITA. BARRA MINN HEKK, DIN L-INFORMAZZJONI TISTA’ TKUN KRUĊJALI GĦALL-IŻVILUPP TA’ VAĊĊINI KONTRAĊETTIVI AKTAR EFFIĊJENTI GĦALL-KONTROLL TA’ POPOLAZZJONIJIET TA’ ANNIMALI SELVAĠĠI B’IMPATT SOĊJALI, EKOLOĠIKU U EKONOMIKU SINIFIKANTI. (Maltese)
4 August 2022
0 references
A REPRODUÇÃO SEXUAL É UM PROCESSO COMPLEXO QUE ENVOLVE A FORMAÇÃO E PARTICIPAÇÃO DE DUAS CÉLULAS ALTAMENTE ESPECIALIZADAS, OS GAMETES, QUE Surgirão A UM ZIGOTO COM A SUA PRÓPRIA IDENTIDADE GENÉTICA. No caso dos mamíferos, com uma produção interna, a fertilização e o desenvolvimento embrionário de pré-implantação ocorrem num tubo especial chamado "Oviduto" (ou "Tubo Flalopiano"). A CLARIFICAÇÃO DOS MECANISMOS ENVOLVIDOS NA FORMAÇÃO DE GAMETES, RECONHECIMENTO ENTRE GAMETES, FERTILIZAÇÃO, INTERACÇÃO COM O OVIDUTO DE GAMETES E EMBRIÕES DE PREIMPLANTAÇÃO É DE GRANDE RELEVÂNCIA CIENTÍFICA, TECNOLÓGICA, CLÍNICA E SOCIAL. Para alcançar estes objetivos, estabelecemos uma nova abordagem, como a utilização da tecnologia CRISPR-CAS9 no coelho. Esta tecnologia permite-nos gerar KNOCKOUT (KO) ANIMAIS, prevenindo a expressão de um gene funcional. Esta abordagem experimental fornece uma das provas científicas mais robustas e fiáveis. Assim, durante alguns anos, o conhecimento no campo da reprodução foi profundamente modificado devido à utilização de animais KO. A tecnologia CRISPR-CAS9 permite gerar KO em outros animais que não o MOUSE num método eficaz e foi recentemente desenvolvida no coelho. No presente projecto, utilizaremos o coelho como animal experimental, uma vez que tem características reprodutivas que, em alguns aspectos, são muito diferentes do rato e semelhantes a outros animais domésticos, como a selva, a vaca, o gato, o peixe e até as espécies humanas. Assim, o coelho apresenta uma ZONA PELLUCIDA (ZP) que cobre o óvulo composto por 4 proteínas, incluindo a proteína ZP4 que não se encontra no tubo (ZP1, ZP2 e ZP3). Além disso, há dados contraditórios na literatura relativos ao papel biológico desempenhado pela OVGP1, que é a proteína mais abundante secretada pelo epitelium ovídio. Assim, a OVGP1 tem uma grande afinação para a ZP de oócitos de coelho, vaca, selva e até mesmo das espécies humanas; No entanto, no MOUSE esta proteína tem uma baixa afinação para o ZP. No presente projecto, queremos analisar, através da utilização de animais Ko, o papel desempenhado por duas proteínas ZP (ZP1 e ZP4) num modelo ZP com 4 proteínas e o papel desempenhado pela OVGP1. Este projecto utilizará igualmente outras tecnologias de orientação, tais como a análise proteómica, a expressão genética (MICROARRAYS e PCR), bem como a microscopia confocal e electrolítica entre outras. Os potenciais resultados obtidos fornecer-nos-ão informações altamente relevantes sobre os mecanismos envolvidos na fertilização. Estas informações serão fundamentais para o desenvolvimento de novas metodologias diagnósticas para a infertilidade, a qualidade do esperma, a seleção do esperma e a melhoria dos meios de cultura para a fertilização in vitro, a fim de aumentar a eficácia da tecnologia de reprodução apoiada. Além disso, estas informações podem ser essenciais para o desenvolvimento de vacinas mais eficazes para o controlo das populações de animais selvagens com um impacto social, ecológico e económico significativo. (Portuguese)
4 August 2022
0 references
SEKSUEL REPRODUKTION ER EN KOMPLEKS PROCES, DER INVOLVERER DANNELSEN OG DELTAGELSEN AF TO HØJT SPECIALISEREDE CELLER, GAMET, DER VIL GIVE ANLEDNING TIL EN ZYGOTE MED SIN EGEN GENETISKE IDENTITET. I TILFÆLDE AF PATTEDYR MED EN INTERN REPRODUKTION, BEFRUGTNING OG PRÆIMPLANTATION EMBRYONISK UDVIKLING SKER I ET SPECIALISERET RØR KALDET OVIDUKT (ELLER ÆGGELEDER). PRÆCISERINGEN AF DE MEKANISMER, DER ER INVOLVERET I DANNELSEN AF KØNSCELLER, ANERKENDELSE BLANDT KØNSCELLER, BEFRUGTNING, INTERAKTION MED KØNSCELLERNES OVIDUKT OG PRÆIMPLANTATIONSEMBRYONER ER AF STOR VIDENSKABELIG, TEKNOLOGISK, KLINISK OG SOCIAL RELEVANS. FOR AT NÅ DISSE MÅL FASTLAGDE VI EN NY TILGANG, F.EKS. BRUGEN AF CRISPR-CAS9-TEKNOLOGI I KANINEN. DENNE TEKNOLOGI GIVER OS MULIGHED FOR AT GENERERE KNOCKOUT (KO) DYR VED AT FORHINDRE EKSPRESSION AF ET FUNKTIONELT GEN. DENNE EKSPERIMENTELLE TILGANG GIVER ET AF DE MEST SOLIDE OG PÅLIDELIGE VIDENSKABELIGE BEVISER. SÅLEDES, I ET PAR ÅR ER VIDEN INDEN FOR REPRODUKTION ER BLEVET DYBT ÆNDRET PÅ GRUND AF BRUGEN AF KO DYR. CRISPR-CAS9-TEKNOLOGIEN GØR DET MULIGT AT GENERERE KO HOS ANDRE DYR END MUSEN I EN EFFEKTIV METODE, OG DEN ER FOR NYLIG UDVIKLET I KANINEN. I DETTE PROJEKT VIL VI BRUGE KANINEN SOM FORSØGSDYR, DA DET HAR REPRODUKTIVE EGENSKABER, DER I NOGLE ASPEKTER ER MEGET FORSKELLIGE FRA MUSEN OG LIGNER ANDRE HUSDYR SOM F.EKS. SÅ, KO, KAT, TÆVE OG ENDDA DEN MENNESKELIGE ART. KANINEN PRÆSENTERER SÅLEDES EN ZONA PELLUCIDA (ZP) OMKRING ÆGGET, DER BESTÅR AF 4 PROTEINER, HERUNDER ZP4-PROTEINET, DER IKKE FINDES I MUSEN (ZP1, ZP2 OG ZP3). DESUDEN ER DER MODSTRIDENDE DATA I LITTERATUREN OM DEN BIOLOGISKE ROLLE, SOM OVGP1, SOM ER DET MEST RIGELIGE PROTEIN, DER UDSKILLES AF DET OVIDUKTIVE EPITEL, SPILLER. OVGP1 HAR SÅLEDES EN HØJ AFFINITET FOR ZP AF OOCYTTER AF KANIN, KO, SO OG ENDDA DEN MENNESKELIGE ART; MEN I MUSEN HAR DETTE PROTEIN EN LAV AFFINITET FOR ZP. I DETTE PROJEKT VIL VI GENNEM BRUGEN AF KO DYR ANALYSERE DEN ROLLE, SOM TO ZP-PROTEINER (ZP1 OG ZP4) SPILLER I EN ZP-MODEL MED 4 PROTEINER OG OVGP1'S ROLLE. DETTE PROJEKT VIL OGSÅ ANVENDE ANDRE FØRENDE TEKNOLOGIER SÅSOM PROTEOMISK ANALYSE, GENEKSPRESSION (MIKROARRAYS OG PCR) SAMT KONFOKAL- OG ELEKTRONMIKROSKOPI. DE POTENTIELLE RESULTATER, DER OPNÅS, VIL GIVE OS YDERST RELEVANTE OPLYSNINGER OM DE MEKANISMER, DER ER INVOLVERET I BEFRUGTNINGEN. DISSE OPLYSNINGER VIL VÆRE AFGØRENDE FOR UDVIKLINGEN AF NYE DIAGNOSTISKE METODER TIL INFERTILITET, SÆDKVALITET, SÆDUDVÆLGELSE OG FORBEDRING AF KULTURMEDIER TIL IN VITRO-BEFRUGTNING FOR AT ØGE EFFEKTIVITETEN AF DEN ASSISTEREDE REPRODUKTIONSTEKNOLOGI. DESUDEN KAN DISSE OPLYSNINGER VÆRE AFGØRENDE FOR UDVIKLINGEN AF MERE EFFEKTIVE PRÆVENTIONSVACCINER TIL BEKÆMPELSE AF POPULATIONER AF VILDE DYR MED BETYDELIGE SOCIALE, ØKOLOGISKE OG ØKONOMISKE KONSEKVENSER. (Danish)
4 August 2022
0 references
REPRODUCEREA SEXUALĂ ESTE UN PROCES COMPLEX CARE IMPLICĂ FORMAREA ȘI PARTICIPAREA A DOUĂ CELULE FOARTE SPECIALIZATE, GAMEȚII, CARE VOR DA NAȘTERE UNUI ZIGOT CU PROPRIA IDENTITATE GENETICĂ. ÎN CAZUL MAMIFERELOR, CU REPRODUCERE INTERNĂ, FERTILIZAREA ȘI DEZVOLTAREA EMBRIONARĂ PREIMPLANTARE ARE LOC ÎNTR-UN TUB SPECIALIZAT NUMIT OVIDUCT (SAU TROMPĂ UTERINĂ). CLARIFICAREA MECANISMELOR CARE SUNT IMPLICATE ÎN FORMAREA GAMEȚILOR, RECUNOAȘTEREA ÎN RÂNDUL GAMEȚILOR, FERTILIZAREA, INTERACȚIUNEA CU OVIDUCTUL GAMEȚILOR ȘI EMBRIONII PREIMPLANTAȚI ARE O MARE RELEVANȚĂ ȘTIINȚIFICĂ, TEHNOLOGICĂ, CLINICĂ ȘI SOCIALĂ. PENTRU A ATINGE ACESTE OBIECTIVE, AM STABILIT O ABORDARE NOUĂ, CUM AR FI UTILIZAREA TEHNOLOGIEI CRISPR-CAS9 LA IEPURE. ACEASTĂ TEHNOLOGIE NE PERMITE SĂ GENERĂM ANIMALE KNOCKOUT (KO) PRIN PREVENIREA EXPRIMĂRII UNEI GENE FUNCȚIONALE. ACEASTĂ ABORDARE EXPERIMENTALĂ OFERĂ UNA DINTRE CELE MAI SOLIDE ȘI FIABILE DOVEZI ȘTIINȚIFICE. ASTFEL, TIMP DE CÂȚIVA ANI, CUNOȘTINȚELE ÎN DOMENIUL REPRODUCERII AU FOST PROFUND MODIFICATE DATORITĂ UTILIZĂRII ANIMALELOR KO. TEHNOLOGIA CRISPR-CAS9 PERMITE GENERAREA KO LA ALTE ANIMALE DECÂT ȘOARECELE PRINTR-O METODĂ EFICIENTĂ ȘI A FOST RECENT DEZVOLTATĂ LA IEPURE. ÎN PREZENTUL PROIECT, VOM FOLOSI IEPURELE CA ANIMAL EXPERIMENTAL, DEOARECE ARE CARACTERISTICI REPRODUCTIVE CARE, ÎN UNELE ASPECTE, SUNT FOARTE DIFERITE DE ȘOARECE ȘI SIMILARE CU ALTE ANIMALE DOMESTICE, CUM AR FI SCROAFA, VACA, PISICA, CĂȚEA ȘI CHIAR SPECIA UMANĂ. ASTFEL, IEPURELE PREZINTĂ O ZONA PELLUCIDA (ZP) CARE ÎNCONJOARĂ OVULUL COMPUS DIN 4 PROTEINE, INCLUSIV PROTEINA ZP4, CARE NU SE GĂSEȘTE LA ȘOARECE (ZP1, ZP2 ȘI ZP3). ÎN PLUS, EXISTĂ DATE CONTRADICTORII ÎN LITERATURA DE SPECIALITATE CU PRIVIRE LA ROLUL BIOLOGIC JUCAT DE OVGP1, CARE ESTE CEA MAI ABUNDENTĂ PROTEINĂ SECRETATĂ DE EPITELIUL OVIDUCTAL. ASTFEL, OVGP1 ARE O AFINITATE RIDICATĂ PENTRU ZP DE OOCITE DE IEPURE, VACĂ, SCROAFĂ ȘI CHIAR SPECIA UMANĂ; CU TOATE ACESTEA, LA ȘOARECE ACEASTĂ PROTEINĂ ARE O AFINITATE SCĂZUTĂ PENTRU ZP. ÎN PREZENTUL PROIECT DORIM SĂ ANALIZĂM PRIN UTILIZAREA ANIMALELOR KO ROLUL JUCAT DE DOUĂ PROTEINE ZP (ZP1 ȘI ZP4) ÎNTR-UN MODEL ZP CU 4 PROTEINE ȘI ROLUL JUCAT DE OVGP1. ACEST PROIECT VA UTILIZA, DE ASEMENEA, ALTE TEHNOLOGII DE VÂRF, CUM AR FI ANALIZA PROTEOMICĂ, EXPRESIA GENELOR (MICROARRAYS ȘI PCR), PRECUM ȘI MICROSCOPIA CONFOCALĂ ȘI ELECTRONICĂ, PRINTRE ALTELE. REZULTATELE POTENȚIALE OBȚINUTE NE VOR OFERI INFORMAȚII EXTREM DE RELEVANTE CU PRIVIRE LA MECANISMELE IMPLICATE ÎN FERTILIZARE. ACESTE INFORMAȚII VOR FI ESENȚIALE PENTRU DEZVOLTAREA DE NOI METODOLOGII DE DIAGNOSTIC PENTRU INFERTILITATE, CALITATEA SPERMEI, SELECȚIA SPERMEI ȘI ÎMBUNĂTĂȚIREA MEDIILOR DE CULTURĂ PENTRU FERTILIZAREA IN VITRO, PENTRU A CREȘTE EFICIENȚA TEHNOLOGIEI DE REPRODUCERE ASISTATĂ. ÎN PLUS, ACESTE INFORMAȚII POT FI ESENȚIALE PENTRU DEZVOLTAREA UNOR VACCINURI CONTRACEPTIVE MAI EFICIENTE PENTRU CONTROLUL POPULAȚIILOR DE ANIMALE SĂLBATICE CU UN IMPACT SOCIAL, ECOLOGIC ȘI ECONOMIC SEMNIFICATIV. (Romanian)
4 August 2022
0 references
SEXUELL REPRODUKTION ÄR EN KOMPLEX PROCESS SOM INNEBÄR BILDANDET OCH DELTAGANDET AV TVÅ HÖGT SPECIALISERADE CELLER, GAMETERNA, SOM KOMMER ATT GE UPPHOV TILL EN ZYGOT MED SIN EGEN GENETISKA IDENTITET. NÄR DET GÄLLER DÄGGDJUR, MED EN INTERN REPRODUKTION, BEFRUKTNING OCH PREIMPLANTATION EMBRYONAL UTVECKLING SKER I ETT SPECIALISERAT RÖR SOM KALLAS OVIDUKT (ELLER ÄGGLEDARE). FÖRTYDLIGANDET AV DE MEKANISMER SOM ÄR INVOLVERADE I BILDANDET AV GAMETER, ERKÄNNANDE BLAND GAMETER, BEFRUKTNING, INTERAKTION MED KÖNSCELLERS ÄGGLEDNING OCH PREIMPLANTATIONSEMBRYON ÄR AV STOR VETENSKAPLIG, TEKNISK, KLINISK OCH SOCIAL RELEVANS. FÖR ATT UPPNÅ DESSA MÅL FASTSTÄLLDE VI ETT NYTT TILLVÄGAGÅNGSSÄTT, SÅSOM ANVÄNDNINGEN AV CRISPR-CAS9-TEKNIK I KANINEN. DENNA TEKNIK GÖR DET MÖJLIGT FÖR OSS ATT GENERERA KNOCKOUT (KO) DJUR GENOM ATT FÖRHINDRA UTTRYCKET AV EN FUNKTIONELL GEN. DETTA EXPERIMENTELLA TILLVÄGAGÅNGSSÄTT ÄR ETT AV DE MEST ROBUSTA OCH TILLFÖRLITLIGA VETENSKAPLIGA BELÄGGEN. PÅ GRUND AV ANVÄNDNINGEN AV KO-DJUR HAR KUNSKAPEN INOM FORTPLANTNINGSOMRÅDET UNDER NÅGRA ÅR ÄNDRATS I GRUNDEN. CRISPR-CAS9-TEKNIKEN GÖR DET MÖJLIGT ATT GENERERA KO I ANDRA DJUR ÄN MUSEN I EN EFFEKTIV METOD OCH DEN HAR NYLIGEN UTVECKLATS I KANINEN. I DETTA PROJEKT KOMMER VI ATT ANVÄNDA KANINEN SOM ETT FÖRSÖKSDJUR EFTERSOM DET HAR REPRODUKTIONSEGENSKAPER SOM I VISSA AVSEENDEN SKILJER SIG MYCKET FRÅN MUSEN OCH LIKNAR ANDRA HUSDJUR SOM SUGGA, KO, KATT, BITCH OCH ÄVEN DEN MÄNSKLIGA ARTEN. SÅLEDES PRESENTERAR KANINEN EN ZONA PELLUCIDA (ZP) SOM OMGER ÄGGET SAMMANSATT AV 4 PROTEINER INKLUSIVE ZP4-PROTEINET SOM INTE FINNS I MUSEN (ZP1, ZP2 OCH ZP3). DESSUTOM FINNS DET MOTSTRIDIGA DATA I LITTERATUREN OM DEN BIOLOGISKA ROLL SOM OVGP1, SOM ÄR DET MEST RIKLIGA PROTEINET SOM UTSÖNDRAS AV DET OVIDUKTALA EPITELET. SÅLEDES HAR OVGP1 EN HÖG AFFINITET FÖR ZP AV OOCYTER AV KANIN, KO, SUGGA OCH ÄVEN DEN MÄNSKLIGA ARTEN; MEN I MUSEN HAR DETTA PROTEIN EN LÅG AFFINITET FÖR ZP. I DETTA PROJEKT VILL VI GENOM ANVÄNDNING AV KO DJUR ANALYSERA ROLLEN SOM TVÅ ZP-PROTEINER (ZP1 OCH ZP4) SPELAR I EN ZP-MODELL MED 4 PROTEINER OCH DEN ROLL SOM OVGP1. DETTA PROJEKT KOMMER OCKSÅ ATT ANVÄNDA ANDRA LEDANDE TEKNIKER SÅSOM PROTEOMISK ANALYS, GENUTTRYCK (MIKROARRAYER OCH PCR) SAMT KONFOKAL OCH ELEKTRONMIKROSKOPI BLAND ANNAT. DE POTENTIELLA RESULTAT SOM UPPNÅS KOMMER ATT GE OSS MYCKET RELEVANT INFORMATION OM DE MEKANISMER SOM ÄR INVOLVERADE I GÖDSLINGEN. DENNA INFORMATION KOMMER ATT VARA AVGÖRANDE FÖR UTVECKLINGEN AV NYA DIAGNOSTISKA METODER FÖR INFERTILITET, SPERMIEKVALITET, SPERMIEURVAL OCH FÖRBÄTTRING AV ODLINGSMEDIER FÖR BEFRUKTNING IN VITRO FÖR ATT ÖKA EFFEKTIVITETEN HOS ASSISTERAD REPRODUKTIONSTEKNIK. DESSUTOM KAN DENNA INFORMATION VARA AVGÖRANDE FÖR UTVECKLINGEN AV EFFEKTIVARE PREVENTIVMEDEL FÖR KONTROLL AV VILDA DJURPOPULATIONER MED BETYDANDE SOCIALA, EKOLOGISKA OCH EKONOMISKA KONSEKVENSER. (Swedish)
4 August 2022
0 references
Murcia
0 references
20 December 2023
0 references
Identifiers
PGC2018-094781-B-I00
0 references