Regulation of FRZB expression in vitro and in vivo, for the restoration of homeostasis in muscle fiber in patients with type 2A waist dystrophy (LGMD2A) (Q3141941)
Jump to navigation
Jump to search
Project Q3141941 in Spain
| Language | Label | Description | Also known as |
|---|---|---|---|
| English | Regulation of FRZB expression in vitro and in vivo, for the restoration of homeostasis in muscle fiber in patients with type 2A waist dystrophy (LGMD2A) |
Project Q3141941 in Spain |
Statements
25,863.75 Euro
0 references
47,500.0 Euro
0 references
54.45 percent
0 references
1 January 2017
0 references
31 March 2020
0 references
ASOCIACION INSTITUTO BIODONOSTIA
0 references
En el presente proyecto de investigación se proponen diferentes estrategias para abordar un mejor conocimiento de la regulación de FRBZ, pues resultados previos muestran posibles efectos beneficiosos in vitro tras su silenciamiento, y así poder orientar los estudios a futuras terapias en las distrofias de cinturas tipo 2A. Objetivos: 1) Establecer las funciones específicas de FRZB en el músculo analizando su ausencia en modelo in vivo de ratón KO Frzb-/-. 2) Establecer las consecuencias del silenciamiento o la sobreexpresión de FRZB in vivo en el pez cebra. 3) Profundizar en los mecanismos en los que participa el silenciamiento de FRZB en cultivos primarios humanos para establecer las consecuencias en diferentes procesos celulares. Metodología: Se utilizarán muestras de músculo y mioblastos/miotubos de ratón KO Frzb-/- en los que se analizará la expresión diferencial de genes (RT-qPCR) y proteínas (Western Blot). Se analizará también la estructura muscular (actividad enzimática de metaloproteinasa) como la capacidad regenerativa del músculo in vivo tras administración de cardiotoxina y se realizará posterior análisis histológico. En el pez cebra, el gen Frzb se silenciará (morfolinos) y se sobreexpresará (pGEM-T) para establecer las consecuencias de su desregulación. Finalmente se utilizarán cultivos celulares (mioblastos/miotubos) de pacientes LGMD2A y controles en los que se determinará la regulación diferencial de kinasas, la autofagia y la función mitocondrial como consecuencia del silenciamiento de FRZB. Para el control del efecto de todos los ensayos, se analizará la expresión de diferentes genes/proteínas, la modificación en la fosforilación de kinasas, así como los ratios de absorción de oxígeno y la producción de protones y la acidificación extracelular (SeaHorse). (Spanish)
0 references
In this research project different strategies are proposed to address a better knowledge of FRBZ regulation, as previous results show possible beneficial effects in vitro after silencing, and thus be able to direct the studies to future therapies in waist dystrophy type 2A. Objectives: 1) Set the specific functions of FRZB in the muscle by analysing its absence in mouse model KO Frzb-/-. 2) Establish the consequences of silencing or overexpression of FRZB in vivo in the zebra fish. 3) Deepen the mechanisms in which the silencing of FRZB participates in human primary cultures to establish the consequences in different cell processes. Methodology: Samples of muscle and myoblasts/myoblasts/myotubes of mouse KO Frzb-/- will be used to analyse the differential expression of genes (RT-qPCR) and proteins (Western Blot). The muscle structure (enzymatic activity of metalloproteinase) as the regenerative capacity of muscle in vivo after administration of cardiotoxin will also be analysed and histological analysis carried out. In zebrafish, the Frzb gene will be silenced (morpholinos) and overexpressed (pGEM-T) to establish the consequences of deregulation. Finally, cell cultures (myoblasts/myotubes) will be used in LGMD2A patients and controls in which differential regulation of kinases, autophagia and mitochondrial function will be determined as a result of FRZB silencing. For the control of the effect of all trials, the expression of different genes/proteins, modification in kinase phosphorylation, oxygen absorption ratios and proton production and extracellular acidification (SeaHorse) shall be analysed. (English)
12 October 2021
0.084575300263748
0 references
Dans ce projet de recherche, différentes stratégies sont proposées pour améliorer la connaissance de la régulation FRBZ, car les résultats précédents montrent les effets bénéfiques possibles in vitro après le silencieux, et donc être en mesure d’orienter les études vers de futures thérapies de la dystrophie de taille de type 2A. Objectifs: 1) Définir les fonctions spécifiques de FRZB dans le muscle en analysant son absence dans le modèle de souris KO Frzb-/-. 2) Établir les conséquences du silence ou de la surexpression du FRZB in vivo chez les poissons zèbres. 3) Approfondissement des mécanismes dans lesquels le silence du FRZB participe aux cultures primaires humaines afin d’en déterminer les conséquences dans les différents processus cellulaires. Méthodologie: Des échantillons de muscles et de myoblastes/myoblastes/myotubes de souris KO Frzb-/- seront utilisés pour analyser l’expression différentielle des gènes (RT-qPCR) et des protéines (Western Blot). La structure musculaire (activité enzymatique de la métalloprotéinase) en tant que capacité régénérative du muscle in vivo après administration de cardiotoxine sera également analysée et une analyse histologique effectuée. Chez le poisson zèbre, le gène Frzb sera réduit au silence (morpholinos) et surexprimé (pGEM-T) pour établir les conséquences de la déréglementation. Enfin, les cultures cellulaires (myoblastes/myotubes) seront utilisées chez les patients atteints de LGMD2A et chez les témoins dans lesquels la régulation différentielle des kinases, de l’autophagie et de la fonction mitochondriale sera déterminée à la suite du silencieux FRZB. Pour contrôler l’effet de tous les essais, il convient d’analyser l’expression de différents gènes/protéines, la modification de la phosphorylation de kinase, les rapports d’absorption d’oxygène et la production de protons et l’acidification extracellulaire (SeaHorse). (French)
2 December 2021
0 references
In diesem Forschungsprojekt werden verschiedene Strategien vorgeschlagen, um eine bessere Kenntnis der FRBZ-Verordnung anzugehen, da frühere Ergebnisse mögliche positive Auswirkungen in vitro nach dem Stillen zeigen und so die Studien auf zukünftige Therapien in der Taillendystrophie Typ 2A lenken können. Ziele: 1) Setzen Sie die spezifischen Funktionen von FRZB im Muskel durch Analyse seiner Abwesenheit im Mausmodell KO Frzb-/-. 2) Die Folgen des Schweigens oder Überdrucks von FRZB in vivo im Zebrafisch feststellen. 3) Vertiefen Sie die Mechanismen, in denen das Schweigen von FRZB an menschlichen Primärkulturen beteiligt ist, um die Folgen in verschiedenen Zellprozessen festzustellen. Methodik: Proben von Muskeln und Myoblasten/Myoblasten/Myotuben der Maus KO Frzb-/- werden verwendet, um die Differentialexpression von Genen (RT-qPCR) und Proteinen (Western Blot) zu analysieren. Die Muskelstruktur (enzymatische Aktivität der Metalloproteinase) als Regenerationsfähigkeit des Muskels in vivo nach Verabreichung von Cardiotoxin wird ebenfalls analysiert und histologische Analysen durchgeführt. Bei Zebrafischen wird das Frzb-Gen zum Schweigen (morpholinos) und überexprimiert (pGEM-T), um die Folgen der Deregulierung festzustellen. Schließlich werden Zellkulturen (myoblasts/myotubes) bei LGMD2A-Patienten und Kontrollen verwendet, bei denen die Differentialregulation von Kinasen, Autophagie und Mitochondrialfunktion durch FRZB-Siliencing bestimmt wird. Zur Kontrolle der Wirkung aller Versuche sind die Expression verschiedener Gene/Proteine, die Veränderung der Kinasephosphorylierung, die Sauerstoffabsorptionsverhältnisse und die Protonenproduktion und die extrazelluläre Säuerung (SeaHorse) zu analysieren. (German)
9 December 2021
0 references
In dit onderzoeksproject worden verschillende strategieën voorgesteld om een betere kennis van FRBZ-regelgeving aan te pakken, aangezien eerdere resultaten laten zien mogelijke gunstige effecten in vitro na het tot zwijgen brengen, en dus in staat zijn om de studies te richten op toekomstige therapieën in tailledystrofie type 2A. Doelstellingen: 1) Stel de specifieke functies van FRZB in de spier door zijn afwezigheid in muismodel KO Frzb-/- te analyseren. 2) Bepaal de gevolgen van het tot zwijgen brengen of overexpressie van FRZB in vivo in de zebravissen. 3) Verdieping van de mechanismen waarin het geluid van FRZB deelneemt aan menselijke primaire culturen om de gevolgen in verschillende celprocessen vast te stellen. Methodologie: Monsters van spier- en myoblasten/myoblasten/myotubes van muis KO Frzb-/- zullen worden gebruikt om de differentiële expressie van genen (RT-qPCR) en eiwitten (Western Blot) te analyseren. De spierstructuur (enzymatische activiteit van metalloproteinase) als de regeneratieve capaciteit van spier in vivo na toediening van cardiotoxine zal ook worden geanalyseerd en histologische analyse uitgevoerd. In zebravis zal het Frzb gen (morfolino’s) en overexpressie (pGEM-T) tot zwijgen gebracht worden om de gevolgen van deregulering vast te stellen. Ten slotte zullen celculturen (myoblasten/myotubes) worden gebruikt bij LGMD2A-patiënten en controles waarbij differentiële regulatie van kinasen, autofagie en mitochondriale functie zal worden bepaald als gevolg van FRZB-demping. Voor de controle op het effect van alle proeven moet de expressie van verschillende genen/eiwitten, modificatie in kinasefosforylatie, zuurstofabsorptieverhoudingen en protonproductie en extracellulaire aanzuring (SeaHorse) worden geanalyseerd. (Dutch)
17 December 2021
0 references
In questo progetto di ricerca vengono proposte diverse strategie per affrontare una migliore conoscenza della regolamentazione FRBZ, in quanto i risultati precedenti mostrano possibili effetti benefici in vitro dopo il silenziamento, ed essere quindi in grado di indirizzare gli studi verso terapie future nella distrofia della vita di tipo 2A. Obiettivi: 1) Impostare le funzioni specifiche di FRZB nel muscolo analizzando la sua assenza nel modello del mouse KO Frzb-/-. 2) Stabilire le conseguenze del silenziamento o dell'eccessiva espressione di FRZB in vivo nel pesce zebra. 3) approfondire i meccanismi in cui il silenziamento di FRZB partecipa alle culture primarie umane per stabilire le conseguenze in diversi processi cellulari. Metodologia: Per analizzare l'espressione differenziale dei geni (RT-qPCR) e delle proteine (Western Blot) verranno utilizzati campioni di muscolo e mioblasti/miotubes del topo KO Frzb-/-. La struttura muscolare (attività enzimatica della metalloproteinasi) come la capacità rigenerativa del muscolo in vivo dopo la somministrazione di cardiotossina sarà anche analizzata e l'analisi istologica effettuata. Nel pesce zebra, il gene Frzb sarà messo a tacere (morpholinos) e sovraespresso (pGEM-T) per stabilire le conseguenze della deregolamentazione. Infine, le colture cellulari (mioblasti/miotubi) saranno utilizzate nei pazienti LGMD2A e nei controlli in cui la regolazione differenziale delle chinasi, dell'autofagia e della funzione mitocondriale sarà determinata come risultato del silenziamento FRZB. Per controllare l'effetto di tutte le prove si analizza l'espressione di diversi geni/proteine, la modifica della fosforilazione chinasi, i rapporti di assorbimento dell'ossigeno e la produzione di protoni e l'acidificazione extracellulare (SeaHorse). (Italian)
16 January 2022
0 references
Selles uurimisprojektis pakutakse välja erinevad strateegiad, et parandada teadmisi FRBZ regulatsioonist, kuna varasemad tulemused näitavad võimalikku kasulikku mõju in vitro pärast vaigistamist ning seega on võimalik suunata uuringud tulevastesse 2A tüüpi vöödüstroofia ravimeetoditesse. Eesmärgid: 1) Määrake FRZB spetsiifilised funktsioonid lihases, analüüsides selle puudumist hiiremudelis KO Frzb-/-. 2) määrata kindlaks FRZB summutamise või üleekspressiooni tagajärjed in vivo sebrakalades. 3) Mõõdetakse mehhanismid, milles FRZB vaigistamine osaleb inimese esmastes kultuurides, et määrata kindlaks tagajärjed erinevates rakuprotsessides. Metoodika: Geenide (RT-qPCR) ja valkude (Western Blot) diferentseeritud ekspressiooni analüüsimiseks kasutatakse hiire KO Frzb-/- lihas- ja müoblastide/müoblastide/müotupulite proove. Analüüsitakse ka lihasstruktuuri (metalloproteinaasi ensümaatiline aktiivsus) kui lihaste taastumisvõimet in vivo pärast kardiotoksiini manustamist ja tehakse histoloogiline analüüs. Sebrakala puhul vaigistatakse Frzb geen (morfolinid) ja üleväljendatakse (pGEM-T), et teha kindlaks dereguleerimise tagajärjed. Lõpuks kasutatakse LGMD2A patsientidel rakukultuure (müoblaste/müotube) ja kontrollrühma, kus kinaaside, autofaagia ja mitokondrite funktsiooni diferentsiaalregulatsioon määratakse FRZB vaigistamise tulemusena. Kõikide katsete toime kontrollimiseks analüüsitakse erinevate geenide/valkude ekspressiooni, kinaasi fosforüülimise modifitseerimist, hapniku neeldumise määra ja prootonide tootmist ning ekstratsellulaarset hapestumist (SeaHorse). (Estonian)
4 August 2022
0 references
Šiame mokslinių tyrimų projekte siūlomos įvairios strategijos, skirtos geresniam žinių apie FRBZ reguliavimą klausimui spręsti, nes ankstesni rezultatai rodo galimą teigiamą poveikį in vitro po triukšmo slopinimo ir taip galės nukreipti tyrimus į būsimus 2A tipo juosmens distrofijos gydymo būdus. Tikslai: 1) Nustatykite specifines FRZB funkcijas raumenyse, analizuodami jo nebuvimą pelės modelyje KO Frzb-/-. 2) Nustatykite FRZB in vivo slopinimo ar pernelyg didelės raiškos pasekmes zebrų žuvims. 3) Nustatykite mechanizmus, kuriuose FRZB tylėjimas dalyvauja žmogaus pirminėse kultūrose, kad nustatytų pasekmes skirtingiems ląstelių procesams. Metodika: Pelės KO Frzb-/- raumenų ir mioblastų/mioblastų mėginiai bus naudojami genų (RT-qPGR) ir baltymų (Western Blot) diferencinei ekspresijai analizuoti. Taip pat bus analizuojama raumenų struktūra (metaloproteinazės fermentinis aktyvumas), kaip raumenų regeneracinis pajėgumas in vivo po kardiotoksino vartojimo, ir atliekama histologinė analizė. Zebrinės danijos atveju Frzb genas bus nutildytas (morfolinos) ir per daug išreikštas (pGEM-T), kad būtų nustatytos reguliavimo panaikinimo pasekmės. Galiausiai LGMD2A sergantiems pacientams ir kontroliniams pacientams bus naudojamos ląstelių kultūros (mioblastai/miovamzdeliai), kurių metu dėl FRZB slopinimo bus nustatomas diferencinis kinazių, autofagijos ir mitochondrijų funkcijos reguliavimas. Siekiant kontroliuoti visų bandymų poveikį, analizuojama skirtingų genų/baltymų ekspresija, kinazės fosforilinimo modifikacija, deguonies absorbcijos santykis ir protonų gamyba bei ekstraląstelinis rūgštėjimas (SeaHorse). (Lithuanian)
4 August 2022
0 references
U ovom istraživačkom projektu predlažu se različite strategije za rješavanje boljeg poznavanja FRBZ regulacije, jer prethodni rezultati pokazuju moguće blagotvorne učinke in vitro nakon prigušivanja, a time i mogućnost usmjeravanja studija na buduće terapije u distrofiji struka tipa 2A. Ciljevi: 1) Postavite specifične funkcije FRZB u mišić analizirajući njegovu odsutnost u modelu miša KO Frzb-/-. 2) Uspostaviti posljedice prigušivanja ili pretjeranog izražavanja FRZB in vivo u zebri. 3) Ovisno o mehanizmima u kojima prigušivanje FRZB sudjeluje u ljudskim primarnim kulturama kako bi se utvrdile posljedice u različitim staničnim procesima. Metodologija: Uzorci mišića i mioblasta/mioblasta/miotube miša KO Frzb-/- koristit će se za analizu diferencijalnog ekspresije gena (RT-qPCR) i proteina (zapadna Blot). Također će se analizirati struktura mišića (enzimska aktivnost metalloproteinaze) kao regenerativni kapacitet mišića in vivo nakon primjene kardiotoksina i provesti histološka analiza. U zebrice, gen Frzb će biti ušutkan (morpholinos) i pretjerano izražen (pGEM-T) kako bi se utvrdile posljedice deregulacije. Konačno, stanične kulture (mioblasti/miocijevi) koristit će se u bolesnika s LGMD2A i kontrolama u kojima će se odrediti diferencijalna regulacija kinaza, autofagije i mitohondrijskih funkcija kao rezultat prigušivanja FRZB-a. Za kontrolu učinka svih pokusa analizira se ekspresija različitih gena/proteina, promjena fosforilacije kinaze, omjeri apsorpcije kisika te proizvodnja protona i izvanstanična zakiseljavanje (SeaHorse). (Croatian)
4 August 2022
0 references
Σε αυτό το ερευνητικό έργο προτείνονται διάφορες στρατηγικές για την καλύτερη γνώση του κανονισμού FRBZ, καθώς τα προηγούμενα αποτελέσματα δείχνουν πιθανά ευεργετικά αποτελέσματα in vitro μετά τον σιγαστήρα και, ως εκ τούτου, είναι σε θέση να κατευθύνουν τις μελέτες σε μελλοντικές θεραπείες στη δυστροφία της μέσης τύπου 2A. Στόχοι: 1) Ορίστε τις συγκεκριμένες λειτουργίες FRZB στο μυ αναλύοντας την απουσία του στο μοντέλο KO Frzb-/- του ποντικιού. 2) Καθορίστε τις συνέπειες του σιγαστήρα ή της υπερέκφρασης του FRZB in vivo στα ψάρια ζέβρας. 3) Εξαρτήστε τους μηχανισμούς στους οποίους η σιγαστήρας της FRZB συμμετέχει σε ανθρώπινες πρωτογενείς καλλιέργειες για να διαπιστώσουν τις συνέπειες σε διαφορετικές κυτταρικές διεργασίες. Μεθοδολογία: Για την ανάλυση της διαφορικής έκφρασης γονιδίων (RT-qPCR) και πρωτεϊνών (Western Blot) θα χρησιμοποιηθούν δείγματα μυών και μυοβλαστών/μυοβλαστών/μυοτούβες ποντικιού KO Frzb-/-. Η μυϊκή δομή (ενζυματική δραστηριότητα της μεταλλοπρωτεϊνάσης) ως η αναγεννητική ικανότητα του μυός in vivo μετά τη χορήγηση της καρδιοτοξίνης θα αναλυθεί και θα διεξαχθεί ιστολογική ανάλυση. Στο ζεβρόψαρο, το γονίδιο Frzb θα σιωπήσει (μορφόλινος) και θα υπερεκφρασθεί (pGEM-T) για να διαπιστωθούν οι συνέπειες της απορρύθμισης. Τέλος, οι κυτταροκαλλιέργειες (myoblasts/myotubes) θα χρησιμοποιηθούν σε ασθενείς με LGMD2A και στους οποίους θα καθοριστεί διαφορική ρύθμιση των κινασών, της αυτοφαγίας και της μιτοχονδριακής λειτουργίας ως αποτέλεσμα του σιγαστήρα FRZB. Για τον έλεγχο της επίδρασης όλων των δοκιμών, αναλύεται η έκφραση διαφορετικών γονιδίων/πρωτεϊνών, η τροποποίηση της φωσφορυλίωσης κινάσης, οι λόγοι απορρόφησης οξυγόνου και η παραγωγή πρωτονίων και η εξωκυτταρική οξίνιση (SeaHorse). (Greek)
4 August 2022
0 references
V tomto výskumnom projekte sa navrhujú rôzne stratégie na riešenie lepších znalostí o regulácii FRBZ, keďže predchádzajúce výsledky ukazujú možné pozitívne účinky in vitro po tlmení hluku, a tak môžu nasmerovať štúdie na budúce terapie v pásovej dystrofii typu 2A. Ciele: 1) Nastavte špecifické funkcie FRZB vo svale analýzou jeho neprítomnosti v myšom modeli KO Frzb-/-. 2) Stanoviť dôsledky umlčania alebo nadmernej expresie FRZB in vivo v rybách zebry. 3) Prehĺbiť mechanizmy, v ktorých sa umlčanie FRZB podieľa na ľudských primárnych kultúrach s cieľom zistiť dôsledky v rôznych bunkových procesoch. Metodika: Vzorky svalov a myoblastov/myoblastov/myotubes myší KO Frzb-/- sa použijú na analýzu diferenciálnej expresie génov (RT-qPCR) a proteínov (Western Blot). Analyzuje sa aj svalová štruktúra (enzymatická aktivita metalloproteinázy) ako regeneračná schopnosť svalov in vivo po podaní kardiotoxínu a vykoná sa histologická analýza. V prípade tresky dlhoplutvej bude gén Frzb umlčaný (morfolínos) a nadmerne vyjadrený (pGEM-T), aby sa zistili dôsledky deregulácie. Nakoniec, bunkové kultúry (myoblasty/myotubes) sa budú používať u pacientov s LGMD2A a kontroly, v ktorých sa stanoví diferenciálna regulácia kináz, autofágie a mitochondriálnej funkcie ako výsledok tlmenia FRZB. Na kontrolu účinku všetkých pokusov sa analyzuje expresia rôznych génov/proteínov, modifikácia vo fosforylácii kinázy, pomery absorpcie kyslíka a produkcia protónov a extracelulárna acidifikácia (SeaHorse). (Slovak)
4 August 2022
0 references
Tässä tutkimushankkeessa ehdotetaan erilaisia strategioita, joilla puututaan FRBZ-sääntelyn parempaan tuntemukseen, sillä aiemmat tulokset osoittavat mahdollisia hyödyllisiä vaikutuksia in vitro äänenvaimennusvaiheen jälkeen ja voivat siten ohjata tutkimukset tuleviin hoidoihin vyötärön tyypin 2A dystrofiassa. Tavoitteet: 1) Aseta FRZB: n erityiset toiminnot lihakseen analysoimalla sen puuttumista hiirimallissa KO Frzb-/-. 2) Selvitetään seuraukset, jotka aiheutuvat FRZB in vivo -bakteerin äänenvaimennus- tai yliilmaisusta seeprakalassa. 3) Syvennetään mekanismeja, joissa FRZB:n äänenvaimennus osallistuu ihmisen primaariviljelmiin, jotta voidaan määrittää seuraukset eri soluprosesseissa. Menetelmät: Hiiren KO Frzb-/- – lihasten ja myoblastien/myoblastien/myotubejen näytteitä käytetään geenien (RT-qPCR) ja proteiineja (Western Blot) koskevan eron analysoimiseen. Lihasrakenne (metalloproteinaasin entsymaattinen aktiivisuus) lihaksen regeneratiivisena kapasiteettina in vivo kardiotoksiinin antamisen jälkeen analysoidaan ja histologinen analyysi suoritetaan. Seeprakalassa Frzb-geeni hiljennetään (morfolinos) ja se ilmaistaan liikaa (pGEM-T) sääntelyn purkamisen seurausten selvittämiseksi. Lisäksi LGMD2A-potilailla käytetään soluviljelmiä (myoblasteja/myotubeja) ja kontrolleja, joissa kinaasien, autofagian ja mitokondrioiden toiminnan erosäätely määritetään FRZB-äänenvaimennusvaiheen seurauksena. Kaikkien kokeiden vaikutuksen hallitsemiseksi on analysoitava eri geenien/proteiinien ilmentymät, kinaasifosforylaation muutokset, hapen imeytymissuhteet ja protonin tuotanto sekä solunulkoinen happamoituminen (SeaHorse). (Finnish)
4 August 2022
0 references
W tym projekcie badawczym proponuje się różne strategie w celu zajęcia się większą wiedzą na temat regulacji FRBZ, ponieważ poprzednie wyniki pokazują możliwe korzystne skutki in vitro po wyciszeniu, a tym samym być w stanie skierować badania na przyszłe terapie dystrofii talii typu 2A. Cele: 1) Ustaw specyficzne funkcje FRZB w mięśniu analizując jego brak w modelu myszy KO Frzb-/-. 2) Ustalenie konsekwencji wyciszenia lub nadekspresji FRZB in vivo u ryb zebry. 3) Pogłębić mechanizmy, w których wyciszanie FRZB uczestniczy w ludzkich podstawowych kulturach w celu ustalenia konsekwencji w różnych procesach komórkowych. Metodyka: Próbki mięśni i mioblastów/mioblastów/miotubes myszy KO Frzb-/- zostaną wykorzystane do analizy różnicowej ekspresji genów (RT-qPCR) i białek (Western Blot). Przeanalizowana zostanie również struktura mięśni (enzymatyczna aktywność metaloproteinazy) jako zdolność regeneracyjna mięśni in vivo po podaniu kardiotoksyny i przeprowadzona zostanie analiza histologiczna. U danio pręgowanego gen Frzb zostanie wyciszony (morfoliny) i nadekspresowany (pGEM-T) w celu ustalenia konsekwencji deregulacji. Wreszcie, kultury komórkowe (mioblasty/miotubes) będą stosowane u pacjentów z LGMD2A i kontrole, w których w wyniku wyciszenia FRZB zostanie określona dyferencyjna regulacja kinaz, autofagii i mitochondrialnej funkcji. W celu kontroli wpływu wszystkich badań należy przeanalizować ekspresję różnych genów/białek, modyfikację fosforylacji kinazy, współczynniki absorpcji tlenu i produkcję protonów oraz zakwaszanie pozakomórkowe (SeaHorse). (Polish)
4 August 2022
0 references
Ebben a kutatási projektben különböző stratégiákat javasolnak az FRBZ szabályozás jobb ismerete érdekében, mivel a korábbi eredmények a hangtompítást követően in vitro lehetséges kedvező hatásokat mutatnak, és így a vizsgálatokat a 2A típusú derékdisztrófia jövőbeli terápiáira irányíthatják. Célkitűzések: 1) Állítsa be az FRZB specifikus funkcióit az izomban, elemezve annak hiányát a KO Frzb-/- egérmodellben. 2) Az FRZB in vivo hangtompításának vagy túlkifejezésének következményeinek megállapítása a zebra halakban. 3) mélyítse el azokat a mechanizmusokat, amelyekben az FRZB elhallgattatása részt vesz az emberi elsődleges kultúrákban, hogy megállapítsa a különböző sejtfolyamatok következményeit. Módszertan: A gének (RT-qPCR) és a fehérjék (Western Blot) differenciálexpressziójának elemzésére az izom- és mioblasztok/mioblasztok/mioblasztok/miotubok mintáit fogják használni. Az izomszerkezetet (a metalloproteináz enzimatikus aktivitását) mint az izom regeneratív képességét in vivo kardiotoxin beadása után szintén elemezni kell és szövettani elemzést kell végezni. A zebradániában a Frzb gént elhallgattatják (morfolinok) és túl expresszálják (pGEM-T), hogy megállapítsák a dereguláció következményeit. Végül, sejttenyészeteket (myoblasts/myotubes) használnak LGMD2A betegeknél és kontrolloknál, amelyekben az FRZB hangtompítás eredményeként meghatározzák a kinázok, az autophagia és a mitokondriális funkció differenciálszabályozását. Az összes vizsgálat hatásának ellenőrzéséhez elemezni kell a különböző gének/fehérjék expresszióját, a kináz-foszforiláció módosítását, az oxigénabszorpciós arányokat, valamint a protontermelést és az extracelluláris savasodást (SeaHorse). (Hungarian)
4 August 2022
0 references
V tomto výzkumném projektu se navrhují různé strategie, které se zabývají lepšími znalostmi regulace FRBZ, neboť předchozí výsledky ukazují možné příznivé účinky in vitro po umlčení, a tak mohou být studie směrovány do budoucích terapií u dystrofie pasu typu 2A. Cíle: 1) Nastavte specifické funkce FRZB ve svalu analýzou jeho nepřítomnosti v modelu myši KO Frzb-/-. 2) Stanovení důsledků umlčení nebo nadměrné exprese FRZB in vivo u zebrových ryb. 3) Prohloubit mechanismy, v nichž se umlčování FRZB podílí na lidských primárních kulturách, aby se zjistily důsledky v různých buněčných procesech. Metodika: Vzorky svalů a myoblastů/myoblastů/myotrubic myší KO Frzb-/- budou použity k analýze diferenciální exprese genů (RT-qPCR) a proteinů (Western Blot). Rovněž bude analyzována svalová struktura (enzymatická aktivita metaloproteinázy) jako regenerační kapacita svalu in vivo po podání kardiotoxinu a provedena histologická analýza. U zebrafish bude gen Frzb umlčen (morpholinos) a převyjádřen (pGEM-T), aby se zjistily důsledky deregulace. Konečně, buněčné kultury (myoblasty/myotuby) budou použity u pacientů s LGMD2A a kontroly, ve kterých bude stanovena diferenciální regulace kináz, autofagie a mitochondriální funkce v důsledku FRZB umlčení. Pro kontrolu účinku všech zkoušek se analyzuje exprese různých genů/proteinů, modifikace fosforylace kinázy, poměry absorpce kyslíku a produkce protonu a extracelulární acidifikace (SeaHorse). (Czech)
4 August 2022
0 references
Šajā pētniecības projektā tiek ierosinātas dažādas stratēģijas, lai pievērstos labākām zināšanām par FRBZ regulējumu, jo iepriekšējie rezultāti liecina par iespējamu labvēlīgu ietekmi in vitro pēc trokšņa slāpēšanas un tādējādi spēj virzīt pētījumus uz turpmāko terapiju vidukļa distrofijas 2.A tipa gadījumā. Mērķi: 1) Iestatiet FRZB īpašās funkcijas muskulī, analizējot tās neesamību peles modelī KO Frzb-/-. 2) Noteikt sekas, ko rada FRZB trokšņa slāpēšana vai pārmērīga ekspresija zebras zivīs in vivo. 3) Atkarīgi no mehānismiem, kuros FRZB klusināšana piedalās cilvēka primārajās kultūrās, lai noteiktu sekas dažādos šūnu procesos. Metodika: Lai analizētu gēnu diferenciālo ekspresiju (RT-qPCR) un proteīnus (Western Blot), izmantos peles KO Frzb-/- muskuļu un mioblastu/mioblastu/miotobu paraugus. Tiks analizēta arī muskuļu struktūra (metaloproteināzes enzīmātiskā aktivitāte) kā muskuļu reģeneratīvā spēja in vivo pēc kardiotoksīna ievadīšanas un tiks veikta histoloģiskā analīze. Zebras zivīs Frzb gēns tiks apklusināts (morfolīns) un pārmērīgi izteikts (pGEM-T), lai noteiktu ierobežojumu atcelšanas sekas. Visbeidzot, LGMD2A pacientiem tiks izmantotas šūnu kultūras (mioblasti/miotubes), un kontroles, kurās FRZB klusināšanas rezultātā tiks noteikta kināžu, autofāgijas un mitohondriju funkcijas diferenciāla regulēšana. Lai kontrolētu visu izmēģinājumu ietekmi, analizē dažādu gēnu/proteīnu ekspresiju, kināzes fosforilācijas modifikāciju, skābekļa absorbcijas koeficientus un protonu veidošanos un ekstracelulāro paskābināšanos (SeaHorse). (Latvian)
4 August 2022
0 references
Sa tionscadal taighde seo moltar straitéisí éagsúla chun aghaidh a thabhairt ar eolas níos fearr ar rialachán FRBZ, mar léiríonn torthaí roimhe seo éifeachtaí tairbhiúla féideartha in vitro tar éis tosta, agus dá bhrí sin a bheith in ann na staidéir a threorú chuig teiripí amach anseo i gcineál 2A dystrophy waist. Cuspóirí: 1) Socraigh feidhmeanna sonracha FRZB sa mhatán trí anailís a dhéanamh ar a neamhláithreacht i samhail luch KO Frzb-/-. 2) Bunaigh na hiarmhairtí a bhaineann le tosta nó ró-léiriú FRZB in vivo san iasc séabra. 3) Doimhneofar na meicníochtaí ina nglacann tosta FRZB páirt i gcultúir phríomhúla daonna chun na hiarmhairtí i bpróisis cille éagsúla a bhunú. Modheolaíocht: Úsáidfear samplaí de muscle agus myoblasts/myoblasts/myotubes luch KO Frzb-/- chun anailís a dhéanamh ar léiriú difreálach géinte (RT-qPCR) agus próitéiní (Blot Western). Déanfar anailís freisin ar struchtúr muscle (gníomhaíocht einsímeach metalloproteinase) mar chumas athghiniúnach muscle in vivo tar éis cardiotoxin a riaradh agus anailís histeolaíoch a dhéanamh. I zebrafish, beidh géine Frzb tosta (morpholinos) agus ró-léiriú (pGEM-T) chun iarmhairtí dírialála a shuíomh. Ar deireadh, bainfear úsáid as cultúir chille (myoblasts/myotubes) in othair agus rialuithe LGMD2A ina gcinnfear rialú difreálach kinases, autophagia agus feidhm mitochondrial mar thoradh ar thostú FRZB. Chun éifeacht na dtrialacha go léir a rialú, déanfar anailís ar léiriú géinte/próitéiní éagsúla, modhnú ar fhosfarúchán craicinn, cóimheasa ionsúcháin ocsaigine agus táirgeadh prótón agus aigéadú eischeallach (SeaHorse). (Irish)
4 August 2022
0 references
V tem raziskovalnem projektu so predlagane različne strategije za boljše poznavanje ureditve FRBZ, saj prejšnji rezultati kažejo možne koristne učinke in vitro po dušenju zvoka in tako lahko študije usmerijo v prihodnje terapije z distrofijo pasu tipa 2A. Cilji: 1) Nastavite specifične funkcije FRZB v mišici z analizo njegove odsotnosti v modelu miši KO Frzb-/-. 2) Uvedite posledice utišanja ali prekomernega izražanja FRZB in vivo v zebri. 3) Odkrijte mehanizme, v katerih utišanje FRZB sodeluje v človeških primarnih kulturah, da bi ugotovili posledice v različnih celičnih procesih. Metodologija: Vzorci mišic in mioblastov/mioblastov/miocev/miocev miši KO Frzb-/- se bodo uporabili za analizo diferencialne ekspresije genov (RT-qPCR) in proteinov (Western Blot). Analizirali bomo tudi mišično strukturo (encimatsko aktivnost metaloproteinaze) kot regenerativno sposobnost mišic in vivo po dajanju kardiotoksina in izvedli histološko analizo. Pri cebricah bo gen Frzb utišan (morfolinos) in pretiran (pGEM-T), da se ugotovijo posledice deregulacije. Na koncu se bodo pri bolnikih z LGMD2A uporabljale celične kulture (mioblasti/miocev) in pri kontrolah, pri katerih se bo zaradi dušenja FRZB določila diferencialna regulacija kinaz, avtofagije in mitohondrijske funkcije. Za nadzor učinka vseh preskušanj se analizirajo izražanje različnih genov/beljakovine, sprememba fosforilacije kinaze, razmerja absorpcije kisika in proizvodnja protona ter zunajcelično zakisljevanje (SeaHorse). (Slovenian)
4 August 2022
0 references
В този изследователски проект се предлагат различни стратегии за справяне с по-доброто познаване на регулирането на FRBZ, тъй като предишните резултати показват възможни благоприятни ефекти in vitro след шумозаглушаване и по този начин могат да насочват проучванията към бъдещи терапии в талията дистрофия тип 2А. Цели: 1) Задайте специфичните функции на FRZB в мускула, като анализирате отсъствието му в модел на мишката KO Frzb-/-. 2) Установяване на последиците от шумозаглушаване или свръхизразяване на FRZB in vivo в рибата зебра. 3) Задълбочете механизмите, в които шумозаглушаването на FRZB участва в човешките първични култури, за да установи последиците в различните клетъчни процеси. Методология: Проби от мускули и миобласти/миобласти/миотуби на мишки KO Frzb-/- ще се използват за анализ на диференциалната експресия на гените (RT-qPCR) и протеините (Western Blot). Мускулната структура (ензиматична активност на металопротеиназата) като регенеративен капацитет на мускула in vivo след прилагане на кардиотоксин също ще бъде анализирана и ще се извърши хистологичен анализ. При зеброфините генът Frzb ще бъде заглушен (морфолино) и свръхекспресиран (pGEM-T), за да се установят последиците от дерегулацията. Накрая, при пациенти с LGMD2A ще се използват клетъчни култури (миобласти/миотуби) и контроли, при които диференциалното регулиране на киназите, автофагията и митохондриалната функция ще бъде определено в резултат на шумозаглушаването на FRZB. За контрола на ефекта от всички изпитвания се анализират експресията на различни гени/протеини, модификацията в киназа фосфорилация, коефициентите на абсорбция на кислород и производството на протон и извънклетъчната киселинност (SeaHorse). (Bulgarian)
4 August 2022
0 references
F’dan il-proġett ta’ riċerka qed jiġu proposti strateġiji differenti biex jiġi indirizzat għarfien aħjar tar-regolament tal-FRBZ, peress li r-riżultati preċedenti juru effetti ta’ benefiċċju possibbli in vitro wara s-sajlenser, u b’hekk ikunu jistgħu jidderieġu l-istudji lejn terapiji futuri fid-distrofija tal-qadd tat-tip 2A. Għanijiet: 1) Issettja l-funzjonijiet speċifiċi ta ‘FRZB fil-muskolu billi tanalizza l-assenza tiegħu fil-mudell tal-ġurdien KO Frzb-/-. 2) Tistabbilixxi l-konsegwenzi ta ‘sajlensers jew espressjoni żejda ta’ FRZB in vivo fil-ħut żebra. 3) Iddetermina l-mekkaniżmi li fihom is-sajlenser tal-FRZB jipparteċipa f’kulturi primarji tal-bniedem biex jiġu stabbiliti l-konsegwenzi fi proċessi differenti taċ-ċelloli. Metodoloġija: Kampjuni ta’ muskolu u mijoblasti/mijoblasti/mijokoli tal-ġurdien KO Frzb-/- se jintużaw biex tiġi analizzata l-espressjoni differenzjali ta’ ġeni (RT-qPCR) u proteini (Western Blot). L-istruttura tal-muskoli (attività enzimatika ta’ metalloproteinase) bħala l-kapaċità riġenerattiva tal-muskoli in vivo wara l-għoti ta’ kardjotossina se tiġi analizzata wkoll u għandha ssir analiżi istoloġika. Fiż-żebra, il-ġene Frzb se jiġi msikket (morpholinos) u espress iżżejjed (pGEM-T) biex jiġu stabbiliti l-konsegwenzi tad-deregolamentazzjoni. Fl-aħħar nett, il-kulturi taċ-ċelloli (myoblasts/miotubes) se jintużaw f’pazjenti b’LGMD2A u kontrolli li fihom ir-regolazzjoni differenzjali tal-kinażi, l-awtofaġja u l-funzjoni mitokondrijali se tiġi stabbilita bħala riżultat tas-silenzjar ta’ FRZB. Għall-kontroll tal-effett tal-provi kollha, l-espressjoni ta’ ġeni/proteini differenti, il-modifika fil-fosforilazzjoni taċ-kinażi, il-proporzjonijiet tal-assorbiment tal-ossiġenu u l-produzzjoni tal-protoni u l-aċidifikazzjoni ekstraċellulari (SeaHorse) għandhom jiġu analizzati. (Maltese)
4 August 2022
0 references
Neste projeto de pesquisa, diferentes estratégias são propostas para abordar um melhor conhecimento da regulação da FRBZ, uma vez que resultados prévios mostram possíveis efeitos benéficos in vitro após o silenciamento, podendo assim direcionar os estudos para futuras terapias na distrofia da cintura tipo 2A. Objetivos: 1) Definir as funções específicas do FRZB no músculo, analisando sua ausência no modelo KO Frzb-/- do ratinho. 2) Estabelecer as consequências do silenciamento ou superexpressão do FRZB in vivo no peixe zebra. 3) Aprofundar os mecanismos em que o silenciamento da FRZB participa de culturas primárias humanas para estabelecer as consequências em diferentes processos telemóveis. Metodologia: Amostras de músculo e mioblastos/mioblastos/myotubes de rato KO Frzb-/- serão usadas para analisar a expressão diferencial de genes (RT-qPCR) e proteínas (Western Blot). A estrutura muscular (atividade enzimática da metaloproteinase) como a capacidade regenerativa do músculo in vivo após a administração de cardiotoxina também será analisada e análise histológica. No peixe-zebra, o gene Frzb será silenciado (morfolinos) e sobreexpresso (pGEM-T) para estabelecer as consequências da desregulamentação. Finalmente, as culturas telemóveis (mioblastos/myotubes) serão usadas em pacientes com LGMD2A e controles nos quais a regulação diferencial das quinases, autofagia e função mitocondrial será determinada como resultado do silenciamento FRZB. Para controlar o efeito de todos os ensaios, deve analisar-se a expressão de diferentes genes/proteínas, a modificação da fosforilação da quinase, as razões de absorção de oxigénio e a produção de prótons e a acidificação extracelular (SeaHorse). (Portuguese)
4 August 2022
0 references
I dette forskningsprojekt foreslås der forskellige strategier for at tage fat på et bedre kendskab til FRBZ-forordningen, da tidligere resultater viser mulige gavnlige virkninger in vitro efter lyddæmpning og dermed kan dirigere undersøgelserne til fremtidige behandlinger i taljedystrofi type 2A. Målsætninger: 1) Indstil FRZB's specifikke funktioner i musklen ved at analysere fraværet i musemodellen KO Frzb-/-. 2) Etablere konsekvenserne af at dæmpe eller overekspression af FRZB in vivo i zebra fisk. 3) Uddyb mekanismerne, hvor Hæmningen af FRZB deltager i menneskelige primære kulturer for at fastslå konsekvenserne i forskellige celleprocesser. Metode: Prøver af muskel og myoblaster/myoblaster/myotubes af mus KO Frzb-/- vil blive anvendt til at analysere differentialekspressionen af gener (RT-qPCR) og proteiner (Western Blot). Muskelstrukturen (metalloproteinases enzymatiske aktivitet) som regenerativ kapacitet af muskel in vivo efter administration af kardiotoxin vil også blive analyseret og histologisk analyse udført. I zebrafisk vil Frzb-genet blive tavst (morfolinos) og overudtrykt (pGEM-T) for at fastslå konsekvenserne af deregulering. Endelig vil cellekulturer (myoblaster/myotubes) blive anvendt til LGMD2A patienter og kontroller, hvor differentieret regulering af kinaser, autofagi og mitokondriefunktion vil blive bestemt som følge af FRZB-hæmning. Til kontrol af virkningen af alle forsøg analyseres ekspressionen af forskellige gener/proteiner, modifikation i kinasephosphorylation, oxygenabsorptionsforhold og protonproduktion og ekstracellulær forsuring (SeaHorse). (Danish)
4 August 2022
0 references
În acest proiect de cercetare sunt propuse diferite strategii pentru a aborda o mai bună cunoaștere a regulamentului FRBZ, deoarece rezultatele anterioare arată posibile efecte benefice in vitro după reducerea la tăcere și, astfel, să fie în măsură să direcționeze studiile către terapiile viitoare în distrofie de talie de tip 2A. Obiective: 1) Setați funcțiile specifice ale FRZB în mușchi prin analizarea absenței acestuia în modelul de șoarece KO Frzb-/-. 2) Stabilirea consecințelor reducerii la tăcere sau a exprimării excesive a FRZB in vivo la peștele zebră. 3) Aprofunda mecanismele în care reducerea la tăcere a FRZB participă la culturile primare umane pentru a stabili consecințele în diferite procese celulare. Metodologie: Probele de mușchi și mioblaste/mioblaste/miotuburi de șoarece KO Frzb-/- vor fi utilizate pentru a analiza expresia diferențială a genelor (RT-qPCR) și a proteinelor (Blocul de Vest). Structura musculară (activitatea enzimatică a metaloproteinazei) ca capacitate regenerativă a mușchiului in vivo după administrarea cardiotoxinei va fi, de asemenea, analizată și se va efectua analiza histologică. În peștele-zebră, gena Frzb va fi redusă la tăcere (morfolinos) și supraexprimată (pGEM-T) pentru a stabili consecințele dereglementării. În cele din urmă, culturile celulare (mioblaste/miotuburi) vor fi utilizate la pacienții cu LGMD2A și la martorii în care reglarea diferențială a kinazelor, autofagiei și funcției mitocondriale va fi determinată ca urmare a amortizării zgomotului cu FRZB. Pentru controlul efectului tuturor studiilor, se analizează expresia diferitelor gene/proteine, modificarea fosforilării kinazei, raporturile de absorbție a oxigenului și producția de protoni și acidificarea extracelulară (SeaHorse). (Romanian)
4 August 2022
0 references
I detta forskningsprojekt föreslås olika strategier för att ta itu med en bättre kunskap om FRBZ-reglering, eftersom tidigare resultat visar möjliga positiva effekter in vitro efter ljuddämpning, och därmed kunna styra studierna till framtida behandlingar i midjedystrofi typ 2A. Mål: 1) Ställ in de specifika funktionerna för FRZB i muskeln genom att analysera dess frånvaro i musmodell KO Frzb-/-. 2) Fastställ konsekvenserna av ljuddämpande eller överuttryck av FRZB in vivo i zebrafisken. 3) Fördjupa mekanismerna där nedstängningen av FRZB deltar i mänskliga primärkulturer för att fastställa konsekvenserna i olika cellprocesser. Metod: Prover av muskel och myoblaster/myoblaster/myotuber från mus KO Frzb-/- kommer att användas för att analysera differentialuttrycket av gener (RT-qPCR) och proteiner (Western Blot). Muskelstrukturen (enzymisk aktivitet hos metalloproteinas) som muskelns regenerativa kapacitet in vivo efter administrering av kardiotoxin kommer också att analyseras och histologisk analys utföras. I sebrafisk kommer Frzb-genen att tystas (morfoliiner) och överuttryckas (pGEM-T) för att fastställa konsekvenserna av avreglering. Slutligen kommer cellkulturer (myoblaster/myotuber) att användas till LGMD2A-patienter och kontroller där differentialreglering av kinaser, autofagi och mitokondriell funktion bestäms som ett resultat av FRZB-ljuddämpning. För kontroll av effekten av alla försök ska uttrycken av olika gener/proteiner, modifiering av kinasfosforylering, syreabsorptionskvoter och protonproduktion och extracellulär försurning (SeaHorse) analyseras. (Swedish)
4 August 2022
0 references
Donostia/San Sebastián
0 references
20 December 2023
0 references
Identifiers
PI16_01325
0 references