Development of a clinically applicable method for targeting peripheral nerves (Q2720768)
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Project Q2720768 in Cyprus
| Language | Label | Description | Also known as |
|---|---|---|---|
| English | Development of a clinically applicable method for targeting peripheral nerves |
Project Q2720768 in Cyprus |
Statements
212,500.0 Euro
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250,000.0 Euro
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85.0 percent
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24 January 2019
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30 November 2021
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The Cyprus Foundation for Muscular Dystrophy Research Κυπριακό 'Ιδρυμα Ερευνών για τη Μυϊκή Δυστροφία (The Cyprus Institute of Neurology and Genetics)
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Σκοπός της παρούσας εργασίας είναι η ανάπτυξη μιας στοχευόμενης γονιδιακής θεραπείας με τη χρήση ιικών φορέων που μπορούν να χρησιμοποιηθούν σε κλινικές μελέτες. Η μελέτη αυτή θα βοηθήσει στην εύρεση θεραπείας για κληρονομικές νευροπάθειες απομυελινωτικού τύπου οι οποίες οφείλονται σε μεταλλάξεις γονιδίων τα οποία εκφράζονται ειδικά στα κύτταρα του Schwann. Θα γίνει επιλογή κλινικά ασφαλών AAV οροτύπων, όπως AAV9, AAVrh10, AAV.PHP.S, AAV2/rh10, με βάση τον τροπισμό που επιδεικνύουν προς τα ανθρώπινα κύτταρα του Schwann. Παράλληλα θα ελεγχθούν μικρού μεγέθους υποκινητές ειδικοί για κύτταρα Schwann, όπως ο miniMpz και ο Aatk, των οποίων η ικανότητα για στοχευόμενη έκφραση θα ελεγχθεί σε κοινές κυτταροκαλλιέργειες κυττάρων του Schwann και PC12. Η ικανότητα των ιικών φορέων με μικρού μεγέθους υποκινητές να εκφραστούν στα κύτταρα Schwann θα εξεταστεί σε ποντίκια μετά από ενδοραχιαία έκχυση. Βασιζόμενοι στα αποτελέσματα αυτά θα γίνει παραγωγή των αντίστοιχων θεραπευτικών ιικών φορέων οι οποίοι θα ελεγχθούν σε δύο μοντέλα συχνών απομυελινωτικών νευροπαθειών, της CMT1A και της CMT1X. Οι νέοι αυτοί ιικοί φορείς καθώς και οι υποκινητές θα ελεγχθούν για τη θεραπευτική ικανότητά τους να αντιμετωπίσουν το μηχανισμό της κάθε νευροπάθειας στα κύτταρα του Schwann. Το γονίδιο GJB1 που είναι μεταλλαγμένο στην CMT1X θα αντικατασταθεί με τη βοήθεια του ιικού φορέα μετά από ενδοραχιαία έκχυση και θα γίνει ανάλυση της έκφρασής του καθώς και του εντοπισμού της κοννεξίνης 32 (Cx32) σε Cx32 ΚΟ ποντίκια, ενώ sh-RNAs που στοχεύουν το γονίδιο της PMP22 θα εγχυθούν ενδοραχιαία σε C61 ποντίκια που υπερεκφράζουν την PMP22, σαν μοντέλο για τη CMT1A. Τέλος, θα γίνει θεραπευτική δοκιμή και στα δύο μοντέλα της CMT χρησιμοποιώντας τους πιο αποτελεσματικούς ιικούς φορείς που θα καθοριστούν από τις προηγούμενες μελέτες. Επιβεβαίωση του θεραπευτικού ωφέλους της γονιδιακής θεραπείας θα γίνει με τη χρήση συμπεριφορικής, ηλεκτροφυσιολογικής, καθώς και μορφολογικής μελέτης, προσφέροντας απόδειξη για περε (Greek)
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The purpose of this paper is to develop targeted gene therapy using viral vectors that can be used in clinical studies. This study will help find a cure for hereditary demyelinating neuropathies due to gene mutations specifically expressed in Schwann cells. Clinically safe AAV serotypes, such as AAV9, AAVrh10, AAV.PHP.S, AAV2/rh10, will be selected based on their modulation to Schwann human cells. At the same time, small-sized instigators for Schwann cells, such as miniMpz and Aatk, will be tested, whose ability for targeted expression will be tested in common cells of Schwann and PC12. The ability of viral vectors with small instigators to express themselves in Schwann cells will be examined in mice after intrathecal spillage. Based on these results, the respective therapeutic viral vectors will be produced, which will be tested in two models of frequent demyelinating neuropathies, CMT1A and CMT1X. These new viral carriers and instigators will be tested for their therapeutic ability to cope with the mechanism of any neuropathy in Schwann cells. The GJB1 mutated gene in CMT1X will be replaced with the help of the viral vector after intrathecal spillage and analysis of its expression and detection of connexin 32 (Cx32) in Cx32 KM mice, while sh-RNAs targeting the PMP22 gene will be injected intrathecally into C61 mice that overexpress the PMP1. Finally, both CMT models will be therapeutically tested using the most effective viral vectors to be defined in the previous studies. Confirmation of the therapeutic benefit of gene therapy will be done using behavioral, electrophysiological and morphological study, offering proof of Pere (English)
31 May 2021
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Le but de ce travail est de développer une thérapie génique ciblée à l’aide de vecteurs viraux qui peut être utilisée dans des études cliniques. Cette étude aidera à trouver un traitement pour les neuropathies héréditaires de type démyélinisant causées par des mutations génétiques spécifiquement exprimées dans les cellules de Schwann. Une sélection de sérotypes AAV cliniquement sûrs, tels que AAV9, AAVrh10, AAV.PHP.S, AAV2/rh10, basé sur le tropisme manifesté envers les cellules humaines de Schwann. Dans le même temps, des stimulateurs spécifiques aux cellules de Schwann de petite taille tels que miniMpz et Aatk seront testés, dont la capacité d’expression ciblée sera testée dans des cultures cellulaires communes de Schwann et PC12. La capacité des porteurs viraux avec des stimulateurs de petite taille à s’exprimer dans les cellules de Schwann sera testée chez la souris après perfusion intrathécale. Sur la base de ces résultats, les vecteurs viraux thérapeutiques correspondants seront produits et testés dans deux modèles de neuropathies démyélinisantes fréquentes, CMT1A et CMT1X. Ces nouveaux vecteurs viraux et instigateurs seront testés pour leur capacité thérapeutique à faire face au mécanisme de toute neuropathie dans les cellules de Schwann. Le gène GJB1 muté dans CMT1X sera remplacé à l’aide du vecteur viral après perfusion intrathécale et analyse de son expression, ainsi que la détection de la connéxine 32 (Cx32) chez des souris CB Cx32, tandis que les ARN-sh ciblant le gène PMP22 seront injectés par voie intrathécale dans des souris C61 surexprimant le PMP22, comme modèle pour le CMT1A. Enfin, les deux modèles de CMT seront traités à l’aide des vecteurs viraux les plus efficaces à déterminer dans le cadre d’études antérieures. La confirmation de l’avantage thérapeutique de la thérapie génique sera effectuée à l’aide d’études comportementales, électrophysiologiques et morphologiques, ce qui permettra d’établir d’autres (French)
27 November 2021
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Ziel dieser Arbeit ist die Entwicklung einer gezielten Gentherapie mit viralen Vektoren, die in klinischen Studien eingesetzt werden können. Diese Studie wird helfen, eine Behandlung für erbliche Neuropathien des demyelinierenden Typs zu finden, die durch Genmutationen verursacht werden, die speziell in Schwann-Zellen ausgedrückt werden. Eine Auswahl klinisch sicherer AAV-Serotypen wie AAV9, AAVrh10, AAV.PHP.S, AAV2/rh10, basierend auf dem Tropismus, der gegenüber den menschlichen Zellen von Schwann demonstriert. Gleichzeitig werden kleine Schwann zellspezifische Stimulatoren wie miniMpz und Aatk getestet, deren Fähigkeit zur gezielten Expression in gängigen Zellkulturen Schwann und PC12 getestet wird. Die Fähigkeit viraler Träger mit kleinen Stimulatoren, sich in Schwann-Zellen auszudrücken, wird nach intrathekaler Infusion in Mäusen getestet. Auf der Grundlage dieser Ergebnisse werden die entsprechenden therapeutischen viralen Vektoren in zwei Modellen von häufig demyelinierenden Neuropathien, CMT1A und CMT1X, produziert und getestet. Diese neuen viralen Vektoren und Anstifter werden auf ihre therapeutische Fähigkeit getestet, den Mechanismus jeder Neuropathie in Schwann-Zellen zu bewältigen. Das GJB1-Gen, das in CMT1X mutiert wird, wird mit Hilfe des viralen Vektors nach intrathekaler Infusion und Analyse seiner Expression sowie dem Nachweis von Connexin 32 (Cx32) in Cx32 CB Mäusen ersetzt, während sh-RNAs, die auf das PMP22-Gen abzielen, als Modell für CMT1A intrathekal in C61 Mäuse injiziert werden. Schließlich werden beide CMT-Modelle mit den effektivsten viralen Vektoren behandelt, die von früheren Studien bestimmt werden. Die Bestätigung des therapeutischen Nutzens der Gentherapie erfolgt unter Verwendung verhaltensbezogener, elektrophysiologischer sowie morphologischer Untersuchungen, die weitere Belege liefern. (German)
29 November 2021
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Het doel van dit werk is om een gerichte gentherapie te ontwikkelen met behulp van virale vectoren die in klinische studies kunnen worden gebruikt. Deze studie zal helpen om behandeling te vinden voor erfelijke neuropathieën van het demyelinating type veroorzaakt door genmutaties specifiek uitgedrukt in Schwann cellen. Een selectie van klinisch veilige AAV-serotypen, zoals AAV9, AAVrh10, AAV.PHP.S, AAV2/rh10, gebaseerd op het tropisme dat demonstreert naar de menselijke cellen van Schwann. Tegelijkertijd zullen kleine Schwann-celspecifieke stimulators zoals miniMpz en Aatk worden getest, waarvan het vermogen tot gerichte expressie zal worden getest in gemeenschappelijke celculturen van Schwann en PC12. Het vermogen van virale dragers met kleine stimulators om zich in Schwann-cellen uit te drukken, zal worden getest bij muizen na intrathecale infusie. Op basis van deze resultaten zullen de overeenkomstige therapeutische virale vectoren worden geproduceerd en getest in twee modellen van frequente demyelinerende neuropathieën, CMT1A en CMT1X. Deze nieuwe virale vectoren en aanstichters zullen worden getest op hun therapeutische vermogen om met het mechanisme van om het even welke neuropathie in Schwann-cellen om te gaan. Het GJB1-gen gemuteerd in CMT1X zal worden vervangen met behulp van de virale vector na intrathecale infusie en analyse van de expressie ervan, evenals de detectie van connexin 32 (Cx32) in Cx32 CB-muizen, terwijl sh-RNAs gericht op het PMP22-gen intrathecal wordt geïnjecteerd in C61 muizen die PMP22 overexpresseren, als model voor CMT1A. Ten slotte zullen beide CMT-modellen worden behandeld met behulp van de meest effectieve virale vectoren die door eerdere studies moeten worden bepaald. Bevestiging van het therapeutische voordeel van gentherapie zal worden gedaan met behulp van gedrags-, elektrofysiologische en morfologische studie, die bewijs levert voor verdere (Dutch)
29 November 2021
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Lo scopo di questo lavoro è quello di sviluppare una terapia genica mirata utilizzando vettori virali che possono essere utilizzati negli studi clinici. Questo studio aiuterà a trovare il trattamento per neuropatie ereditarie di tipo demielinizzante causate da mutazioni geniche specificamente espresse nelle cellule di Schwann. Una selezione di sierotipi AAV clinicamente sicuri, come AAV9, AAVrh10, AAV.PHP.S, AAV2/rh10, sulla base del tropismo che dimostra verso le cellule umane di Schwann. Allo stesso tempo, saranno testati stimolatori specifici per le cellule Schwann di piccole dimensioni come miniMpz e Aatk, la cui capacità di espressione mirata sarà testata in colture cellulari comuni di Schwann e PC12. La capacità dei vettori virali con stimolatori di piccole dimensioni di esprimersi nelle cellule di Schwann sarà testata nei topi dopo l'infusione intratecale. Sulla base di questi risultati, i corrispondenti vettori virali terapeutici saranno prodotti e testati in due modelli di neuropatie frequenti demielinanti, CMT1A e CMT1X. Questi nuovi vettori virali e istigatori saranno testati per la loro capacità terapeutica di far fronte al meccanismo di qualsiasi neuropatia nelle cellule di Schwann. Il gene GJB1 mutato in CMT1X sarà sostituito con l'aiuto del vettore virale dopo infusione intratecale e analisi della sua espressione, così come il rilevamento della connessina 32 (Cx32) nei topi CB Cx32, mentre gli sh-RNAs destinati al gene PMP22 saranno iniettati per via intratecale in topi C61 sovraesprimendo il PMP22, come modello per CMT1A. Infine, entrambi i modelli di CMT saranno trattati utilizzando i vettori virali più efficaci che saranno determinati da studi precedenti. La conferma del beneficio terapeutico della terapia genica sarà effettuata utilizzando studi comportamentali, elettrofisiologici e morfologici, fornendo prove per ulteriori (Italian)
11 January 2022
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El propósito de este trabajo es desarrollar una terapia génica dirigida utilizando vectores virales que puedan ser utilizados en estudios clínicos. Este estudio ayudará a encontrar tratamiento para neuropatías hereditarias de tipo desmielinizante causadas por mutaciones génicas específicamente expresadas en las células de Schwann. Una selección de serotipos de AVA clínicamente seguros, tales como AAV9, AAVrh10, AAV.PHP.S, AAV2/rh10, basado en el tropismo que se demuestra hacia las células humanas de Schwann. Al mismo tiempo, se probarán estimuladores específicos de células Schwann de pequeño tamaño, como miniMpz y Aatk, cuya capacidad de expresión dirigida se probará en cultivos celulares comunes de Schwann y PC12. La capacidad de los portadores virales con estimuladores de pequeño tamaño para expresarse en las células de Schwann se probará en ratones después de la perfusión intratécal. A partir de estos resultados, los vectores virales terapéuticos correspondientes se producirán y probarán en dos modelos de neuropatías desmielinizantes frecuentes, CMT1A y CMT1X. Estos nuevos vectores virales e instigadores serán probados por su capacidad terapéutica para hacer frente al mecanismo de cualquier neuropatía en las células de Schwann. El gen GJB1 mutado en CMT1X será reemplazado con la ayuda del vector viral después de la infusión intratécal y el análisis de su expresión, así como la detección de la connexina 32 (Cx32) en ratones Cx32 CB, mientras que los ARN-sh dirigidos al gen PMP22 se inyectarán por vía intratécal en ratones C61 sobreexpresando PMP22, como modelo para CMT1A. Por último, ambos modelos de CMT se tratarán utilizando los vectores virales más eficaces que se determinarán mediante estudios previos. La confirmación del beneficio terapéutico de la terapia génica se realizará mediante estudios conductuales, electrofisiológicos, así como morfológicos, aportando pruebas para (Spanish)
12 January 2022
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*Δεν έχει γεωγραφική διάσταση*
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34460
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