DNA-DNA INTERFERENCE MEDIATED BY THERMUS THERMOPHILUS ARGONAUTA PROTEIN AND GENOMIC EDITION APPLICATIONS (Q3138236): Difference between revisions
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(Created claim: summary (P836): LES PROTÉINES ARGONAUTA PRODUISENT DES INTERFÉRENCES ARN-ARN RESPONSABLES DU SILENCIEUX GÉNIQUE CHEZ LES EUCARYOTES, BIEN QUE DE NOMBREUSES ARCHÉES ET CERTAINES BACTÉRIES CODENT ÉGALEMENT DES PROTÉINES DE LA FAMILLE DES ARGONAUTES. LA PROTÉINE THAGO DE THERMUS THERMOPHILUS (HORMONE PROTÉIQUE HUMAINE AGO2) PRÉSENTE LA CAPACITÉ INHABITUELLE DE COUPER L’ADN COMPLÉMENTAIRE AUX GUIDES DE L’ADN SS, QUI EST UN NOUVEAU SYSTÈME D’INTERFÉRENCE ADN-ADN. DE...) |
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DNA-DNA INTERFERENZ VERMITTELT DURCH THERMUS THERMOPHILUS ARGONAUTA PROTEIN UND GENOMISCHE EDITION ANWENDUNGEN | |||||||||||||||
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ARGONAUTA-PROTEINE PRODUZIEREN RNA-RNA-INTERFERENZ, DIE FÜR DIE ABSCHOTTUNG IN EUKARYOTES VERANTWORTLICH IST, OBWOHL VIELE ARCHÄE UND EINIGE BAKTERIEN AUCH PROTEINE AUS DER ARGONAUT-FAMILIE CODIEREN. DAS THAGO-PROTEIN VON THERMUS THERMOPHILUS (HUMANES AGO2-PROTEINHORMON) ZEIGT DIE UNGEWÖHNLICHE FÄHIGKEIT, DNA KOMPLEMENTÄR ZU SSDNA-GUIDES ZU SCHNEIDEN, EIN NEUARTIGES DNA-DNA-INTERFERENZSYSTEM. FRÜHERE DATEN DES ANFRAGENDEN LABORS ZEIGEN, DASS THAGO ALS BARRIERE DER ANGEBORENEN IMMUNITÄT GEGEN EXOGENE DNA WIRKT UND DIE MEISTEN (90 %) DER DNA-MOLEKÜLE, DIE DURCH TRANSFORMATION IN DIE ZELLE GELANGEN, EFFEKTIV ZERSTÖRT, OHNE JEDOCH AUF DIESELBE DNA ZU WIRKEN, WENN SIE VON EINEM ANDEREN BAKTERIUM DERSELBEN GATTUNG ÜBERTRAGEN WIRD, WAS DARAUF HINDEUTET, DASS DIE AKTIVITÄT VON THAGO DER REGULIERUNG IN DER ZELLE UNTERLIEGT. ANDERERSEITS STELLT DIE VON SSDNA VON THAGO ANGEFÜHRTE SCHNEIDKAPAZITÄT EINE EIGENSCHAFT AUSSERGEWÖHNLICHER ANWENDUNGSPOTENZIALE IN GENOM-EDITION DAR, ÄHNLICH WIE IN IHREM BETRIEB, ABER MIT POTENZIELLEN VORTEILEN GEGENÜBER DEM CRISPR/CAS9-SYSTEM. IN EINEM 2015 ABGESCHLOSSENEN PROJEKT STELLTEN WIR FEST, DASS DIE VORÜBERGEHENDE EXPRESSION VON THAGO IN TRANSFEKTEN RATON-ZELLEN MIT SPEZIFISCHEN OLIGONUKLEOTIDEN DIE ABSCHALTUNG IM AUSDRUCK VON GFP AUS EINEM PLASMAID HERVORRIEF. In DER PROJEKT, dass wir gebeten werden, in den MECHANISMS PROFUNDEN, mit denen Sie es Ihnen zur Verfügung stellen können, die durch TRANSFORMATION oder TRANSFERIING OF Other CELULS mit dem FINANZ und EINER FUNKTION DER HINWEISIERUNG als ENTWICKLUNG IN DER GENOMAS._x000D_ als Vorstufe zu jedem Prozess der Offenheit des PROTEINs ANGENOMAS ANGENOMAS._x000D_ als Vorstufe zur Verfügung gestellt werden, die FIRST OBJECTIVE PROPOSAL PROPOSAL IENTIFIKATION DER COMPONENTE UND AKTIVITÄTEN/Deaktivierungsmekanismen, die in der von THAGO gemessenen DNA-DNA-Interferenzantwort enthalten sind, wird durch eine Kombination von biochemischen, protheomischen und GENETIC-Technologien zur Identifizierung von kovalenten Modifikationen und Wechselwirkungen mit anderen Interferenznotwendigkeiten behandelt. IM ZWEITEN ZIEL WIRD DIE VERWENDUNG VON PROTEINEN, DIE ALS WERKZEUGE FÜR DIE DNA-MODIFIKATION BEZAHLT WERDEN, AUF DIE MODIFIKATION VON THAGO AUSGERICHTET WERDEN, DIE SICH AUF DIE IM ERSTEN ZIEL GEWONNENEN DATEN SOWIE ZUFÄLLIG DURCH IN-VITRO GERICHTETE EVOLUTION KONZENTRIEREN. DIE EFFIZIENTESTEN VARIANTEN IN SCHNEIDVERSUCHEN UNTER DER LEITUNG VON GUIA WERDEN IN VITRO IN DNA MODIFIKATIONSPROZESSEN ALS PROGRAMMIERBARES RESTRIKTIONSENZYM VERWENDET UND DIREKT IN VIVO FÜR DIE BEARBEITUNG VON GENOMEN VON PROKARYOTEN UND EUKARYOTES ANGEWENDET. BEI GENOME VON EUKARYOTEN WÜRDE DIE AUFNAHME VON KERNORTSIGNALEN ZU DIESEN VERBESSERTEN VARIANTEN EINE DIREKTE TRANSFECCION DES PROTEINS ERMÖGLICHEN, DAS BEREITS MIT SSDNA-LEITFÄDEN VERBUNDEN IST, WODURCH DAS RISIKO EINER VERSEHENTLICHEN INTEGRATION EXOGENER DNA IN DAS GENOM, DAS MIT DEN DERZEITIGEN CRISPR/CAS9-TECHNIKEN VERBUNDEN IST, VERMIEDEN WÜRDE. (German) | |||||||||||||||
| Property / summary: ARGONAUTA-PROTEINE PRODUZIEREN RNA-RNA-INTERFERENZ, DIE FÜR DIE ABSCHOTTUNG IN EUKARYOTES VERANTWORTLICH IST, OBWOHL VIELE ARCHÄE UND EINIGE BAKTERIEN AUCH PROTEINE AUS DER ARGONAUT-FAMILIE CODIEREN. DAS THAGO-PROTEIN VON THERMUS THERMOPHILUS (HUMANES AGO2-PROTEINHORMON) ZEIGT DIE UNGEWÖHNLICHE FÄHIGKEIT, DNA KOMPLEMENTÄR ZU SSDNA-GUIDES ZU SCHNEIDEN, EIN NEUARTIGES DNA-DNA-INTERFERENZSYSTEM. FRÜHERE DATEN DES ANFRAGENDEN LABORS ZEIGEN, DASS THAGO ALS BARRIERE DER ANGEBORENEN IMMUNITÄT GEGEN EXOGENE DNA WIRKT UND DIE MEISTEN (90 %) DER DNA-MOLEKÜLE, DIE DURCH TRANSFORMATION IN DIE ZELLE GELANGEN, EFFEKTIV ZERSTÖRT, OHNE JEDOCH AUF DIESELBE DNA ZU WIRKEN, WENN SIE VON EINEM ANDEREN BAKTERIUM DERSELBEN GATTUNG ÜBERTRAGEN WIRD, WAS DARAUF HINDEUTET, DASS DIE AKTIVITÄT VON THAGO DER REGULIERUNG IN DER ZELLE UNTERLIEGT. ANDERERSEITS STELLT DIE VON SSDNA VON THAGO ANGEFÜHRTE SCHNEIDKAPAZITÄT EINE EIGENSCHAFT AUSSERGEWÖHNLICHER ANWENDUNGSPOTENZIALE IN GENOM-EDITION DAR, ÄHNLICH WIE IN IHREM BETRIEB, ABER MIT POTENZIELLEN VORTEILEN GEGENÜBER DEM CRISPR/CAS9-SYSTEM. IN EINEM 2015 ABGESCHLOSSENEN PROJEKT STELLTEN WIR FEST, DASS DIE VORÜBERGEHENDE EXPRESSION VON THAGO IN TRANSFEKTEN RATON-ZELLEN MIT SPEZIFISCHEN OLIGONUKLEOTIDEN DIE ABSCHALTUNG IM AUSDRUCK VON GFP AUS EINEM PLASMAID HERVORRIEF. In DER PROJEKT, dass wir gebeten werden, in den MECHANISMS PROFUNDEN, mit denen Sie es Ihnen zur Verfügung stellen können, die durch TRANSFORMATION oder TRANSFERIING OF Other CELULS mit dem FINANZ und EINER FUNKTION DER HINWEISIERUNG als ENTWICKLUNG IN DER GENOMAS._x000D_ als Vorstufe zu jedem Prozess der Offenheit des PROTEINs ANGENOMAS ANGENOMAS._x000D_ als Vorstufe zur Verfügung gestellt werden, die FIRST OBJECTIVE PROPOSAL PROPOSAL IENTIFIKATION DER COMPONENTE UND AKTIVITÄTEN/Deaktivierungsmekanismen, die in der von THAGO gemessenen DNA-DNA-Interferenzantwort enthalten sind, wird durch eine Kombination von biochemischen, protheomischen und GENETIC-Technologien zur Identifizierung von kovalenten Modifikationen und Wechselwirkungen mit anderen Interferenznotwendigkeiten behandelt. IM ZWEITEN ZIEL WIRD DIE VERWENDUNG VON PROTEINEN, DIE ALS WERKZEUGE FÜR DIE DNA-MODIFIKATION BEZAHLT WERDEN, AUF DIE MODIFIKATION VON THAGO AUSGERICHTET WERDEN, DIE SICH AUF DIE IM ERSTEN ZIEL GEWONNENEN DATEN SOWIE ZUFÄLLIG DURCH IN-VITRO GERICHTETE EVOLUTION KONZENTRIEREN. DIE EFFIZIENTESTEN VARIANTEN IN SCHNEIDVERSUCHEN UNTER DER LEITUNG VON GUIA WERDEN IN VITRO IN DNA MODIFIKATIONSPROZESSEN ALS PROGRAMMIERBARES RESTRIKTIONSENZYM VERWENDET UND DIREKT IN VIVO FÜR DIE BEARBEITUNG VON GENOMEN VON PROKARYOTEN UND EUKARYOTES ANGEWENDET. BEI GENOME VON EUKARYOTEN WÜRDE DIE AUFNAHME VON KERNORTSIGNALEN ZU DIESEN VERBESSERTEN VARIANTEN EINE DIREKTE TRANSFECCION DES PROTEINS ERMÖGLICHEN, DAS BEREITS MIT SSDNA-LEITFÄDEN VERBUNDEN IST, WODURCH DAS RISIKO EINER VERSEHENTLICHEN INTEGRATION EXOGENER DNA IN DAS GENOM, DAS MIT DEN DERZEITIGEN CRISPR/CAS9-TECHNIKEN VERBUNDEN IST, VERMIEDEN WÜRDE. (German) / rank | |||||||||||||||
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| Property / summary: ARGONAUTA-PROTEINE PRODUZIEREN RNA-RNA-INTERFERENZ, DIE FÜR DIE ABSCHOTTUNG IN EUKARYOTES VERANTWORTLICH IST, OBWOHL VIELE ARCHÄE UND EINIGE BAKTERIEN AUCH PROTEINE AUS DER ARGONAUT-FAMILIE CODIEREN. DAS THAGO-PROTEIN VON THERMUS THERMOPHILUS (HUMANES AGO2-PROTEINHORMON) ZEIGT DIE UNGEWÖHNLICHE FÄHIGKEIT, DNA KOMPLEMENTÄR ZU SSDNA-GUIDES ZU SCHNEIDEN, EIN NEUARTIGES DNA-DNA-INTERFERENZSYSTEM. FRÜHERE DATEN DES ANFRAGENDEN LABORS ZEIGEN, DASS THAGO ALS BARRIERE DER ANGEBORENEN IMMUNITÄT GEGEN EXOGENE DNA WIRKT UND DIE MEISTEN (90 %) DER DNA-MOLEKÜLE, DIE DURCH TRANSFORMATION IN DIE ZELLE GELANGEN, EFFEKTIV ZERSTÖRT, OHNE JEDOCH AUF DIESELBE DNA ZU WIRKEN, WENN SIE VON EINEM ANDEREN BAKTERIUM DERSELBEN GATTUNG ÜBERTRAGEN WIRD, WAS DARAUF HINDEUTET, DASS DIE AKTIVITÄT VON THAGO DER REGULIERUNG IN DER ZELLE UNTERLIEGT. ANDERERSEITS STELLT DIE VON SSDNA VON THAGO ANGEFÜHRTE SCHNEIDKAPAZITÄT EINE EIGENSCHAFT AUSSERGEWÖHNLICHER ANWENDUNGSPOTENZIALE IN GENOM-EDITION DAR, ÄHNLICH WIE IN IHREM BETRIEB, ABER MIT POTENZIELLEN VORTEILEN GEGENÜBER DEM CRISPR/CAS9-SYSTEM. IN EINEM 2015 ABGESCHLOSSENEN PROJEKT STELLTEN WIR FEST, DASS DIE VORÜBERGEHENDE EXPRESSION VON THAGO IN TRANSFEKTEN RATON-ZELLEN MIT SPEZIFISCHEN OLIGONUKLEOTIDEN DIE ABSCHALTUNG IM AUSDRUCK VON GFP AUS EINEM PLASMAID HERVORRIEF. In DER PROJEKT, dass wir gebeten werden, in den MECHANISMS PROFUNDEN, mit denen Sie es Ihnen zur Verfügung stellen können, die durch TRANSFORMATION oder TRANSFERIING OF Other CELULS mit dem FINANZ und EINER FUNKTION DER HINWEISIERUNG als ENTWICKLUNG IN DER GENOMAS._x000D_ als Vorstufe zu jedem Prozess der Offenheit des PROTEINs ANGENOMAS ANGENOMAS._x000D_ als Vorstufe zur Verfügung gestellt werden, die FIRST OBJECTIVE PROPOSAL PROPOSAL IENTIFIKATION DER COMPONENTE UND AKTIVITÄTEN/Deaktivierungsmekanismen, die in der von THAGO gemessenen DNA-DNA-Interferenzantwort enthalten sind, wird durch eine Kombination von biochemischen, protheomischen und GENETIC-Technologien zur Identifizierung von kovalenten Modifikationen und Wechselwirkungen mit anderen Interferenznotwendigkeiten behandelt. IM ZWEITEN ZIEL WIRD DIE VERWENDUNG VON PROTEINEN, DIE ALS WERKZEUGE FÜR DIE DNA-MODIFIKATION BEZAHLT WERDEN, AUF DIE MODIFIKATION VON THAGO AUSGERICHTET WERDEN, DIE SICH AUF DIE IM ERSTEN ZIEL GEWONNENEN DATEN SOWIE ZUFÄLLIG DURCH IN-VITRO GERICHTETE EVOLUTION KONZENTRIEREN. DIE EFFIZIENTESTEN VARIANTEN IN SCHNEIDVERSUCHEN UNTER DER LEITUNG VON GUIA WERDEN IN VITRO IN DNA MODIFIKATIONSPROZESSEN ALS PROGRAMMIERBARES RESTRIKTIONSENZYM VERWENDET UND DIREKT IN VIVO FÜR DIE BEARBEITUNG VON GENOMEN VON PROKARYOTEN UND EUKARYOTES ANGEWENDET. BEI GENOME VON EUKARYOTEN WÜRDE DIE AUFNAHME VON KERNORTSIGNALEN ZU DIESEN VERBESSERTEN VARIANTEN EINE DIREKTE TRANSFECCION DES PROTEINS ERMÖGLICHEN, DAS BEREITS MIT SSDNA-LEITFÄDEN VERBUNDEN IST, WODURCH DAS RISIKO EINER VERSEHENTLICHEN INTEGRATION EXOGENER DNA IN DAS GENOM, DAS MIT DEN DERZEITIGEN CRISPR/CAS9-TECHNIKEN VERBUNDEN IST, VERMIEDEN WÜRDE. (German) / qualifier | |||||||||||||||
point in time: 9 December 2021
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Revision as of 07:20, 9 December 2021
Project Q3138236 in Spain
| Language | Label | Description | Also known as |
|---|---|---|---|
| English | DNA-DNA INTERFERENCE MEDIATED BY THERMUS THERMOPHILUS ARGONAUTA PROTEIN AND GENOMIC EDITION APPLICATIONS |
Project Q3138236 in Spain |
Statements
108,900.0 Euro
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217,800.0 Euro
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50.0 percent
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30 December 2016
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31 December 2020
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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE MADRID
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40°25'0.12"N, 3°42'12.89"W
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28079
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LAS PROTEINAS ARGONAUTA PRODUCEN LA INTERFERENCIA RNA-RNA RESPONSABLE DEL SILENCIAMIENTO GENICO EN EUCARIOTAS, AUNQUE MUCHAS ARQUEAS Y ALGUNAS BACTERIAS TAMBIEN CODIFICAN PROTEINAS DE LA FAMILIA ARGONAUTA. LA PROTEINA THAGO DE THERMUS THERMOPHILUS ( HOMOLOGA DE LA PROTEINA AGO2 HUMANA) PRESENTA LA INUSUAL CAPACIDAD DE CORTAR DNA COMPLEMENTARIO A GUIAS DE SSDNA, LO QUE CONSTITUYE UN NOVEDOSO SISTEMA DE INTERFERENCIA DNA-DNA. DATOS PREVIOS DEL LABORATORIO SOLICITANTE MUESTRAN QUE THAGO ACTUA COMO BARRERA DE INMUNIDAD INNATA FRENTE A DNA EXOGENO, DESTRUYENDO DE FORMA EFICAZ LA MAYOR PARTE (90%) DE LAS MOLECULAS DE DNA QUE ENTRAN EN LA CELULA POR TRANSFORMACION, PERO SIN ACTUAR SOBRE EL MISMO DNA CUANDO ESTE ES TRANSFERIDO DESDE OTRA BACTERIA DEL MISMO GENERO, LO QUE SUGIERE QUE LA ACTIVIDAD DE THAGO ESTA SOMETIDA A REGULACION EN LA CELULA. POR OTRA PARTE, LA CAPACIDAD DE CORTE DIRIGIDO POR SSDNA DE THAGO CONSTITUYE UNA PROPIEDAD DE EXTRAORDINARIO POTENCIAL DE APLICACION EN EDICION DE GENOMAS, SIMILAR EN SU FUNCIONAMIENTO PERO CON POTENCIALES VENTAJAS SOBRE EL SISTEMA CRISPR/CAS9. DE HECHO, EN UN PROYECTO EXPLORA FINALIZADO EN 2015 OBSERVAMOS QUE LA EXPRESION TRANSITORIA DE THAGO EN CELULAS DE RATON TRANSFECTADAS CON OLIGONUCLEOTIDOS GUIA ESPECIFICOS PRODUCIA EL APAGADO EN LA EXPRESION DE GFP DESDE UN PLASMIDO. EN EL PROYECTO QUE SE SOLICITA PRETENDEMOS PROFUNDIZAR EN LOS MECANISMOS QUE LE PERMITEN A THAGO DISTINGUIR ENTRE DNA ADQUIRIDO POR TRANSFORMACION O TRANSFERIDO DE OTRAS CELULAS CON EL FIN DE ENTENDER Y OPTIMIZAR SU FUNCIONAMIENTO DE CARA A SU APLICACION COMO HERRAMIENTA EN LA EDICION DE GENOMAS._x000D_ COMO PASO PREVIO A CUALQUIER PROCESO DE OPTIMIZACION DE LA PROTEINA, EL PRIMER OBJETIVO PROPUESTO TITULADO ¿IDENTIFICACION DE LOS COMPONENTES Y LOS MECANISMOS DE ACTIVACION/DESACTIVACION IMPLICADOS EN LA RESPUESTA DE INTERFERENCIA DNA-DNA MEDIADA POR THAGO¿, SERA ABORDADO MEDIANTE UNA COMBINACION DE TECNICAS BIOQUIMICAS, PROTEOMICAS Y GENETICAS PARA IDENTIFICAR POSIBLES MODIFICACIONES COVALENTES E INTERACCIONES CON OTRAS PROTEINAS NECESARIAS PARA LA INTERFERENCIA. EN EL SEGUNDO OBJETIVO ¿UTILIZACION DE PROTEINAS PAGO COMO HERRAMIENTAS PARA LA MODIFICACION DE DNA¿, SE ABORDARA LA MODIFICACION DE THAGO TANTO FOCALIZADA EN BASE A LOS DATOS OBTENIDOS EN EL PRIMER OBJETIVO, COMO AL AZAR, MEDIANTE EVOLUCION DIRIGIDA IN VITRO. LAS VARIANTES MAS EFICIENTES EN ENSAYOS DE CORTE DIRIGIDOS POR GUIA SERAN UTILIZADAS IN VITRO EN PROCESOS DE MODIFICACION DE DNA COMO ENZIMA DE RESTRICCION PROGRAMABLE, Y APLICADAS DIRECTAMENTE IN VIVO PARA LA EDICION DE GENOMAS DE PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS. EN EL CASO DE LOS GENOMAS DE EUCARIOTAS, LA ADICION DE DE SEÑALES DE LOCALIZACION NUCLEAR A ESTAS VARIANTES MEJORADAS PERMITIRIA LA TRANSFECCION DIRECTA DE LA PROTEINA YA UNIDA A GUIAS DE SSDNA, EVITANDO EL RIESGO DE INCORPORACION ACCIDENTAL DE DNA EXOGENO EN EL GENOMA ASOCIADO A LAS TECNICAS CRISPR/CAS9 ACTUALES. (Spanish)
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ARGONAUTA PROTEINS PRODUCE RNA-RNA INTERFERENCE RESPONSIBLE FOR GENIC SILENCING IN EUKARYOTES, ALTHOUGH MANY ARCHAEA AND SOME BACTERIA ALSO ENCODE PROTEINS FROM THE ARGONAUT FAMILY. THE THAGO PROTEIN FROM THERMUS THERMOPHILUS (HUMAN AGO2 PROTEIN HORMONE) PRESENTS THE UNUSUAL ABILITY TO CUT DNA COMPLEMENTARY TO SSDNA GUIDES, WHICH IS A NOVEL DNA-DNA INTERFERENCE SYSTEM. PREVIOUS DATA FROM THE REQUESTING LABORATORY SHOW THAT THAGO ACTS AS A BARRIER OF INNATE IMMUNITY AGAINST EXOGENOUS DNA, EFFECTIVELY DESTROYING MOST (90 %) OF THE DNA MOLECULES THAT ENTER THE CELL BY TRANSFORMATION, BUT WITHOUT ACTING ON THE SAME DNA WHEN IT IS TRANSFERRED FROM ANOTHER BACTERIUM OF THE SAME GENUS, SUGGESTING THAT THAGO’S ACTIVITY IS SUBJECT TO REGULATION IN THE CELL. ON THE OTHER HAND, THE CUTTING CAPACITY LED BY SSDNA OF THAGO CONSTITUTES A PROPERTY OF EXTRAORDINARY APPLICATION POTENTIAL IN GENOME EDITION, SIMILAR IN ITS OPERATION BUT WITH POTENTIAL ADVANTAGES OVER THE CRISPR/CAS9 SYSTEM. IN FACT, IN A PROJECT EXPLORED COMPLETED IN 2015 WE OBSERVED THAT THE TRANSIENT EXPRESSION OF THAGO IN TRANSFECTED RATON CELLS WITH SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDES PRODUCED THE SHUTDOWN IN THE EXPRESSION OF GFP FROM A PLASMAID. In THE PROJECT THAT IS REQUESTed we intend to PROFUND in the MECHANISMS that allow you to make it available to you to enter DNA ADQUIRIED by TRANSFORMATION or TRANSFERIING OF Other CELULS WITH THE FINANCIAL AND OPTIMITION OF YOUR FUNCTIONING OF HIS APPLICATION AS TOOL IN THE EDITION OF GENOMAS._x000D_ as a preliminary step to any process of openness of the PROTEIN, THE FIRST OBJECTIVE PROPOSAL PROPOSAL IENTIFICATION OF COMPONENTS AND ACTIVITIES/deactivation MECANISMs included in the DNA-DNA Interference Answer Measured by THAGO, it will be addressed by means of a combination of biochemical, protheomic and GENETIC technologies for identification of covalent modifications and interactions with other necessities for interference. IN THE SECOND OBJECTIVE, WILL THE USE OF PROTEINS PAID AS TOOLS FOR DNA MODIFICATION BE ADDRESSED THE MODIFICATION OF THAGO FOCUSED ON THE DATA OBTAINED IN THE FIRST OBJECTIVE, AS WELL AS RANDOMLY, THROUGH IN VITRO DIRECTED EVOLUTION. THE MOST EFFICIENT VARIANTS IN CUTTING TESTS LED BY GUIA WILL BE USED IN VITRO IN DNA MODIFICATION PROCESSES AS A PROGRAMMABLE RESTRICTION ENZYME, AND APPLIED DIRECTLY IN VIVO FOR THE EDITING OF GENOMES OF PROKARYOTES AND EUKARYOTES. IN THE CASE OF GENOMES OF EUKARYOTES, THE ADDITION OF NUCLEAR LOCATION SIGNALS TO THESE IMPROVED VARIANTS WOULD ALLOW DIRECT TRANSFECCION OF THE PROTEIN ALREADY LINKED TO SSDNA GUIDES, AVOIDING THE RISK OF ACCIDENTAL INCORPORATION OF EXOGENOUS DNA INTO THE GENOME ASSOCIATED WITH THE CURRENT CRISPR/CAS9 TECHNIQUES. (English)
12 October 2021
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LES PROTÉINES ARGONAUTA PRODUISENT DES INTERFÉRENCES ARN-ARN RESPONSABLES DU SILENCIEUX GÉNIQUE CHEZ LES EUCARYOTES, BIEN QUE DE NOMBREUSES ARCHÉES ET CERTAINES BACTÉRIES CODENT ÉGALEMENT DES PROTÉINES DE LA FAMILLE DES ARGONAUTES. LA PROTÉINE THAGO DE THERMUS THERMOPHILUS (HORMONE PROTÉIQUE HUMAINE AGO2) PRÉSENTE LA CAPACITÉ INHABITUELLE DE COUPER L’ADN COMPLÉMENTAIRE AUX GUIDES DE L’ADN SS, QUI EST UN NOUVEAU SYSTÈME D’INTERFÉRENCE ADN-ADN. DES DONNÉES ANTÉRIEURES DU LABORATOIRE DEMANDEUR MONTRENT QUE THAGO AGIT COMME UNE BARRIÈRE D’IMMUNITÉ INNÉE CONTRE L’ADN EXOGÈNE, DÉTRUISANT EFFECTIVEMENT LA PLUPART (90 %) DES MOLÉCULES D’ADN QUI PÉNÈTRENT DANS LA CELLULE PAR TRANSFORMATION, MAIS SANS AGIR SUR LE MÊME ADN LORSQU’IL EST TRANSFÉRÉ D’UNE AUTRE BACTÉRIE DU MÊME GENRE, SUGGÉRANT QUE L’ACTIVITÉ DE THAGO EST SOUMISE À LA RÉGLEMENTATION DANS LA CELLULE. D’AUTRE PART, LA CAPACITÉ DE COUPE MENÉE PAR L’ADN SS DE THAGO CONSTITUE UNE PROPRIÉTÉ D’UN POTENTIEL D’APPLICATION EXTRAORDINAIRE DANS L’ÉDITION DU GÉNOME, SIMILAIRE DANS SON FONCTIONNEMENT, MAIS AVEC DES AVANTAGES POTENTIELS PAR RAPPORT AU SYSTÈME CRISPR/CAS9. EN FAIT, DANS UN PROJET EXPLORÉ EN 2015, NOUS AVONS OBSERVÉ QUE L’EXPRESSION TRANSITOIRE DE THAGO DANS DES CELLULES DE RATON TRANSFECTÉES AVEC DES OLIGONUCLÉOTIDES SPÉCIFIQUES PRODUISAIT L’ARRÊT DANS L’EXPRESSION DU GFP À PARTIR D’UN PLASMAID. Dans LE PROJET qu’il nous a demandé d’entreprendre dans les MECHANISMS qui vous permettent de le mettre à votre disposition pour entrer l’ADN ADQUIRIÉ par TRANSFORMATION ou TRANSFERIATION D’autres CELULS AVEC LA FINANCITÉ ET OPTIMITION DE VOTRE FONCTIONNEMENT DE SES APPLICATION À L’ÉDITION DES GENOMAS._x000D_comme étape préliminaire à tout processus d’ouverture du PROTÉIN, la PREMIÈRE PROPOSITION OBJECTIVE IENTIFICATION DES COMPONENTS ET ACTIVITÉS/mécanismes de désactivation inclus dans la réponse d’interférence ADN-ADN Mesurée par THAGO, elle sera traitée au moyen d’une combinaison de technologies biochimiques, prothéomiques et GENETIQUEs pour l’identification des modifications covalentes et des interactions avec d’autres nécessités d’interférence. DANS LE DEUXIÈME OBJECTIF, L’UTILISATION DE PROTÉINES PAYÉES COMME OUTILS DE MODIFICATION DE L’ADN SERA-T-ELLE ABORDÉE LA MODIFICATION DE THAGO AXÉE SUR LES DONNÉES OBTENUES DANS LE PREMIER OBJECTIF, AINSI QUE DE FAÇON ALÉATOIRE, PAR L’ÉVOLUTION DIRIGÉE IN VITRO. LES VARIANTES LES PLUS EFFICACES DANS LES TESTS DE COUPE MENÉS PAR GUIA SERONT UTILISÉES IN VITRO DANS LES PROCESSUS DE MODIFICATION DE L’ADN EN TANT QU’ENZYME DE RESTRICTION PROGRAMMABLE, ET APPLIQUÉES DIRECTEMENT IN VIVO POUR L’ÉDITION DES GÉNOMES DES PROKARYOTES ET DES EUCARYOTES. DANS LE CAS DES GÉNOMES D’EUKARYOTES, L’AJOUT DE SIGNAUX DE LOCALISATION NUCLÉAIRE À CES VARIANTES AMÉLIORÉES PERMETTRAIT UNE TRANSFECCION DIRECTE DE LA PROTÉINE DÉJÀ LIÉE AUX GUIDES DE L’ADN SS, EN ÉVITANT LE RISQUE D’INCORPORATION ACCIDENTELLE DE L’ADN EXOGÈNE DANS LE GÉNOME ASSOCIÉ AUX TECHNIQUES ACTUELLES CRISPR/CAS9. (French)
2 December 2021
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ARGONAUTA-PROTEINE PRODUZIEREN RNA-RNA-INTERFERENZ, DIE FÜR DIE ABSCHOTTUNG IN EUKARYOTES VERANTWORTLICH IST, OBWOHL VIELE ARCHÄE UND EINIGE BAKTERIEN AUCH PROTEINE AUS DER ARGONAUT-FAMILIE CODIEREN. DAS THAGO-PROTEIN VON THERMUS THERMOPHILUS (HUMANES AGO2-PROTEINHORMON) ZEIGT DIE UNGEWÖHNLICHE FÄHIGKEIT, DNA KOMPLEMENTÄR ZU SSDNA-GUIDES ZU SCHNEIDEN, EIN NEUARTIGES DNA-DNA-INTERFERENZSYSTEM. FRÜHERE DATEN DES ANFRAGENDEN LABORS ZEIGEN, DASS THAGO ALS BARRIERE DER ANGEBORENEN IMMUNITÄT GEGEN EXOGENE DNA WIRKT UND DIE MEISTEN (90 %) DER DNA-MOLEKÜLE, DIE DURCH TRANSFORMATION IN DIE ZELLE GELANGEN, EFFEKTIV ZERSTÖRT, OHNE JEDOCH AUF DIESELBE DNA ZU WIRKEN, WENN SIE VON EINEM ANDEREN BAKTERIUM DERSELBEN GATTUNG ÜBERTRAGEN WIRD, WAS DARAUF HINDEUTET, DASS DIE AKTIVITÄT VON THAGO DER REGULIERUNG IN DER ZELLE UNTERLIEGT. ANDERERSEITS STELLT DIE VON SSDNA VON THAGO ANGEFÜHRTE SCHNEIDKAPAZITÄT EINE EIGENSCHAFT AUSSERGEWÖHNLICHER ANWENDUNGSPOTENZIALE IN GENOM-EDITION DAR, ÄHNLICH WIE IN IHREM BETRIEB, ABER MIT POTENZIELLEN VORTEILEN GEGENÜBER DEM CRISPR/CAS9-SYSTEM. IN EINEM 2015 ABGESCHLOSSENEN PROJEKT STELLTEN WIR FEST, DASS DIE VORÜBERGEHENDE EXPRESSION VON THAGO IN TRANSFEKTEN RATON-ZELLEN MIT SPEZIFISCHEN OLIGONUKLEOTIDEN DIE ABSCHALTUNG IM AUSDRUCK VON GFP AUS EINEM PLASMAID HERVORRIEF. In DER PROJEKT, dass wir gebeten werden, in den MECHANISMS PROFUNDEN, mit denen Sie es Ihnen zur Verfügung stellen können, die durch TRANSFORMATION oder TRANSFERIING OF Other CELULS mit dem FINANZ und EINER FUNKTION DER HINWEISIERUNG als ENTWICKLUNG IN DER GENOMAS._x000D_ als Vorstufe zu jedem Prozess der Offenheit des PROTEINs ANGENOMAS ANGENOMAS._x000D_ als Vorstufe zur Verfügung gestellt werden, die FIRST OBJECTIVE PROPOSAL PROPOSAL IENTIFIKATION DER COMPONENTE UND AKTIVITÄTEN/Deaktivierungsmekanismen, die in der von THAGO gemessenen DNA-DNA-Interferenzantwort enthalten sind, wird durch eine Kombination von biochemischen, protheomischen und GENETIC-Technologien zur Identifizierung von kovalenten Modifikationen und Wechselwirkungen mit anderen Interferenznotwendigkeiten behandelt. IM ZWEITEN ZIEL WIRD DIE VERWENDUNG VON PROTEINEN, DIE ALS WERKZEUGE FÜR DIE DNA-MODIFIKATION BEZAHLT WERDEN, AUF DIE MODIFIKATION VON THAGO AUSGERICHTET WERDEN, DIE SICH AUF DIE IM ERSTEN ZIEL GEWONNENEN DATEN SOWIE ZUFÄLLIG DURCH IN-VITRO GERICHTETE EVOLUTION KONZENTRIEREN. DIE EFFIZIENTESTEN VARIANTEN IN SCHNEIDVERSUCHEN UNTER DER LEITUNG VON GUIA WERDEN IN VITRO IN DNA MODIFIKATIONSPROZESSEN ALS PROGRAMMIERBARES RESTRIKTIONSENZYM VERWENDET UND DIREKT IN VIVO FÜR DIE BEARBEITUNG VON GENOMEN VON PROKARYOTEN UND EUKARYOTES ANGEWENDET. BEI GENOME VON EUKARYOTEN WÜRDE DIE AUFNAHME VON KERNORTSIGNALEN ZU DIESEN VERBESSERTEN VARIANTEN EINE DIREKTE TRANSFECCION DES PROTEINS ERMÖGLICHEN, DAS BEREITS MIT SSDNA-LEITFÄDEN VERBUNDEN IST, WODURCH DAS RISIKO EINER VERSEHENTLICHEN INTEGRATION EXOGENER DNA IN DAS GENOM, DAS MIT DEN DERZEITIGEN CRISPR/CAS9-TECHNIKEN VERBUNDEN IST, VERMIEDEN WÜRDE. (German)
9 December 2021
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Madrid
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Identifiers
BIO2016-77031-R
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