Precision gene therapy for rare diseases of dermo-epidermal fragility (Q3142008)
Jump to navigation
Jump to search
Project Q3142008 in Spain
| Language | Label | Description | Also known as |
|---|---|---|---|
| English | Precision gene therapy for rare diseases of dermo-epidermal fragility |
Project Q3142008 in Spain |
Statements
50,094.0 Euro
0 references
92,000.0 Euro
0 references
54.45 percent
0 references
1 January 2018
0 references
31 March 2021
0 references
CENTRO DE INVESTIGACION ENERGETICA MEDIOAMBIENTAL Y TECNOLOG
0 references
La Epidermolisis Bullosa (EB) comprende a un grupo heterogéneo de enfermedades raras de fragilidad caracterizadas por la formación de ampollas cutáneas, espontáneas o inducidas por un trauma mínimo. La forma distrófica recesiva, severa generalizada de la EB (EBDRsev-gen), causada por mutaciones nulas en el gen COL7A1 que codifica para la proteína Colágeno VII (C7), no tiene cura y las terapias disponibles son sólo paliativas y de eficacia marginal. La terapia génica (TG) es una opción terapéutica válida capaz de restituir la expresión de C7 en células EBDR independientemente de la mutación causal en COL7A1. Recientes avances en TG están haciendo posible la corrección precisa (edición) de genes utilizando nucleasas dirigidas. En el marco del proyecto anterior propusimos y testamos con éxito la edición génica utilizando nucleasas TALEN aplicadas a queratinocitos EBDR inmortalizados portadores de una mutación en COL7A1 recurrente en España, siendo los primeros en emplear la modalidad basada en reparación NHEJ para lograr recuperar la pauta de lectura y expresión del gen. Objetivos: En este proyecto proponemos el uso de nuevas herramientas y abordajes de edición más eficientes y su aplicación no sólo ex vivo sino también in vivo. Metodología: Concretamente proponemos caracterizar la eficiencia de nucleasas TALEN dirigidas específicamente al sitio de la mutación para lograr la corrección de precisión por NHEJ y del sistema CRISPR/Cas9 de doble guía para conseguir la escisión del exon 80 del COL7A1 donde reside la mutación, una estrategia que permite producir C7 funcional. En modelos fidedignos de EBDR en ratón con piel humanizada, ensayaremos el abordaje de edición más eficiente usando transferencia viral y no viral sobre los xenotrasplantes. Esperamos conseguir una eficaz re-expresión de C7 y una corrección del fenotipo de adhesión que nos acerque a la aplicación en pacientes. (Spanish)
0 references
The Bullosa Epidermolysis (EB) comprises a heterogeneous group of rare diseases of fragility characterised by the formation of skin blisters, spontaneous or trauma-induced. The severe generalised recessive dystrophic form of EB (EBDRsev-gen), caused by null mutations in the COL7A1 gene coding for the collagen VII (C7) protein, has no cure and the therapies available are only palliative and marginally effective. Gene therapy (GT) is a valid therapeutic option capable of restoring C7 expression in EBDR cells regardless of the causal mutation in COL7A1. Recent advances in TG are enabling accurate correction (edition) of genes using targeted nucleases. In the framework of the previous project we proposed and successfully tested gene editing using TALEN nucleases applied to immortalised EBDR keratinocytes carrying a mutation in COL7A1 recurrent in Spain, being the first to use the modality based on NHEJ repair to recover the pattern of reading and expression of the gene. Objectives: In this project we propose the use of new tools and more efficient editing approaches and their application not only ex vivo but also in vivo. Methodology: Specifically, we propose to characterise the efficiency of TALEN nucleases aimed specifically at the mutation site to achieve precision correction by NHEJ and the CRISPR/Cas9 double-guide system to achieve the exon 80 exon of the COL7A1 where the mutation resides, a strategy that allows the production of functional C7. In reliable EBDR models in mouse with humanised skin, we will test the most efficient editing approach using viral and non-viral transfer over xenotransplants. We hope to achieve an effective re-expression of C7 and a correction of the adhesion phenotype that brings us closer to the application in patients. (English)
12 October 2021
0.4985255676396343
0 references
L’épidermolyse de Bullosa (EB) comprend un groupe hétérogène de maladies rares de fragilité caractérisées par la formation de cloques cutanées spontanées ou traumatisées. La forme dystrophique récessive sévère généralisée de l’EB (EBDRsev-gen), causée par des mutations nulles dans le gène COL7A1 codant pour la protéine collagène VII (C7), n’a pas de remède et les thérapies disponibles ne sont que palliatives et marginalement efficaces. La thérapie génique (GT) est une option thérapeutique valable capable de restaurer l’expression C7 dans les cellules EBDR, indépendamment de la mutation causale dans COL7A1. Les progrès récents de la TG permettent une correction précise (édition) des gènes utilisant des nucléases ciblées. Dans le cadre du projet précédent, nous avons proposé et testé avec succès l’édition génétique à l’aide des nucléases TALEN appliquées aux kératinocytes EBDR immortalisés porteurs d’une mutation dans COL7A1 récurrente en Espagne, étant le premier à utiliser la modalité basée sur la réparation NHEJ pour récupérer le modèle de lecture et d’expression du gène. Objectifs: Dans ce projet, nous proposons l’utilisation de nouveaux outils et d’approches d’édition plus efficaces et leur application non seulement ex vivo, mais aussi in vivo. Méthodologie: Plus précisément, nous proposons de caractériser l’efficacité des nucléases TALEN visant spécifiquement au site de mutation pour obtenir une correction de précision par NHEJ et le système de double guide CRISPR/Cas9 pour atteindre l’exon 80 exon du COL7A1 où réside la mutation, une stratégie qui permet la production de C7. Dans des modèles EBDR fiables chez la souris avec peau humanisée, nous testerons l’approche d’édition la plus efficace en utilisant le transfert viral et non viral sur xénotransplantes. Nous espérons parvenir à une réexpression efficace du C7 et à une correction du phénotype d’adhésion qui nous rapproche de l’application chez les patients. (French)
2 December 2021
0 references
Die Bullosa Epidermolysis (EB) besteht aus einer heterogenen Gruppe seltener Fragilitätskrankheiten, die durch die Bildung von Hautblasen gekennzeichnet sind, spontan oder traumainduziert. Die schwere generalisierte rezessive dystrophe Form von EB (EBDRsev-gen), die durch Nullmutationen im COL7A1-Gencodierung für das Kollagen VII (C7)-Protein verursacht wird, hat keine Heilung und die verfügbaren Therapien sind nur palliativ und marginal wirksam. Gentherapie (GT) ist eine gültige therapeutische Option, die die C7-Expression in EBDR-Zellen unabhängig von der ursächlichen Mutation in COL7A1 wiederhergestellt kann. Jüngste Fortschritte in der TG ermöglichen eine genaue Korrektur (Edition) von Genen mit gezielten Nukleasen. Im Rahmen des vorherigen Projekts haben wir die Genbearbeitung mit TALEN Nukleasen für unstertalisierte EBDR-Keratinozyten mit einer Mutation im COL7A1-Rezidiv in Spanien vorgeschlagen und erfolgreich getestet. Ziele: In diesem Projekt schlagen wir den Einsatz neuer Werkzeuge und effizientere Bearbeitungsansätze und deren Anwendung nicht nur ex vivo, sondern auch in vivo vor. Methodik: Konkret schlagen wir vor, die Effizienz von TALEN-Nukleasen zu charakterisieren, die speziell auf den Mutationsstandort ausgerichtet sind, um eine präzise Korrektur durch NHEJ und das Doppelführungssystem CRISPR/Cas9 zu erreichen, um die Exon 80 Exon des COL7A1 zu erreichen, wo die Mutation liegt, eine Strategie, die die Produktion von funktionalen C7 ermöglicht. In zuverlässigen EBDR-Modellen in der Maus mit humanisierter Haut werden wir den effizientesten Schnittansatz mit viraler und nicht-viraler Übertragung über Xenotransplantate testen. Wir hoffen, eine wirksame Reexpression von C7 und eine Korrektur des Adhäsionsphänotyps zu erreichen, die uns der Anwendung bei Patienten näher bringt. (German)
9 December 2021
0 references
De Bullosa Epidermolysis (EB) bestaat uit een heterogene groep zeldzame ziekten van kwetsbaarheid gekenmerkt door de vorming van huidblaasjes, spontane of trauma-geïnduceerd. De ernstige gegeneraliseerde recessieve dystrofische vorm van EB (EBDRsev-gen), veroorzaakt door nulmutaties in het COL7A1 gen codering voor het collageen VII (C7)-eiwit, heeft geen genezing en de beschikbare therapieën zijn slechts palliatief en marginaal effectief. Gentherapie (GT) is een geldige therapeutische optie die C7-expressie in EBDR-cellen kan herstellen ongeacht de causale mutatie in COL7A1. Recente vooruitgang in TG maakt nauwkeurige correctie (editie) van genen mogelijk die gerichte nucleasen gebruiken. In het kader van het vorige project hebben we voorgesteld en met succes getest genbewerking met behulp van TALEN nucleases toegepast op vereeuwigde EBDR keratinocyten met een mutatie in COL7A1 terugkerend in Spanje, zijnde de eerste om de modaliteit te gebruiken op basis van NHEJ reparatie om het patroon van lezen en expressie van het gen te herstellen. Doelstellingen: In dit project stellen we het gebruik van nieuwe tools en efficiëntere bewerkingsmethoden en de toepassing ervan voor, niet alleen ex vivo, maar ook in vivo. Methodologie: Specifiek stellen wij voor om de efficiëntie van TALEN nucleases specifiek gericht op de mutatielocatie te karakteriseren om precisiecorrectie door NHEJ en het CRISPR/Cas9 dubbelgeleidersysteem te bereiken om de exon 80 exon van de COL7A1 waar de mutatie verblijft te bereiken, een strategie die de productie van functionele C7 mogelijk maakt. In betrouwbare EBDR-modellen in muis met gehumaniseerde huid, zullen we de meest efficiënte bewerkingsaanpak testen met behulp van virale en niet-virale overdracht over xenotransplantaten. We hopen een effectieve re-expressie van C7 te bereiken en een correctie van het adhesiefenotype dat ons dichter bij de toepassing bij patiënten brengt. (Dutch)
17 December 2021
0 references
La Bullosa Epidermolysis (EB) comprende un gruppo eterogeneo di malattie rare di fragilità caratterizzate dalla formazione di vesciche cutanee, spontanee o indotte da traumi. La grave forma distrofica recessiva generalizzata di EB (EBDRsev-gen), causata da mutazioni nulle nel gene COL7A1 che codifica per la proteina del collagene VII (C7), non ha alcuna cura e le terapie disponibili sono solo palliative e marginalmente efficaci. La terapia genica (GT) è una valida opzione terapeutica in grado di ripristinare l'espressione C7 nelle cellule EBDR indipendentemente dalla mutazione causale in COL7A1. I recenti progressi in TG stanno consentendo una correzione accurata (edition) dei geni utilizzando nucleasi mirate. Nel quadro del progetto precedente abbiamo proposto e testato con successo l'editing genico utilizzando le nucleasi TALEN applicate ai cheratinociti immortalati dell'EBDR che trasportano una mutazione ricorrente in COL7A1 in Spagna, essendo il primo ad utilizzare la modalità basata sulla riparazione NHEJ per recuperare il modello di lettura ed espressione del gene. Obiettivi: In questo progetto proponiamo l'utilizzo di nuovi strumenti e approcci di editing più efficienti e la loro applicazione non solo ex vivo ma anche in vivo. Metodologia: Nello specifico, proponiamo di caratterizzare l'efficienza delle nucleasi TALEN mirate specificamente al sito di mutazione per ottenere la correzione di precisione da parte di NHEJ e il sistema a doppia guida CRISPR/Cas9 per raggiungere l'esonere 80 esone del COL7A1 dove risiede la mutazione, una strategia che consente la produzione di C7 funzionale. Nei modelli EBDR affidabili in topo con pelle umanizzata, testeremo l'approccio di editing più efficiente utilizzando il trasferimento virale e non virale su xenotrapianti. Speriamo di ottenere un'efficace riespressione del C7 e una correzione del fenotipo di adesione che ci avvicina all'applicazione nei pazienti. (Italian)
16 January 2022
0 references
Το Bullosa Epidermolysis (EB) περιλαμβάνει μια ετερογενή ομάδα σπάνιων ασθενειών ευπάθειας που χαρακτηρίζονται από το σχηματισμό φουσκαλών του δέρματος, αυθόρμητων ή τραυματικών. Η σοβαρή γενικευμένη υποβαθμισμένη δυστροφική μορφή του EB (EBDRsev-gen), που προκαλείται από μηδενικές μεταλλάξεις στο γονίδιο COL7A1 που κωδικοποιεί για την πρωτεΐνη κολλαγόνου VII (C7), δεν έχει καμία θεραπεία και οι διαθέσιμες θεραπείες είναι μόνο ανακουφιστικές και οριακά αποτελεσματικές. Η γονιδιακή θεραπεία (GT) είναι μια έγκυρη θεραπευτική επιλογή ικανή να αποκαταστήσει την έκφραση C7 στα κύτταρα EBDR ανεξάρτητα από την αιτιώδη μετάλλαξη στο COL7A1. Οι πρόσφατες εξελίξεις στην TG επιτρέπουν την ακριβή διόρθωση (έκδοση) γονιδίων χρησιμοποιώντας στοχευμένες νουκλεάσεις. Στο πλαίσιο του προηγούμενου έργου προτείναμε και δοκιμάσαμε επιτυχώς γονιδιακή επεξεργασία χρησιμοποιώντας νουκλεάσεις TALEN που εφαρμόζονται σε αθάνατα κερατινοκύτταρα EBDR που μεταφέρουν μια μετάλλαξη στο COL7A1 επαναλαμβανόμενο στην Ισπανία, όντας τα πρώτα που χρησιμοποιούν τη μέθοδο που βασίζεται στην επισκευή NHEJ για να ανακτήσουν το πρότυπο ανάγνωσης και έκφρασης του γονιδίου. Στόχοι: Σε αυτό το έργο προτείνουμε τη χρήση νέων εργαλείων και αποτελεσματικότερων προσεγγίσεων επεξεργασίας και την εφαρμογή τους όχι μόνο ex vivo αλλά και in vivo. Μεθοδολογία: Συγκεκριμένα, προτείνουμε να χαρακτηριστεί η αποτελεσματικότητα των νουκλεάσεων TALEN που στοχεύουν ειδικά στο σημείο μετάλλαξης για την επίτευξη διόρθωσης ακριβείας από το NHEJ και το σύστημα διπλού οδηγού CRISPR/Cas9 για την επίτευξη του εξονυχιστικού 80 exon του COL7A1 όπου κατοικεί η μετάλλαξη, μια στρατηγική που επιτρέπει την παραγωγή λειτουργικών C7. Σε αξιόπιστα μοντέλα EBDR σε ποντίκια με εξανθρωπισμένο δέρμα, θα δοκιμάσουμε την πιο αποτελεσματική προσέγγιση επεξεργασίας χρησιμοποιώντας ιογενή και μη ιική μεταφορά πάνω από ξενομετατροπές. Ελπίζουμε να επιτύχουμε μια αποτελεσματική εκ νέου έκφραση του C7 και μια διόρθωση του φαινότυπου πρόσφυσης που μας φέρνει πιο κοντά στην εφαρμογή στους ασθενείς. (Greek)
17 August 2022
0 references
Bullosa Epidermolyse (EB) omfatter en heterogen gruppe af skrøbelige sjældne sygdomme, der er karakteriseret ved dannelsen af hudblister, spontane eller traumafremkaldte. Den alvorlige generaliserede recessive dystrofe form af EB (EBDRsev-gen) forårsaget af nullmutationer i COL7A1-genet, der koder for kollagen VII (C7)-proteinet, har ingen helbredelse, og de tilgængelige behandlinger er kun palliative og marginalt effektive. Genterapi (GT) er en gyldig terapeutisk mulighed for at genoprette C7-ekspression i EBDR-celler uanset kausal mutation i COL7A1. Nylige fremskridt i TG muliggør nøjagtig korrektion (udformning) af gener ved hjælp af målrettede nukleaser. Inden for rammerne af det tidligere projekt foreslog og med succes testede vi genredigering ved hjælp af TALEN-nukleaser anvendt på immortaliserede EBDR keratinocytter med en mutation i COL7A1 tilbagevendende i Spanien, som er den første til at bruge modaliteten baseret på NHEJ reparation til at genvinde mønsteret for læsning og ekspression af genet. Målsætninger: I dette projekt foreslår vi brug af nye værktøjer og mere effektive redigeringsmetoder og deres anvendelse ikke kun ex vivo, men også in vivo. Metode: Specifikt foreslår vi at karakterisere effektiviteten af TALEN nukleaser specifikt rettet mod mutationsstedet for at opnå præcisionskorrektion ved NHEJ og CRISPR/Cas9 double-guide-systemet for at opnå exon 80 exon af COL7A1, hvor mutationen befinder sig, en strategi, der gør det muligt at producere funktionel C7. I pålidelige EBDR modeller i mus med humaniseret hud, vil vi teste den mest effektive redigering tilgang ved hjælp af viral og ikke-viral overførsel over xenotransplantater. Vi håber at opnå en effektiv re-udtryk af C7 og en korrektion af adhæsion fænotype, der bringer os tættere på anvendelsen hos patienter. (Danish)
17 August 2022
0 references
Bullosa Epidermolysis (EB) sisältää heterogeenisen ryhmän harvinaisia sairauksia, joille on ominaista ihon rakkuloita, spontaaneja tai traumaperäisiä. Vaikea yleistynyt resessiivinen dystrofinen muoto EB (EBDRsev-gen), joka johtuu COL7A1-geenin, joka koodaa kollageeni VII (C7)-proteiini, null mutaatioista, ei ole parannuskeinoa, ja käytettävissä olevat hoidot ovat vain lievittäviä ja vain marginaalisesti tehokkaita. Geeniterapia (GT) on pätevä terapeuttinen vaihtoehto, jolla voidaan palauttaa C7- ilmentyminen EBDR-soluissa riippumatta COL7A1: n syy-mutaatiosta. Viimeaikainen edistyminen TG:ssä mahdollistaa geenien tarkan korjauksen (edition) kohdennetuilla nukleaseilla. Aiemmassa hankkeessa ehdotimme ja testasimme geenin muokkausta TALEN-nukleaasien avulla, joita sovellettiin kuolemattomiin EBDR keratinosyytteihin, joilla oli COL7A1: n toistuva mutaatio Espanjassa, ja se oli ensimmäinen, joka käytti NHEJ-korjaukseen perustuvaa menetelmää geenin lukemisen ja ilmentymisen mallin palauttamiseksi. Tavoitteet: Tässä hankkeessa ehdotamme uusien työkalujen käyttöä ja tehokkaampia editointitapoja ja niiden soveltamista paitsi ex vivo myös in vivo. Menetelmät: Erityisesti ehdotamme, että TALEN-nukleaasien tehokkuutta luonnehditaan erityisesti mutaatioalueelle, jotta saavutetaan NHEJ:n ja CRISPR/Cas9-kaksoisopastusjärjestelmän tarkkuuskorjaus, jotta saavutetaan COL7A1:n ekson 80 ekson, jossa mutaatio sijaitsee, strategia, joka mahdollistaa funktionaalisen C7:n tuotannon. Luotettavissa EBDR-malleissa hiiressä, jossa on humanisoitu iho, testaamme tehokkainta muokkaustapaa käyttäen virus- ja ei-viraalisia siirtoja ksenotransplansseihin. Toivomme saavamme aikaan tehokkaan C7-ilmaisun ja kitkafenotyypin korjauksen, joka tuo meidät lähemmäs potilaiden käyttöä. (Finnish)
17 August 2022
0 references
L-Epidermolisi Bullosa (EB) tinkludi grupp eteroġenju ta’ mard rari ta’ fraġilità kkaratterizzat mill-formazzjoni ta’ nfafet fil-ġilda, spontanji jew ikkaġunati mit-trawma. Il-forma diżtrofika riċessiva ġeneralizzata severa ta’ EB (EBDRsev-gen), ikkawżata minn mutazzjonijiet nulli fil-kodifikazzjoni tal-ġene COL7A1 għall-proteina tal-collagen VII (C7), m’għandha l-ebda kura u t-terapiji disponibbli huma biss palljattivi u marġinalment effettivi. It-terapija tal-ġeni (GT) hija għażla terapewtika valida li kapaċi tirrestawra l-espressjoni C7 fiċ-ċelloli EBDR irrispettivament mill-mutazzjoni kawżali f’COL7A1. Avvanzi riċenti fit-TG qed jippermettu korrezzjoni (edizzjoni) preċiża tal-ġeni bl-użu ta’ nucleases immirati. Fil-qafas tal-proġett preċedenti pproponejna u ttestjajna b’suċċess l-editjar tal-ġeni bl-użu ta’ nucleases TALEN applikati għal keratinoċiti tal-EBDR immortalizzati li jġorru mutazzjoni f’COL7A1 rikorrenti fi Spanja, li hija l-ewwel waħda li tuża l-modalità bbażata fuq it-tiswija tal-NEJ biex tirkupra l-mudell tal-qari u l-espressjoni tal-ġene. Għanijiet: F’dan il-proġett nipproponu l-użu ta’ għodod ġodda u approċċi ta’ editjar aktar effiċjenti u l-applikazzjoni tagħhom mhux biss ex vivo iżda wkoll in vivo. Metodoloġija: B’mod speċifiku, aħna nipproponu li nikkaratterizzaw l-effiċjenza ta’ Nucleases TALEN immirati speċifikament lejn is-sit ta’ mutazzjoni biex tinkiseb korrezzjoni ta’ preċiżjoni mill-NHEJ u s-sistema ta’ gwida doppja CRISPR/Cas9 biex tinkiseb l-exon 80 exon tal-COL7A1 fejn tirrisjedi l-mutazzjoni, strateġija li tippermetti l-produzzjoni ta’ C7 funzjonali. F’mudelli EBDR affidabbli fil-ġurdien bil-ġilda umanizzata, aħna se jittestjaw l-approċċ editjar l-aktar effiċjenti bl-użu ta ‘trasferiment virali u mhux virali fuq xenotransplants. Nittamaw li niksbu espressjoni mill-ġdid effettiva ta’ C7 u korrezzjoni tal-fenotip ta’ adeżjoni li jressaqna eqreb lejn l-applikazzjoni fil-pazjenti. (Maltese)
17 August 2022
0 references
Bullosa Epidermolysis (EB) ietver neviendabīgu retu trauslu slimību grupu, ko raksturo ādas pūšļu veidošanās, spontāna vai traumas izraisīta. Smagā ģeneralizētā EB (EBDRsev-gen) recesīvā distrofiskā forma, ko izraisa mutācijas COL7A1 gēnā, kas kodē kolagēna VII (C7) proteīnu, nav izārstēta, un pieejamā terapija ir tikai paliatīva un margināli efektīva. Gēnu terapija (GT) ir derīga terapeitiska iespēja, kas spēj atjaunot C7 ekspresiju EBDR šūnās neatkarīgi no COL7A1 izraisītās mutācijas. Jaunākie sasniegumi TG ļauj precīzi koriģēt (rediģēt) gēnus, izmantojot mērķtiecīgas kodolvielas. Iepriekšējā projekta ietvaros mēs ierosinājām un veiksmīgi pārbaudījām gēnu rediģēšanu, izmantojot TALEN nukleāzes, ko piemēro immortalizētiem EBDR keratinocītiem, kuriem ir mutācija COL7A1 atkārtojas Spānijā, kas ir pirmais, kas izmanto modalitāti, pamatojoties uz NHEJ remontu, lai atgūtu gēna lasīšanas un izteiksmes modeli. Mērķi: Šajā projektā mēs ierosinām izmantot jaunus instrumentus un efektīvākas rediģēšanas pieejas un to piemērošanu ne tikai ex vivo, bet arī in vivo. Metodika: Konkrēti, mēs ierosinām raksturot TALEN kodolu efektivitāti, kas īpaši paredzēti mutācijas vietai, lai panāktu precizitātes korekciju ar NHEJ un CRISPR/Cas9 divvirzienu sistēmu, lai sasniegtu COL7A1 eksonu 80, kur mutācija dzīvo, stratēģiju, kas ļauj ražot funkcionālo C7. Uzticamajos EBDR modeļos pelēm ar humanizētu ādu mēs pārbaudīsim visefektīvāko rediģēšanas pieeju, izmantojot vīrusu un nevīrusu pārnesi uz ksenotransplantiem. Mēs ceram panākt efektīvu C7 atkārtotu ekspresiju un adhēzijas fenotipa korekciju, kas mūs pietuvina lietošanai pacientiem. (Latvian)
17 August 2022
0 references
Bullosa Epidermolysis (EB) pozostáva z heterogénnej skupiny zriedkavých ochorení krehkosti charakterizovaných tvorbou pľuzgierov na koži, spontánnych alebo trauma-indukovaných. Ťažká generalizovaná recesívna dystrofická forma EB (EBDRsev-gen) spôsobená nulovými mutáciami v géne COL7A1, ktorý kóduje proteín kolagénu VII (C7), nemá liek a dostupné terapie sú len paliatívne a okrajovo účinné. Génová terapia (GT) je platná terapeutická možnosť schopná obnoviť expresiu C7 v bunkách EBDR bez ohľadu na kauzálnu mutáciu v COL7A1. Nedávny pokrok v TG umožňuje presnú korekciu (vydanie) génov pomocou cielených nukleáz. V rámci predchádzajúceho projektu sme navrhli a úspešne testovali úpravu génov pomocou nukleáz TALEN aplikovaných na nesmrteľné EBDR keratinocyty nesúce mutáciu v COL7A1 rekurentnej v Španielsku, ktorá ako prvá použila modalitu založenú na NHEJ oprave na obnovenie vzoru čítania a expresie génu. Ciele: V tomto projekte navrhujeme použitie nových nástrojov a efektívnejšie editačné prístupy a ich aplikáciu nielen ex vivo, ale aj in vivo. Metodika: Konkrétne navrhujeme charakterizovať účinnosť nukleáz TALEN zameraných konkrétne na miesto mutácie, aby sa dosiahla presná korekcia NHEJ a systému CRISPR/Cas9 s cieľom dosiahnuť exon 80 exon COL7A1, kde mutácia sídli, stratégia, ktorá umožňuje produkciu funkčného C7. V spoľahlivých modeloch EBDR u myší s humanizovanou kožou otestujeme najúčinnejší prístup úpravy pomocou vírusového a nevírusového prenosu cez xenotransplantáty. Dúfame, že dosiahneme účinnú represiu C7 a korekciu fenotypu adhézie, ktorá nás priblíži k aplikácii u pacientov. (Slovak)
17 August 2022
0 references
Is éard atá in Epidermolysis Bullosa (EB) grúpa ilchineálach de ghalair neamhchoitianta leochaileachta arb iad is sainairíonna foirmiú blisters craicinn, spontáineach nó tráma-spreagtha. Níl aon leigheas ag an bhfoirm dhian dystrophic cúlaitheach de EB (EBDRsev-gen), de bharr sócháin neamhnithe sa chódú géine COL7A1 don phróitéin collagen VII (C7), agus níl na teiripí atá ar fáil ach maolaitheach agus beagán éifeachtach. Is rogha teiripeach bhailí í Géinteiripe (GT) atá in ann léiriú C7 a athbhunú i gcealla EBDR beag beann ar an sóchán cúiseach in COL7A1. Leis an dul chun cinn a rinneadh le déanaí i TG, tá ceartú cruinn (eagar) ar ghéinte ag baint úsáide as nucleases spriocdhírithe. Faoi chuimsiú an tionscadail roimhe seo mholamar agus d’éirigh linn tástáil a dhéanamh ar eagarthóireacht ghéine ag baint úsáide as nucleases TALEN i bhfeidhm ar cheratinocytes neamhbhásaithe EBDR ag iompar sóchán i COL7A1 athfhillteach sa Spáinn, is é sin an chéad cheann chun úsáid a bhaint as an módúlacht bunaithe ar dheisiú NHEJ chun patrún léitheoireachta agus léirithe an ghéine a aisghabháil. Cuspóirí: Sa tionscadal seo, molaimid uirlisí nua agus cuir chuige eagarthóireachta níos éifeachtúla a úsáid agus ní hamháin ex vivo ach in vivo freisin. Modheolaíocht: Go sonrach, molaimid éifeachtúlacht nucleases TALEN atá dírithe go sonrach ar an suíomh sócháin a thréithriú chun ceartú beachtais a bhaint amach ag NHEJ agus ag an gcóras déthreorach CRISPR/Cas9 chun exon 80 den COL7A1 ina bhfuil cónaí ar an sóchán a bhaint amach, straitéis a cheadaíonn táirgeadh C7 feidhmiúil. I múnlaí iontaofa EBDR i luch le craiceann daonnaithe, déanfaimid tástáil ar an gcur chuige eagarthóireachta is éifeachtaí ag baint úsáide as aistriú víreasach agus neamhvíreasach thar xenotransplants. Tá súil againn athléiriú éifeachtach ar C7 a bhaint amach agus ceartú an fheinitíopa greamaitheachta a thugann níos gaire dúinn don iarratas in othair. (Irish)
17 August 2022
0 references
Epidermolýza Bullosa (EB) zahrnuje heterogenní skupinu vzácných křehkých onemocnění charakterizovaných tvorbou kožních puchýřů, spontánních nebo traumatizovaných. Těžká generalizovaná recesivní dystrofická forma EB (EBDRsev-gen), způsobená null mutacemi v genu COL7A1 kódujícím pro kolagen VII (C7) protein, nemá žádnou léčbu a dostupné terapie jsou pouze paliativní a okrajově účinné. Genová terapie (GT) je platnou terapeutickou možností, která je schopna obnovit expresi C7 v buňkách EBDR bez ohledu na kauzální mutaci v COL7A1. Nedávné pokroky v TG umožňují přesnou korekci (edice) genů pomocí cílených nukleáz. V rámci předchozího projektu jsme navrhli a úspěšně testovali editaci genů pomocí nukleáz TALEN aplikovaných na nesmrtelné keratinocyty EBDR nesoucí mutaci v recidivu COL7A1 ve Španělsku, jako první použil modalitu založenou na opravě NHEJ k obnovení vzoru čtení a exprese genu. Cíle: V tomto projektu navrhujeme využití nových nástrojů a efektivnější editační přístupy a jejich aplikaci nejen ex vivo, ale i in vivo. Metodika: Konkrétně navrhujeme charakterizovat účinnost nukleáz TALEN zaměřených konkrétně na místo mutace, aby bylo dosaženo přesné korekce pomocí systému NHEJ a CRISPR/Cas9 pro dosažení exonu 80 exonu COL7A1, kde mutace spočívá, strategie, která umožňuje výrobu funkční C7. Ve spolehlivých modelech EBDR u myší s humanizovanou kůží budeme testovat nejúčinnější editační přístup pomocí virového a nevirového přenosu přes xenotransplanty. Doufáme, že dosáhneme účinné reexprese C7 a korekce adhezního fenotypu, který nás přiblíží aplikaci u pacientů. (Czech)
17 August 2022
0 references
A Epidermólise Bullosa (EB) compreende um grupo heterogêneo de doenças raras de fragilidade caracterizada pela formação de bolhas cutâneas, espontâneas ou induzidas por trauma. A forma distrófica recessiva generalizada grave de EB (EBDRsev-gen), causada por mutações nulas no gene COL7A1 que codifica para a proteína colágeno VII (C7), não tem cura e as terapias disponíveis são apenas paliativas e marginalmente eficazes. A terapia gênica (GT) é uma opção terapêutica válida capaz de restaurar a expressão de C7 nas células EBDR, independentemente da mutação causal na COL7A1. Avanços recentes em TG estão permitindo a correção precisa (edição) de genes usando nucleases alvo. No âmbito do projeto anterior, propusemos e testamos com sucesso a edição gênica usando nucleases TALEN aplicadas a queratinócitos EBDR imortalizados que carregam uma mutação em COL7A1 recorrente na Espanha, sendo o primeiro a usar a modalidade baseada no reparo do NHEJ para recuperar o padrão de leitura e expressão do gene. Objetivos: Neste projeto propomos o uso de novas ferramentas e abordagens de edição mais eficientes e sua aplicação não só ex vivo, mas também in vivo. Metodologia: Especificamente, propomos caracterizar a eficiência das nucleases TALEN voltadas especificamente para o local da mutação para alcançar a correção de precisão pelo NHEJ e o sistema de duplo guia CRISPR/Cas9 para alcançar o éxon 80 éxon do COL7A1 onde reside a mutação, estratégia que permite a produção de C7 funcional. Em modelos de EBDR fiáveis em ratinhos com pele humanizada, testaremos a abordagem de edição mais eficiente usando transferência viral e não viral sobre xenotransplantes. Esperamos conseguir uma reexpressão efetiva de C7 e uma correção do fenótipo de adesão que nos aproxima da aplicação em pacientes. (Portuguese)
17 August 2022
0 references
Bullosa Epidermolüüs (EB) koosneb haruldaste ebakindlate haiguste heterogeensest rühmast, mida iseloomustab naha villide teke, spontaanne või trauma põhjustatud. EB (EBDRsev-gen) raske generaliseerunud retsessiivne düstroofne vorm, mis on põhjustatud nullmutatsioonidest COL7A1 geenis, mis kodeerib VII kollageeni (C7), ei ole ravitav ja saadavalolevad ravimeetodid on ainult palliatiivsed ja vähesel määral efektiivsed. Geeniteraapia (GT) on sobiv ravivõimalus, mis suudab taastada C7 ekspressiooni EBDR-rakkudes, olenemata COL7A1 põhjuslikust mutatsioonist. Hiljutised edusammud TG-s võimaldavad geenide täpset korrigeerimist (väljastamist) sihtnukleaaside abil. Eelmise projekti raames tegime ettepaneku ja katsetasime edukalt geenide redigeerimist, kasutades TALENi nukleaasi, mida rakendatakse surematutele EBDR keratinotsüütidele, millel on Hispaanias korduv COL7A1 mutatsioon, olles esimene, kes kasutab NHEJ remondil põhinevat modaalsust geeni lugemise ja ekspressiooni mustri taastamiseks. Eesmärgid: Selles projektis teeme ettepaneku kasutada uusi vahendeid ja tõhusamaid toimetamismeetodeid ning nende rakendamist mitte ainult ex vivo, vaid ka in vivo. Metoodika: Täpsemalt teeme ettepaneku iseloomustada konkreetselt mutatsioonikohale suunatud TALENi nukleaaside tõhusust, et saavutada NHEJ ja CRISPR/Cas9 kahesuunalise süsteemi täpsuskorrektsioon, et saavutada COL7A1 ekson 80 ekson, kus mutatsioon elab, strateegia, mis võimaldab funktsionaalse C7 tootmist. Usaldusväärsetes EBDR mudelites humaniseeritud nahaga hiirtel testime kõige tõhusamat redigeerimismeetodit, kasutades viiruslikku ja mitteviiruslikku ülekannet üle ksenotransplantaatide. Loodame, et saavutatakse C7 tõhus uuesti väljendamine ja haardumisfenotüübi korrigeerimine, mis toob meid patsientidele rakendusele lähemale. (Estonian)
17 August 2022
0 references
A Bullosa Epidermolysis (EB) ritka betegségek heterogén csoportját foglalja magában, amelyeket spontán vagy trauma által kiváltott bőrhólyagképződés jellemez. Az EB (EBDRsev-gen) súlyos generalizált, recesszív disztrófiás formája, amelyet a VII (C7) kollagén fehérjét kódoló COL7A1 gén nullmutációi okoznak, nem gyógyítható, és a rendelkezésre álló terápiák csak palliatívak és csekély mértékben hatékonyak. Génterápia (GT) egy érvényes terápiás lehetőség, amely képes helyreállítani C7 expresszió EBDR sejtek függetlenül az ok-okozati mutáció COL7A1 A TG legújabb fejleményei lehetővé teszik a célzott nukleázokat használó gének pontos korrekcióját (szerkesztését). Az előző projekt keretében javaslatot tettünk és sikeresen teszteltünk génszerkesztést TALEN nukleázokkal, amelyeket a COL7A1-ben visszatérő mutációt hordozó, halhatatlan EBDR keratinocytákra alkalmaztak, elsőként használták az NHEJ javításon alapuló módszert a gén olvasási és kifejeződési mintájának helyreállítására. Célkitűzések: Ebben a projektben új eszközök használatát és hatékonyabb szerkesztési módszereket és alkalmazásukat javasoljuk nemcsak ex vivo, hanem in vivo is. Módszertan: Konkrétabban azt javasoljuk, hogy jellemezzük a kifejezetten a mutáció helyszínére irányuló TALEN nukleázok hatékonyságát, hogy az NHEJ és a CRISPR/Cas9 kettős vezető rendszer precíziós korrekciót érjen el a COL7A1 exon 80 exonjának elérése érdekében, ahol a mutáció található, egy olyan stratégia, amely lehetővé teszi funkcionális C7 előállítását. Megbízható EBDR modellek egerekben humanizált bőrrel, teszteljük a leghatékonyabb szerkesztési megközelítést vírusos és nem vírusos átvitellel xenotranszplantátumokon keresztül. Reméljük, hogy sikerül elérni a C7 hatékony újrakifejezését és a tapadás fenotípusának korrekcióját, amely közelebb visz minket a betegeken történő alkalmazáshoz. (Hungarian)
17 August 2022
0 references
Булозата Епидермолиза (EB) се състои от хетерогенна група редки заболявания на крехкост, характеризиращи се с образуване на кожни мехури, спонтанни или предизвикани от травма. Тежката генерализирана рецесивна дистрофична форма на EB (EBDRsev-gen), причинена от нулеви мутации в генния код COL7A1 за протеина колаген VII (C7), няма излекуване и наличните терапии са само палиативни и слабо ефективни. Генната терапия (GT) е валидна терапевтична опция, способна да възстанови експресията на C7 в клетките на EBDR, независимо от причинно-следствената мутация в COL7A1. Последните постижения в TG позволяват точна корекция (издание) на гените с помощта на целеви нуклеази. В рамките на предишния проект предложихме и успешно тествахме редактирането на гени с помощта на нуклеази TALEN, приложени към безсмъртни EBDR кератиноцити, носещи мутация в COL7A1, повтаряща се в Испания, което е първото, което използва метода, базиран на ремонта на NHEJ, за да възстанови модела на четене и експресия на гена. Цели: В този проект предлагаме използването на нови инструменти и по-ефективни подходи за редактиране и тяхното прилагане не само ex vivo, но и in vivo. Методология: По-конкретно, предлагаме да се характеризира ефективността на нуклеазите TALEN, насочени специално към мястото на мутация, за да се постигне прецизна корекция от NHEJ и системата CRISPR/Cas9 за постигане на екзон 80 екзон на COL7A1, където пребивава мутацията, стратегия, която позволява производството на функционален C7. В надеждните модели на EBDR в мишка с хуманизирана кожа, ще тестваме най-ефективния подход за редактиране, използвайки вирусен и невирусен трансфер през ксенотрансплантанти. Надяваме се да постигнем ефективна ре-експресия на С7 и корекция на адхесионния фенотип, който ни приближава до приложението при пациенти. (Bulgarian)
17 August 2022
0 references
Bullosa epidermolizę (EB) sudaro nevienalytė retų pažeidžiamumo ligų grupė, kuriai būdingas spontaninių arba traumų sukeltų odos pūslių susidarymas. Sunkios generalizuotos recesyvinės distrofinės formos EB (EBDRsev-gen), kurią sukelia nulinės mutacijos COL7A1 geno koduojant kolageno VII (C7) baltymą, neišgydo, o gydymo priemonės yra tik paliatyvios ir nežymiai veiksmingos. Genų terapija (GT) yra tinkama terapinė priemonė, galinti atkurti C7 ekspresiją EBDR ląstelėse, nepriklausomai nuo priežastinės mutacijos COL7A1. Naujausi TG pasiekimai leidžia tiksliai koreguoti genus, naudojant tikslines nukleazes. Pagal ankstesnį projektą mes pasiūlėme ir sėkmingai išbandėme genų redagavimą naudojant TALEN nukleazius, pritaikytus nemirtingiems EBDR keratinocitams, turintiems COL7A1 pasikartojančią mutaciją Ispanijoje, kurie pirmieji naudojo modalumą, pagrįstą NHEJ remontu, kad atkurtų geno skaitymo ir išraiškos modelį. Tikslai: Šiame projekte siūlome naudoti naujas priemones ir veiksmingesnius redagavimo metodus bei jų taikymą ne tik ex vivo, bet ir in vivo. Metodika: Konkrečiai, siūlome apibūdinti TALEN nukleazių, skirtų specialiai mutacijų vietai, efektyvumą, kad NHEJ ir CRISPR/Cas9 dvigubos gido sistema pasiektų COL7A1 exon 80 exon, kurioje yra mutacija, strategiją, kuri leidžia gaminti funkcinę C7. Patikimuose EBDR modeliuose pelėmis su humanizuota oda mes išbandysime efektyviausią redagavimo metodą, naudodami virusinį ir nevirusinį pernešimą per ksenotransplantus. Tikimės, kad bus pasiekta veiksminga C7 išraiška ir sukibimo fenotipo korekcija, kuri priartina mus prie taikymo pacientams. (Lithuanian)
17 August 2022
0 references
Bullosa Epidermolysis (EB) sastoji se od heterogene skupine rijetkih bolesti krhkosti karakteriziranih stvaranjem kožnih mjehurića, spontanih ili trauma-induciranih. Teški generalizirani recesivni distrofični oblik EB-a (EBDRsev-gen), uzrokovan nultim mutacijama u kodiranju gena COL7A1 za protein kolagena VII (C7), nema lijek, a dostupne terapije su samo palijativne i marginalno učinkovite. Genska terapija (GT) je valjana terapijska opcija koja može vratiti ekspresiju C7 u stanicama EBDR-a bez obzira na uzročno-posljedičnu mutaciju COL7A1. Nedavni napredak u TG-u omogućuje točnu korekciju (izdavanje) gena pomoću ciljanih nukleaza. U okviru prethodnog projekta predložili smo i uspješno testirali uređivanje gena koristeći TALEN nukleaze primijenjene na besmrtne EBDR keratinocite koji nose mutaciju u COL7A1 ponavljanju u Španjolskoj, što je prvi koji je koristio modalitet na temelju NHEJ popravaka za oporavak uzorka čitanja i ekspresije gena. Ciljevi: U ovom projektu predlažemo korištenje novih alata i učinkovitijih pristupa uređivanju i njihovu primjenu ne samo ex vivo nego i in vivo. Metodologija: Konkretno, predlažemo da se okarakterizira učinkovitost TALEN nukleaza usmjerenih posebno na mjesto mutacije kako bi se postigla precizna korekcija NHEJ-a i CRISPR/Cas9 dvostrukog vodnog sustava kako bi se postigao exon 80 exon COL7A1 gdje se nalazi mutacija, strategija koja omogućuje proizvodnju funkcionalnog C7. U pouzdanim EBDR modelima miša s humaniziranom kožom, testirat ćemo najučinkovitiji pristup uređivanju koristeći virusni i nevirusni prijenos preko ksenotransplanta. Nadamo se da ćemo postići učinkovito ponovno izražavanje C7 i korekciju fenotipa prianjanja koja nas približava primjeni kod pacijenata. (Croatian)
17 August 2022
0 references
Bullosa Epidermolysis (EB) omfattar en heterogen grupp av sällsynta bräcklighetssjukdomar som kännetecknas av bildandet av hudblåsor, spontana eller traumainducerade. Den svåra generaliserade recessiva dystrofa formen av EB (EBDRsev-gen), som orsakas av nollmutationer i COL7A1-genen som kodar för kollagen VII (C7)-proteinet, har inget botemedel och de tillgängliga terapierna är endast palliativa och marginellt effektiva. Genterapi (GT) är ett giltigt terapeutiskt alternativ som kan återställa C7-uttrycket i EBDR-celler oavsett orsaksmutationen i COL7A1. Den senaste tidens framsteg inom TG möjliggör korrekt korrigering (utgåva) av gener som använder riktade nukleaser. Inom ramen för det tidigare projektet föreslog vi och framgångsrikt testade genredigering med hjälp av TALEN-nucleases tillämpas på odödliga EBDR keratinocyter som bär en mutation i COL7A1 återkommande i Spanien, var den första att använda modaliteten baserad på NHEJ reparation för att återställa mönstret för läsning och uttryck av genen. Mål: I detta projekt föreslår vi användning av nya verktyg och effektivare redigeringsmetoder och deras tillämpning inte bara ex vivo utan även in vivo. Metod: Specifikt föreslår vi att man karakteriserar effektiviteten hos TALEN-nukleaser som specifikt syftar till mutationsstället för att uppnå precisionskorrigering av NHEJ och CRISPR/Cas9 dubbelstyrsystem för att uppnå exon 80 exon av COL7A1 där mutationen finns, en strategi som möjliggör produktion av funktionell C7. I pålitliga EBDR-modeller i mus med humaniserad hud kommer vi att testa den mest effektiva redigeringsmetoden med viral och icke-viral överföring över xenotransplanter. Vi hoppas kunna uppnå en effektiv återuttryck av C7 och en korrigering av adhesionsfenotypen som för oss närmare applikationen hos patienter. (Swedish)
17 August 2022
0 references
Epidermoliza Bullosa (EB) cuprinde un grup eterogen de boli rare de fragilitate caracterizate prin formarea de vezicule cutanate, spontane sau induse de traume. Forma distrofică recesivă severă generalizată a EB (genul EBDRsev), cauzată de mutațiile nule ale genei COL7A1 care codifică proteina colagen VII (C7), nu are tratament, iar terapiile disponibile sunt doar paliative și marginal eficiente. Terapia genică (GT) este o opțiune terapeutică valabilă, capabilă să restabilească expresia C7 în celulele EBDR, indiferent de mutația cauzală a COL7A1. Progresele recente în TG permit corectarea exactă (ediția) genelor folosind nucleaze vizate. În cadrul proiectului anterior am propus și testat cu succes editarea genelor folosind nucleazele TALEN aplicate keratinocitelor EBDR imortalizate care transportă o mutație în COL7A1 recurentă în Spania, fiind primele care utilizează modalitatea bazată pe repararea NHEJ pentru a recupera modelul de citire și exprimare a genei. Obiective: În acest proiect propunem utilizarea de noi instrumente și abordări mai eficiente de editare și aplicarea lor nu numai ex vivo, ci și in vivo. Metodologie: În mod specific, propunem caracterizarea eficienței nucleazelor TALEN destinate în mod specific locului mutației pentru a realiza corecția de precizie de către NHEJ și sistemul dublu de ghidare CRISPR/Cas9 pentru a realiza exonul 80 exon al COL7A1 unde se află mutația, o strategie care permite producerea de C7 funcțional. În modelele EBDR fiabile la șoarece cu piele umanizată, vom testa cea mai eficientă abordare de editare folosind transferul viral și non-viral peste xenotransplante. Sperăm să realizăm o re-exprimare eficientă a C7 și o corecție a fenotipului aderenței care ne aduce mai aproape de aplicarea la pacienți. (Romanian)
17 August 2022
0 references
Epidermoliza Bullosa (EB) obsega heterogeno skupino redkih bolezni krhkosti, za katere je značilno tvorjenje kožnih mehurjev, spontanih ali povzročenih s poškodbami. Huda generalizirana recesivna distrofična oblika EB (EBDRsev-gen), ki jo povzročajo null mutacije gena COL7A1, ki kodira beljakovino kolagena VII (C7), nima zdravila in terapije, ki so na voljo, so le paliativne in marginalno učinkovite. Genska terapija (GT) je veljavna terapevtska možnost, ki lahko ponovno vzpostavi ekspresijo C7 v celicah EBDR ne glede na vzročno mutacijo v COL7A1. Nedavni napredek v trigliceridih omogoča natančno korekcijo (izdaja) genov z uporabo ciljnih nukleaz. V okviru prejšnjega projekta smo predlagali in uspešno testirali urejanje genov z nukleazami TALEN, ki se uporabljajo za nesmrtne keratinocite EBDR, ki nosijo mutacijo v COL7A1 ponavljajoči se v Španiji, pri čemer je prvi uporabil način, ki temelji na popravilu NHEJ, da bi si opomogel vzorec branja in izražanja gena. Cilji: V tem projektu predlagamo uporabo novih orodij in učinkovitejše montažne pristope ter njihovo uporabo ne le ex vivo, ampak tudi in vivo. Metodologija: Natančneje, predlagamo, da se opredeli učinkovitost nukleaz TALEN, ki so posebej namenjene mestu mutacije, da se doseže natančen popravek z NHEJ in sistemom dvojnih vodičev CRISPR/Cas9, da se doseže ekson 80 ekson COL7A1, kjer je mutacija, strategija, ki omogoča proizvodnjo funkcionalnega C7. Pri zanesljivih modelih EBDR pri miših s humanizirano kožo bomo preizkusili najučinkovitejši pristop urejanja z uporabo virusnega in nevirusnega prenosa preko ksenotransplantov. Upamo, da bomo dosegli učinkovito ponovno izražanje C7 in korekcijo fenotipa adhezije, ki nas približa aplikaciji pri bolnikih. (Slovenian)
17 August 2022
0 references
Bullosa Epidermolysis (EB) obejmuje niejednorodną grupę rzadkich chorób o kruchości charakteryzujących się powstawaniem pęcherzy skórnych, spontanicznych lub wywołanych urazem. Ciężka uogólniona recesywna postać dystroficzna EB (EBDRsev-gen), spowodowana zerowymi mutacjami w genie COL7A1 kodującym białko kolagenu VII (C7), nie ma lekarstwa, a dostępne terapie są tylko paliatywne i marginalnie skuteczne. Terapia genowa (GT) jest ważną opcją terapeutyczną, która może przywrócić ekspresję C7 w komórkach EBDR niezależnie od mutacji przyczynowej w COL7A1. Ostatnie postępy w TG umożliwiają dokładną korekcję (wydanie) genów za pomocą ukierunkowanych nukleaz. W ramach poprzedniego projektu zaproponowaliśmy i z powodzeniem przetestowaliśmy edycję genów za pomocą nukleaz TALEN zastosowanych do nieśmiertelnych keratynocytów EBDR przenoszących mutację w COL7A1 powtarzających się w Hiszpanii, jako pierwsi, którzy wykorzystali modalność opartą na naprawie NHEJ w celu odzyskania wzoru odczytu i ekspresji genu. Cele: W tym projekcie proponujemy wykorzystanie nowych narzędzi i wydajniejszego podejścia do edycji i ich zastosowania nie tylko ex vivo, ale także in vivo. Metodyka: W szczególności proponujemy scharakteryzowanie skuteczności nukleaz TALEN skierowanych specjalnie do miejsca mutacji w celu osiągnięcia precyzyjnej korekty za pomocą NHEJ i systemu podwójnego przewodnika CRISPR/Cas9 w celu osiągnięcia exon 80 exon COL7A1, gdzie znajduje się mutacja, strategii, która umożliwia produkcję funkcjonalnego C7. W niezawodnych modelach EBDR myszki z humanizowaną skórą przetestujemy najbardziej efektywne podejście do edycji przy użyciu wirusowego i niewirusowego transferu przez ksenotransplanty. Mamy nadzieję osiągnąć skuteczną reekspresję C7 i korektę fenotypu adhezyjnego, która przybliża nas do zastosowania u pacjentów. (Polish)
17 August 2022
0 references
Madrid
0 references
20 December 2023
0 references
Identifiers
PI17_01747
0 references