ANIMAL MODELS FOR RETINAL DYSTROPHY: STRATEGIES OF GENOMIC EDITION, PHENOTYPING AND NANOTHERAPY (Q3140799)
Jump to navigation
Jump to search
Project Q3140799 in Spain
| Language | Label | Description | Also known as |
|---|---|---|---|
| English | ANIMAL MODELS FOR RETINAL DYSTROPHY: STRATEGIES OF GENOMIC EDITION, PHENOTYPING AND NANOTHERAPY |
Project Q3140799 in Spain |
Statements
65,884.5 Euro
0 references
121,000.0 Euro
0 references
54.45 percent
0 references
30 December 2016
0 references
31 December 2020
0 references
UNIVERSIDAD DE BARCELONA
0 references
8028
0 references
LA DISFUNCION Y MUERTE DE LOS FOTORECEPTORES CONSTITUYE LA CAUSA PRINCIPAL DE PERDIDA DE VISION EN LAS DISTROFIAS DE RETINA HEREDITARIAS (IRDS), UN GRUPO DE ENFERMEDADES DE LA RETINA, DE FENOTIPO SEVERO Y GENETICAMENTE MUY HETEROGENEO. TRAS MAS DE 30 AÑOS DE INVESTIGACION, SE CONOCEN CERCA DE 300 GENES CAUSATIVOS PERO TODAVIA FALTA UN CORPUS DE CONOCIMIENTO QUE CORRELACIONE DE FORMA INTEGRADA LOS GENES IRD Y SUS MUTACIONES (GENOTIPO) CON SU FUNCION FISIOLOGICA EN LA SALUD Y SU DISFUNCION EN LA ENFERMEDAD (FENOTIPO). POR TANTO, ADEMAS DE LA IDENTIFICACION DE NUEVOS GENES, ES CRUCIAL LA CARACTERIZACION FUNCIONAL DE LAS VIAS METABOLICAS Y DE SEÑALIZACION QUE SE VEN ALTERADAS POR MUTACIONES PATOLOGICAS EN ESTOS GENES CAUSATIVOS, CON EL FIN DE DISEÑAR ESTRATEGIAS TERAPEUTICAS MAS EFICIENTES QUE LOGREN DETENER EL PROGRESO DE LA NEURODEGENERACION RETINIANA, O INCLUSO, CURAR LA ENFERMEDAD. NUESTRO OBJETIVO ES EL ESTUDIO FUNCIONAL DE CERKL, NR2E3, Y ATXN3 ¿GENES IMPLICADOS EN IRDS Y REPRESENTATIVOS DE VIAS CELULARES RELEVANTES EN RETINA¿ A PARTIR DEL DESARROLLO Y CARACTERIZACION DE MODELOS ANIMALES EN RATON Y PEZ CEBRA. ESTOS MODELOS HAN SIDO YA GENERADOS EN NUESTRO GRUPO, BIEN MEDIANTE LA NOVEDOSA ESTRATEGIA DE EDICION GENOMICA (CRISPRCAS9) PARA CERKL (KNOCKOUT) Y NR2E3 (KNOCKIN), BIEN POR KNOCKDOWN MEDIANTE MORFOLINOS (ATXN3), PERO FALTA EL ANALISIS FENOTIPICO A NIVELES BIOQUIMICO, MORFOLOGICO Y FISIOLOGICO. PARA ELLO, UTILIZAREMOS INNOVADORAS TECNICAS (OPTIMIZADAS EN NUESTROS LABORATORIOS) COMO: CULTIVOS PRIMARIOS DE FOTORECEPTORES Y DE EXPLANTES DE RETINA DE RATON ¿EN CONDICIONES NORMALES Y BAJO ESTRES¿, CO-TRANSFECCION DE FACTORES DE TRANSCRIPCION Y PROMOTORES DIANA, CHIP-SEQ, CARACTERIZACION DE INTERACTOMAS MEDIANTE INMUNOPRECIPITACION ACOPLADA A MALDI-TOF, TECNICAS DE TRANSGENESIS TRANSITORIA IN VIVO EN RETINA DE RATON MEDIANTE MICROINYECCION SUBRETINAL, SEGUIDAS DE UN DETALLADO ANALISIS HISTOLOGICO E INMUNODETECCION POR MICROSCOPIA CONFOCAL. POR ULTIMO, Y A TRAVES DE COLABORACION CON UN GRUPO DE BIONANOTECNOLOGIA DEL DPT. OF PHYSICS (UNIVERSITY OF OXFORD), EXPLORAREMOS COMO "PRUEBA DE PRINCIPIO" LA VIABILIDAD DE UN POSIBLE TRATAMIENTO POR TERAPIA GENICA CON NANOPARTICULAS ENVUELTAS EN ADN (SMART NANOSYSTEM) EN EL MODELO CERKL-/- GENERADO POR CRISPR/CAS9, MEDIANTE EL ESTUDIO DE LA EFICIENCIA EN LA ENTREGA DEL GEN EN FOTORECEPTORES COMPARADA CON OTRAS ESTRATEGIAS, COMO MICROINYECCION SUBRETINAL SEGUIDA DE ELECTROPORACION O, EN UN FUTURO, VIRUS ADENO-ASOCIADOS, LA TERAPIA GENICA ACTUALMENTE UTILIZADA EN RETINA. _x000D_ RESULTADOS ESPERADOS: PROFUNDIZAREMOS EN LAS REDES METABOLICAS Y DE SEÑALIZACION ALTERADAS EN EL PROCESO DE NEURODEGENERACION DE LA RETINA DETECTANDO, BIEN AQUELLAS DIANAS DE INTERES TERAPEUTICO, O BIEN INDICADORES MOLECULARES FIABLES DE LA PROGRESION DEL FENOTIPO. ADEMAS, EXPLORAREMOS LA VIABILIDAD DE UNA POSIBLE TERAPIA/RESCATE GENETICO POR NANOPARTICULAS ENVUELTAS CON ADN, MIDIENDO: I) EFICIENCIA DE ENTREGA DEL GEN VERSUS OTRAS ESTRATEGIAS; II) SUPERVIVENCIA/APOPTOSIS DE LOS FOTORECEPTORES Y III) EXPRESION DE GENES RELEVANTES PARA LA FUNCION DE CONOS Y BASTONES. (Spanish)
0 references
DYSFUNCTION AND DEATH OF PHOTORECEPTORS IS THE MAIN CAUSE OF LOSS OF VISION IN HEREDITARY RETINAL DYSTROPHY (IRDS), A GROUP OF DISEASES OF THE RETINA, SEVERE PHENOTYPE AND VERY HETEROGENEOUS. AFTER MORE THAN 30 YEARS OF RESEARCH, NEARLY 300 CAUSATIVE GENES ARE KNOWN BUT THERE IS STILL A CORPUS OF KNOWLEDGE THAT CORRELATES IN AN INTEGRATED WAY THE IRD GENES AND THEIR MUTATIONS (GENOTYPE) WITH THEIR PHYSIOLOGICAL FUNCTION IN HEALTH AND THEIR DYSFUNCTION IN THE DISEASE (PHENOTYPE). THEREFORE, IN ADDITION TO THE IDENTIFICATION OF NEW GENES, IT IS CRUCIAL THE FUNCTIONAL CHARACTERISATION OF THE METABOLIC AND SIGNAGE PATHWAYS THAT ARE ALTERED BY PATHOLOGICAL MUTATIONS IN THESE CAUSATIVE GENES, IN ORDER TO DESIGN MORE EFFICIENT THERAPEUTIC STRATEGIES THAT CAN STOP THE PROGRESS OF RETINAL NEURODEGENERATION, OR EVEN CURE THE DISEASE. OUR OBJECTIVE IS THE FUNCTIONAL STUDY OF CERKL, NR2E3, AND ATXN3, ARE THE GENES INVOLVED IN IRDS AND REPRESENTATIVE OF RELEVANT CELLULAR PATHWAYS IN RETINA FROM THE DEVELOPMENT AND CHARACTERISATION OF ANIMAL MODELS IN RATON AND ZEBRAFISH. THESE MODELS HAVE ALREADY BEEN GENERATED IN OUR GROUP, EITHER THROUGH THE NOVEL GENOMIC EDITION STRATEGY (CRISPRCAS9) FOR CERKL (KNOCKOUT) AND NR2E3 (KNOCKIN), OR BY KNOCKDOWN USING MORFOLINS (ATXN3), BUT THERE IS NO PHENOTIPIC ANALYSIS AT BIOCHEMICAL, MORFOLOGICAL AND PHYSIOLOGICAL LEVELS. TO DO THIS, WE WILL USE INNOVATIVE TECHNIQUES (OPTIMISED IN OUR LABORATORIES) SUCH AS: PRIMARY CULTURES OF PHOTORECEPTORS AND RATON RETINAL EXPLANTS, UNDER NORMAL AND STRESSFUL CONDITIONS, CO-TRANSFECCION OF TRANSCRIPTION FACTORS AND PROMOTERS DIANA, CHIP-SEQ, CHARACTERISATION OF INTERACTIONS BY INMUNOPRECIPITATION COUPLED TO MALDI-TOF, TRANSGENES IN VIVO TRANSGENESIS TECHNIQUES IN RATON RETINA USING SUBRETINAL MICROINYECTION, FOLLOWED BY A DETAILED HISTOLOGIC ANALYSIS AND INMUNODETECTION BY CONFOCAL MICROSCOPY. FINALLY, AND THROUGH COLLABORATION WITH A GROUP OF BIONANOTECHNOLOGY OF THE DPT. OF PHYSICS (UNIVERSITY OF OXFORD), WE WILL EXPLORE AS A “PROOF OF PRINCIPLE” THE FEASIBILITY OF A POSSIBLE TREATMENT BY GENIC THERAPY WITH NANOPARTICULATES WRAPPED IN DNA (SMART NANOSYSTEM) IN THE CERKL-/- MODEL GENERATED BY CRISPR/CAS9, BY STUDYING THE EFFICIENCY OF GENE DELIVERY IN PHOTORECEPTORS COMPARED WITH OTHER STRATEGIES, SUCH AS SUBRETINAL MICROINYECTION FOLLOWED BY ELECTROPORATION OR, IN THE FUTURE, ADENO-ASSOCIATED VIRUSES, THE GENIC THERAPY CURRENTLY USED IN RETINA. _x000D_ Expected Results: WE WILL DEEPEN THE METABOLIC AND SIGNALING NETWORKS ALTERED IN THE PROCESS OF NEURODEGENERATION OF THE RETINA DETECTING, EITHER THOSE TARGETS OF THERAPEUTIC INTEREST, OR RELIABLE MOLECULAR INDICATORS OF THE PROGRESSION OF THE PHENOTYPE. IN ADDITION, WE WILL EXPLORE THE FEASIBILITY OF A POSSIBLE GENETIC THERAPY/RESCUE BY NANOPARTICULAES WRAPPED WITH DNA, MEASURING: GENE DELIVERY EFFICIENCY VERSUS OTHER STRATEGIES; SURVIVAL/APOPTOSIS OF PHOTORECEPTORS AND III) EXPRESSION OF GENES RELEVANT TO THE FUNCTION OF CONES AND STICKS. (English)
12 October 2021
0.0928873261659384
0 references
LA DYSFONCTION ET LA MORT DES PHOTORÉCEPTEURS SONT LA PRINCIPALE CAUSE DE PERTE DE VISION DANS LA DYSTROPHIE RÉTINIENNE HÉRÉDITAIRE (IRD), UN GROUPE DE MALADIES DE LA RÉTINE, UN PHÉNOTYPE SÉVÈRE ET TRÈS HÉTÉROGÈNE. APRÈS PLUS DE 30 ANS DE RECHERCHE, PRÈS DE 300 GÈNES CAUSALS SONT CONNUS, MAIS IL EXISTE ENCORE UN CORPUS DE CONNAISSANCES QUI CORRÉLE DE MANIÈRE INTÉGRÉE LES GÈNES IRD ET LEURS MUTATIONS (GÉNOTYPE) AVEC LEUR FONCTION PHYSIOLOGIQUE EN SANTÉ ET LEUR DYSFONCTION DANS LA MALADIE (PHÉNOTYPE). PAR CONSÉQUENT, EN PLUS DE L’IDENTIFICATION DE NOUVEAUX GÈNES, IL EST CRUCIAL DE CARACTÉRISER LES VOIES MÉTABOLIQUES ET DE SIGNALISATION QUI SONT ALTÉRÉES PAR DES MUTATIONS PATHOLOGIQUES DANS CES GÈNES CAUSANT, AFIN DE CONCEVOIR DES STRATÉGIES THÉRAPEUTIQUES PLUS EFFICACES QUI PEUVENT ARRÊTER LE PROGRÈS DE LA NEURODÉGÉNÉRESCENCE RÉTINIENNE, VOIRE GUÉRIR LA MALADIE. NOTRE OBJECTIF EST L’ÉTUDE FONCTIONNELLE DE CERKL, NR2E3, ET ATXN3, SONT LES GÈNES IMPLIQUÉS DANS LES DIR ET REPRÉSENTATIFS DES VOIES CELLULAIRES PERTINENTES DANS LA RÉTINE À PARTIR DU DÉVELOPPEMENT ET DE LA CARACTÉRISATION DE MODÈLES ANIMAUX CHEZ RATON ET LE POISSON ZÈBRE. CES MODÈLES ONT DÉJÀ ÉTÉ GÉNÉRÉS DANS NOTRE GROUPE, SOIT PAR LE BIAIS DE LA NOUVELLE STRATÉGIE D’ÉDITION GÉNOMIQUE (CRISPRCAS9) POUR CERKL (KNOCKOUT) ET NR2E3 (KNOCKIN), SOIT PAR LE BIAIS DE MORFOLINS (ATXN3), MAIS IL N’Y A PAS D’ANALYSE PHENOTIPIC AUX NIVEAUX BIOCHIMIQUE, MORFOLOGIQUE ET PHYSIOLOGIQUE. POUR CE FAIRE, NOUS UTILISERONS DES TECHNIQUES INNOVANTES (OPTIMISÉES DANS NOS LABORATOIRES) TELLES QUE: CULTURES PRIMAIRES DE PHOTORÉCEPTEURS ET D’EXPLANTS RÉTINIENS RATON, DANS DES CONDITIONS NORMALES ET STRESSANTES, CO-TRANSFECCION DES FACTEURS DE TRANSCRIPTION ET DES PROMOTEURS DIANA, CHIP-SEQ, CARACTÉRISATION DES INTERACTIONS PAR INMUNOPRECIPITATION COUPLÉE À MALDI-TOF, TRANSGENES IN VIVO TRANSGENÈSE DANS RATON RÉTINE UTILISANT MICROINYECTION SUBRÉTINALE, SUIVIE D’UNE ANALYSE HISTOLOGIQUE DÉTAILLÉE ET INMUNODETECTION PAR MICROSCOPIE CONFOCALE. ENFIN, ET GRÂCE À LA COLLABORATION AVEC UN GROUPE DE BIONANOTECHNOLOGIES DU DPT. DE PHYSIQUE (UNIVERSITÉ D’OXFORD), NOUS EXPLORERONS COMME «PREUVE DE PRINCIPE» LA FAISABILITÉ D’UN TRAITEMENT POSSIBLE PAR THÉRAPIE GÉNIQUE AVEC DES NANOPARTICULES ENVELOPPÉS DANS L’ADN (NANOSYSTÈME INTELLIGENT) DANS LE MODÈLE CERKL-/- GÉNÉRÉ PAR CRISPR/CAS9, EN ÉTUDIANT L’EFFICACITÉ DE LA TRANSMISSION DE GÈNES DANS LES PHOTORÉCEPTEURS PAR RAPPORT À D’AUTRES STRATÉGIES, TELLES QUE MICROINYECTION SUBRÉTINIENNE SUIVIE D’ÉLECTROPORATION OU, À L’AVENIR, DE VIRUS ADÉNO-ASSOCIÉS, LA THÉRAPIE GÉNIQUE ACTUELLEMENT UTILISÉE EN RÉTINE. _x000D_ Résultats attendus: NOUS APPROFONDIRONS LES RÉSEAUX MÉTABOLIQUES ET DE SIGNALISATION MODIFIÉS DANS LE PROCESSUS DE NEURODÉGÉNÉRESCENCE DE LA RÉTINE DÉTECTANT, SOIT CES CIBLES D’INTÉRÊT THÉRAPEUTIQUE, SOIT DES INDICATEURS MOLÉCULAIRES FIABLES DE LA PROGRESSION DU PHÉNOTYPE. EN OUTRE, NOUS ÉTUDIERONS LA FAISABILITÉ D’UNE POSSIBLE THÉRAPIE GÉNÉTIQUE/SAUVETAGE PAR NANOPARTICULAES ENVELOPPÉ D’ADN, EN MESURANT: L’EFFICACITÉ DE LA TRANSMISSION DES GÈNES PAR RAPPORT À D’AUTRES STRATÉGIES; SURVIE/APOPTOSE DES PHOTORÉCEPTEURS ET III) EXPRESSION DE GÈNES PERTINENTS POUR LA FONCTION DES CÔNES ET DES BÂTONNETS. (French)
2 December 2021
0 references
DYSFUNKTION UND TOD VON PHOTOREZEPTOREN SIND DIE HAUPTURSACHE FÜR SEHVERLUST BEI ERBLICHER NETZHAUTDYSTROPHIE (IRDS), EINER GRUPPE VON ERKRANKUNGEN DER NETZHAUT, SCHWERER PHÄNOTYP UND SEHR HETEROGENEM. NACH MEHR ALS 30 JAHREN FORSCHUNG SIND FAST 300 URSÄCHLICHE GENE BEKANNT, ABER ES GIBT NOCH EINEN WISSENSSCHATZ, DER DIE IRD-GENE UND IHRE MUTATIONEN (GENOTYP) MIT IHRER PHYSIOLOGISCHEN FUNKTION IN DER GESUNDHEIT UND IHRER DYSFUNKTION IN DER KRANKHEIT (PHENOTYP) IN INTEGRIERTER WEISE KORRELIERT. DAHER IST NEBEN DER IDENTIFIZIERUNG NEUER GENE DIE FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG DER STOFFWECHSEL- UND SIGNAGEWEGE, DIE DURCH PATHOLOGISCHE MUTATIONEN IN DIESEN URSÄCHLICHEN GENEN VERÄNDERT WERDEN, ENTSCHEIDEND, UM EFFIZIENTERE THERAPIESTRATEGIEN ZU ENTWICKELN, DIE DEN FORTSCHRITT DER NETZHAUTNEUDEGENERATION STOPPEN ODER SOGAR DIE KRANKHEIT HEILEN KÖNNEN. UNSER ZIEL IST DIE FUNKTIONELLE STUDIE VON CERKL, NR2E3 UND ATXN3, SIND DIE AN IRDS BETEILIGTEN GENE UND REPRÄSENTATIV FÜR RELEVANTE ZELLWEGE IN NETZHAUT AUS DER ENTWICKLUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON TIERMODELLEN IN RATON UND ZEBRAFISCH. DIESE MODELLE WURDEN BEREITS IN UNSERER GRUPPE ERZEUGT, ENTWEDER DURCH DIE NEUARTIGE GENOMISCHE AUSGABESTRATEGIE (CRISPRCAS9) FÜR CERKL (KNOCKOUT) UND NR2E3 (KNOCKIN) ODER DURCH KLOPFEN MIT MORFOLINS (ATXN3), ABER ES GIBT KEINE PHENOTIPIC-ANALYSE AUF BIOCHEMISCHER, MORFOLOGISCHER UND PHYSIOLOGISCHER EBENE. DAZU WERDEN WIR INNOVATIVE (IN UNSEREN LABOREN OPTIMIERTE) TECHNIKEN EINSETZEN, WIE Z. B.: PRIMÄRE KULTUREN VON PHOTOREZEPTOREN UND RATON-RETINA-EXPLANTATEN, UNTER NORMALEN UND STRESSIGEN BEDINGUNGEN, CO-TRANSFECCION VON TRANSKRIPTIONSFAKTOREN UND PROMOTERN DIANA, CHIP-SEQ, CHARAKTERISIERUNG VON INTERAKTIONEN DURCH INMUNOPRECIPITATION GEKOPPELT MIT MALDI-TOF, TRANSGENES IN VIVO TRANSGENESE-TECHNIKEN IN RATON-RETINA MIT SUBRETINALER MICROINYECTION, GEFOLGT VON EINER DETAILLIERTEN HISTOLOGISCHEN ANALYSE UND INMUNODETECTION DURCH KONFOKALE MIKROSKOPIE. SCHLIESSLICH UND DURCH ZUSAMMENARBEIT MIT EINER GRUPPE VON BIONANOTECHNOLOGIE DES DPT. IN DER PHYSIK (UNIVERSITÄT OXFORD) WERDEN WIR ALS „PROOF OF PRINZIP“ DIE MACHBARKEIT EINER MÖGLICHEN BEHANDLUNG DURCH GENTHERAPIE MIT NANOPARTIKAULATEN UNTERSUCHEN, DIE IN DNA (INTELLIGENTES NANOSYSTEM) IM CERKL-/- MODELL VON CRISPR/CAS9 EINGEWICKELT SIND, INDEM WIR DIE EFFIZIENZ DER GENLIEFERUNG IN PHOTOREZEPTOREN IM VERGLEICH ZU ANDEREN STRATEGIEN UNTERSUCHEN, WIE SUBRETINALE MICROINYECTION, GEFOLGT VON ELEKTROPORATION ODER IN ZUKUNFT ADENO-ASSOZIIERTE VIREN, DIE DERZEIT IN NETZHAUT EINGESETZTE GENTHERAPIE. _x000D_ erwartete Ergebnisse: WIR WERDEN DIE STOFFWECHSEL- UND SIGNALNETZWERKE VERTIEFEN, DIE IM PROZESS DER NEURODEGENERATION DER NETZHAUTDETEKTION VERÄNDERT WURDEN, ENTWEDER DIE ZIELE VON THERAPEUTISCHEM INTERESSE ODER ZUVERLÄSSIGE MOLEKULARE INDIKATOREN FÜR DIE PROGRESSION DES PHÄNOTYPS. DARÜBER HINAUS WERDEN WIR DIE MACHBARKEIT EINER MÖGLICHEN GENETISCHEN THERAPIE/RETTUNG DURCH NANOPARTICULAES MIT DNA UMHÜLLT UNTERSUCHEN UND MESSEN: EFFIZIENZ DER GENLIEFERUNG GEGENÜBER ANDEREN STRATEGIEN; ÜBERLEBEN/APOPTOSE VON PHOTOREZEPTOREN UND III) EXPRESSION VON GENEN, DIE FÜR DIE FUNKTION VON KEGELN UND STÖCKEN RELEVANT SIND. (German)
9 December 2021
0 references
DYSFUNCTIE EN DOOD VAN FOTORECEPTOREN IS DE BELANGRIJKSTE OORZAAK VAN VERLIES VAN GEZICHTSVERMOGEN BIJ ERFELIJKE RETINALE DYSTROFIE (IRD’S), EEN GROEP ZIEKTEN VAN HET NETVLIES, ERNSTIG FENOTYPE EN ZEER HETEROGEEN. NA MEER DAN 30 JAAR ONDERZOEK ZIJN BIJNA 300 OORZAKELIJKE GENEN BEKEND, MAAR ER IS NOG STEEDS EEN CORPUS VAN KENNIS DIE OP EEN GEÏNTEGREERDE MANIER CORRELEERT DE IRD GENEN EN HUN MUTATIES (GENOTYPE) MET HUN FYSIOLOGISCHE FUNCTIE IN GEZONDHEID EN HUN DISFUNCTIE IN DE ZIEKTE (FENOTYPE). DAAROM, IN AANVULLING OP DE IDENTIFICATIE VAN NIEUWE GENEN, IS HET CRUCIAAL DE FUNCTIONELE KARAKTERISERING VAN DE METABOLISCHE EN SIGNAGE PADEN DIE WORDEN VERANDERD DOOR PATHOLOGISCHE MUTATIES IN DEZE OORZAKELIJKE GENEN, OM EFFICIËNTERE THERAPEUTISCHE STRATEGIEËN TE ONTWERPEN DIE DE VOORUITGANG VAN NETVLIES NEURODEGENERATIE KUNNEN STOPPEN, OF ZELFS GENEZEN VAN DE ZIEKTE. ONS DOEL IS DE FUNCTIONELE STUDIE VAN CERKL, NR2E3 EN ATXN3, ZIJN DE GENEN DIE BETROKKEN ZIJN BIJ IRD’S EN REPRESENTATIEF ZIJN VOOR RELEVANTE CELLULAIRE TRAJECTEN IN HET NETVLIES VAN DE ONTWIKKELING EN KARAKTERISERING VAN DIERMODELLEN IN RATON EN ZEBRAVIS. DEZE MODELLEN ZIJN AL GEGENEREERD IN ONZE GROEP, HETZIJ VIA DE NIEUWE GENOMIC EDITION STRATEGIE (CRISPRCAS9) VOOR CERKL (KNOCKOUT) EN NR2E3 (KNOCKIN), OFWEL DOOR KNOCKDOWN MET BEHULP VAN MORFOLINS (ATXN3), MAAR ER IS GEEN PHENOTIPIC ANALYSE OP BIOCHEMISCHE, MORFOLOGISCHE EN FYSIOLOGISCHE NIVEAUS. HIERVOOR GEBRUIKEN WE INNOVATIEVE TECHNIEKEN (GEOPTIMALISEERD IN ONZE LABORATORIA) ZOALS: PRIMAIRE CULTUREN VAN FOTORECEPTOREN EN RATON RETINALE EXPLANTATEN, ONDER NORMALE EN STRESSVOLLE OMSTANDIGHEDEN, CO-TRANSFECCION VAN TRANSCRIPTIEFACTOREN EN PROMOTORS DIANA, CHIP-SEQ, KARAKTERISERING VAN INTERACTIES DOOR INMUNOPRECIPITATION GEKOPPELD AAN MALDI-TOF, TRANSGENEN IN VIVO TRANSGENESE TECHNIEKEN IN RATON RETINA MET SUBRETINALE MICROINYECTION, GEVOLGD DOOR EEN GEDETAILLEERDE HISTOLOGIC ANALYSE EN INMUNODETECTION DOOR CONFOCALE MICROSCOPIE. TENSLOTTE, EN DOOR SAMENWERKING MET EEN GROEP BIONANOTECHNOLOGIE VAN HET DPT. VAN DE FYSICA (UNIVERSITEIT VAN OXFORD), ZULLEN WE ALS EEN „PROOF OF PRINCIPLE” DE HAALBAARHEID ONDERZOEKEN VAN EEN MOGELIJKE BEHANDELING DOOR GENIC THERAPIE MET NANOPARTICULATEN VERPAKT IN DNA (SMART NANOSYSTEEM) IN HET CERKL-/- MODEL GEGENEREERD DOOR CRISPR/CAS9, DOOR DE EFFICIËNTIE VAN GENLEVERING IN FOTORECEPTOREN TE BESTUDEREN IN VERGELIJKING MET ANDERE STRATEGIEËN, ZOALS SUBRETINALE MICROINYECTION GEVOLGD DOOR ELEKTROPORATIE OF, IN DE TOEKOMST, ADENO-GEASSOCIEERDE VIRUSSEN, DE GENIC THERAPIE DIE MOMENTEEL IN HET NETVLIES WORDT GEBRUIKT. _x000D_ verwachte resultaten: WE ZULLEN DE METABOLISCHE EN SIGNALERENDE NETWERKEN VERDIEPEN DIE VERANDERD ZIJN IN HET PROCES VAN NEURODEGENERATIE VAN HET NETVLIES, OFWEL DIE DOELEN VAN THERAPEUTISCH BELANG, OFWEL BETROUWBARE MOLECULAIRE INDICATOREN VAN DE PROGRESSIE VAN HET FENOTYPE. DAARNAAST ONDERZOEKEN WE DE HAALBAARHEID VAN EEN MOGELIJKE GENETISCHE THERAPIE/REDDING DOOR NANOPARTICULAES VERPAKT MET DNA, METEN: EFFICIËNTIE VAN DE GENLEVERING TEN OPZICHTE VAN ANDERE STRATEGIEËN; OVERLEVING/APOPTOSE VAN FOTORECEPTOREN EN III) EXPRESSIE VAN GENEN DIE RELEVANT ZIJN VOOR DE FUNCTIE VAN KEGELS EN STOKKEN. (Dutch)
17 December 2021
0 references
LA DISFUNZIONE E LA MORTE DEI FOTORECETTORI SONO LA PRINCIPALE CAUSA DI PERDITA DELLA VISTA NELLA DISTROFIA RETINICA EREDITARIA (IRD), UN GRUPPO DI MALATTIE DELLA RETINA, FENOTIPO GRAVE E MOLTO ETEROGENEO. DOPO PIÙ DI 30 ANNI DI RICERCA, SONO NOTI QUASI 300 GENI CAUSATIVI, MA C'È ANCORA UN CORPUS DI CONOSCENZE CHE CORRELA IN MODO INTEGRATO I GENI IRD E LE LORO MUTAZIONI (GENOTIPO) CON LA LORO FUNZIONE FISIOLOGICA NELLA SALUTE E LA LORO DISFUNZIONE NELLA MALATTIA (FENOTIPO). PERTANTO, OLTRE ALL'IDENTIFICAZIONE DI NUOVI GENI, È FONDAMENTALE LA CARATTERIZZAZIONE FUNZIONALE DELLE VIE METABOLICHE E DI SEGNALETICA CHE VENGONO ALTERATE DA MUTAZIONI PATOLOGICHE IN QUESTI GENI CAUSATIVI, AL FINE DI PROGETTARE STRATEGIE TERAPEUTICHE PIÙ EFFICIENTI CHE POSSANO FERMARE IL PROGRESSO DELLA NEURODEGENERAZIONE RETINICA, O ADDIRITTURA CURARE LA MALATTIA. IL NOSTRO OBIETTIVO È LO STUDIO FUNZIONALE DI CERKL, NR2E3 E ATXN3, SONO I GENI COINVOLTI NEGLI IRD E RAPPRESENTATIVI DELLE VIE CELLULARI RILEVANTI NELLA RETINA DALLO SVILUPPO E DALLA CARATTERIZZAZIONE DI MODELLI ANIMALI IN RATON E ZEBRAFISH. QUESTI MODELLI SONO GIÀ STATI GENERATI NEL NOSTRO GRUPPO, SIA ATTRAVERSO LA NUOVA STRATEGIA DELL'EDIZIONE GENOMICA (CRISPRCAS9) PER CERKL (KNOCKOUT) E NR2E3 (KNOCKIN), SIA MEDIANTE ABBATTIMENTO UTILIZZANDO MORFOLINS (ATXN3), MA NON C'È ANALISI PHENOTIPIC A LIVELLO BIOCHIMICO, MORFOLOGICO E FISIOLOGICO. PER FARE QUESTO, USEREMO TECNICHE INNOVATIVE (OTTIMIZZATE NEI NOSTRI LABORATORI) COME: COLTURE PRIMARIE DI FOTORECETTORI ED ESPIANTI RETINICI RATON, IN CONDIZIONI NORMALI E STRESSANTI, CO-TRANSFECCION DI FATTORI DI TRASCRIZIONE E PROMOTORI DIANA, CHIP-SEQ, CARATTERIZZAZIONE DELLE INTERAZIONI DA PARTE DI INMUNOPRECIPITATION ACCOPPIATA A MALDI-TOF, TRANSGENES IN VIVO TRANSGENESIS IN RATON RETINA UTILIZZANDO MICROINYECTION SUBRETINALE, SEGUITA DA UN'ANALISI ISTOLOGICA DETTAGLIATA E INMUNODETECTION MEDIANTE MICROSCOPIA CONFOCALE. INFINE, E ATTRAVERSO LA COLLABORAZIONE CON UN GRUPPO DI BIONANOTECNOLOGIE DEL DPT. DI FISICA (UNIVERSITÀ DI OXFORD), ESPLOREREMO COME "PROVA DI PRINCIPIO" LA FATTIBILITÀ DI UN POSSIBILE TRATTAMENTO MEDIANTE TERAPIA GENETICA CON NANOPARTICOLATI AVVOLTI NEL DNA (NANOSISTEMA INTELLIGENTE) NEL MODELLO CERKL-/- GENERATO DA CRISPR/CAS9, STUDIANDO L'EFFICIENZA DELLA CONSEGNA GENICA NEI FOTORECETTORI RISPETTO AD ALTRE STRATEGIE, COME LA MICROINYECTION SUBRETINALE SEGUITA DA ELETTROPORAZIONE O, IN FUTURO, VIRUS ADENO-ASSOCIATI, LA TERAPIA GENETICA ATTUALMENTE UTILIZZATA NELLA RETINA. _x000D_ Risultati attesi: APPROFONDIREMO LE RETI METABOLICHE E DI SEGNALAZIONE ALTERATE NEL PROCESSO DI NEURODEGENERAZIONE DELLA RETINA RILEVANDO, SIA QUEGLI OBIETTIVI DI INTERESSE TERAPEUTICO, SIA INDICATORI MOLECOLARI AFFIDABILI DELLA PROGRESSIONE DEL FENOTIPO. INOLTRE, ESAMINEREMO LA FATTIBILITÀ DI UNA POSSIBILE TERAPIA GENETICA/DI SALVATAGGIO DA PARTE DI NANOPARTICULAES AVVOLTO CON DNA, MISURANDO: EFFICIENZA DELLA CONSEGNA GENICA RISPETTO AD ALTRE STRATEGIE; SOPRAVVIVENZA/APOPTOSI DEI FOTORECETTORI E III) ESPRESSIONE DI GENI RILEVANTI PER LA FUNZIONE DI CONI E BASTONI. (Italian)
16 January 2022
0 references
Η ΔΥΣΛΕΙΤΟΥΡΓΊΑ ΚΑΙ Ο ΘΆΝΑΤΟΣ ΤΩΝ ΦΩΤΟΫΠΟΔΟΧΈΩΝ ΕΊΝΑΙ Η ΚΎΡΙΑ ΑΙΤΊΑ ΑΠΏΛΕΙΑΣ ΤΗΣ ΌΡΑΣΗΣ ΣΕ ΚΛΗΡΟΝΟΜΙΚΉ ΔΥΣΤΡΟΦΊΑ ΤΟΥ ΑΜΦΙΒΛΗΣΤΡΟΕΙΔΟΎΣ (IRDS), ΜΙΑ ΟΜΆΔΑ ΑΣΘΕΝΕΙΏΝ ΤΟΥ ΑΜΦΙΒΛΗΣΤΡΟΕΙΔΟΎΣ, ΣΟΒΑΡΌ ΦΑΙΝΌΤΥΠΟ ΚΑΙ ΠΟΛΎ ΕΤΕΡΟΓΕΝΉ. ΜΕΤΆ ΑΠΌ ΠΕΡΙΣΣΌΤΕΡΑ ΑΠΌ 30 ΧΡΌΝΙΑ ΈΡΕΥΝΑΣ, ΣΧΕΔΌΝ 300 ΑΙΤΙΟΛΟΓΙΚΆ ΓΟΝΊΔΙΑ ΕΊΝΑΙ ΓΝΩΣΤΆ, ΑΛΛΆ ΕΞΑΚΟΛΟΥΘΕΊ ΝΑ ΥΠΆΡΧΕΙ ΈΝΑ ΣΏΜΑ ΓΝΏΣΕΩΝ ΠΟΥ ΣΥΣΧΕΤΊΖΕΙ ΜΕ ΈΝΑΝ ΟΛΟΚΛΗΡΩΜΈΝΟ ΤΡΌΠΟ ΤΑ ΓΟΝΊΔΙΑ IRD ΚΑΙ ΤΙΣ ΜΕΤΑΛΛΆΞΕΙΣ ΤΟΥΣ (ΓΕΝΌΤΥΠΟΣ) ΜΕ ΤΗ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΉ ΤΟΥΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΊΑ ΣΤΗΝ ΥΓΕΊΑ ΚΑΙ ΤΗ ΔΥΣΛΕΙΤΟΥΡΓΊΑ ΤΟΥΣ ΣΤΗ ΝΌΣΟ (ΦΑΙΝΌΤΥΠΟΣ). ΩΣ ΕΚ ΤΟΎΤΟΥ, ΕΚΤΌΣ ΑΠΌ ΤΗΝ ΤΑΥΤΟΠΟΊΗΣΗ ΝΈΩΝ ΓΟΝΙΔΊΩΝ, ΕΊΝΑΙ ΖΩΤΙΚΉΣ ΣΗΜΑΣΊΑΣ Ο ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΚΌΣ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΌΣ ΤΩΝ ΟΔΏΝ ΜΕΤΑΒΟΛΙΣΜΟΎ ΚΑΙ ΣΉΜΑΝΣΗΣ ΠΟΥ ΜΕΤΑΒΆΛΛΟΝΤΑΙ ΑΠΌ ΠΑΘΟΛΟΓΙΚΈΣ ΜΕΤΑΛΛΆΞΕΙΣ ΣΕ ΑΥΤΆ ΤΑ ΑΙΤΙΟΛΟΓΙΚΆ ΓΟΝΊΔΙΑ, ΠΡΟΚΕΙΜΈΝΟΥ ΝΑ ΣΧΕΔΙΑΣΤΟΎΝ ΠΙΟ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΙΚΈΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΈΣ ΣΤΡΑΤΗΓΙΚΈΣ ΠΟΥ ΜΠΟΡΟΎΝ ΝΑ ΣΤΑΜΑΤΉΣΟΥΝ ΤΗΝ ΠΡΌΟΔΟ ΤΗΣ ΝΕΥΡΟΕΚΦΎΛΙΣΗΣ ΤΟΥ ΑΜΦΙΒΛΗΣΤΡΟΕΙΔΟΎΣ Ή ΑΚΌΜΗ ΚΑΙ ΝΑ ΘΕΡΑΠΕΎΣΟΥΝ ΤΗΝ ΑΣΘΈΝΕΙΑ. ΣΤΌΧΟΣ ΜΑΣ ΕΊΝΑΙ Η ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΚΉ ΜΕΛΈΤΗ ΤΩΝ CERKL, NR2E3, ΚΑΙ ATXN3, ΕΊΝΑΙ ΤΑ ΓΟΝΊΔΙΑ ΠΟΥ ΕΜΠΛΈΚΟΝΤΑΙ ΣΕ IRD ΚΑΙ ΑΝΤΙΠΡΟΣΩΠΕΥΤΙΚΆ ΤΩΝ ΣΧΕΤΙΚΏΝ ΚΥΤΤΑΡΙΚΏΝ ΟΔΏΝ ΣΤΟΝ ΑΜΦΙΒΛΗΣΤΡΟΕΙΔΉ ΑΠΌ ΤΗΝ ΑΝΆΠΤΥΞΗ ΚΑΙ ΤΟ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΌ ΤΩΝ ΖΩΙΚΏΝ ΜΟΝΤΈΛΩΝ ΣΕ RATON ΚΑΙ ZEBRAFISH. ΤΑ ΜΟΝΤΈΛΑ ΑΥΤΆ ΈΧΟΥΝ ΉΔΗ ΔΗΜΙΟΥΡΓΗΘΕΊ ΣΤΗΝ ΟΜΆΔΑ ΜΑΣ, ΕΊΤΕ ΜΈΣΩ ΤΗΣ ΝΈΑΣ ΣΤΡΑΤΗΓΙΚΉΣ ΓΟΝΙΔΙΩΜΑΤΙΚΉΣ ΈΚΔΟΣΗΣ (CRISPRCAS9) ΓΙΑ ΤΟ CERKL (KNOCKOUT) ΚΑΙ ΤΟ NR2E3 (KNOCKIN), ΕΊΤΕ ΜΕ ΤΗ ΧΡΉΣΗ MORFOLINS (ATXN3), ΑΛΛΆ ΔΕΝ ΥΠΆΡΧΕΙ ΑΝΆΛΥΣΗ ΦΕΝΟΤΙΠ ΣΕ ΒΙΟΧΗΜΙΚΆ, ΝΕΚΡΟΛΟΓΙΚΆ ΚΑΙ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΆ ΕΠΊΠΕΔΑ. ΓΙΑ ΝΑ ΓΊΝΕΙ ΑΥΤΌ, ΘΑ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΉΣΟΥΜΕ ΚΑΙΝΟΤΌΜΕΣ ΤΕΧΝΙΚΈΣ (ΒΕΛΤΙΣΤΟΠΟΙΗΜΈΝΕΣ ΣΤΑ ΕΡΓΑΣΤΉΡΙΆ ΜΑΣ) ΌΠΩΣ: ΠΡΩΤΟΓΕΝΕΊΣ ΚΑΛΛΙΈΡΓΕΙΕΣ ΦΩΤΟΥΠΟΔΟΧΈΩΝ ΚΑΙ ΕΚΤΟΞΕΥΤΏΝ ΑΜΦΙΒΛΗΣΤΡΟΕΙΔΟΎΣ RATON, ΥΠΌ ΚΑΝΟΝΙΚΈΣ ΚΑΙ ΑΓΧΩΤΙΚΈΣ ΣΥΝΘΉΚΕΣ, ΣΥΝ- ΔΙΑΜΕΤΑΚΟΜΙΣΗΣ ΤΩΝ ΠΑΡΑΓΌΝΤΩΝ ΜΕΤΑΓΡΑΦΉΣ ΚΑΙ ΤΩΝ ΥΠΟΚΙΝΗΤΏΝ DIANA, CHIP-SEQ, ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΌΣ ΑΛΛΗΛΕΠΙΔΡΆΣΕΩΝ ΑΠΌ ΕΜΠΝΟΠΟΙΗΣΗ ΣΕ ΣΥΝΔΥΑΣΜΌ ΜΕ MALDI-TOF, ΔΙΑΓΟΝΙΔΙΑΚΈΣ ΤΕΧΝΙΚΈΣ IN VIVO TRANSGENESIS ΣΤΟΝ ΑΜΦΙΒΛΗΣΤΡΟΕΙΔΉ RATON ΜΕ ΧΡΉΣΗ ΥΠΟ ΑΜΦΙΒΛΗΣΤΡΟΕΙΔΟΎΣ MICROINYECTION, ΑΚΟΛΟΥΘΟΎΜΕΝΗ ΑΠΌ ΛΕΠΤΟΜΕΡΉ ΙΣΤΟΛΟΓΙΚΉ ΑΝΆΛΥΣΗ ΚΑΙ ΕΝΙΣΧΥΣΗ ΜΕ ΣΥΝΟΜΟΚΡΑΤΙΚΉ ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΊΑ. ΤΈΛΟΣ, ΚΑΙ ΜΈΣΩ ΤΗΣ ΣΥΝΕΡΓΑΣΊΑΣ ΜΕ ΜΙΑ ΟΜΆΔΑ ΒΙΟΝΑΝΟΤΕΧΝΟΛΟΓΊΑΣ ΤΟΥ DPT. ΤΗΣ ΦΥΣΙΚΉΣ (ΠΑΝΕΠΙΣΤΉΜΙΟ ΤΗΣ ΟΞΦΌΡΔΗΣ), ΘΑ ΔΙΕΡΕΥΝΉΣΟΥΜΕ ΩΣ «ΑΠΌΔΕΙΞΗ ΑΡΧΉΣ» ΤΗ ΣΚΟΠΙΜΌΤΗΤΑ ΜΙΑΣ ΠΙΘΑΝΉΣ ΘΕΡΑΠΕΊΑΣ ΜΕ ΓΟΝΙΚΉ ΘΕΡΑΠΕΊΑ ΜΕ ΝΑΝΟΣΩΜΑΤΊΔΙΑ ΤΥΛΙΓΜΈΝΑ ΣΕ DNA (ΈΞΥΠΝΟ ΝΑΝΟΣΎΣΤΗΜΑ) ΣΤΟ ΜΟΝΤΈΛΟ CERKL-/- ΠΟΥ ΠΑΡΆΓΕΤΑΙ ΑΠΌ ΤΟ CRISPR/CAS9, ΜΕΛΕΤΏΝΤΑΣ ΤΗΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΙΚΌΤΗΤΑ ΤΗΣ ΠΑΡΟΧΉΣ ΓΟΝΙΔΊΩΝ ΣΤΟΥΣ ΦΩΤΟΫΠΟΔΟΧΕΊΣ ΣΕ ΣΎΓΚΡΙΣΗ ΜΕ ΆΛΛΕΣ ΣΤΡΑΤΗΓΙΚΈΣ, ΌΠΩΣ Η ΥΠΟ- ΑΜΦΙΒΛΗΣΤΡΟΕΙΔΉΣ MICROINYECTION ΑΚΟΛΟΥΘΟΎΜΕΝΗ ΑΠΌ ΗΛΕΚΤΡΟΣΎΝΘΕΣΗ Ή, ΣΤΟ ΜΈΛΛΟΝ, ΟΙ ΑΔΕΝΟΣΥΝΔΕΌΜΕΝΟΙ ΙΟΊ, Η ΓΟΝΙΚΉ ΘΕΡΑΠΕΊΑ ΠΟΥ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΕΊΤΑΙ ΕΠΊ ΤΟΥ ΠΑΡΌΝΤΟΣ ΣΤΟΝ ΑΜΦΙΒΛΗΣΤΡΟΕΙΔΉ. _x000D_ αναμενόμενα αποτελέσματα: ΘΑ ΕΜΒΑΘΎΝΟΥΜΕ ΤΑ ΔΊΚΤΥΑ ΜΕΤΑΒΟΛΙΣΜΟΎ ΚΑΙ ΣΗΜΑΤΟΔΌΤΗΣΗΣ ΠΟΥ ΜΕΤΑΒΆΛΛΟΝΤΑΙ ΣΤΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΊΑ ΤΗΣ ΝΕΥΡΟΕΚΦΎΛΙΣΗΣ ΤΟΥ ΑΜΦΙΒΛΗΣΤΡΟΕΙΔΟΎΣ ΑΝΙΧΝΕΎΟΝΤΑΣ, ΕΊΤΕ ΕΚΕΊΝΟΥΣ ΤΟΥΣ ΣΤΌΧΟΥΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΟΎ ΕΝΔΙΑΦΈΡΟΝΤΟΣ, ΕΊΤΕ ΑΞΙΌΠΙΣΤΟΥΣ ΜΟΡΙΑΚΟΎΣ ΔΕΊΚΤΕΣ ΤΗΣ ΕΞΈΛΙΞΗΣ ΤΟΥ ΦΑΙΝΟΤΎΠΟΥ. ΕΠΙΠΛΈΟΝ, ΘΑ ΔΙΕΡΕΥΝΉΣΟΥΜΕ ΤΗ ΣΚΟΠΙΜΌΤΗΤΑ ΜΙΑΣ ΠΙΘΑΝΉΣ ΓΕΝΕΤΙΚΉΣ ΘΕΡΑΠΕΊΑΣ/ΔΙΆΣΩΣΗΣ ΑΠΌ NANOPARTICULAES ΤΥΛΙΓΜΈΝΗ ΜΕ DNA, ΜΕΤΡΏΝΤΑΣ: ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΙΚΌΤΗΤΑ ΠΑΡΟΧΉΣ ΓΟΝΙΔΊΩΝ ΈΝΑΝΤΙ ΆΛΛΩΝ ΣΤΡΑΤΗΓΙΚΏΝ· ΕΠΙΒΊΩΣΗ/ΑΠΟΠΤΊΩΣΗ ΦΩΤΟΫΠΟΔΟΧΈΩΝ ΚΑΙ III) ΈΚΦΡΑΣΗ ΓΟΝΙΔΊΩΝ ΠΟΥ ΣΧΕΤΊΖΟΝΤΑΙ ΜΕ ΤΗ ΛΕΙΤΟΥΡΓΊΑ ΚΏΝΩΝ ΚΑΙ ΡΑΒΔΙΏΝ. (Greek)
17 August 2022
0 references
DYSFUNKTION OG DØD AF FOTORECEPTORER ER HOVEDÅRSAGEN TIL SYNSTAB I ARVELIG RETINAL DYSTROFI (IRD), EN GRUPPE AF SYGDOMME I NETHINDEN, SVÆR FÆNOTYPE OG MEGET HETEROGEN. EFTER MERE END 30 ÅRS FORSKNING ER NÆSTEN 300 ÅRSAGSGENER KENDT, MEN DER ER STADIG ET KORPS AF VIDEN, DER KORRELERER PÅ EN INTEGRERET MÅDE IRD GENER OG DERES MUTATIONER (GENOTYPE) MED DERES FYSIOLOGISKE FUNKTION I SUNDHED OG DERES DYSFUNKTION I SYGDOMMEN (PHENOTYPE). DERFOR, UD OVER IDENTIFIKATIONEN AF NYE GENER, ER DET AFGØRENDE DEN FUNKTIONELLE KARAKTERISERING AF DE METABOLISKE OG TEGNVEJE, DER ÆNDRES AF PATOLOGISKE MUTATIONER I DISSE KAUSATIVE GENER, FOR AT DESIGNE MERE EFFEKTIVE TERAPEUTISKE STRATEGIER, DER KAN STOPPE UDVIKLINGEN AF RETINAL NEURODEGENERATION, ELLER ENDDA HELBREDE SYGDOMMEN. VORES MÅL ER DEN FUNKTIONELLE UNDERSØGELSE AF CERKL, NR2E3 OG ATXN3, ER DE GENER, DER ER INVOLVERET I IRD'ER OG REPRÆSENTATIVE FOR RELEVANTE CELLULÆRE VEJE I NETHINDEN FRA UDVIKLINGEN OG KARAKTERISERINGEN AF DYREMODELLER I RATON OG ZEBRAFISH. DISSE MODELLER ER ALLEREDE BLEVET GENERERET I VORES GRUPPE, ENTEN GENNEM DEN NYE GENOMISKE UDGAVE STRATEGI (CRISPRCAS9) FOR CERKL (KNOCKOUT) OG NR2E3 (KNOCKIN), ELLER VED KNOCKDOWN VED HJÆLP AF MORFOLINS (ATXN3), MEN DER ER INGEN PHENOTIPIC ANALYSE PÅ BIOKEMISKE, MORFOLOGISKE OG FYSIOLOGISKE NIVEAUER. FOR AT GØRE DETTE VIL VI ANVENDE INNOVATIVE TEKNIKKER (OPTIMERET I VORES LABORATORIER) SOM F.EKS.: PRIMÆRE KULTURER AF FOTORECEPTORER OG RATON RETINAL EKSPLANTATER, UNDER NORMALE OG STRESSENDE FORHOLD, CO-TRANSFECCION AF TRANSKRIPTION FAKTORER OG PROMOTORER DIANA, CHIP-SEQ, KARAKTERISERING AF INTERAKTIONER VED INMUNOPRECIPITATION KOBLET TIL MALDI-TOF, TRANSGENES IN VIVO TRANSGENESIS TEKNIKKER I RATON RETINA VED HJÆLP AF SUBRETINAL MICROINYECTION, EFTERFULGT AF EN DETALJERET HISTOLOGISK ANALYSE OG INMUNODETECTION VED KONFOKAL MIKROSKOPI. ENDELIG OG GENNEM SAMARBEJDE MED EN GRUPPE AF BIONANOTEKNOLOGI I DPT. AF FYSIK (UNIVERSITY OF OXFORD), VIL VI SOM EN "PRINCIPBEVIS" UNDERSØGE GENNEMFØRLIGHEDEN AF EN MULIG BEHANDLING VED GENISK TERAPI MED NANOPARTIKULATER INDPAKKET I DNA (INTELLIGENT NANOSYSTEM) I CERKL-/-- MODELLEN GENERERET AF CRISPR/CAS9, VED AT STUDERE EFFEKTIVITETEN AF GENLEVERING I FOTORECEPTORER SAMMENLIGNET MED ANDRE STRATEGIER, SÅSOM SUBRETINAL MICROINYECTION EFTERFULGT AF ELEKTROPORERING ELLER, I FREMTIDEN, ADENO-ASSOCIEREDE VIRA, DEN GENISKE TERAPI, DER I ØJEBLIKKET ANVENDES I NETHINDEN. _x000D_ forventede resultater: VI VIL UDDYBE DE METABOLISKE OG SIGNALERENDE NETVÆRK ÆNDRET I PROCESSEN MED NEURODEGENERATION AF NETHINDEN DETEKTERING, ENTEN DE MÅL AF TERAPEUTISK INTERESSE, ELLER PÅLIDELIGE MOLEKYLÆRE INDIKATORER FOR PROGRESSION AF FÆNOTYPEN. DERUDOVER VIL VI UNDERSØGE GENNEMFØRLIGHEDEN AF EN EVENTUEL GENETISK TERAPI/REDNING AF NANOPARTICULAES INDPAKKET MED DNA, DER MÅLER: EFFEKTIVITET I FORHOLD TIL ANDRE STRATEGIER FOR GENLEVERING FOTORECEPTORERS OVERLEVELSE/APOPTOSE OG III) EKSPRESSION AF GENER, DER ER RELEVANTE FOR KEGLERS OG PINDES FUNKTION. (Danish)
17 August 2022
0 references
VALORESEPTORIEN TOIMINTAHÄIRIÖ JA KUOLEMA ON PÄÄASIALLINEN SYY NÄÖN MENETTÄMISEEN PERINNÖLLISESSÄ VERKKOKALVON DYSTROFIASSA (IRD), VERKKOKALVON SAIRAUKSIEN RYHMÄSSÄ, VAIKEASSA FENOTYYPISSÄ JA HYVIN HETEROGEENISESSÄ. YLI 30 VUODEN TUTKIMUKSEN JÄLKEEN TIEDETÄÄN LÄHES 300 AIHEUTTAVAA GEENIÄ, MUTTA EDELLEEN ON OLEMASSA TIETOKOKOELMA, JOKA KORRELOI INTEGROIDULLA TAVALLA IRD-GEENIT JA NIIDEN MUTAATIOT (GENOTYYPPI) NIIDEN FYSIOLOGISEEN TOIMINTAAN TERVEYDESSÄ JA NIIDEN TOIMINTAHÄIRIÖÖN TAUDISSA (FENOTYYPPI). SIKSI UUSIEN GEENIEN TUNNISTAMISEN LISÄKSI ON RATKAISEVAN TÄRKEÄÄ, ETTÄ NÄIDEN AIHEUTTAJAGEENIEN PATOLOGISET MUTAATIOT MUUTTAVAT AINEENVAIHDUNTA- JA OPASTEIDEN FUNKTIONAALISTA KARAKTERISOINTIA, JOTTA VOIDAAN SUUNNITELLA TEHOKKAAMPIA HOITOSTRATEGIOITA, JOTKA VOIVAT PYSÄYTTÄÄ VERKKOKALVON NEURODEGENEROINNIN ETENEMISEN TAI JOPA PARANTAA TAUDIN. TAVOITTEENAMME ON CERKL:N, NR2E3:N JA ATXN3:N TOIMINNALLINEN TUTKIMUS OVAT IRD:N GEENEJÄ JA EDUSTAVAT ASIAANKUULUVIA SOLUREITTEJÄ VERKKOKALVOSSA ELÄINMALLIEN KEHITTÄMISESTÄ JA KARAKTEROINNISTA RATONISSA JA SEEPRAKALASSA. NÄMÄ MALLIT ON JO LUOTU RYHMÄSSÄMME JOKO UUDEN GENOMIPAINOSSTRATEGIAN (CRISPRCAS9) CERKL- (KNOCKOUT) JA NR2E3 (KNOCKIN) AVULLA TAI TYRMÄYKSELLÄ MORFOLINS (ATXN3), MUTTA EI OLE OLEMASSA PHENOTIPIC-ANALYYSIA BIOKEMIALLISILLA, MORFOLOGISILLA JA FYSIOLOGISILLA TASOILLA. TÄTÄ VARTEN KÄYTÄMME INNOVATIIVISIA TEKNIIKOITA (JOTKA ON OPTIMOITU LABORATORIOISSAMME), KUTEN: FOTORESEPTORIEN JA RATONIN VERKKOKALVON EKSLANTTIEN PRIMAARIVILJELMÄT NORMAALEISSA JA STRESSAAVISSA OLOSUHTEISSA, TRANSKRIPTIOTEKIJÖIDEN JA PROMOOTTORIEN DIANA TRANSFECCION, SIRUSEQ, INMUNOPRECIPITATIONIN JA MALDI-TOFIN VUOROVAIKUTUKSEN KARAKTERISOINTI, TRANSGENES IN VIVO TRANSGENESIS -TEKNIIKAT RATONIN VERKKOKALVOSSA KÄYTTÄEN SUBRETINAALISTA MICROINYECTION-MENETELMÄÄ, JOTA SEURAA YKSITYISKOHTAINEN HISTOLOGINEN ANALYYSI JA INMUNODETECTION KONFOKAALISEN MIKROSKOPIAN AVULLA. LOPUKSI, JA TEKEMÄLLÄ YHTEISTYÖTÄ DPT:N BIONANOTEKNOLOGIAN KANSSA. OF PHYSICS (UNIVERSITY OF OXFORD), TUTKIMME ”PERIAATETODISTEENA” MAHDOLLISEN HOIDON TOTEUTETTAVUUTTA GEENITERAPIALLA DNA: HEN KÄÄRITYILLÄ NANOHIUKKASILLA (ÄLYKÄS NANOSYSTEEMI) CRISPR/CAS9: N TUOTTAMASSA CERKL-/--MALLISSA TUTKIMALLA GEENIN TOIMITTAMISEN TEHOKKUUTTA FOTORESEPTOREIHIN VERRATTUNA MUIHIN STRATEGIOIHIN, KUTEN SUBRETINAALISEEN MICROINYECTION- JA SEN JÄLKEEN SÄHKÖPORAATIOON TAI TULEVAISUUDESSA ADENOPERÄISIIN VIRUKSIIN, JOITA TÄLLÄ HETKELLÄ KÄYTETÄÄN VERKKOKALVOSSA. _x000D_ odotetut tulokset: SYVENNÄMME AINEENVAIHDUNTA- JA SIGNAALIVERKOSTOJA, JOTKA OVAT MUUTTUNEET VERKKOKALVON NEURODEGENERAATIOPROSESSISSA, JOKA HAVAITSEE JOKO TERAPEUTTISEN KIINNOSTUKSEN KOHTEET TAI LUOTETTAVAT MOLEKYYLI-INDIKAATTORIT FENOTYYPIN ETENEMISESTÄ. LISÄKSI TUTKIMME DNA:N KÄÄRITTYJEN NANOPARTICULAESIN MAHDOLLISEN GENEETTISEN HOIDON/RESCUE-HOIDON TOTEUTETTAVUUTTA MITTAAMALLA: GEENIN TOIMITUSTEHOKKUUS VERRATTUNA MUIHIN STRATEGIOIHIN; VALORESEPTORIEN ELOONJÄÄMINEN/APOPTOOSI JA III) KÄPYJEN JA KEPPIEN TOIMINNAN KANNALTA MERKITYKSELLISTEN GEENIEN ILMENTYMINEN. (Finnish)
17 August 2022
0 references
DISFUNZJONI U MEWT TA’ FOTORIĊETTURI HUMA L-KAWŻA EWLENIJA TA’ TELF TAL-VISTA F’DISTROFIJA EREDITARJA TAR-RETINA (IRDS), GRUPP TA’ MARD TAR-RETINA, FENOTIP SEVER U ETEROĠENJU ĦAFNA. WARA AKTAR MINN 30 SENA TA ‘RIĊERKA, KWAŻI 300 ĠENI KAWŻATTIVI HUMA MAGĦRUFA IŻDA GĦAD HEMM KORP TA’ GĦARFIEN LI JIKKORRELATA B’MOD INTEGRAT IL-ĠENI IRD U L-MUTAZZJONIJIET TAGĦHOM (ĠENOTIP) MAL-FUNZJONI FIŻJOLOĠIKA TAGĦHOM FIS-SAĦĦA U L-FUNZJONI ĦAŻINA TAGĦHOM FIL-MARDA (FENOTIP). GĦALHEKK, MINBARRA L-IDENTIFIKAZZJONI TA’ ĠENI ĠODDA, HUWA KRUĊJALI L-KARATTERIZZAZZJONI FUNZJONALI TAL-MOGĦDIJIET METABOLIĊI U TA’ SINJALAZZJONI LI JINBIDLU MINN MUTAZZJONIJIET PATOLOĠIĊI F’DAWN IL-ĠENI KAWŻATTIVI, SABIEX JITFASSLU STRATEĠIJI TERAPEWTIĊI AKTAR EFFIĊJENTI LI JISTGĦU JWAQQFU L-PROGRESS TAN-NEWRODEĠENERAZZJONI TAR-RETINA, JEW SAĦANSITRA JFEJQU L-MARDA. L-GĦAN TAGĦNA HUWA L-ISTUDJU FUNZJONALI TAS-CERKL, NR2E3, U ATXN3, HUMA L-ĠENI INVOLUTI FL-IRDS U JIRRAPPREŻENTAW IL-MOGĦDIJIET ĊELLULARI RILEVANTI FIR-RETINA MILL-IŻVILUPP U L-KARATTERIZZAZZJONI TAL-MUDELLI TAL-ANNIMALI FIR-RATON U Ż-ŻEBRA. DAWN IL-MUDELLI DIĠÀ ĠEW IĠĠENERATI FIL-GRUPP TAGĦNA, JEW PERMEZZ TAL-ISTRATEĠIJA L-ĠDIDA TAL-EDIZZJONI ĠENOMIKA (CRISPRCAS9) GĦAL CERKL (KNOCKOUT) U NR2E3 (KNOCKIN), JEW PERMEZZ TA’ KNOCKDOWN BL-UŻU TA’ MORFOLINS (ATXN3), IŻDA MA HEMM L-EBDA ANALIŻI PHENOTIPIC F’LIVELLI BIJOKIMIĊI, MORFOLOĠIĊI U FIŻJOLOĠIĊI. BIEX NAGĦMLU DAN, SE NUŻAW TEKNIKI INNOVATTIVI (OTTIMIZZATI FIL-LABORATORJI TAGĦNA) BĦAL: KULTURI PRIMARJI TA ‘FOTORIĊETTURI U EXPLANTS RATON RETINALI, TAĦT KUNDIZZJONIJIET NORMALI U STRESSANTI, KO-TRANSFECCION TA’ FATTURI TA ‘TRASKRIZZJONI U PROMOTURI DIANA, CHIP-SEQ, KARATTERIZZAZZJONI TA’ INTERAZZJONIJIET PERMEZZ TA’ INMUNOPRECIPITATION FLIMKIEN MA’ MALDI-TOF, TRANSĠENI IN VIVO TEKNIKI TA’ TRANSĠENESI F’RATON RETINA BL-UŻU TA’ MICROINYECTION SUBRETINALI, SEGWITI MINN ANALIŻI ISTOLOĠIKA DETTALJATA U INMUNODETECTION PERMEZZ TA’ MIKROSKOPIJA KONFOKALI. FL-AĦĦAR NETT, U PERMEZZ TA’ KOLLABORAZZJONI MA’ GRUPP TA’ BIJONANOTEKNOLOĠIJA TAD-DPT. TAL-FIŻIKA (UNIVERSITÀ TA ‘OXFORD), AĦNA SE TESPLORA BĦALA “PROVA TAL-PRINĊIPJU” IL-FATTIBBILTÀ TA’ TRATTAMENT POSSIBBLI MINN TERAPIJA ĠENIKU MA NANOPARTIKULI MGEŻWRA FID-DNA (NANOSISTEMA INTELLIĠENTI) FIL-MUDELL CERKL-/- IĠĠENERAT MILL CRISPR/CAS9, BILLI TISTUDJA L-EFFIĊJENZA TAT-TWASSIL TAL-ĠENI FIL-FOTORIĊETTURI META MQABBLA MA ‘STRATEĠIJI OĦRA, BĦAL SUBRETINAL MICROINYECTION SEGWIT MINN ELETTROPORAZZJONI JEW, FIL-FUTUR, VIRUSES ADENO-ASSOĊJATI, IT-TERAPIJA ĠENIKA ATTWALMENT UŻATA FIR-RETINA. _x000D_ Riżultati mistennija: AĦNA SE JAPPROFONDIXXU N-NETWERKS METABOLIĊI U TA ‘SINJALAR MIBDULA FIL-PROĊESS TA’ NEWRODEĠENERAZZJONI TAL-ISKOPERTA RETINA, JEW DAWK IL-MIRI TA ‘INTERESS TERAPEWTIKU, JEW INDIKATURI MOLEKULARI AFFIDABBLI TAL-PROGRESSJONI TAL-FENOTIP. BARRA MINN HEKK, AĦNA SER NESPLORAW IL-FATTIBBILTÀ TA ‘TERAPIJA/SALVATAĠĠ ĠENETIKU POSSIBBLI MINN NANOPARTICULAES MGEŻWRA BID-DNA, KEJL: L-EFFIĊJENZA TAT-TWASSIL TAL-ĠENI META MQABBLA MA’ STRATEĠIJI OĦRA; SOPRAVIVENZA/APOPTOSI TA’ FOTORIĊETTURI U III) ESPRESSJONI TA’ ĠENI RILEVANTI GĦALL-FUNZJONI TA’ KONI U STIKEK. (Maltese)
17 August 2022
0 references
FOTORECEPTORU DISFUNKCIJA UN NĀVE IR GALVENAIS REDZES ZUDUMA CĒLONIS IEDZIMTĀ TĪKLENES DISTROFIJĀ (IRD), KAS IR TĪKLENES SLIMĪBU GRUPA, SMAGA FENOTIPA UN ĻOTI NEVIENDABĪGA. PĒC VAIRĀK NEKĀ 30 GADU PĒTĪJUMIEM IR ZINĀMI GANDRĪZ 300 IZRAISĪTĀJGĒNI, BET JOPROJĀM IR ZINĀŠANU KOPUMS, KAS INTEGRĒTĀ VEIDĀ KORELĒ IRD GĒNUS UN TO MUTĀCIJAS (GENOTIPU) AR TO FIZIOLOĢISKO FUNKCIJU VESELĪBU UN TO DISFUNKCIJU SLIMĪBAS (FENOTIPA) GADĪJUMĀ. TĀPĒC PAPILDUS JAUNU GĒNU IDENTIFICĒŠANAI IR ĻOTI SVARĪGI FUNKCIONĀLI RAKSTUROT METABOLISMA UN APZĪMĒJUMU CEĻUS, KO MAINA ŠO IZRAISĪTĀJGĒNU PATOLOĢISKAS MUTĀCIJAS, LAI IZSTRĀDĀTU EFEKTĪVĀKAS TERAPEITISKĀS STRATĒĢIJAS, KAS VAR APTURĒT TĪKLENES NEIRODEĢENERĀCIJAS GAITU VAI PAT IZĀRSTĒT SLIMĪBU. MŪSU MĒRĶIS IR CERKL, NR2E3 UN ATXN3 FUNKCIONĀLAIS PĒTĪJUMS IR IRD IESAISTĪTIE GĒNI UN REPREZENTATĪVI ATTIECĪGIE TĪKLENES ŠŪNU CEĻI NO DZĪVNIEKU MODEĻU IZSTRĀDES UN RAKSTUROŠANAS RATONĀ UN ZEBRAS ZIVĪS. ŠIE MODEĻI JAU IR RADĪTI MŪSU GRUPĀ, VAI NU IZMANTOJOT JAUNO GENOMA IZDEVUMA STRATĒĢIJU (CRISPRCAS9) CERKL (KNOCKOUT) UN NR2E3 (KNOCKIN), VAI ARĪ NOJAUKŠANU, IZMANTOJOT MORFOLINS (ATXN3), BET NAV PHENOTIPIC ANALĪZES BIOĶĪMISKĀ, MORFOLOĢISKĀ UN FIZIOLOĢISKĀ LĪMENĪ. LAI TO PAVEIKTU, MĒS IZMANTOSIM INOVATĪVAS METODES (KAS OPTIMIZĒTAS MŪSU LABORATORIJĀS), PIEMĒRAM: FOTORECEPTORU UN RATONA TĪKLENES EKSPLANTU PRIMĀRĀS KULTŪRAS NORMĀLOS UN STRESA APSTĀKĻOS, TRANSKRIPCIJAS FAKTORU UN DIANA VEICINĀTĀJU KO-TRANSFECCION, MIKROSHĒMAS, MIJIEDARBĪBAS RAKSTUROJUMS AR INMUNOPRECIPITATION APVIENOJUMĀ AR MALDI-TOF, TRANSGĒNI IN VIVO TRANSGENĒZES PAŅĒMIENI RATON TĪKLENĒ, IZMANTOJOT SUBRETINĀLU MICROINYECTION, KAM SEKO DETALIZĒTA HISTOLOĢISKĀ ANALĪZE UN INMUNODETECTION AR KONFOKĀLO MIKROSKOPIJU. VISBEIDZOT, SADARBOJOTIES AR DPT BIONANOTEHNOLOĢIJAS GRUPU. NO FIZIKAS (OKSFORDAS UNIVERSITĀTE), MĒS KĀ “PRINCIPA PIERĀDĪJUMU” IZPĒTĪSIM IESPĒJAMO ĀRSTĒŠANAS IESPĒJAMĪBU AR GENĒNU TERAPIJU AR NANODAĻIŅIEM, KAS IESAIŅOTI DNS (VIEDAJĀ NANOSISTĒMĀ) CERKL-/- MODELĪ, KO ĢENERĒ CRISPR/CAS9, PĒTOT GĒNU PIEGĀDES EFEKTIVITĀTI FOTORECEPTOROS SALĪDZINĀJUMĀ AR CITĀM STRATĒĢIJĀM, PIEMĒRAM, SUBRETINĀLU MICROINYECTION, KAM SEKO ELEKTROPORĀCIJA VAI NĀKOTNĒ AR ADENO-SAISTĪTI VĪRUSI, KAS PAŠLAIK TIEK IZMANTOTA TĪKLENĒ. _x000D_ gaidāmie rezultāti: MĒS PADZIĻINĀSIM VIELMAIŅAS UN SIGNALIZĀCIJAS TĪKLUS, KAS MAINĪTI TĪKLENES NEIRODEĢENERĀCIJAS PROCESĀ, NOSAKOT TOS TERAPEITISKOS MĒRĶUS VAI UZTICAMUS FENOTIPA PROGRESĒŠANAS MOLEKULĀROS RĀDĪTĀJUS. TURKLĀT MĒS IZPĒTĪSIM IESPĒJAMO ĢENĒTISKO TERAPIJU/GLĀBT AR NANOPARTICULAES IETIN DNS, MĒROT: GĒNU PIEGĀDES EFEKTIVITĀTE SALĪDZINĀJUMĀ AR CITĀM STRATĒĢIJĀM; FOTORECEPTORU IZDZĪVOŠANA/APOPTOZE UN III) GĒNU EKSPRESIJA, KAS ATTIECAS UZ KONUSU UN NŪJU FUNKCIJU. (Latvian)
17 August 2022
0 references
DYSFUNKCIA A SMRŤ FOTORECEPTOROV JE HLAVNOU PRÍČINOU STRATY ZRAKU V DEDIČNEJ DYSTROFII SIETNICE (IRD), SKUPINE OCHORENÍ SIETNICE, ZÁVAŽNÉHO FENOTYPU A VEĽMI HETEROGÉNNEJ. PO VIAC AKO 30 ROKOCH VÝSKUMU JE ZNÁMYCH TAKMER 300 KAUZATÍVNYCH GÉNOV, ALE STÁLE EXISTUJE KORPUS POZNATKOV, KTORÉ INTEGROVANÝM SPÔSOBOM KORELUJÚ GÉNY IRD A ICH MUTÁCIE (GENOTYP) S ICH FYZIOLOGICKÝMI FUNKCIAMI V ZDRAVÍ A ICH DYSFUNKCIOU PRI CHOROBE (FENOTYP). PRETO JE OKREM IDENTIFIKÁCIE NOVÝCH GÉNOV KĽÚČOVÁ FUNKČNÁ CHARAKTERIZÁCIA METABOLICKÝCH A SIGNÁLNYCH DRÁH, KTORÉ SÚ ZMENENÉ PATOLOGICKÝMI MUTÁCIAMI V TÝCHTO GÉNOCH, ABY BOLO MOŽNÉ NAVRHNÚŤ ÚČINNEJŠIE TERAPEUTICKÉ STRATÉGIE, KTORÉ MÔŽU ZASTAVIŤ VÝVOJ SIETNICOVEJ NEURODEGENERÁCIE, ALEBO DOKONCA VYLIEČIŤ CHOROBU. NAŠÍM CIEĽOM JE FUNKČNÉ ŠTÚDIUM CERKL, NR2E3 A ATXN3, SÚ GÉNY ZAPOJENÉ DO IRD A REPREZENTUJÚCE RELEVANTNÉ BUNKOVÉ DRÁHY V SIETNICI Z VÝVOJA A CHARAKTERIZÁCIE ZVIERACÍCH MODELOV V RATONE A ZEBRAFISH. TIETO MODELY UŽ BOLI VYTVORENÉ V NAŠEJ SKUPINE, A TO BUĎ PROSTREDNÍCTVOM NOVEJ STRATÉGIE GENÓMOVEJ EDÍCIE (CRISPRCAS9) PRE CERKL (KNOCKOUT) A NR2E3 (KNOCKINA), ALEBO ZRAZENÍM POMOCOU MORFOLINS (ATXN3), ALE NEEXISTUJE ŽIADNA ANALÝZA PHENOTIPIC NA BIOCHEMICKEJ, MORFOLOGICKEJ A FYZIOLOGICKEJ ÚROVNI. NA TENTO ÚČEL POUŽIJEME INOVATÍVNE TECHNIKY (OPTIMALIZOVANÉ V NAŠICH LABORATÓRIÁCH), AKO NAPRÍKLAD: PRIMÁRNE KULTÚRY FOTORECEPTOROV A RATONOVÝCH EXPLANTÁTOV SIETNICE, ZA NORMÁLNYCH A STRESOVÝCH PODMIENOK, SPOLUTRANSFECCION TRANSKRIPČNÝCH FAKTOROV A PROPAGÁTOROV DIANA, ČIP-SEQ, CHARAKTERIZÁCIA INTERAKCIÍ POMOCOU INMUNOPRECIPITATION SPOLU S MALDI-TOF, TRANSGÉNOVÉ TECHNIKY TRANSGENÉZY V RATONSKEJ SIETNICI POMOCOU SUBRETINÁLNEJ MICROINYEKCIE, PO KTOREJ NASLEDUJE PODROBNÁ HISTOLOGICKÁ ANALÝZA A INMUNODETEKCIA KONFOKÁLNOU MIKROSKOPIOU. NAPOKON A PROSTREDNÍCTVOM SPOLUPRÁCE SO SKUPINOU BIONANOTECHNOLÓGIÍ DPT. FYZIKA (UNIVERZITA V OXFORDE), PRESKÚMAME AKO „PRINCIPIÁLNY DÔKAZ“ USKUTOČNITEĽNOSŤ MOŽNEJ LIEČBY GÉNOVOU TERAPIOU NANOČASTICAMI ZABALENÝMI DO DNA (INTELIGENTNÝ NANOSYSTÉM) V CERKL-/- MODELI GENEROVANOM CRISPR/CAS9, ŠTÚDIOM ÚČINNOSTI PRENOSU GÉNOV VO FOTORECEPTOROCH V POROVNANÍ S INÝMI STRATÉGIAMI, AKO JE SUBRETINÁLNA MICROINYECTION, PO KTOREJ NASLEDUJE ELEKTROPORÁCIA ALEBO V BUDÚCNOSTI ADENO-ASOCIOVANÉ VÍRUSY, GÉNOVÁ TERAPIA, KTORÁ SA V SÚČASNOSTI POUŽÍVA V SIETNICI. _x000D_ očakávané výsledky: PREHĹBIME METABOLICKÉ A SIGNALIZAČNÉ SIETE ZMENENÉ V PROCESE NEURODEGENERÁCIE DETEKCIE SIETNICE, BUĎ TIE CIELE TERAPEUTICKÉHO ZÁUJMU, ALEBO SPOĽAHLIVÉ MOLEKULÁRNE UKAZOVATELE PROGRESIE FENOTYPU. OKREM TOHO PRESKÚMAME USKUTOČNITEĽNOSŤ MOŽNEJ GENETICKEJ TERAPIE/ZÁCHRANY NANOPARTICULAES ZABALENEJ DNA, MERAJÚCEJ: ÚČINNOSŤ PRENOSU GÉNOV OPROTI INÝM STRATÉGIÁM; PREŽITIE/APOPTÓZA FOTORECEPTOROV A III) EXPRESIA GÉNOV RELEVANTNÝCH PRE FUNKCIU KUŽEĽOV A TYČINIEK. (Slovak)
17 August 2022
0 references
IS É MÍFHEIDHMIÚ AGUS BÁS PHOTORECEPTORS AN CHÚIS IS MÓ LE CAILLTEANAS FÍS I DYSTROPHY RETINAL HEREDITARY (IRDS), GRÚPA GALAIR DEN REITINE, FEINITÍOPA DIAN AGUS AN-ILCHINEÁLACH. TAR ÉIS NÍOS MÓ NÁ 30 BLIAIN DE THAIGHDE, TÁ BEAGNACH 300 GÉINTE CÚISEACHA AR EOLAS ACH TÁ CORPAS EOLAIS ANN FÓS A CHOMHFHREAGRAÍONN AR BHEALACH COMHTHÁITE NA GÉINTE IRD AGUS A GCUID SÓCHÁN (GENOTYPE) LENA BHFEIDHM FISEOLAÍOCH I SLÁINTE AGUS A MÍFHEIDHMIÚ SA GHALAR (PHENOTYPE). DÁ BHRÍ SIN, CHOMH MAITH LE GÉINTE NUA A SHAINAITHINT, TÁ SÉ RÍTHÁBHACHTACH TRÉITHRIÚ FEIDHMIÚIL NA GCONAIRÍ MEITIBILEACH AGUS COMHARTHAÍOCHTA A ATHRAÍTEAR TRÍ SHÓCHÁIN PHAITEOLAÍOCHA SNA GÉINTE CÚISEACHA SEO, CHUN STRAITÉISÍ TEIRIPEACHA NÍOS ÉIFEACHTÚLA A DHEARADH A D’FHÉADFADH STOP A CHUR LE DUL CHUN CINN NEURODEGENERATION RETINAL, NÓ FIÚ AN GALAR A LEIGHEAS. IS É ÁR GCUSPÓIR AN STAIDÉAR FEIDHMIÚIL CERKL, NR2E3, AGUS ATXN3, IS IAD NA GÉINTE A BHFUIL BAINT ACU LE IRDS AGUS IONADAÍ NA COSÁIN CHEALLACHA ÁBHARTHA I REITINE Ó FHORBAIRT AGUS THRÉITHRIÚ SAMHLACHA AINMHITHE I RATON AGUS ZEBRAFISH. GINEADH NA SAMHLACHA SEO INÁR NGRÚPA CHEANA FÉIN, TRÍD AN STRAITÉIS GENOMIC EAGRÁN NUA (CRISPRCAS9) DO CERKL (KNOCKOUT) AGUS NR2E3 (KNOCKIN), NÓ TRÍ KNOCKDOWN AG BAINT ÚSÁIDE AS MORFOLINS (ATXN3), ACH NÍL AON ANAILÍS PHENOTIPIC AR LEIBHÉIL BITHCHEIMICEACHA, MORFOLOGICAL AGUS FISEOLAÍOCHA. CHUN SEO A DHÉANAMH, BAINFIMID ÚSÁID AS TEICNÍCÍ NUÁLACHA (OPTAMAITHE INÁR SAOTHARLANNA) AR NÓS: CULTÚIR PHRÍOMHÚLA PHOTORECEPTORS AGUS EXPLANTS RETINAL RATON, FAOI GHNÁTHCHOINNÍOLLACHA AGUS STRUIS, COMH-TRANSFECCION FACHTÓIRÍ TRAS-SCRÍOBH AGUS TIONSCNÓIRÍ DIANA, SLISEANNA-SEQ, TRÉITHRIÚ IDIRGHNÍOMHAÍOCHTAÍ AG INMUNOPRECIPITATION CÚPLÁILTE LE MALDI-TOF, TRANSGENES IN VIVO TEICNÍCÍ TRANSGENESIS I RATON RETINA AG BAINT ÚSÁIDE AS SUBRETINAL MICROINYECTION, AGUS ANAILÍS HISTOLOGIC MIONSONRAITHE AGUS INMUNODETECTION AG MICREASCÓPACHT CONFOCAL. AR DEIREADH, AGUS TRÍ CHOMHOIBRIÚ LE GRÚPA BITH-NANAITHEICNEOLAÍOCHTA DEN DPT. NA FISICE (OLLSCOIL OXFORD), DÉANFAIMID INIÚCHADH MAR “CRUTHÚNAS PRIONSABAIL” AN FHÉIDEARTHACHT CÓIREÁIL FÉIDEARTHA TRÍ THEIRIPE GÉINE LE NANOPARTICULATES FILLTE I DNA (NANACHÓRAS CLISTE) SA CERKL-/- SAMHAIL A GHINTEAR AG CRISPR/CAS9, TRÍ STAIDÉAR A DHÉANAMH AR ÉIFEACHTÚLACHT NA SEACHADADH GÉIN I PHOTORECEPTORS I GCOMPARÁID LE STRAITÉISÍ EILE, COSÚIL LE SUBRETINAL MICROINYECTION AGUS ELECTROPORATION INA DHIAIDH SIN NÓ, SA TODHCHAÍ, VÍRIS ADE-GHAOLMHARA, AN TEIRIPE GÉINE A ÚSÁIDTEAR FAOI LÁTHAIR I REITINEINE. _x000D_ Torthaí a bhfuiltear ag súil leo: DÉANFAIMID NA LÍONRAÍ MEITIBILEACH AGUS COMHARTHAÍOCHTA A ATHRAÍODH I BPRÓISEAS NEURODEGENERATION AN BHRATH REITINE A DHOIMHNIÚ, BÍODH NA SPRIOCANNA SIN A BHFUIL LEAS TEIRIPEACH AG BAINT LEO, NÓ TÁSCAIRÍ MÓILÍNEACHA IONTAOFA MAIDIR LE DUL CHUN CINN AN FHEINITÍOPA. INA THEANNTA SIN, DÉANFAIMID INIÚCHADH AR INDÉANTACHT TEIRIPE GÉINITÍ/TARRTHÁLA GÉINITÍ FÉIDEARTHA AG NANOPARTICULAES FILLTE LE DNA, A THOMHAS: ÉIFEACHTÚLACHT SEACHADTA GÉINE I GCOMPARÁID LE STRAITÉISÍ EILE; MARTHANAS/APOPTÓIS FÓTA-GHLACADÓIRÍ AGUS III) LÉIRIÚ GÉINTE A BHAINEANN LE FEIDHM CÓIN AGUS BATAÍ. (Irish)
17 August 2022
0 references
DYSFUNKCE A SMRT FOTORECEPTORŮ JE HLAVNÍ PŘÍČINOU ZTRÁTY ZRAKU U DĚDIČNÉ SÍTNICE DYSTROFIE (IRD), SKUPINY ONEMOCNĚNÍ SÍTNICE, TĚŽKÉHO FENOTYPU A VELMI HETEROGENNÍHO. PO VÍCE NEŽ 30 LETECH VÝZKUMU JE ZNÁMO TÉMĚŘ 300 PŘÍČINNÝCH GENŮ, ALE STÁLE EXISTUJE SOUBOR ZNALOSTÍ, KTERÝ INTEGROVANĚ KORELUJE GENY IRD A JEJICH MUTACE (GENOTYP) S JEJICH FYZIOLOGICKOU FUNKCÍ VE ZDRAVÍ A JEJICH DYSFUNKCÍ V NEMOCI (FENOTYP). PROTO, KROMĚ IDENTIFIKACE NOVÝCH GENŮ, JE ZÁSADNÍ FUNKČNÍ CHARAKTERIZACE METABOLICKÝCH A SIGNAGE DRAH, KTERÉ JSOU ZMĚNĚNY PATOLOGICKÝMI MUTACEMI V TĚCHTO PŘÍČINNÝCH GENECH, ABY BYLO MOŽNÉ NAVRHNOUT ÚČINNĚJŠÍ TERAPEUTICKÉ STRATEGIE, KTERÉ MOHOU ZASTAVIT PRŮBĚH NEURODEGENERACE SÍTNICE, NEBO DOKONCE VYLÉČIT ONEMOCNĚNÍ. NAŠÍM CÍLEM JE FUNKČNÍ STUDIE CERKL, NR2E3 A ATXN3, JSOU GENY ZAPOJENÉ DO IRD A REPREZENTATIVNÍCH BUNĚČNÝCH CEST V SÍTNICI Z VÝVOJE A CHARAKTERIZACE ZVÍŘECÍCH MODELŮ U RATON A ZEBRAFISH. TYTO MODELY JIŽ BYLY VYTVOŘENY V NAŠÍ SKUPINĚ, A TO BUĎ PROSTŘEDNICTVÍM NOVÉ STRATEGIE GENOMOVÉ EDICE (CRISPRCAS9) PRO CERKL (KNOCKOUT) A NR2E3 (KNOCKIN), NEBO ROZDRCENÍM POMOCÍ MORFOLINS (ATXN3), ALE NA BIOCHEMICKÉ, MORFOLOGICKÉ A FYZIOLOGICKÉ ÚROVNI NEEXISTUJE ŽÁDNÁ ANALÝZA PHENOTIPIC. K TOMU VYUŽIJEME INOVATIVNÍ TECHNIKY (OPTIMALIZOVANÉ V NAŠICH LABORATOŘÍCH), JAKO JSOU: PRIMÁRNÍ KULTURY FOTORECEPTORŮ A RATONOVÝCH EXPLANTÁTŮ, ZA NORMÁLNÍCH A STRESOVÝCH PODMÍNEK, SPOLU-TRANSFECCION TRANSKRIPČNÍCH FAKTORŮ A PROMOTORŮ DIANA, ČIPOVÉ SEKVENCE, CHARAKTERIZACE INTERAKCÍ INMUNOPRECIPITATION SPOJENÝCH S MALDI-TOF, TRANSGENY IN VIVO TRANSGENEZE V RATON SÍTNICI POMOCÍ SUBRETINÁLNÍ MICROINYECTION, NÁSLEDOVANÉ PODROBNOU HISTOLOGICKOU ANALÝZOU A INMUNODETECTION KONFOKÁLNÍ MIKROSKOPIÍ. A KONEČNĚ PROSTŘEDNICTVÍM SPOLUPRÁCE SE SKUPINOU BIONANOTECH DPT. Z FYZIKY (UNIVERSITY OF OXFORD) BUDEME ZKOUMAT JAKO „DŮKAZ PRINCIPU“ PROVEDITELNOST MOŽNÉ LÉČBY POMOCÍ GENOVÉ TERAPIE NANOPARTIKULÁTY ZABALENÝMI V DNA (INTELIGENTNÍ NANOSYSTÉM) V CERKL-/- MODELU GENEROVANÉM CRISPR/CAS9, ZKOUMÁNÍM ÚČINNOSTI PŘENOSU GENŮ VE FOTORECEPTORECH VE SROVNÁNÍ S JINÝMI STRATEGIEMI, JAKO JE SUBRETINÁLNÍ MICROINYECTION NÁSLEDOVANÁ ELEKTROPORACÍ NEBO V BUDOUCNU ADENO- ASOCIOVANÝMI VIRY, GENOVOU TERAPII, KTERÁ SE V SOUČASNÉ DOBĚ POUŽÍVÁ V SÍTNICI. _x000D_ očekávané výsledky: PROHLOUBÍME METABOLICKÉ A SIGNALIZAČNÍ SÍTĚ ZMĚNĚNÉ V PROCESU NEURODEGENERACE SÍTNICE DETEKUJÍCÍ BUĎ TYTO CÍLE TERAPEUTICKÉHO ZÁJMU, NEBO SPOLEHLIVÉ MOLEKULÁRNÍ UKAZATELE PROGRESE FENOTYPU. KROMĚ TOHO PROZKOUMÁME PROVEDITELNOST MOŽNÉ GENETICKÉ TERAPIE/ZÁCHRANY NANOPARTICULAES ZABALENÉ DNA, MĚŘENÍ: ÚČINNOST POSKYTOVÁNÍ GENŮ V POROVNÁNÍ S JINÝMI STRATEGIEMI; PŘEŽITÍ/APOPTÓZA FOTORECEPTORŮ A III) EXPRESE GENŮ RELEVANTNÍCH PRO FUNKCI KUŽELŮ A TYČINEK. (Czech)
17 August 2022
0 references
A DESFUNÇÃO E A MORTE DOS FOTORECEPTORES É A PRINCIPAL CAUSA DE PERDA DE VISÃO NA DESSTROPIA RETINAL HEREDITÁRIA (IRDS), UM GRUPO DE DOENÇAS DA RETINA, FENÓTIPO VÁRIO E MUITO HETEROGÉNEO. Após mais de 30 anos de investigação, conhecem-se cerca de 300 genes causadores, mas continua a existir um corpo de conhecimentos que correlaciona de forma integrada os genes e as suas mutações (genótipo) com a sua função fisiológica na saúde e a sua desfunção na doença (fenótipo). Por conseguinte, para além da identificação de novos genes, é fundamental a caracterização funcional dos caminhos metabólicos e de sinalização que são alterados por mutações patológicas nesses genes causadores, a fim de conceber estratégias terapêuticas mais eficazes que possam travar o progresso da neurogeração retiniana, ou mesmo sanar a doença. NOSSO OBJETIVO É O ESTUDO FUNCIONAL DE CERKL, NR2E3, E ATXN3, SÃO OS GÉNEROS ENVOLVIDOS EM IRDAS E REPRESENTANTES DE PERCURSO CELULAR RELEVANTES EM RETINA DO DESENVOLVIMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE MODELOS ANIMAIS EM RATON E ZEBRAFISH. Estes modelos já foram desenvolvidos no nosso grupo, quer através da ESTRATÉGIA DE EDIÇÃO GENÓMICA NOVEL (CRISPRCAS9) PARA O CERKL (KNOCKOUT) E NR2E3 (KNOCKIN), quer através da utilização de MORFOLINS (ATXN3), mas não existe análise fenotópica nos níveis bioquímico, morfológico e fisiológico. Para fazer isso, vamos utilizar técnicas inovadoras (OPTIMISED NOS NOSSOS LABORATÓRIOS) como: CULTURAS PRIMÁRIAS DE FOTORECEPTORES E EXPLICATIVAS RETINAIS DE RATON, EM CONDIÇÕES NORMAIS E ESTRESFUL, CO-TRANSFECIONAMENTO DE FATORES E PROMOTORES DE TRANSCRIÇÃO DIANA, CHIP-SEQ, CARACTERIZAÇÃO DAS INTERAÇÕES POR INMUNOPRECIPITAÇÃO AcopladaS A MALDI-TOF, TRANSGENES EM TÉCNICAS DE TRANSGENESE VIVO EM RATON RETINA UTILIZANDO MICROINECÇÃO SUBRETINAL, SEGUIDAS DE UMA ANÁLISE HISTOLÓGICA DETIVA E INMUNODETECTION POR MICROSCÓPIA CONFOCAL. Finalmente, e através da colaboração com um grupo de BIONANOTECNOLOGIA do DPT. OF PHYSICS (UNIVERSITY OF OXFORD), WE WILL EXPLORE AS A “PROOF OF PRINCIPLE” THE FEASIBILITY OF A POSSIBLE TREATMENT BY GENIC THERAPY WITH NANOPARTICULATES WRAPPED IN DNA (SMART NANOSYSTEM) IN THE CERKL-/- MODEL GENERATED BY CRISPR/CAS9, BY STUDYING THE EFFICIENCY OF GENE DELIVERY IN PHOTORECEPTORS COMPARED WITH OTHER STRATEGIES, SUCH AS SUBRETINAL MICROINYECTION FOLLOWED BY ELECTROPORATION OR, IN THE FUTURE, ADENO-ASSOCIATED VIRUSES, THE GENIC THERAPY CURRENTLY USED IN RETINA. _x000D_ Resultados esperados: Aprofundaremos as redes metabólicas e de sinalização alteradas no processo de neurodetecção da retina, quer se trate de objectivos de interesse terapeutico, quer de indicadores moleculares fiáveis da progressão do fenótipo. Além disso, exploraremos a viabilidade de uma possível terapia/resposta genética por nanopartículas envoltas em ADN, medindo: GENE DELIVERY EFFICIENCY VERSUS OUTRAS ESTRATÉGIAS; SOBREVIVÊNCIA/APOPTOSE DOS FOTORECEPTORES E III) EXPRESSÃO DOS GÉNEROS RELEVANTES À FUNÇÃO DE CONES E DISPOSIÇÕES. (Portuguese)
17 August 2022
0 references
PÄRILIKU VÕRKKESTA DÜSTROOFIA (IRD), VÕRKKESTA HAIGUSTE RÜHM, RASKE FENOTÜÜP JA VÄGA HETEROGEENNE NÄGEMISE KAOTUSE PEAMINE PÕHJUS ON FOTORETSEPTORITE HÄIRE JA SURM. PÄRAST ROHKEM KUI 30 AASTAT KESTNUD UURIMISTÖÖD ON TEADA LIGI 300 PÕHJUSLIKKU GEENI, KUID ON OLEMAS TEADMISTE KOGU, MIS ÜHENDAB INTEGREERITUD VIISIL IRD GEENID JA NENDE MUTATSIOONID (GENOTÜÜP) NENDE FÜSIOLOOGILISE FUNKTSIOONIGA TERVISELE JA NENDE DÜSFUNKTSIOONIGA HAIGUSES (FENOTÜÜP). SEETÕTTU ON LISAKS UUTE GEENIDE TUVASTAMISELE OLULINE NENDE METABOOLSETE JA MÄRGISTUSRADADE FUNKTSIONAALNE ISELOOMUSTAMINE, MIDA MUUDAVAD PATOLOOGILISED MUTATSIOONID NENDES PÕHJUSLIKES GEENIDES, ET KUJUNDADA TÕHUSAMAID RAVISTRATEEGIAID, MIS VÕIVAD PEATADA VÕRKKESTA NEURODEGENERATSIOONI PROGRESSI VÕI ISEGI RAVIDA HAIGUST. MEIE EESMÄRK ON CERKL, NR2E3 JA ATXN3 FUNKTSIONAALNE UURING ON GEENID, MIS OSALEVAD IRD-DES JA ESINDAVAD ASJAKOHASEID RAKULISI RADASID VÕRKKESTAS ALATES LOOMMUDELITE VÄLJATÖÖTAMISEST JA ISELOOMUSTAMISEST RATONIS JA SEBRAKALAS. NEED MUDELID ON MEIE GRUPIS JUBA LOODUD KAS UUDSE GENOOMILISE VÄLJAANDE STRATEEGIA (CRISPRCAS9) ABIL CERKLI (KNOCKOUT) JA NR2E3 (KNOCKIN) JAOKS VÕI MORFOLINS (ATXN3) ABIL, KUID BIOKEEMILISTEL, MORFOLOOGILISTEL JA FÜSIOLOOGILISTEL TASEMETEL PHENOTIPIC-ANALÜÜSI EI OLE. SELLEKS KASUTAME UUENDUSLIKKE MEETODEID (OPTIMEERITUD MEIE LABORITES), NÄITEKS: FOTORETSEPTORITE JA RATON VÕRKKESTA EKSPLANTAATIDE PRIMAARSED KULTUURID NORMAALSETES JA STRESSIROHKETES TINGIMUSTES TRANSKRIPTSIOONIFAKTORITE JA PROMOOTORITE DIANA, KIIP-SEQ, KOOSTOIMETE ISELOOMUSTAMINE KOOS MALDI-TOF-IGA, TRANSGEENID IN VIVO RATON VÕRKKESTAS, KASUTADES SUBRETINAALSET MICROINYECTION’I, MILLELE JÄRGNEB ÜKSIKASJALIK HISTOLOOGILINE ANALÜÜS JA INMUNODETECTION KONFLOKAALSE MIKROSKOOPIA ABIL. LÕPUKS JA KOOSTÖÖS DPT BIONANOTEHNOLOOGIA RÜHMAGA. FÜÜSIKA (OXFORDI ÜLIKOOL) UURIME KUI PÕHIMÕTTE TÕESTUST VÕIMALIKU GENEETILISE RAVI TEOSTATAVUSE KOHTA NANOTAHKETEGA, MIS ON PAKITUD DNASSE (ARUKAS NANOSÜSTEEM) CERKL-I/-MUDELIS, MIS ON LOODUD CRISPR/CAS9 POOLT, UURIDES GEENIÜLEKANDE TÕHUSUST FOTORETSEPTORITES VÕRRELDES TEISTE STRATEEGIATEGA, NAGU SUBRETINAALNE MICROINYECTION, MILLELE JÄRGNEB ELEKTROPORATSIOON, VÕI TULEVIKUS ADENO-ASSOTSIEERUNUD VIIRUSED, MIDA PRAEGU VÕRKKESTAS KASUTATAKSE. _x000D_ oodatavad tulemused: ME SÜVENDAME METABOOLSEID JA SIGNAALIVÕRKE, MIS ON MUUTUNUD VÕRKKESTA TUVASTAMISE NEURODEGENERATSIOONI PROTSESSIS, KAS NEED TERAPEUTILIST HUVI PAKKUVAD SIHTMÄRGID VÕI USALDUSVÄÄRSED MOLEKULAARSED NÄITAJAD FENOTÜÜBI PROGRESSEERUMISE KOHTA. LISAKS UURIME VÕIMALIKU GENEETILISE TERAAPIA/PÄÄSTE TEOSTATAVUST DNA-GA MÄHITUD NANOPARTICULAESI ABIL, MÕÕTES: GEENIDE MANUSTAMISE TÕHUSUS VÕRRELDES TEISTE STRATEEGIATEGA; FOTORETSEPTORITE ELULEMUS/APOPTOOS JA III) KOONUSTE JA PULGADE FUNKTSIOONI SEISUKOHAST OLULISTE GEENIDE EKSPRESSIOON. (Estonian)
17 August 2022
0 references
A FOTORECEPTOROK DISZFUNKCIÓJA ÉS HALÁLA A LÁTÁSVESZTÉS FŐ OKA AZ ÖRÖKLETES RETINA DISZTRÓFIÁBAN (IRD), A RETINA BETEGSÉGEINEK CSOPORTJÁBAN, A SÚLYOS FENOTÍPUSBAN ÉS NAGYON HETEROGÉN. TÖBB MINT 30 ÉV KUTATÁS UTÁN KÖZEL 300 KÓROKOZÓ GÉN ISMERT, DE MÉG MINDIG VAN EGY OLYAN TUDÁS, AMELY INTEGRÁLT MÓDON KORRELÁLJA AZ IRD GÉNJEIT ÉS MUTÁCIÓIT (GENOTÍPUSÁT) AZ EGÉSZSÉGBEN VALÓ ÉLETTANI FUNKCIÓJUKKAL ÉS A BETEGSÉGBEN (FENOTÍPUS) FENNÁLLÓ DISZFUNKCIÓVAL. EZÉRT AZ ÚJ GÉNEK AZONOSÍTÁSA MELLETT ALAPVETŐ FONTOSSÁGÚ A METABOLIKUS ÉS JELÚTVONALAK FUNKCIONÁLIS JELLEMZÉSE, AMELYEKET EZEK A KÓROKOZÓ GÉNEK PATOLÓGIAI MUTÁCIÓI MEGVÁLTOZTATNAK, HOGY HATÉKONYABB TERÁPIÁS STRATÉGIÁKAT DOLGOZZANAK KI, AMELYEK MEGÁLLÍTHATJÁK A RETINÁLIS NEURODEGENERÁCIÓ FEJLŐDÉSÉT, VAGY AKÁR GYÓGYÍTHATJÁK A BETEGSÉGET. CÉLUNK A CERKL, AZ NR2E3, ÉS AZ ATXN3 FUNKCIONÁLIS VIZSGÁLATA AZ IRD-KBEN RÉSZT VEVŐ GÉNEK ÉS A RETINA RELEVÁNS SEJTÚTJAINAK REPREZENTATIVITÁSA A RATONBAN ÉS A ZEBRADÁNIÁBAN TALÁLHATÓ ÁLLATMODELLEK FEJLESZTÉSÉBŐL ÉS JELLEMZÉSÉBŐL. EZEKET A MODELLEKET MÁR LÉTREHOZTUK A CSOPORTUNKBAN, VAGY A CERKL (KNOCKOUT) ÉS AZ NR2E3 (KNOCKIN) ÚJ GENOMIKUS KIADÁSÁNAK STRATÉGIÁJÁN (CRISPRCAS9) KERESZTÜL, VAGY A MORFOLINS (ATXN3) SEGÍTSÉGÉVEL VÉGREHAJTOTT LEÜTÉSSEL, DE BIOKÉMIAI, MORFOLÓGIAI ÉS FIZIOLÓGIAI SZINTEN NINCS PHENOTIPIC ELEMZÉS. EHHEZ INNOVATÍV (LABORATÓRIUMAINKBAN OPTIMALIZÁLT) TECHNIKÁKAT ALKALMAZUNK, MINT PÉLDÁUL: FOTORECEPTOROK ÉS RATON RETINÁLIS EXPLANTÁCIÓK ELSŐDLEGES TENYÉSZETEI NORMÁL ÉS STRESSZES KÖRÜLMÉNYEK KÖZÖTT, TRANSZKRIPCIÓS FAKTOROK ÉS PROMÓTEREK, DIANA, CHIP-SEQ, A KÖLCSÖNHATÁSOK JELLEMZÉSE AZ INMUNOPRECIPITATION ÉS A MALDI-TOF ÁLTAL, TRANSZGÉNEK IN VIVO TRANSZGENEZIS TECHNIKÁK RATON RETINA SZUBRETINÁLIS MICROINYECTION ALKALMAZÁSÁVAL, MAJD RÉSZLETES SZÖVETTANI ELEMZÉS ÉS INMUNODETECTION KONOCALIS MIKROSZKÓPIA. VÉGÜL, A DPT BIONANOTECHNOLÓGIAI CSOPORTJÁVAL VALÓ EGYÜTTMŰKÖDÉS RÉVÉN. A FIZIKA (UNIVERSITY OF OXFORD) A CRISPR/CAS9 ÁLTAL GENERÁLT CERKL-/- MODELLBEN A CERKL/CAS9 ÁLTAL GENERÁLT CERKL-/- MODELLBEN A DNS-BE (INTELLIGENS NANORENDSZERBE) CSOMAGOLT NANORÉSZKULÁTUMOKKAL VÉGZETT GÉNTERÁPIA MEGVALÓSÍTHATÓSÁGÁT „ELVI BIZONYÍTÉKKÉNT” VIZSGÁLJUK, A FOTORECEPTOROK GÉNSZÁLLÍTÁSÁNAK HATÉKONYSÁGÁT MÁS STRATÉGIÁKHOZ KÉPEST, MINT PÉLDÁUL A SZUBRETINÁLIS MICROINYECTION, AMELYET ELEKTROPORÁCIÓ KÖVET, VAGY A JÖVŐBEN AZ ADENO-ASSZOCIÁLT VÍRUSOK, A RETINÁBAN JELENLEG ALKALMAZOTT GÉNTERÁPIA. _x000D_ várt eredmények: ELMÉLYÍTJÜK A RETINA NEURODEGENERÁCIÓJÁNAK FOLYAMATÁBAN MEGVÁLTOZOTT METABOLIKUS ÉS JELADÓ HÁLÓZATOKAT, AKÁR A TERÁPIÁS ÉRDEKLŐDÉSRE SZÁMOT TARTÓ CÉLOKAT, AKÁR A FENOTÍPUS PROGRESSZIÓJÁNAK MEGBÍZHATÓ MOLEKULÁRIS MUTATÓIT. EZEN TÚLMENŐEN MEGVIZSGÁLJUK A NANOPARTICULAES DNS-SEL BORÍTOTT LEHETSÉGES GENETIKAI TERÁPIÁJÁNAK/MENTÉSÉNEK MEGVALÓSÍTHATÓSÁGÁT, AMELY A KÖVETKEZŐKET MÉRI: GÉNSZÁLLÍTÁSI HATÉKONYSÁG MÁS STRATÉGIÁKKAL SZEMBEN; A FOTORECEPTOROK TÚLÉLÉSE/APOPTÓZISA ÉS III) A KÚPOK ÉS BOTOK MŰKÖDÉSE SZEMPONTJÁBÓL LÉNYEGES GÉNEK EXPRESSZIÓJA. (Hungarian)
17 August 2022
0 references
ДИСФУНКЦИЯТА И СМЪРТТА НА ФОТОРЕЦЕПТОРИТЕ Е ОСНОВНАТА ПРИЧИНА ЗА ЗАГУБА НА ЗРЕНИЕ ПРИ НАСЛЕДСТВЕНА ДИСТРОФИЯ НА РЕТИНАТА (IRDS), ГРУПА ОТ ЗАБОЛЯВАНИЯ НА РЕТИНАТА, ТЕЖЪК ФЕНОТИП И МНОГО ХЕТЕРОГЕНЕН. СЛЕД ПОВЕЧЕ ОТ 30 ГОДИНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ СА ИЗВЕСТНИ БЛИЗО 300 ГЕНА ПРИЧИНИТЕЛИ, НО ВСЕ ОЩЕ ИМА СЪВКУПНОСТ ОТ ЗНАНИЯ, КОИТО КОРЕЛИРАТ ПО ИНТЕГРИРАН НАЧИН ГЕНИТЕ НА IRD И ТЕХНИТЕ МУТАЦИИ (ГЕНОТИП) С ТЯХНАТА ФИЗИОЛОГИЧНА ФУНКЦИЯ В ЗДРАВЕТО И ТЯХНАТА ДИСФУНКЦИЯ В ЗАБОЛЯВАНЕТО (ФЕНОТИП). СЛЕДОВАТЕЛНО, В ДОПЪЛНЕНИЕ КЪМ ИДЕНТИФИЦИРАНЕТО НА НОВИ ГЕНИ, ОТ РЕШАВАЩО ЗНАЧЕНИЕ Е ФУНКЦИОНАЛНОТО ХАРАКТЕРИЗИРАНЕ НА МЕТАБОЛИТНИТЕ И СИГНАЛНИТЕ ПЪТИЩА, КОИТО СЕ ПРОМЕНЯТ ОТ ПАТОЛОГИЧНИ МУТАЦИИ В ТЕЗИ ПРИЧИНЯВАЩИ ГЕНИ, ЗА ДА СЕ РАЗРАБОТЯТ ПО-ЕФЕКТИВНИ ТЕРАПЕВТИЧНИ СТРАТЕГИИ, КОИТО МОГАТ ДА СПРАТ ПРОГРЕСА НА НЕВРОДЕГЕНЕРАЦИЯТА НА РЕТИНАТА ИЛИ ДОРИ ДА ИЗЛЕКУВАТ ЗАБОЛЯВАНЕТО. НАШАТА ЦЕЛ Е ФУНКЦИОНАЛНОТО ИЗСЛЕДВАНЕ НА CERKL, NR2E3 И ATXN3 СА ГЕНИТЕ, УЧАСТВАЩИ В IRDS И ПРЕДСТАВИТЕЛНИ ЗА СЪОТВЕТНИТЕ КЛЕТЪЧНИ ПЪТИЩА В РЕТИНАТА ОТ РАЗВИТИЕТО И ХАРАКТЕРИЗИРАНЕТО НА ЖИВОТИНСКИ МОДЕЛИ В РАТОН И ЗЕБРОФИНИ. ТЕЗИ МОДЕЛИ ВЕЧЕ СА ГЕНЕРИРАНИ В НАШАТА ГРУПА ИЛИ ЧРЕЗ НОВАТА СТРАТЕГИЯ ЗА ГЕНОМНО ИЗДАНИЕ (CRISPRCAS9) ЗА CERKL (KNOCKOUT) И NR2E3 (KNOCKIN), ИЛИ ЧРЕЗ НОКДАУН С ИЗПОЛЗВАНЕ НА MORFOLINS (ATXN3), НО НЯМА PHENOTIPIC АНАЛИЗ НА БИОХИМИЧНИ, МОРФОЛОГИЧНИ И ФИЗИОЛОГИЧНИ НИВА. ЗА ТАЗИ ЦЕЛ ЩЕ ИЗПОЛЗВАМЕ ИНОВАТИВНИ ТЕХНИКИ (ОПТИМИЗИРАНИ В НАШИТЕ ЛАБОРАТОРИИ), КАТО НАПРИМЕР: ПЪРВИЧНИ КУЛТУРИ ОТ ФОТОРЕЦЕПТОРИ И ЕКСПЛАНАНТИ НА РЕТИНАТА НА РАТОН, ПРИ НОРМАЛНИ И СТРЕСОВИ УСЛОВИЯ, СЪВМЕСТНО С ТРАНСКРИПЦИОННИТЕ ФАКТОРИ И ПРОМОТОРИТЕ DIANA, ЧИП-SEQ, ХАРАКТЕРИЗИРАНЕ НА ВЗАИМОДЕЙСТВИЯТА ЧРЕЗ INMUNOPRECIPITATION, СЪЧЕТАНО С MALDI-TOF, ТРАНСГЕНИ ИН ВИВО ТРАНСГЕНЕЗА ТЕХНИКИ В RATON RETINA, ИЗПОЛЗВАЙКИ СУБРЕТИНАЛНА MICROINYECTION, ПОСЛЕДВАНИ ОТ ПОДРОБЕН ХИСТОЛОГИЧЕН АНАЛИЗ И INMUNODETECTION ЧРЕЗ КОНФОКАЛНА МИКРОСКОПИЯ. И НАКРАЯ, И ЧРЕЗ СЪТРУДНИЧЕСТВО С ГРУПА БИОНАНОТЕХНОЛОГИИ НА ДПП. НА ФИЗИКАТА (УНИВЕРСИТЕТ В ОКСФОРД), ЩЕ ПРОУЧИМ КАТО „ДОКАЗАТЕЛСТВО ЗА ПРИНЦИП“ ОСЪЩЕСТВИМОСТТА НА ВЪЗМОЖНО ЛЕЧЕНИЕ ЧРЕЗ ГЕННА ТЕРАПИЯ С НАНОЧАСТИЦИ, УВИТИ В ДНК (ИНТЕЛИГЕНТНА НАНОСИСТЕМА) В CERKL-/- МОДЕЛ, ГЕНЕРИРАН ОТ CRISPR/CAS9, ЧРЕЗ ИЗУЧАВАНЕ НА ЕФЕКТИВНОСТТА НА ГЕННОТО ДОСТАВЯНЕ ВЪВ ФОТОРЕЦЕПТОРИ В СРАВНЕНИЕ С ДРУГИ СТРАТЕГИИ, КАТО СУБРЕТИНАЛНА MICROINYECTION, ПОСЛЕДВАНА ОТ ЕЛЕКТРОПОРАЦИЯ ИЛИ, В БЪДЕЩЕ, АДЕНО-АСОЦИИРАНИ ВИРУСИ, ГЕННАТА ТЕРАПИЯ, КОЯТО ПОНАСТОЯЩЕМ СЕ ИЗПОЛЗВА В РЕТИНАТА. _x000D_ очаквани резултати: ЩЕ ЗАДЪЛБОЧИМ МЕТАБОЛИТНИТЕ И СИГНАЛНИТЕ МРЕЖИ, ПРОМЕНЕНИ В ПРОЦЕСА НА НЕВРОДЕГЕНЕРАЦИЯ НА ОТКРИВАНЕ НА РЕТИНАТА, ИЛИ ТЕЗИ ЦЕЛИ ОТ ТЕРАПЕВТИЧЕН ИНТЕРЕС, ИЛИ НАДЕЖДНИ МОЛЕКУЛЯРНИ ПОКАЗАТЕЛИ ЗА ПРОГРЕСИЯТА НА ФЕНОТИПА. ОСВЕН ТОВА ЩЕ ПРОУЧИМ ОСЪЩЕСТВИМОСТТА НА ВЪЗМОЖНА ГЕНЕТИЧНА ТЕРАПИЯ/СПАСИТЕЛНА ТЕРАПИЯ ОТ NANOPARTICULAES, ОБВИТА С ДНК, ИЗМЕРВАНЕ: ЕФЕКТИВНОСТ НА ДОСТАВЯНЕТО НА ГЕНИ В СРАВНЕНИЕ С ДРУГИ СТРАТЕГИИ; ПРЕЖИВЯЕМОСТ/АПОПТОЗА НА ФОТОРЕЦЕПТОРИ И III) ЕКСПРЕСИЯ НА ГЕНИ, СВЪРЗАНИ С ФУНКЦИЯТА НА КОНУСИ И ПРЪЧКИ. (Bulgarian)
17 August 2022
0 references
FOTORECEPTORIŲ DISFUNKCIJA IR MIRTIS YRA PAGRINDINĖ REGOS PRARADIMO PRIEŽASTIS PAVELDIMOJE TINKLAINĖS DISTROFIJOJE (IRD), TINKLAINĖS LIGŲ GRUPĖJE, SUNKIOJE FENOTIPO IR LABAI HETEROGENINĖJE. PO DAUGIAU NEI 30 METŲ TYRIMŲ YRA ŽINOMI BEVEIK 300 PRIEŽASTINIŲ GENŲ, TAČIAU VIS DAR YRA ŽINIŲ VISUMA, KURI INTEGRUOTAI KORELIUOJA IRD GENUS IR JŲ MUTACIJAS (GENOTIPAS) SU JŲ FIZIOLOGINE FUNKCIJA SVEIKATOS SRITYJE IR JŲ DISFUNKCIJA LIGA (FENOTIPAS). TODĖL, BE NAUJŲ GENŲ IDENTIFIKAVIMO, LABAI SVARBU FUNKCIŠKAI APIBŪDINTI MEDŽIAGŲ APYKAITOS IR ŽENKLŲ KELIUS, KURIUOS KEIČIA PATOLOGINĖS ŠIŲ PRIEŽASTINIŲ GENŲ MUTACIJOS, SIEKIANT SUKURTI VEIKSMINGESNES GYDYMO STRATEGIJAS, KURIOS GALI SUSTABDYTI TINKLAINĖS NEURODEGENERACIJOS PROGRESĄ AR NETGI IŠGYDYTI LIGĄ. MŪSŲ TIKSLAS YRA FUNKCINIS CERKL, NR2E3 IR ATXN3 TYRIMAS – TAI GENAI, ĮTRAUKTI Į IRD IR REPREZENTUOJANTYS ATITINKAMUS LĄSTELIŲ KELIUS TINKLAINĖJE, KURIANT IR APIBŪDINANT GYVŪNŲ MODELIUS RATON IR ZEBRAFISH. ŠIE MODELIAI JAU BUVO SUKURTI MŪSŲ GRUPĖJE, ARBA PER NAUJĄ GENOMINIO LEIDIMO STRATEGIJĄ (CRISPRCAS9) CERKL (KNOCKOUT) IR NR2E3 (KNOCKIN), ARBA NUMUŠIMĄ NAUDOJANT MORFOLINS (ATXN3), TAČIAU NĖRA PHENOTIPIC ANALIZĖS BIOCHEMINIU, MORFOLOGINIU IR FIZIOLOGINIU LYGIU. NORĖDAMI TAI PADARYTI, NAUDOSIME NOVATORIŠKUS METODUS (OPTIMIZUOTUS MŪSŲ LABORATORIJOSE), KAIP ANTAI: PIRMINĖS FOTORECEPTORIŲ IR RATON TINKLAINĖS EKSPLANTACIJOS KULTŪROS NORMALIOMIS IR STRESINĖMIS SĄLYGOMIS, TRANSKRIPCIJOS FAKTORIŲ IR PROMOTORIŲ BENDRA TRANSFECCION DIANA, LUSTŲ SEKOS, INMUNOPRECIPITATION SĄVEIKOS APIBŪDINIMAS KARTU SU MALDI-TOF, TRANSGENŲ IN VIVO TRANSGENEZĖS METODAI RATON TINKLAINĖJE, NAUDOJANT SUBTINKLINĘ MICROINYECTION, PO TO IŠSAMI HISTOLOGINĖ ANALIZĖ IR INMUNODETECTION KONFOKINĖ MIKROSKOPIJA. GALIAUSIAI, BENDRADARBIAUJANT SU DPT BIONANOTECHNOLOGIJŲ GRUPE. FIZIKOS (OKSFORDO UNIVERSITETAS) MES IŠNAGRINĖSIME KAIP „PRINCIPO ĮRODYMĄ“ GALIMĄ GYDYMĄ GENINE TERAPIJA NANODALELĖMIS, ĮVYNIOTOMIS Į DNR (PAŽANGI NANOSISTEMA) CERKL-/- MODELYJE, KURĮ SUKŪRĖ CRISPR/CAS9, TIRIANT GENŲ PRISTATYMO EFEKTYVUMĄ FOTORECEPTORIUOSE, PALYGINTI SU KITOMIS STRATEGIJOMIS, TOKIOMIS KAIP SUBTINKLINIS MICROINYECTION, PO KURIO VYKSTA ELEKTROPORACIJA, O ATEITYJE – SU ADENO-ASSOCIUOTAIS VIRUSAIS, ŠIUO METU NAUDOJAMA TINKLAINĖJE. _x000D_ Tikėtini rezultatai: MES GILINSIME MEDŽIAGŲ APYKAITOS IR SIGNALIZAVIMO TINKLUS, PAKEISTUS TINKLAINĖS NEURODEGENERACIJOS PROCESE, ARBA TUOS GYDOMOJO INTERESO TIKSLUS, ARBA PATIKIMUS FENOTIPO PROGRESAVIMO MOLEKULINIUS RODIKLIUS. BE TO, MES IŠNAGRINĖSIME GALIMĄ GENETINĘ TERAPIJĄ/GELBĖJIMĄ NANOPARTICULAES, APVYNIOTĄ DNR, MATUODAMI: GENŲ PRISTATYMO EFEKTYVUMAS LYGINANT SU KITOMIS STRATEGIJOMIS; FOTORECEPTORIŲ IŠGYVENAMUMAS/APOPTOZĖ IR III) GENŲ, SUSIJUSIŲ SU SPURGŲ IR LAZDELIŲ FUNKCIJA, EKSPRESIJA. (Lithuanian)
17 August 2022
0 references
DISFUNKCIJA I SMRT FOTORECEPTORA GLAVNI SU UZROK GUBITKA VIDA U NASLJEDNOJ DISTROFIJI MREŽNICE, SKUPINI BOLESTI MREŽNICE, TEŠKOM FENOTIPU I VRLO HETEROGENOM. NAKON VIŠE OD 30 GODINA ISTRAŽIVANJA, POZNATO JE GOTOVO 300 UZROČNIH GENA, ALI JOŠ UVIJEK POSTOJI KORPUS ZNANJA KOJI NA INTEGRIRANI NAČIN KORELIRA GENE IRD-A I NJIHOVE MUTACIJE (GENOTIP) S NJIHOVOM FIZIOLOŠKOM FUNKCIJOM U ZDRAVLJU I DISFUNKCIJOM BOLESTI (FENOTIPA). STOGA, OSIM IDENTIFIKACIJE NOVIH GENA, KLJUČNO JE FUNKCIONALNA KARAKTERIZACIJA METABOLIČKIH I SIGNALNIH PUTOVA KOJI SE MIJENJAJU PATOLOŠKIM MUTACIJAMA U TIM UZROČNIM GENIMA, KAKO BI SE OSMISLILE UČINKOVITIJE TERAPIJSKE STRATEGIJE KOJE MOGU ZAUSTAVITI NAPREDAK NEURODEGENERACIJA MREŽNICE ILI ČAK IZLIJEČITI BOLEST. NAŠ CILJ JE FUNKCIONALNA STUDIJA CERKL, NR2E3 I ATXN3, GENI KOJI SU UKLJUČENI U IRD-OVE I REPREZENTATIVNI SU ZA RELEVANTNE STANIČNE PUTOVE U MREŽNICI OD RAZVOJA I KARAKTERIZACIJE ŽIVOTINJSKIH MODELA U RATONU I ZEBRICI. OVI MODELI VEĆ SU GENERIRANI U NAŠOJ GRUPI, BILO KROZ NOVU GENOMSKU STRATEGIJU IZDANJA (CRISPRCAS9) ZA CERKL (KNOCKOUT) I NR2E3 (KNOCKIN), ILI PADAJUĆI KORISTEĆI MORFOLINS (ATXN3), ALI NE POSTOJI PHENOTIPIC ANALIZA NA BIOKEMIJSKIM, MORFOLOŠKIM I FIZIOLOŠKIM RAZINAMA. DA BISMO TO UČINILI, PRIMIJENIT ĆEMO INOVATIVNE TEHNIKE (OPTIMIZIRANE U NAŠIM LABORATORIJIMA) KAO ŠTO SU: PRIMARNE KULTURE FOTORECEPTORA I RATON RETINALNIH EKSPLANTATA, U NORMALNIM I STRESNIM UVJETIMA, KO-TRANSFECCION TRANSKRIPCIJSKIH FAKTORA I PROMOTORA DIANA, ČIP-SEQ, KARAKTERIZACIJA INTERAKCIJA POMOĆU INMUNOPRECIPITATION-A U KOMBINACIJI S MALDI-TOF-OM, TRANSGENES IN VIVO TRANSGENEZA TEHNIKE U RATON MREŽNICI POMOĆU SUBRETINALNE MICROINYECTION, NAKON ČEGA SLIJEDI DETALJNA HISTOLOŠKA ANALIZA I INMUNODETECTION KONFOKALNOM MIKROSKOPIJOM. KONAČNO, I KROZ SURADNJU SA SKUPINOM BIONANOTEHNOLOGIJE DPT-A. FIZIKE (SVEUČILIŠTE U OXFORDU), ISTRAŽIT ĆEMO KAO „DOKAZ PRINCIPA” IZVEDIVOST MOGUĆEG LIJEČENJA GENSKOM TERAPIJOM S NANOČESTICAMA UMOTANIM U DNK (PAMETNI NANOSUSTAV) U CERKL-/- MODELU GENERIRANOM CRISPR/CAS9, PROUČAVANJEM UČINKOVITOSTI ISPORUKE GENA U FOTORECEPTORIMA U USPOREDBI S DRUGIM STRATEGIJAMA, KAO ŠTO JE SUBRETINALNA MICROINYECTION NAKON KOJE SLIJEDI ELEKTROPORACIJA ILI, U BUDUĆNOSTI, VIRUSI POVEZANI S ADENOM, GENSKA TERAPIJA KOJA SE TRENUTNO KORISTI U MREŽNICI. _x000D_ očekivani rezultati: PRODUBIT ĆEMO METABOLIČKE I SIGNALIZACIJSKE MREŽE IZMIJENJENE U PROCESU NEURODEGENERACIJA MREŽNICE DETEKCIJE, BILO CILJEVE OD TERAPIJSKOG INTERESA, ILI POUZDANE MOLEKULARNE POKAZATELJE PROGRESIJE FENOTIPA. OSIM TOGA, ISTRAŽIT ĆEMO IZVEDIVOST MOGUĆE GENETSKE TERAPIJE/SPASITI OD STRANE NANOPARTICULAES OMOTAN DNK, MJERENJE: UČINKOVITOST ISPORUKE GENA U USPOREDBI S DRUGIM STRATEGIJAMA; PREŽIVLJAVANJE/APOPTOZA FOTORECEPTORA I III) EKSPRESIJA GENA BITNIH ZA FUNKCIJU ČUNJEVA I ŠTAPIĆA. (Croatian)
17 August 2022
0 references
DYSFUNKTION OCH DÖD AV FOTORECEPTORER ÄR DEN FRÄMSTA ORSAKEN TILL SYNFÖRLUST I ÄRFTLIG NÄTHINNEDYSTROFI (IRD), EN GRUPP SJUKDOMAR I NÄTHINNAN, SVÅR FENOTYP OCH MYCKET HETEROGEN. EFTER MER ÄN 30 ÅRS FORSKNING ÄR NÄSTAN 300 KAUSATIVA GENER KÄNDA, MEN DET FINNS FORTFARANDE EN KUNSKAPSSAMLING SOM PÅ ETT INTEGRERAT SÄTT KORRELERAR IRD-GENERNA OCH DERAS MUTATIONER (GENOTYP) MED DERAS FYSIOLOGISKA FUNKTION I HÄLSA OCH DERAS DYSFUNKTION I SJUKDOMEN (FENOTYP). DÄRFÖR, FÖRUTOM IDENTIFIERING AV NYA GENER, ÄR DET AVGÖRANDE ATT DEN FUNKTIONELLA KARAKTERISERINGEN AV DE METABOLISKA OCH SKYLTNINGSVÄGARNA SOM ÄNDRAS AV PATOLOGISKA MUTATIONER I DESSA ORSAKANDE GENER, FÖR ATT UTFORMA EFFEKTIVARE TERAPEUTISKA STRATEGIER SOM KAN STOPPA UTVECKLINGEN AV NÄTHINNENEURONDEGENERATIONEN, ELLER TILL OCH MED BOTA SJUKDOMEN. VÅRT MÅL ÄR DEN FUNKTIONELLA STUDIEN AV CERKL, NR2E3 OCH ATXN3, ÄR GENERNA INVOLVERADE I IRD OCH REPRESENTATIVA FÖR RELEVANTA CELLULÄRA VÄGAR I NÄTHINNAN FRÅN UTVECKLING OCH KARAKTERISERING AV DJURMODELLER I RATON OCH SEBRAFISK. DESSA MODELLER HAR REDAN GENERERATS I VÅR GRUPP, ANTINGEN GENOM DEN NYA GENOMIC EDITION-STRATEGIN (CRISPRCAS9) FÖR CERKL (KNOCKOUT) OCH NR2E3 (KNOCKIN), ELLER GENOM KNOCKDOWN MED MORFOLINS (ATXN3), MEN DET FINNS INGEN PHENOTIPIC-ANALYS PÅ BIOKEMISKA, MORFOLOGISKA OCH FYSIOLOGISKA NIVÅER. FÖR ATT GÖRA DETTA KOMMER VI ATT ANVÄNDA INNOVATIVA TEKNIKER (OPTIMERADE I VÅRA LABORATORIER) SÅSOM: PRIMÄRA KULTURER AV FOTORECEPTORER OCH RATON RETINAL EXPLANTS, UNDER NORMALA OCH STRESSIGA FÖRHÅLLANDEN, CO-TRANSFECCION AV TRANSKRIPTIONSFAKTORER OCH PROMOTORER DIANA, CHIP-SEQ, KARAKTERISERING AV INTERAKTIONER GENOM INMUNOPRECIPITATION KOPPLAT TILL MALDI-TOF, TRANSGENES IN VIVO TRANSGENESIS TEKNIKER I RATON RETINA MED SUBRETINAL MICROINYECTION, FÖLJT AV EN DETALJERAD HISTOLOGISK ANALYS OCH INMUNODETECTION GENOM KONFOKAL MIKROSKOPI. SLUTLIGEN, OCH GENOM SAMARBETE MED EN GRUPP BIONANOTEKNIK AV DPT. AV FYSIK (UNIVERSITY OF OXFORD) KOMMER VI ATT UNDERSÖKA GENOMFÖRBARHETEN AV EN MÖJLIG BEHANDLING MED GENISK TERAPI MED NANOPARTICULATES INSVEPT I DNA (SMART NANOSYSTEM) I CERKL-/-MODELLEN SOM GENERERAS AV CRISPR/CAS9, GENOM ATT STUDERA EFFEKTIVITETEN AV GENLEVERANS I FOTORECEPTORER JÄMFÖRT MED ANDRA STRATEGIER, SÅSOM SUBRETINAL MICROINYECTION FÖLJT AV ELEKTROPORATION ELLER, I FRAMTIDEN, ADENOASSOCIERADE VIRUS, GENIC TERAPI SOM FÖR NÄRVARANDE ANVÄNDS I NÄTHINNAN. _x000D_ förväntade resultat: VI KOMMER ATT FÖRDJUPA DE METABOLISKA OCH SIGNALERINGSNÄTVERK SOM FÖRÄNDRAS I PROCESSEN FÖR NEURODEGENERERING AV NÄTHINNAN DETEKTION, ANTINGEN DESSA MÅL AV TERAPEUTISKT INTRESSE, ELLER TILLFÖRLITLIGA MOLEKYLÄRA INDIKATORER PÅ UTVECKLINGEN AV FENOTYPEN. DESSUTOM KOMMER VI ATT UNDERSÖKA GENOMFÖRBARHETEN AV EN EVENTUELL GENETISK TERAPI/RÄDDNING AV NANOPARTICULAES INLINDAD MED DNA, MÄTNING: EFFEKTIVITETEN HOS GENLEVERANSER JÄMFÖRT MED ANDRA STRATEGIER. ÖVERLEVNAD/APOPTOS AV FOTORECEPTORER OCH III) UTTRYCK AV GENER SOM ÄR RELEVANTA FÖR FUNKTIONEN AV KOTTAR OCH PINNAR. (Swedish)
17 August 2022
0 references
DISFUNCȚIA ȘI DECESUL FOTORECEPTORILOR ESTE PRINCIPALA CAUZĂ A PIERDERII VEDERII ÎN DISTROFIE EREDITARĂ RETINIANĂ (IRD), UN GRUP DE BOLI ALE RETINEI, FENOTIP SEVER ȘI FOARTE ETEROGEN. DUPĂ MAI MULT DE 30 DE ANI DE CERCETARE, APROAPE 300 DE GENE CAUZALE SUNT CUNOSCUTE, DAR EXISTĂ ÎNCĂ UN CORPUS DE CUNOȘTINȚE CARE CORELEAZĂ ÎNTR-UN MOD INTEGRAT GENELE IRD ȘI MUTAȚIILE LOR (GENOTIP) CU FUNCȚIA LOR FIZIOLOGICĂ ÎN SĂNĂTATE ȘI DISFUNCȚIA LOR ÎN BOALĂ (FENOTIP). PRIN URMARE, PE LÂNGĂ IDENTIFICAREA DE NOI GENE, ESTE CRUCIALĂ CARACTERIZAREA FUNCȚIONALĂ A CĂILOR METABOLICE ȘI DE SEMNALIZARE CARE SUNT MODIFICATE DE MUTAȚIILE PATOLOGICE DIN ACESTE GENE CAUZALE, PENTRU A PROIECTA STRATEGII TERAPEUTICE MAI EFICIENTE CARE POT OPRI PROGRESUL NEURODEGENERĂRII RETINEI SAU CHIAR POT VINDECA BOALA. OBIECTIVUL NOSTRU ESTE STUDIUL FUNCȚIONAL AL CERKL, NR2E3, ȘI ATXN3, SUNT GENELE IMPLICATE ÎN IRD-URI ȘI REPREZENTATIVE ALE CĂILOR CELULARE RELEVANTE ÎN RETINĂ DE LA DEZVOLTAREA ȘI CARACTERIZAREA MODELELOR ANIMALE ÎN RATON ȘI PEȘTE-ZEBRĂ. ACESTE MODELE AU FOST DEJA GENERATE ÎN GRUPUL NOSTRU, FIE PRIN NOUA STRATEGIE DE EDIȚIE GENOMICĂ (CRISPRCAS9) PENTRU CERKL (KNOCKOUT) ȘI NR2E3 (KNOCKIN), FIE PRIN KNOCKDOWN FOLOSIND MORFOLINS (ATXN3), DAR NU EXISTĂ ANALIZE PHENOTIPIC LA NIVEL BIOCHIMIC, MORFOLOGIC ȘI FIZIOLOGIC. PENTRU A FACE ACEST LUCRU, VOM UTILIZA TEHNICI INOVATOARE (OPTIMIZATE ÎN LABORATOARELE NOASTRE), CUM AR FI: CULTURI PRIMARE DE FOTORECEPTORI ȘI EXPLANTE RETINIENE RATON, ÎN CONDIȚII NORMALE ȘI STRESANTE, CO-TRANSFECCION DE FACTORI DE TRANSCRIERE ȘI PROMOTORI DIANA, CHIP-SEQ, CARACTERIZAREA INTERACȚIUNILOR PRIN INMUNOPRECIPITATION CUPLATĂ CU MALDI-TOF, TRANSGENES IN VIVO TEHNICI DE TRANSGENEZĂ ÎN RATON RETINA FOLOSIND MICROINYECTION SUBRETINIENE, URMATE DE O ANALIZĂ HISTOLOGICĂ DETALIATĂ ȘI INMUNODETECȚIE PRIN MICROSCOPIE CONFOCALĂ. ÎN CELE DIN URMĂ, ȘI PRIN COLABORAREA CU UN GRUP DE BIONANOTEHNOLOGIE DIN DPT. DE FIZICĂ (UNIVERSITATEA OXFORD), VOM EXPLORA CA O „DOVADA DE PRINCIPIU” FEZABILITATEA UNUI POSIBIL TRATAMENT PRIN TERAPIE GENICĂ CU NANOPARTICULAȚI ÎNVELIȚI ÎN ADN (NANOSISTEM INTELIGENT) ÎN MODELUL CERKL-/- GENERAT DE CRISPR/CAS9, PRIN STUDIEREA EFICIENȚEI ADMINISTRĂRII GENELOR ÎN FOTORECEPTORI ÎN COMPARAȚIE CU ALTE STRATEGII, CUM AR FI MICROINECȚIA SUBRETINIANĂ URMATĂ DE ELECTROPORARE SAU, ÎN VIITOR, VIRUȘI ADENO-ASOCIAȚI, TERAPIA GENICĂ UTILIZATĂ ÎN PREZENT ÎN RETINĂ. _x000D_ Rezultatele așteptate: VOM APROFUNDA REȚELELE METABOLICE ȘI DE SEMNALIZARE MODIFICATE ÎN PROCESUL DE NEURODEGENERARE A DETECTĂRII RETINEI, FIE ACELE ȚINTE DE INTERES TERAPEUTIC, FIE INDICATORI MOLECULARI FIABILI AI PROGRESIEI FENOTIPULUI. ÎN PLUS, VOM EXPLORA FEZABILITATEA UNEI POSIBILE TERAPII GENETICE/SALVARE DE CĂTRE NANOPARTICULAES ÎNVELITE CU ADN, MĂSURÂND: EFICIENȚA GENELOR FAȚĂ DE ALTE STRATEGII; SUPRAVIEȚUIREA/APOPTOZA FOTORECEPTORILOR ȘI III) EXPRIMAREA GENELOR RELEVANTE PENTRU FUNCȚIA CONURILOR ȘI A BASTOANELOR. (Romanian)
17 August 2022
0 references
DISFUNKCIJA IN SMRT FOTORECEPTORJEV STA GLAVNI VZROK ZA IZGUBO VIDA PRI DEDNI DISTROFIJI MREŽNICE (IRD), SKUPINI BOLEZNI MREŽNICE, HUDEM FENOTIPU IN ZELO HETEROGENI. PO VEČ KOT 30 LETIH RAZISKAV JE ZNANIH SKORAJ 300 POVZROČITELJEV GENOV, VENDAR ŠE VEDNO OBSTAJA KORPUS ZNANJA, KI NA INTEGRIRAN NAČIN POVEZUJE GENE IRD IN NJIHOVE MUTACIJE (GENOTIP) Z NJIHOVO FIZIOLOŠKO FUNKCIJO V ZDRAVJU IN NJIHOVO DISFUNKCIJO PRI BOLEZNI (FENOTIP). ZATO JE POLEG IDENTIFIKACIJE NOVIH GENOV KLJUČNEGA POMENA FUNKCIONALNA KARAKTERIZACIJA PRESNOVNIH IN OZNAČEVALNIH POTI, KI JIH SPREMINJAJO PATOLOŠKE MUTACIJE V TEH VZROČNIH GENIH, DA BI OBLIKOVALI UČINKOVITEJŠE TERAPEVTSKE STRATEGIJE, KI LAHKO USTAVIJO NAPREDOVANJE NEVRODEGENERACIJE MREŽNICE ALI CELO OZDRAVIJO BOLEZEN. NAŠ CILJ JE FUNKCIONALNA ŠTUDIJA CERKL, NR2E3 IN ATXN3 SO GENI, KI SO VKLJUČENI V IRD IN PREDSTAVLJAJO USTREZNE CELIČNE POTI V MREŽNICI IZ RAZVOJA IN KARAKTERIZACIJE ŽIVALSKIH MODELOV V RATONU IN CEBRICI. TI MODELI SO ŽE BILI USTVARJENI V NAŠI SKUPINI, BODISI Z NOVO GENOMSKO STRATEGIJO IZDAJE (CRISPRCAS9) ZA CERKL (KNOCKOUT) IN NR2E3 (KNOCKIN) ALI Z UPORABO MORFOLINS (ATXN3), VENDAR NI PHENOTIPIC ANALIZE NA BIOKEMIČNIH, MORFOLOŠKIH IN FIZIOLOŠKIH RAVNEH. ZA TO BOMO UPORABILI INOVATIVNE TEHNIKE (OPTIMIZIRANE V NAŠIH LABORATORIJIH), KOT SO: PRIMARNE KULTURE FOTORECEPTORJEV IN EKSPLANTACIJ MREŽNICE RATON, V NORMALNIH IN STRESNIH POGOJIH, SO-TRANSFECCION TRANSKRIPCIJSKIH FAKTORJEV IN PROMOTORJEV DIANE, ČIP-SEQ, KARAKTERIZACIJA INTERAKCIJ Z INMUNOPRECIPITACIJEM V POVEZAVI Z MALDI-TOF, TRANSGENSKE TEHNIKE IN VIVO TRANSGENEZE V MREŽNICI RATON Z UPORABO SUBRETINALNEGA MICROINYECTION, ČEMUR SLEDI PODROBNA HISTOLOŠKA ANALIZA IN INMUNODETEKTION S KONFOKALNO MIKROSKOPIJO. NAZADNJE IN S SODELOVANJEM S SKUPINO BIONANOTEHNOLOGIJE DPT. FIZIKE (UNIVERZA V OXFORDU) BOMO KOT „DOKAZ NAČELA“ RAZISKALI IZVEDLJIVOST MOŽNEGA ZDRAVLJENJA Z NANODELCI Z NANODELCI, ZAVITIMI V DNK (PAMETNI NANOSISTEM) V CERKL-/- MODELU, KI GA USTVARI CRISPR/CAS9, S PREUČEVANJEM UČINKOVITOSTI DOVAJANJA GENOV V FOTORECEPTORJIH V PRIMERJAVI Z DRUGIMI STRATEGIJAMI, KOT JE SUBRETINALNA MICROINYECTION, KI JI SLEDI ELEKTROPORACIJA ALI, V PRIHODNOSTI, VIRUSI, POVEZANI Z ADENO, GENSKO TERAPIJO, KI SE TRENUTNO UPORABLJA V MREŽNICI. _x000D_ pričakovani rezultati: POGLOBILI BOMO PRESNOVNA IN SIGNALNA OMREŽJA, SPREMENJENA V PROCESU NEVRODEGENERACIJE MREŽNICE, BODISI TISTIH CILJEV TERAPEVTSKEGA INTERESA BODISI ZANESLJIVIH MOLEKULARNIH KAZALCEV NAPREDOVANJA FENOTIPA. POLEG TEGA BOMO RAZISKALI IZVEDLJIVOST MOŽNE GENETSKE TERAPIJE/REŠEVANJA Z NANOPARTICULAES, ZAVITO Z DNK, PRI ČEMER BOMO MERILI: UČINKOVITOST ZAGOTAVLJANJA GENOV V PRIMERJAVI Z DRUGIMI STRATEGIJAMI; PREŽIVETJE/APOPTOZA FOTORECEPTORJEV IN III) IZRAŽANJE GENOV, POMEMBNIH ZA DELOVANJE STOŽCEV IN PALIC. (Slovenian)
17 August 2022
0 references
DYSFUNKCJA I ŚMIERĆ FOTORECEPTORÓW JEST GŁÓWNĄ PRZYCZYNĄ UTRATY WZROKU W DZIEDZICZNEJ DYSTROFII SIATKÓWKI (IRD), GRUPIE CHORÓB SIATKÓWKI, CIĘŻKIEGO FENOTYPU I BARDZO NIEJEDNORODNEGO. PO PONAD 30 LATACH BADAŃ ZNANYCH JEST PRAWIE 300 GENÓW SPRAWCZYCH, ALE NADAL ISTNIEJE ZBIÓR WIEDZY, KTÓRY KORELUJE W ZINTEGROWANY SPOSÓB GENY IRD I ICH MUTACJE (GENOTYP) Z ICH FIZJOLOGICZNĄ FUNKCJĄ W ZDROWIU I ICH DYSFUNKCJĄ W CHOROBIE (FENOTYP). DLATEGO, OPRÓCZ IDENTYFIKACJI NOWYCH GENÓW, KLUCZOWE ZNACZENIE MA CHARAKTERYSTYKA FUNKCJONALNA SZLAKÓW METABOLICZNYCH I OZNAKOWAŃ, KTÓRE SĄ ZMIENIANE PRZEZ PATOLOGICZNE MUTACJE W TYCH GENACH SPRAWCZYCH, W CELU OPRACOWANIA SKUTECZNIEJSZYCH STRATEGII TERAPEUTYCZNYCH, KTÓRE MOGĄ ZATRZYMAĆ POSTĘP NEURODEGENERACJI SIATKÓWKI, A NAWET WYLECZYĆ CHOROBĘ. NASZYM CELEM JEST BADANIE FUNKCJONALNE CERKL, NR2E3 I ATXN3, SĄ GENAMI ZAANGAŻOWANYMI W IRD I REPREZENTATYWNYMI DLA ODPOWIEDNICH SZLAKÓW KOMÓRKOWYCH SIATKÓWKI POCHODZĄCEJ Z ROZWOJU I CHARAKTERYSTYKI MODELI ZWIERZĘCYCH W RATON I DANIOKSZTAŁTNYCH. MODELE TE ZOSTAŁY JUŻ WYGENEROWANE W NASZEJ GRUPIE, ALBO POPRZEZ NOWĄ STRATEGIĘ WYDANIA GENOMOWEGO (CRISPRCAS9) DLA CERKL (KNOCKOUT) I NR2E3 (KNOCKIN), ALBO PRZEZ KNOCKDOWN PRZY UŻYCIU MORFOLINS (ATXN3), ALE NIE MA ANALIZY PHENOTIPIC NA POZIOMIE BIOCHEMICZNYM, MORFOLOGICZNYM I FIZJOLOGICZNYM. W TYM CELU WYKORZYSTAMY INNOWACYJNE TECHNIKI (OPTYMALIZOWANE W NASZYCH LABORATORIACH), TAKIE JAK: PODSTAWOWE KULTURY FOTORECEPTORÓW I WYLEWÓW SIATKÓWKI RATON, W NORMALNYCH I STRESUJĄCYCH WARUNKACH, CO-TRANSFECCION CZYNNIKÓW TRANSKRYPCYJNYCH I PROMOTORÓW DIANA, CHIP-SEQ, CHARAKTERYSTYKA INTERAKCJI PRZEZ INMUNOPRECIPITATION W POŁĄCZENIU Z MALDI-TOF, TRANSGENES IN VIVO TRANSGENESIS W RATON SIATKÓWKA PRZY UŻYCIU SUBRETINAL MICROINYECTION, A NASTĘPNIE SZCZEGÓŁOWA ANALIZA HISTOLOGICZNA I INMUNODETECTION PRZEZ MIKROSKOPIA KONFOKALNA. WRESZCIE, POPRZEZ WSPÓŁPRACĘ Z GRUPĄ BIONANOTECHNOLOGII DPT. FIZYKI (UNIWERSYTET OKSFORDZKI), ZBADAMY JAKO „DOWÓD ZASADY” WYKONALNOŚĆ MOŻLIWEGO LECZENIA ZA POMOCĄ TERAPII GENOWEJ NANOPARTICULATES OWINIĘTYCH W DNA (INTELIGENTNY NANOSYSTEM) W MODELU CERKL-/- GENEROWANYM PRZEZ CRISPR/CAS9, POPRZEZ BADANIE SKUTECZNOŚCI DOSTARCZANIA GENÓW W FOTORECEPTORACH W PORÓWNANIU Z INNYMI STRATEGIAMI, TAKIMI JAK MICROINYECTION SUBRETINAL, PO KTÓRYM NASTĘPUJE ELEKTROPORACJA LUB, W PRZYSZŁOŚCI, WIRUSY ZWIĄZANE Z ADENO, TERAPIAGENNA OBECNIE STOSOWANA W SIATKÓWCE. _x000D_ oczekiwane wyniki: BĘDZIEMY POGŁĘBIAĆ SIECI METABOLICZNE I SYGNALIZACYJNE ZMIENIONE W PROCESIE NEURODEGENERACJI SIATKÓWKI WYKRYWAJĄCEJ CELE BĘDĄCE PRZEDMIOTEM ZAINTERESOWANIA TERAPEUTYCZNEGO LUB WIARYGODNE WSKAŹNIKI MOLEKULARNE PROGRESJI FENOTYPU. PONADTO ZBADAMY WYKONALNOŚĆ EWENTUALNEJ TERAPII GENETYCZNEJ/RATUNKU PRZEZ NANOPARTICULAES OWINIĘTEGO DNA, MIERZĄC: WYDAJNOŚĆ DOSTARCZANIA GENÓW W PORÓWNANIU Z INNYMI STRATEGIAMI; PRZEŻYWALNOŚĆ/APOPTOZA FOTORECEPTORÓW I III) EKSPRESJA GENÓW ISTOTNYCH DLA FUNKCJI STOŻKÓW I PAŁECZEK. (Polish)
17 August 2022
0 references
Barcelona
0 references
20 December 2023
0 references
Identifiers
SAF2016-80937-R
0 references