POST-EDUCATIONAL MODIFICATIONS OF STIM1 AND ORAI1: PHYSIOLOGICAL AND PATHOLOGICAL IMPLICATIONS (Q3135746)
Jump to navigation
Jump to search
Project Q3135746 in Spain
| Language | Label | Description | Also known as |
|---|---|---|---|
| English | POST-EDUCATIONAL MODIFICATIONS OF STIM1 AND ORAI1: PHYSIOLOGICAL AND PATHOLOGICAL IMPLICATIONS |
Project Q3135746 in Spain |
Statements
125,840.0 Euro
0 references
157,300.0 Euro
0 references
80.0 percent
0 references
1 January 2015
0 references
31 July 2018
0 references
UNIVERSIDAD DE EXTREMADURA
0 references
6071
0 references
LA SEÑALIZACION INTRACELULAR DEPENDIENTE DE CA2+ REPRESENTA UN MECANISMO DE CONTROL DE NUMEROSOS EVENTOS CELULARES. EN ESTE SENTIDO EL COMPLEJO FORMADO POR LAS PROTEINAS STIM1 Y ORAI1 RESULTA ESENCIAL PARA EL CONTROL DEL INFLUJO DE CA2+ Y POR LO TANTO PARA EL CONTROL DE LOS NIVELES DE CA2+ LIBRE CITOSOLICO. STIM1 ES UNA PROTEINA SITUADA MAYORITARIAMENTE EN LA MEMBRANA DEL RETICULO ENDOPLASMATICO DONDE ACTUA COMO SENSOR DE LOS NIVELES DE CA2+ DENTRO DE ESTE COMPARTIMENTO, Y QUE BAJO CONDICIONES DE DEPLECION DE LOS NIVELES DE CA2+ INTRALUMINAL ACTIVA CANALES DE CA2+ DE LA MEMBRANA PLASMATICA MEDIANTE UNION FISICA A LOS MISMOS. ENTRE ESTOS CANALES DE CA2+ SE ENCUENTRA ORAI1, QUE REGULA EL INFLUJO DE CA2+, Y QUE JUNTO A SU ACTIVADOR, STIM1, ESTA INVOLUCRADO EN FENOMENOS DEPENDIENTES DE CA2+ COMO LA MIGRACION CELULAR, DIFERENCIACION, O LA PROLIFERACION, EXISTIENDO DATOS RECIENTES QUE RELACIONAN A ESTAS DOS PROTEINAS CON LA TRANSFORMACION CELULAR EN FENOTIPOS MESENQUIMALES (TRANSICION EPITELIO-MESENQUIMA), ASI COMO EN LA METASTASIS EN LINEAS TUMORALES. POR ELLO, LA MODULACION DE ESTOS SISTEMAS DE TRANSPORTE Y EL CONTROL DE LOS NIVELES DE CA2+ CITOSOLICOS RESULTAN CLAVES EN LA SEÑALIZACION CELULAR. EN ESTE SENTIDO NUESTRO GRUPO HA DESCRITO QUE LA FOSFORILACION DE STIM1 EN RESIDUOS DIANA DE LA ACTIVIDAD ERK1/2 SUPONE UN MECANISMO DE ACTIVACION DE ESTA PROTEINA, NECESARIO PARA FACILITAR LA UNION A ORAI1, Y ACTIVAR LA ENTRADA DE CA2+ OPERADA POR DEPOSITOS INTRACELULARES (SOCE). ASI, LA FOSFORILACION DE STIM1 EN LOS RESIDUOS SER575, SER608 Y SER621 CONDUCE A SU DISOCIACION DEL EXTREMO DE MICROTUBULOS, PERMITIENDO LA AGREGACION DE STIM1 EN AGREGADOS (CLUSTERS) COMO PASO PREVIO A LA UNION A ORAI1. SIN EMBARGO, NUESTRA HIPOTESIS ESTABLECE QUE EL PLENO CONTROL DE LA ACTIVACION DEL CANAL ES DEBIDA A MODIFICACIONES POSTRADUCCIONALES DE AMBAS PROTEINAS, YA QUE ORAI1 TAMBIEN ES UNA FOSFOPROTEINA. AUNQUE ALGUNOS FOSFORESIDUOS DE ORAI1 SON CONOCIDOS POR ENSAYOS DE ESPECTROMETRIA DE MASAS A GRAN ESCALA, ENSAYOS PRELIMINARES REALIZADOS POR NUESTRO GRUPO EN CELULAS HEK293 NOS HAN PERMITIDO IDENTIFICAR FOSFORESIDUOS EN ORAI1 NO DESCRITOS HASTA LA FECHA, DE LOS QUE NO SE CONOCEN LAS QUINASAS RESPONSABLES, NI LA FUNCION DE ESTA FOSFORILACION. POR TODO ELLO, Y ASUMIENDO QUE LA FOSFORILACION DE ORAI1 PODRIA JUGAR UN PAPEL CLAVE EN LA MODULACION DE SU ACTIVIDAD Y POR TANTO MODULAR LOS PROCESOS DEPENDIENTES DE CA2+ MENCIONADOS ANTES, EL OBJETIVO PRINCIPAL DE ESTE PROYECTO ES LA DEFINICION DEL PERFIL DE FOSFORESIDUOS DE ORAI1 EN DIFERENTES SITUACIONES METABOLICAS, LA IDENTIFICACION DE LAS QUINASAS RESPONSABLES, Y LA FUNCION FISIOLOGICA DE ESTA FOSFORILACION ATENDIENDO A: (1) LA ACTIVIDAD DE ORAI1 COMO CANAL DE CA2+, (2) SU LOCALIZACION SUBCELULAR, (3) LA INTERACCION CON STIM1 Y (4) LA FORMACION DE COMPLEJOS CON OTRAS PROTEINAS DEPENDIENTES DE ESTOS RESIDUOS FOSFORILADOS, EMPLEANDO CELULAS HEK293. ADEMAS, SE ESTUDIARA EL IMPACTO DE ESTA FOSFORILACION EN PROCESOS DE MIGRACION CELULAR, TRANSICION EPITELIO-MESENQUIMA, Y EN LA DIFERENCIACION CELULAR EMPLEANDO LINEAS CELULARES ESTABLECIDAS. CON TODO ELLO PRETENDEMOS CONOCER LAS BASES MOLECULARES DE LA ACTIVACION DE SOCE, SU MODULACION POR FOSFORILACION, Y LA IDENTIFICACION DE POSIBLES DIANAS DE POTENCIAL INTERES TERAPEUTICO EN EL SISTEMA STIM1-ORAI1. (Spanish)
0 references
CA2±DEPENDENT INTRACELLULAR SIGNALING REPRESENTS A CONTROL MECHANISM FOR NUMEROUS CELLULAR EVENTS. IN THIS SENSE, THE COMPLEX FORMED BY STIM1 AND ORAI1 PROTEINS IS ESSENTIAL FOR THE CONTROL OF CA2+ INFLUX AND THEREFORE FOR THE CONTROL OF FREE CYTOSOLIC CA2+ LEVELS. STIM1 IS A PROTEIN LOCATED MOSTLY IN THE MEMBRANE OF THE ENDOPLASMATIC RETICULUM WHERE IT ACTS AS A SENSOR OF CA2+ LEVELS WITHIN THIS COMPARTMENT, AND THAT UNDER CONDITIONS OF DEPLETION OF THE CA2+ INTRALUMINAL LEVELS ACTIVATES CA2+ CHANNELS OF THE PLASMA MEMBRANE BY MEANS OF PHYSICAL UNION TO THEM. AMONG THESE CA2+ CHANNELS IS ORAI1, WHICH REGULATES THE INFLUX OF CA2+, AND WHICH TOGETHER WITH ITS ACTIVATOR, STIM1, IS INVOLVED IN CA2±DEPENDENT PHENOMENES SUCH AS CELL MIGRATION, DIFFERENTIATION, OR PROLIFERATION, AND THERE ARE RECENT DATA THAT RELATE THESE TWO PROTEINS TO CELL TRANSFORMATION IN MESENCHYMAL PHENOTYPES (EPITHELIUM-MESENCHYMA TRANSITION), AS WELL AS TUMOR-LINE METATASIS. THEREFORE, MODULATION OF THESE TRANSPORT SYSTEMS AND CONTROL OF CA2+ CYTOSOLIC LEVELS ARE KEY IN CELLULAR SIGNALING. IN THIS SENSE OUR GROUP HAS DESCRIBED THAT STIM1 PHOSPHORYLATION IN DIANA RESIDUES FROM THE ERK1/2 ACTIVITY IS A MECHANISM FOR ACTIVATING THIS PROTEIN, NECESSARY TO FACILITATE THE UNION TO ORAI1, AND ACTIVATE THE INPUT OF CA2+ OPERATED BY INTRACELLULAR DEPOSITS (SOCE). THUS, THE STIM1 PHOSPHORYLATION IN THE SER575, SER608 AND SER621 RESIDUES LEADS TO ITS DISSOCIATION OF THE MICROTUBULE END, ALLOWING THE AGGREGATION OF STIM1 IN AGGREGATES (CLUSTERS) AS A STEP PRIOR TO THE UNION TO ORAI1. HOWEVER, OUR HYPOTHESIS STATES THAT FULL CONTROL OF CHANNEL ACTIVATION IS DUE TO POST-TRANSLATIONAL MODIFICATIONS OF BOTH PROTEINS, AS ORAI1 IS ALSO A PHOSPHOPROTEIN. ALTHOUGH SOME ORAI1 PHOSPHORUS ARE KNOWN FOR LARGE-SCALE MASS SPECTROMETRY ASSAYS, PRELIMINARY TRIALS CARRIED OUT BY OUR GROUP IN HEK293 CELLS HAVE ALLOWED US TO IDENTIFY POSFORESIDUOS IN ORAI1 NOT DESCRIBED TO DATE, FOR WHICH THE RESPONSIBLE KINASES ARE NOT KNOWN, NOR THE FUNCTION OF THIS PHOSPHORUS. FOR ALL THIS, AND ASSUMING THAT ORAI1 PHOSPHORYLATION COULD PLAY A KEY ROLE IN THE MODULATION OF ITS ACTIVITY AND THEREFORE MODULATE THE PROCESSES DEPENDENT ON CA2+ MENTIONED ABOVE, THE MAIN OBJECTIVE OF THIS PROJECT IS TO DEFINE THE PROFILE OF ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 IN DIFFERENT METABOLIC SITUATIONS, THE IDENTIFICATION OF THE RESPONSIBLE KINASES, AND THE PHYSIOLOGICAL FUNCTION OF THIS FOSFORILACION TAKING INTO ACCOUNT: (1) THE ACTIVITY OF ORAI1 AS A CHANNEL OF CA2+, (2) ITS SUBCELLULAR LOCATION, (3) THE INTERACTION WITH STIM1 AND (4) THE FORMATION OF COMPLEXES WITH OTHER PROTEINS DEPENDENT ON THESE PHOSPHORYLATED RESIDUES, USING HEK293 CELLS. IN ADDITION, THE IMPACT OF THIS PHOSPHORYLATION ON CELL MIGRATION PROCESSES, EPITHELIUM-MESENCHYMA TRANSITION, AND CELL DIFFERENTIATION USING ESTABLISHED CELL LINES WILL BE STUDIED. WITH ALL THIS WE INTEND TO KNOW THE MOLECULAR BASES OF THE ACTIVATION OF SOCE, ITS MODULATION BY PHOSPHORYLATION, AND THE IDENTIFICATION OF POSSIBLE TARGETS OF POTENTIAL THERAPEUTIC INTEREST IN THE SYSTEM STIM1-ORAI1. (English)
12 October 2021
0.2578566439867577
0 references
LA SIGNALISATION INTRACELLULAIRE DÉPENDANTE DE CA2± REPRÉSENTE UN MÉCANISME DE CONTRÔLE POUR DE NOMBREUX ÉVÉNEMENTS CELLULAIRES. EN CE SENS, LE COMPLEXE FORMÉ PAR LES PROTÉINES STIM1 ET ORAI1 EST ESSENTIEL POUR LE CONTRÔLE DE L’AFFLUX DE CA2+ ET DONC POUR LE CONTRÔLE DES NIVEAUX LIBRES DE CA2+ CYTOSOLIQUES. STIM1 EST UNE PROTÉINE SITUÉE PRINCIPALEMENT DANS LA MEMBRANE DU RÉTICULUM ENDOPLASMATIQUE OÙ ELLE AGIT COMME UN CAPTEUR DES NIVEAUX DE CA2+ À L’INTÉRIEUR DE CE COMPARTIMENT, ET QUE DANS DES CONDITIONS D’ÉPUISEMENT DES NIVEAUX INTRALUMINAUX CA2+ ACTIVE LES CANAUX CA2+ DE LA MEMBRANE PLASMATIQUE PAR L’INTERMÉDIAIRE DE L’UNION PHYSIQUE À EUX. PARMI CES CANAUX CA2+ SE TROUVE L’ORAI1, QUI RÉGULE L’AFFLUX DE CA2+, ET QUI, AVEC SON ACTIVATEUR STIM1, EST IMPLIQUÉ DANS LES PHENOMENES DÉPENDANTS DU CA2± COMME LA MIGRATION, LA DIFFÉRENCIATION OU LA PROLIFÉRATION CELLULAIRES, ET IL EXISTE DES DONNÉES RÉCENTES QUI RELIENT CES DEUX PROTÉINES À LA TRANSFORMATION CELLULAIRE DANS LES PHÉNOTYPES MÉSENCHYMIQUES (TRANSITION ÉPITHÉLIUM-MÉSENCHYME), AINSI QU’À METATASIS DE LA LIGNÉE TUMORALE. PAR CONSÉQUENT, LA MODULATION DE CES SYSTÈMES DE TRANSPORT ET LE CONTRÔLE DES NIVEAUX CYTOSOLIQUES CA2+ SONT ESSENTIELS DANS LA SIGNALISATION CELLULAIRE. EN CE SENS, NOTRE GROUPE A DÉCRIT QUE LA PHOSPHORYLATION STIM1 DANS LES RÉSIDUS DE DIANA DE L’ACTIVITÉ ERK1/2 EST UN MÉCANISME D’ACTIVATION DE CETTE PROTÉINE, NÉCESSAIRE POUR FACILITER L’UNION À ORAI1, ET ACTIVER L’ENTRÉE DE CA2+ OPÉRÉE PAR DES DÉPÔTS INTRACELLULAIRES (SOCE). AINSI, LA PHOSPHORYLATION STIM1 DANS LES RÉSIDUS SER575, SER608 ET SER621 CONDUIT À SA DISSOCIATION DE L’EXTRÉMITÉ DES MICROTUBULES, CE QUI PERMET L’AGRÉGATION DE STIM1 DANS LES AGRÉGATS (GRAPPES) EN TANT QU’ÉTAPE ANTÉRIEURE À L’ORAI1. CEPENDANT, NOTRE HYPOTHÈSE INDIQUE QUE LE CONTRÔLE TOTAL DE L’ACTIVATION DES CANAUX EST DÛ À DES MODIFICATIONS POST-TRADUCTIONNELLES DES DEUX PROTÉINES, CAR ORAI1 EST ÉGALEMENT UNE PHOSPHOPROTÉINE. BIEN QUE CERTAINS PHOSPHORE ORAI1 SOIENT CONNUS POUR LES ESSAIS DE SPECTROMÉTRIE DE MASSE À GRANDE ÉCHELLE, DES ESSAIS PRÉLIMINAIRES EFFECTUÉS PAR NOTRE GROUPE DANS DES CELLULES HEK293 NOUS ONT PERMIS D’IDENTIFIER POSFORESIDUOS DANS ORAI1 NON DÉCRIT À CE JOUR, POUR LESQUELS LES KINASES RESPONSABLES NE SONT PAS CONNUES, NI LA FONCTION DE CE PHOSPHORE. POUR TOUT CELA, ET À SUPPOSER QUE LA PHOSPHORYLATION ORAI1 PUISSE JOUER UN RÔLE CLÉ DANS LA MODULATION DE SON ACTIVITÉ ET DONC MODULER LES PROCESSUS DÉPENDANT DE CA2+ MENTIONNÉS CI-DESSUS, L’OBJECTIF PRINCIPAL DE CE PROJET EST DE DÉFINIR LE PROFIL DE PHOSFORESIDUOS1 D’ORAI DANS DIFFÉRENTES SITUATIONS MÉTABOLIQUES, L’IDENTIFICATION DES KINASES RESPONSABLES ET LA FONCTION PHYSIOLOGIQUE DE CETTE FOSFORILACION EN TENANT COMPTE: (1) L’ACTIVITÉ DE L’ORAI1 COMME CANAL DE CA2+, (2) SON EMPLACEMENT SUBCELLULAIRE, (3) L’INTERACTION AVEC LA STIM1 ET (4) LA FORMATION DE COMPLEXES AVEC D’AUTRES PROTÉINES DÉPENDANT DE CES RÉSIDUS PHOSPHORYLÉS, EN UTILISANT DES CELLULES HEK293. DE PLUS, ON ÉTUDIERA L’IMPACT DE CETTE PHOSPHORYLATION SUR LES PROCESSUS DE MIGRATION CELLULAIRE, LA TRANSITION ÉPITHÉLIUM-MÉSENCHYME ET LA DIFFÉRENCIATION CELLULAIRE À L’AIDE DE LIGNÉES CELLULAIRES ÉTABLIES. AVEC TOUT CELA, NOUS AVONS L’INTENTION DE CONNAÎTRE LES BASES MOLÉCULAIRES DE L’ACTIVATION DE SOCE, SA MODULATION PAR PHOSPHORYLATION, ET L’IDENTIFICATION DE CIBLES POSSIBLES D’INTÉRÊT THÉRAPEUTIQUE POTENTIEL DANS LE SYSTÈME STIM1-ORAI1. (French)
2 December 2021
0 references
CA2±ABHÄNGIGE INTRAZELLULÄRE SIGNALISIERUNG STELLT EINEN KONTROLLMECHANISMUS FÜR ZAHLREICHE ZELLULÄRE EREIGNISSE DAR. IN DIESEM SINNE IST DER KOMPLEX, DER AUS STIM1- UND ORAI1-PROTEINEN GEBILDET WIRD, FÜR DIE KONTROLLE DES CA2±ZUFLUSSES UND DAMIT FÜR DIE KONTROLLE DER FREIEN ZYTOSOLISCHEN CA2±SPIEGEL UNERLÄSSLICH. STIM1 IST EIN PROTEIN, DAS SICH HAUPTSÄCHLICH IN DER MEMBRAN DES ENDOPLASMATISCHEN RETIKULUMS BEFINDET, WO ES ALS SENSOR VON CA2±SPIEGELN INNERHALB DIESES KOMPARTIMENTS FUNGIERT UND DASS UNTER BEDINGUNGEN DER ERSCHÖPFUNG DER CA2±INTRALUMINALWERTE CA2±KANÄLE DER PLASMAMEMBRAN DURCH PHYSIKALISCHE UNION ZU IHNEN AKTIVIERT WERDEN. UNTER DIESEN CA2±KANÄLE IST ORAI1, DAS DEN ZUSTROM VON CA2+ REGULIERT UND ZUSAMMEN MIT SEINEM AKTIVATOR STIM1 AN CA2±ABHÄNGIGEN PHENOMENES WIE ZELLMIGRATION, DIFFERENZIERUNG ODER PROLIFERATION BETEILIGT IST, UND ES GIBT AKTUELLE DATEN, DIE DIESE BEIDEN PROTEINE MIT DER ZELLTRANSFORMATION IN MESENCHYMALEN PHÄNOTYPEN (EPITHELIUM-MESENCHYMA-ÜBERGANG) SOWIE TUMOR-LINE METATASIS IN VERBINDUNG BRINGEN. DAHER IST DIE MODULATION DIESER TRANSPORTSYSTEME UND DIE STEUERUNG VON CA2+ ZYTOSOLISCHEN EBENEN VON ENTSCHEIDENDER BEDEUTUNG FÜR DIE ZELLULÄRE SIGNALISIERUNG. IN DIESEM SINNE HAT UNSERE GRUPPE BESCHRIEBEN, DASS DIE STIM1-PHOSPHORYLIERUNG IN DIANA-RÜCKSTÄNDEN AUS DER AKTIVITÄT ERK1/2 EIN MECHANISMUS ZUR AKTIVIERUNG DIESES PROTEINS IST, DER NOTWENDIG IST, UM DIE UNION IN ORAI1 ZU ERLEICHTERN UND DIE EINGABE VON CA2+ DURCH INTRAZELLULÄRE ABLAGERUNGEN (SOCE) ZU AKTIVIEREN. SO FÜHRT DIE STIM1-PHOSPHORYLIERUNG IN DEN RÜCKSTÄNDEN SER575, SER608 UND SER621 ZU DEREN DISSOZIATION DES MIKROTUBÜLENDS, WODURCH DIE AGGREGATION VON STIM1 IN AGGREGATEN (CLUSTERN) IN EINEM SCHRITT VOR DER UNION ZUM ORAI1 ERMÖGLICHT WIRD. UNSERE HYPOTHESE BESAGT JEDOCH, DASS DIE VOLLSTÄNDIGE KONTROLLE DER KANALAKTIVIERUNG AUF POST-TRANSLATIONALE MODIFIKATIONEN BEIDER PROTEINE ZURÜCKZUFÜHREN IST, DA ORAI1 AUCH EIN PHOSPHOPROTEIN IST. OBWOHL EINIGE ORAI1-PHOSPHOR FÜR GROSSMASSSTÄBLICHE MASSENSPEKTROMETRIE-ASSAYS BEKANNT SIND, ERLAUBTEN UNS VORVERSUCHE UNSERER GRUPPE IN HEK293 ZELLEN, POSFORESIDUOS IN ORAI1 ZU IDENTIFIZIEREN, FÜR DIE DIE VERANTWORTLICHEN KINASEN WEDER BEKANNT SIND NOCH DIE FUNKTION DIESES PHOSPHORS. FÜR ALL DIES UND UNTER DER ANNAHME, DASS DIE ORAI1-PHOSPHORYLIERUNG EINE SCHLÜSSELROLLE BEI DER MODULATION IHRER AKTIVITÄT SPIELEN UND SOMIT DIE OBEN GENANNTEN PROZESSE VON CA2+ MODULIEREN KÖNNTE, BESTEHT DAS HAUPTZIEL DIESES PROJEKTS DARIN, DAS PROFIL VON ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 IN VERSCHIEDENEN STOFFWECHSELSITUATIONEN, DIE IDENTIFIZIERUNG DER VERANTWORTLICHEN KINASEN UND DIE PHYSIOLOGISCHE FUNKTION DIESER FOSFORILACION UNTER BERÜCKSICHTIGUNG FOLGENDER FAKTOREN ZU DEFINIEREN: (1) DIE AKTIVITÄT VON ORAI1 ALS KANAL VON CA2+, (2) SEINE SUBZELLULÄRE LAGE, (3) DIE WECHSELWIRKUNG MIT STIM1 UND (4) DIE BILDUNG VON KOMPLEXEN MIT ANDEREN PROTEINEN, DIE VON DIESEN PHOSPHORYLIERTEN RÜCKSTÄNDEN ABHÄNGIG SIND, UNTER VERWENDUNG VON HEK293 ZELLEN. DARÜBER HINAUS WERDEN DIE AUSWIRKUNGEN DIESER PHOSPHORYLIERUNG AUF ZELLMIGRATIONSPROZESSE, EPITHELIUM-MESENCHYM-ÜBERGANG UND ZELLDIFFERENZIERUNG ANHAND ETABLIERTER ZELLLINIEN UNTERSUCHT. MIT ALL DEM WOLLEN WIR DIE MOLEKULAREN GRUNDLAGEN DER AKTIVIERUNG VON SOCE, SEINE MODULATION DURCH PHOSPHORYLIERUNG UND DIE ERMITTLUNG MÖGLICHER ZIELE VON POTENZIELLEM THERAPEUTISCHEM INTERESSE IM SYSTEM STIM1-ORAI1 KENNEN. (German)
9 December 2021
0 references
CA2±AFHANKELIJKE INTRACELLULAIRE SIGNALERING VERTEGENWOORDIGT EEN CONTROLEMECHANISME VOOR TAL VAN CELLULAIRE GEBEURTENISSEN. IN DEZE ZIN IS HET COMPLEX GEVORMD DOOR STIM1- EN ORAI1-EIWITTEN ESSENTIEEL VOOR DE CONTROLE VAN DE CA2±INFLUX EN DUS VOOR DE CONTROLE VAN VRIJE CYTOSOLISCHE CA2±NIVEAUS. STIM1 IS EEN EIWIT DAT ZICH VOORNAMELIJK IN HET MEMBRAAN VAN HET ENDOPLASMATISCHE RETICULUM BEVINDT, WAAR HET FUNGEERT ALS SENSOR VAN CA2±NIVEAUS IN DIT COMPARTIMENT, EN DAT ONDER OMSTANDIGHEDEN VAN UITPUTTING VAN DE CA2±INTRALUMINALE NIVEAUS CA2±KANALEN VAN HET PLASMAMEMBRAAN DOOR MIDDEL VAN FYSIEKE UNIE AAN HEN ACTIVEERT. ONDER DEZE CA2+ KANALEN IS ORAI1, DAT DE INSTROOM VAN CA2+ REGULEERT, EN DIE SAMEN MET ZIJN ACTIVATOR, STIM1, BETROKKEN IS BIJ CA2±AFHANKELIJKE PHENOMENES ZOALS CELMIGRATIE, DIFFERENTIATIE OF PROLIFERATIE, EN ER ZIJN RECENTE GEGEVENS DIE BETREKKING HEBBEN OP DEZE TWEE EIWITTEN OP CELTRANSFORMATIE IN MESENCHYMALE FENOTYPES (EPITHELIUM-MESENCHYMA OVERGANG), EVENALS TUMOR-LINE METATASIS. DAAROM ZIJN MODULATIE VAN DEZE TRANSPORTSYSTEMEN EN CONTROLE VAN CA2+ CYTOSOLISCHE NIVEAUS ESSENTIEEL IN CELLULAIRE SIGNALERINGEN. IN DEZE ZIN HEEFT ONZE GROEP BESCHREVEN DAT STIM1 FOSFORYLATIE IN DIANA-RESIDUEN VAN DE ERK1/2-ACTIVITEIT EEN MECHANISME IS OM DIT EIWIT TE ACTIVEREN, NOODZAKELIJK OM DE UNIE TE VERGEMAKKELIJKEN TOT ORAI1, EN DE INPUT VAN CA2+ TE ACTIVEREN DIE WORDT GEËXPLOITEERD DOOR INTRACELLULAIRE AFZETTINGEN (SOCE). ZO LEIDT DE STIM1-FOSFORYLATIE IN DE SER575, SER608 EN SER621-RESIDUEN TOT DE DISSOCIATIE VAN HET MICROTUBULEEINDE, WAARDOOR STIM1 IN AGGREGATEN (CLUSTERS) KAN WORDEN SAMENGEVOEGD ALS EEN STAP VÓÓR DE UNIE MET ORAI1. ECHTER, ONZE HYPOTHESE STATEN DAT VOLLEDIGE CONTROLE VAN KANAALACTIVERING IS TE WIJTEN AAN POST-TRANSLATIONELE MODIFICATIES VAN BEIDE EIWITTEN, AANGEZIEN ORAI1 OOK EEN FOSFOPROTEÏNE IS. HOEWEL SOMMIGE ORAI1-FOSFOR BEKEND ZIJN VOOR GROOTSCHALIGE MASSASPECTROMETRIETESTS, HEBBEN VOORLOPIGE ONDERZOEKEN DIE DOOR ONZE GROEP IN HEK293-CELLEN ZIJN UITGEVOERD, ONS IN STAAT GESTELD POSFORESIDUOS TE IDENTIFICEREN IN ORAI1 DIE TOT OP HEDEN NIET IS BESCHREVEN, WAARVOOR DE VERANTWOORDELIJKE KINASEN NIET BEKEND ZIJN, NOCH DE FUNCTIE VAN DEZE FOSFOR. IN DE VERONDERSTELLING DAT ORAI1-FOSFORYLATIE EEN SLEUTELROL ZOU KUNNEN SPELEN IN DE MODULATIE VAN ZIJN ACTIVITEIT EN DUS DE HIERBOVEN VERMELDE PROCESSEN DIE AFHANKELIJK ZIJN VAN CA2+ KAN MODULEREN, IS HET HOOFDDOEL VAN DIT PROJECT OM HET PROFIEL VAN ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 IN VERSCHILLENDE METABOLE SITUATIES TE DEFINIËREN, DE VERANTWOORDELIJKE KINASEN TE IDENTIFICEREN EN DE FYSIOLOGISCHE FUNCTIE VAN DEZE FOSFORILACIE TE BEPALEN, REKENING HOUDEND MET: (1) DE ACTIVITEIT VAN ORAI1 ALS KANAAL VAN CA2+, (2) DE SUBCELLULAIRE LOCATIE, (3) DE INTERACTIE MET STIM1 EN (4) DE VORMING VAN COMPLEXEN MET ANDERE EIWITTEN DIE AFHANKELIJK ZIJN VAN DEZE GEFOSFORYLEERDE RESIDUEN, MET BEHULP VAN HEK293-CELLEN. DAARNAAST ZAL HET EFFECT VAN DEZE FOSFORYLATIE OP CELMIGRATIEPROCESSEN, EPITHEEL-MESENCHYMA-TRANSITIE EN CELDIFFERENTIATIE MET BEHULP VAN GEVESTIGDE CELLIJNEN WORDEN BESTUDEERD. MET DIT ALLES WILLEN WE DE MOLECULAIRE BASEN KENNEN VAN DE ACTIVERING VAN SOCE, DE MODULATIE ERVAN DOOR FOSFORYLATIE EN DE IDENTIFICATIE VAN MOGELIJKE DOELWITTEN VAN POTENTIEEL THERAPEUTISCH BELANG IN HET SYSTEEM STIM1-ORAI1. (Dutch)
17 December 2021
0 references
LA SEGNALAZIONE INTRACELLULARE CA2±DIPENDENTE RAPPRESENTA UN MECCANISMO DI CONTROLLO PER NUMEROSI EVENTI CELLULARI. IN QUESTO SENSO, IL COMPLESSO FORMATO DALLE PROTEINE STIM1 E ORAI1 È ESSENZIALE PER IL CONTROLLO DELL'AFFLUSSO DI CA2+ E QUINDI PER IL CONTROLLO DEI LIVELLI DI CA2+ LIBERI. LO STIM1 È UNA PROTEINA SITUATA PRINCIPALMENTE NELLA MEMBRANA DEL RETICOLO ENDOPLASMATICO DOVE AGISCE COME UN SENSORE DEI LIVELLI DI CA2+ ALL'INTERNO DI QUESTO COMPARTIMENTO E CHE IN CONDIZIONI DI DEPLEZIONE DEI LIVELLI INTRALUMINALI CA2+ ATTIVA I CANALI CA2+ DELLA MEMBRANA PLASMATICA PER MEZZO DI UN'UNIONE FISICA A LORO. TRA QUESTI CANALI CA2+ C'È ORAI1, CHE REGOLA L'AFFLUSSO DI CA2+, E CHE INSIEME AL SUO ATTIVATORE, STIM1, È COINVOLTO IN PHENOMENES CA2±DIPENDENTI COME MIGRAZIONE CELLULARE, DIFFERENZIAZIONE O PROLIFERAZIONE, E CI SONO DATI RECENTI CHE COLLEGANO QUESTE DUE PROTEINE ALLA TRASFORMAZIONE CELLULARE NEI FENOTIPI MESENCHIMALI (TRANSIZIONE EPITELIO-MESENCHIMA), COSÌ COME METATASIS SULLA LINEA TUMORALE. PERTANTO, LA MODULAZIONE DI QUESTI SISTEMI DI TRASPORTO E IL CONTROLLO DEI LIVELLI CITOSOLICI CA2+ SONO FONDAMENTALI NELLA SEGNALAZIONE CELLULARE. IN QUESTO SENSO IL NOSTRO GRUPPO HA DESCRITTO CHE LA FOSFORILAZIONE STIM1 NEI RESIDUI DIANA DELL'ATTIVITÀ ERK1/2 È UN MECCANISMO PER ATTIVARE QUESTA PROTEINA, NECESSARIO PER FACILITARE L'UNIONE A ORAI1, E ATTIVARE L'INGRESSO DI CA2+ GESTITO DA DEPOSITI INTRACELLULARI (SOCE). PERTANTO, LA FOSFORILAZIONE STIM1 NEI RESIDUI SER575, SER608 E SER621 PORTA ALLA DISSOCIAZIONE DELL'ESTREMITÀ DEL MICROTUBULO, CONSENTENDO L'AGGREGAZIONE DI STIM1 IN AGGREGATI (CLUSTER) COME PASSO PRIMA DELL'UNIONE VERSO ORAI1. TUTTAVIA, LA NOSTRA IPOTESI AFFERMA CHE IL PIENO CONTROLLO DELL'ATTIVAZIONE DEL CANALE È DOVUTO A MODIFICHE POST-TRADUZIONALI DI ENTRAMBE LE PROTEINE, IN QUANTO ORAI1 È ANCHE UNA FOSFOPROTEINA. SEBBENE ALCUNI FOSFORO ORAI1 SIANO NOTI PER I TEST DI SPETTROMETRIA DI MASSA SU LARGA SCALA, GLI STUDI PRELIMINARI EFFETTUATI DAL NOSTRO GRUPPO IN CELLULE HEK293 CI HANNO PERMESSO DI IDENTIFICARE POSFORESIDUOS IN ORAI1 NON DESCRITTO FINO AD OGGI, PER CUI LE CHINASI RESPONSABILI NON SONO NOTE, NÉ LA FUNZIONE DI QUESTO FOSFORO. PER TUTTO QUESTO, E SUPPONENDO CHE LA FOSFORILAZIONE ORAI1 POSSA SVOLGERE UN RUOLO CHIAVE NELLA MODULAZIONE DELLA SUA ATTIVITÀ E QUINDI MODULARE I PROCESSI DIPENDENTI DA CA2+ DI CUI SOPRA, L'OBIETTIVO PRINCIPALE DI QUESTO PROGETTO È QUELLO DI DEFINIRE IL PROFILO DEL PHOSFORESIDUOS1 DI ORAI IN DIVERSE SITUAZIONI METABOLICHE, L'IDENTIFICAZIONE DELLE CHINASI RESPONSABILI E LA FUNZIONE FISIOLOGICA DI QUESTA FOSFORILACION TENENDO CONTO: (1) L'ATTIVITÀ DI ORAI1 COME CANALE DI CA2+, (2) LA SUA POSIZIONE SUBCELLULARE, (3) L'INTERAZIONE CON STIM1 E (4) LA FORMAZIONE DI COMPLESSI CON ALTRE PROTEINE DIPENDENTI DA QUESTI RESIDUI FOSFORILATI, UTILIZZANDO CELLULE HEK293. INOLTRE, SARÀ STUDIATO L'IMPATTO DI QUESTA FOSFORILAZIONE SUI PROCESSI DI MIGRAZIONE CELLULARE, SULLA TRANSIZIONE EPITELIO-MESENCHIMA E SULLA DIFFERENZIAZIONE CELLULARE UTILIZZANDO LINEE CELLULARI CONSOLIDATE. CON TUTTO QUESTO INTENDIAMO CONOSCERE LE BASI MOLECOLARI DELL'ATTIVAZIONE DI SOCE, LA SUA MODULAZIONE PER FOSFORILAZIONE E L'IDENTIFICAZIONE DI POSSIBILI OBIETTIVI DI POTENZIALE INTERESSE TERAPEUTICO NEL SISTEMA STIM1-ORAI1. (Italian)
16 January 2022
0 references
CA2± ΕΞΑΡΤΏΜΕΝΗ ΕΝΔΟΚΥΤΤΑΡΙΚΉ ΣΗΜΑΤΟΔΌΤΗΣΗ ΑΝΤΙΠΡΟΣΩΠΕΎΕΙ ΈΝΑΝ ΜΗΧΑΝΙΣΜΌ ΕΛΈΓΧΟΥ ΓΙΑ ΠΟΛΛΆ ΚΥΤΤΑΡΙΚΆ ΣΥΜΒΆΝΤΑ. ΥΠΌ ΤΗΝ ΈΝΝΟΙΑ ΑΥΤΉ, ΤΟ ΣΎΜΠΛΕΓΜΑ ΠΟΥ ΣΧΗΜΑΤΊΖΕΤΑΙ ΑΠΌ ΤΙΣ ΠΡΩΤΕΪ́ΝΕΣ STIM1 ΚΑΙ ORAI1 ΕΊΝΑΙ ΑΠΑΡΑΊΤΗΤΟ ΓΙΑ ΤΟΝ ΈΛΕΓΧΟ ΤΗΣ ΕΙΣΡΟΉΣ CA2+ ΚΑΙ, ΩΣ ΕΚ ΤΟΎΤΟΥ, ΓΙΑ ΤΟΝ ΈΛΕΓΧΟ ΤΩΝ ΕΛΕΎΘΕΡΩΝ ΚΥΤΤΑΡΟΣΥΛΙΚΏΝ ΕΠΙΠΈΔΩΝ CA2+. ΤΟ STIM1 ΕΊΝΑΙ ΜΙΑ ΠΡΩΤΕΪ́ΝΗ ΠΟΥ ΒΡΊΣΚΕΤΑΙ ΚΥΡΊΩΣ ΣΤΗ ΜΕΜΒΡΆΝΗ ΤΟΥ ΕΝΔΟΠΛΑΣΜΑΤΙΚΟΎ ΔΙΚΤΥΏΜΑΤΟΣ ΌΠΟΥ ΔΡΑ ΩΣ ΑΙΣΘΗΤΉΡΑΣ ΤΩΝ ΕΠΙΠΈΔΩΝ CA2+ ΜΈΣΑ ΣΕ ΑΥΤΌ ΤΟ ΔΙΑΜΈΡΙΣΜΑ ΚΑΙ ΌΤΙ ΥΠΌ ΣΥΝΘΉΚΕΣ ΕΞΆΝΤΛΗΣΗΣ ΤΩΝ ΕΠΙΠΈΔΩΝ CA2+ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΕΊ ΤΟΥΣ ΔΙΑΎΛΟΥΣ CA2+ ΤΗΣ ΜΕΜΒΡΆΝΗΣ ΠΛΆΣΜΑΤΟΣ ΜΈΣΩ ΤΗΣ ΦΥΣΙΚΉΣ ΈΝΩΣΗΣ ΣΕ ΑΥΤΆ. ΜΕΤΑΞΎ ΑΥΤΏΝ ΤΩΝ ΚΑΝΑΛΙΏΝ CA2+ ΕΊΝΑΙ ΤΟ ORAI1, ΤΟ ΟΠΟΊΟ ΡΥΘΜΊΖΕΙ ΤΗΝ ΕΙΣΡΟΉ CA2+, ΚΑΙ ΤΟ ΟΠΟΊΟ ΜΑΖΊ ΜΕ ΤΟΝ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΤΉ ΤΟΥ, ΤΟ STIM1, ΣΥΜΜΕΤΈΧΕΙ ΣΤΗΝ CA2±ΕΞΑΡΤΏΜΕΝΗ ΦΕΝΟΜΕΝΕΣ, ΌΠΩΣ Η ΜΕΤΑΝΆΣΤΕΥΣΗ ΚΥΤΤΆΡΩΝ, Η ΔΙΑΦΟΡΟΠΟΊΗΣΗ Ή Ο ΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑΣΜΌΣ, ΚΑΙ ΥΠΆΡΧΟΥΝ ΠΡΌΣΦΑΤΑ ΣΤΟΙΧΕΊΑ ΠΟΥ ΣΧΕΤΊΖΟΝΤΑΙ ΜΕ ΑΥΤΈΣ ΤΙΣ ΔΎΟ ΠΡΩΤΕΪ́ΝΕΣ ΜΕ ΤΗ ΜΕΤΑΤΡΟΠΉ ΤΩΝ ΚΥΤΤΆΡΩΝ ΣΕ ΜΕΣΕΓΧΥΜΑΤΙΚΟΎΣ ΦΑΙΝΌΤΥΠΟΥΣ (ΜΕΤΆΠΤΩΣΗ ΕΠΙΘΉΛΊΟΥ-ΜΕΣΕΓΧΎΜΑΤΟΣ), ΚΑΘΏΣ ΚΑΙ ΜΕ ΤΗ ΜΕΤΑΤΑΣΗ ΌΓΚΩΝ. ΩΣ ΕΚ ΤΟΎΤΟΥ, Η ΔΙΑΜΌΡΦΩΣΗ ΑΥΤΏΝ ΤΩΝ ΣΥΣΤΗΜΆΤΩΝ ΜΕΤΑΦΟΡΆΣ ΚΑΙ Ο ΈΛΕΓΧΟΣ ΤΩΝ ΚΥΤΤΑΡΟΣΤΕΡΙΚΏΝ ΕΠΙΠΈΔΩΝ CA2+ ΕΊΝΑΙ ΚΑΊΡΙΑΣ ΣΗΜΑΣΊΑΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΚΥΤΤΑΡΙΚΉ ΣΗΜΑΤΟΔΌΤΗΣΗ. ΥΠΌ ΤΗΝ ΈΝΝΟΙΑ ΑΥΤΉ, Η ΟΜΆΔΑ ΜΑΣ ΠΕΡΙΈΓΡΑΨΕ ΌΤΙ Η ΦΩΣΦΟΡΥΛΊΩΣΗ STIM1 ΣΤΗ DIANA ΑΠΌ ΤΗ ΔΡΑΣΤΗΡΙΌΤΗΤΑ ERK1/2 ΕΊΝΑΙ ΈΝΑΣ ΜΗΧΑΝΙΣΜΌΣ ΕΝΕΡΓΟΠΟΊΗΣΗΣ ΑΥΤΉΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΪ́ΝΗΣ, ΑΠΑΡΑΊΤΗΤΟΣ ΓΙΑ ΝΑ ΔΙΕΥΚΟΛΥΝΘΕΊ Η ΈΝΩΣΗ ΣΤΟ ORAI1, ΚΑΙ ΝΑ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΘΕΊ Η ΕΙΣΡΟΉ CA2+ ΠΟΥ ΛΕΙΤΟΥΡΓΕΊ ΜΕ ΕΝΔΟΚΥΤΤΑΡΙΚΈΣ ΕΝΑΠΟΘΈΣΕΙΣ (SOCE). ΩΣ ΕΚ ΤΟΎΤΟΥ, Η ΦΩΣΦΟΡΥΛΊΩΣΗ STIM1 ΣΤΑ ΥΠΟΛΕΊΜΜΑΤΑ SER575, SER608 ΚΑΙ SER621 ΟΔΗΓΕΊ ΣΤΟΝ ΔΙΑΧΩΡΙΣΜΌ ΤΟΥ ΆΚΡΟΥ ΤΗΣ ΜΙΚΡΟΣΩΛΉΝΑΣ, ΕΠΙΤΡΈΠΟΝΤΑΣ ΤΗΝ ΟΜΑΔΟΠΟΊΗΣΗ ΤΟΥ STIM1 ΣΕ ΑΔΡΑΝΉ ΥΛΙΚΆ (ΣΥΣΤΆΔΕΣ) ΩΣ ΒΉΜΑ ΠΡΙΝ ΑΠΌ ΤΗΝ ΈΝΩΣΗ ΈΩΣ ΤΟ ORAI1. ΩΣΤΌΣΟ, Η ΥΠΌΘΕΣΗ ΜΑΣ ΑΝΑΦΈΡΕΙ ΌΤΙ Ο ΠΛΉΡΗΣ ΈΛΕΓΧΟΣ ΤΗΣ ΕΝΕΡΓΟΠΟΊΗΣΗΣ ΤΩΝ ΚΑΝΑΛΙΏΝ ΟΦΕΊΛΕΤΑΙ ΣΕ ΜΕΤΑΜΕΤΑΦΡΑΣΤΙΚΈΣ ΤΡΟΠΟΠΟΙΉΣΕΙΣ ΚΑΙ ΤΩΝ ΔΎΟ ΠΡΩΤΕΪΝΏΝ, ΚΑΘΏΣ ΤΟ ORAI1 ΕΊΝΑΙ ΕΠΊΣΗΣ ΦΩΣΦΟΠΡΩΤΕΪ́ΝΗ. ΑΝ ΚΑΙ ΟΡΙΣΜΈΝΟΙ ΦΩΣΦΌΡΟΣ ORAI1 ΕΊΝΑΙ ΓΝΩΣΤΟΊ ΓΙΑ ΜΕΓΆΛΗΣ ΚΛΊΜΑΚΑΣ ΑΝΑΛΎΣΕΙΣ ΦΑΣΜΑΤΟΜΕΤΡΊΑΣ ΜΆΖΑΣ, ΟΙ ΠΡΟΚΑΤΑΡΚΤΙΚΈΣ ΔΟΚΙΜΈΣ ΠΟΥ ΠΡΑΓΜΑΤΟΠΟΙΉΘΗΚΑΝ ΑΠΌ ΤΗΝ ΟΜΆΔΑ ΜΑΣ ΣΕ ΚΎΤΤΑΡΑ HEK293 ΜΑΣ ΕΠΈΤΡΕΨΑΝ ΝΑ ΑΝΑΓΝΩΡΊΣΟΥΜΕ ΤΟ POSFORESIDUOS ΣΤΟ ORAI1 ΠΟΥ ΔΕΝ ΈΧΕΙ ΠΕΡΙΓΡΑΦΕΊ ΜΈΧΡΙ ΣΉΜΕΡΑ, ΓΙΑ ΤΟ ΟΠΟΊΟ ΟΙ ΥΠΕΎΘΥΝΕΣ ΚΙΝΆΣΕΣ ΔΕΝ ΕΊΝΑΙ ΓΝΩΣΤΈΣ, ΟΎΤΕ Η ΛΕΙΤΟΥΡΓΊΑ ΑΥΤΟΎ ΤΟΥ ΦΩΣΦΌΡΟΥ. ΓΙΑ ΌΛΑ ΑΥΤΆ, ΚΑΙ ΑΝ ΥΠΟΤΕΘΕΊ ΌΤΙ Η ΦΩΣΦΟΡΥΛΊΩΣΗ ORAI1 ΘΑ ΜΠΟΡΟΎΣΕ ΝΑ ΔΙΑΔΡΑΜΑΤΊΣΕΙ ΒΑΣΙΚΌ ΡΌΛΟ ΣΤΗ ΔΙΑΜΌΡΦΩΣΗ ΤΗΣ ΔΡΑΣΤΗΡΙΌΤΗΤΆΣ ΤΗΣ ΚΑΙ, ΩΣ ΕΚ ΤΟΎΤΟΥ, ΝΑ ΔΙΑΜΟΡΦΏΣΕΙ ΤΙΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΊΕΣ ΠΟΥ ΕΞΑΡΤΏΝΤΑΙ ΑΠΌ ΤΗΝ CA2+, ΚΎΡΙΟΣ ΣΤΌΧΟΣ ΑΥΤΟΎ ΤΟΥ ΈΡΓΟΥ ΕΊΝΑΙ ΝΑ ΚΑΘΟΡΊΣΕΙ ΤΟ ΠΡΟΦΊΛ ΤΟΥ PHOSFORESIDUOS1 ΤΟΥ ORAI ΣΕ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΈΣ ΜΕΤΑΒΟΛΙΚΈΣ ΚΑΤΑΣΤΆΣΕΙΣ, ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΌ ΤΩΝ ΥΠΕΎΘΥΝΩΝ ΚΙΝΑΣΏΝ ΚΑΙ ΤΗ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΉ ΛΕΙΤΟΥΡΓΊΑ ΤΟΥ ΠΑΡΌΝΤΟΣ FOSFORILACION ΛΑΜΒΆΝΟΝΤΑΣ ΥΠΌΨΗ: (1) Η ΔΡΑΣΤΗΡΙΌΤΗΤΑ ΤΟΥ ORAI1 ΩΣ ΔΙΑΎΛΟΥ CA2+, (2) Η ΥΠΟΚΥΤΤΑΡΙΚΉ ΘΈΣΗ ΤΟΥ, (3) Η ΑΛΛΗΛΕΠΊΔΡΑΣΗ ΜΕ ΤΟ STIM1 ΚΑΙ (4) Ο ΣΧΗΜΑΤΙΣΜΌΣ ΣΎΜΠΛΟΚΩΝ ΜΕ ΆΛΛΕΣ ΠΡΩΤΕΪ́ΝΕΣ ΠΟΥ ΕΞΑΡΤΏΝΤΑΙ ΑΠΌ ΑΥΤΆ ΤΑ ΦΩΣΦΟΡΥΛΙΩΜΈΝΑ ΥΠΟΛΕΊΜΜΑΤΑ, ΜΕ ΤΗ ΧΡΉΣΗ ΚΥΤΤΆΡΩΝ HEK293. ΕΠΙΠΛΈΟΝ, ΘΑ ΜΕΛΕΤΗΘΟΎΝ ΟΙ ΕΠΙΠΤΏΣΕΙΣ ΑΥΤΉΣ ΤΗΣ ΦΩΣΦΟΡΥΛΊΩΣΗΣ ΣΤΙΣ ΔΙΕΡΓΑΣΊΕΣ ΜΕΤΑΝΆΣΤΕΥΣΗΣ ΚΥΤΤΆΡΩΝ, ΣΤΗ ΜΕΤΆΒΑΣΗ ΕΠΙΘΗΛΊΟΥ-ΜΕΣΕΓΎΜΑΤΟΣ ΚΑΙ ΣΤΗ ΔΙΑΦΟΡΟΠΟΊΗΣΗ ΤΩΝ ΚΥΤΤΆΡΩΝ ΜΕ ΤΗ ΧΡΉΣΗ ΚΑΘΙΕΡΩΜΈΝΩΝ ΚΥΤΤΑΡΙΚΏΝ ΣΕΙΡΏΝ. ΜΕ ΌΛΑ ΑΥΤΆ ΣΚΟΠΕΎΟΥΜΕ ΝΑ ΓΝΩΡΊΖΟΥΜΕ ΤΙΣ ΜΟΡΙΑΚΈΣ ΒΆΣΕΙΣ ΤΗΣ ΕΝΕΡΓΟΠΟΊΗΣΗΣ ΤΟΥ SOCE, ΤΗ ΔΙΑΜΌΡΦΩΣΗ ΤΟΥ ΜΕ ΦΩΣΦΟΡΥΛΊΩΣΗ, ΚΑΙ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΌ ΠΙΘΑΝΏΝ ΣΤΌΧΩΝ ΔΥΝΗΤΙΚΟΎ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΟΎ ΕΝΔΙΑΦΈΡΟΝΤΟΣ ΣΤΟ ΣΎΣΤΗΜΑ STIM1-ORAI1. (Greek)
17 August 2022
0 references
CA2±AFHÆNGIG INTRACELLULÆR SIGNALERING REPRÆSENTERER EN KONTROLMEKANISME FOR TALRIGE CELLULÆRE HÆNDELSER. I DENNE FORSTAND ER DET KOMPLEKS, DER DANNES AF STIM1- OG ORAI1-PROTEINER, AFGØRENDE FOR AT KONTROLLERE CA2±TILSTRØMNINGEN OG DERMED FOR AT KONTROLLERE FRIE CYTOSOLIC CA2±NIVEAUER. STIM1 ER ET PROTEIN, DER FOR DET MESTE BEFINDER SIG I MEMBRANEN I DET ENDOPLASMATISKE RETICULUM, HVOR DET FUNGERER SOM EN SENSOR AF CA2±NIVEAUER INDEN FOR DETTE RUM, OG SOM UNDER BETINGELSER FOR UDTØMNING AF CA2± INTRALUMINALE NIVEAUER AKTIVERER CA2±KANALERNE I PLASMAMEMBRANEN VED HJÆLP AF FYSISK UNION TIL DEM. BLANDT DISSE CA2+ KANALER ER ORAI1, SOM REGULERER TILSTRØMNINGEN AF CA2+, OG SOM SAMMEN MED SIN AKTIVATOR, STIM1, ER INVOLVERET I CA2±AFHÆNGIGE PHENOMENES SÅSOM CELLEMIGRATION, DIFFERENTIERING ELLER PROLIFERATION, OG DER ER NYLIGE DATA, DER RELATERER DISSE TO PROTEINER TIL CELLETRANSFORMATION I MESENCHYMALE FÆNOTYPER (EPITHELIUM-MESENCHYMA OVERGANG), SAMT TUMOR-LINE METATASIS. DERFOR ER GRADUERING AF DISSE TRANSPORTSYSTEMER OG KONTROL AF CA2+ CYTOSOLIC NIVEAUER AFGØRENDE FOR CELLULÆR SIGNALERING. I DENNE HENSEENDE HAR VORES GRUPPE BESKREVET, AT STIM1-PHOSPHORYLATION I DIANA-RESTER FRA ERK1/2-AKTIVITETEN ER EN MEKANISME TIL AKTIVERING AF DETTE PROTEIN, SOM ER NØDVENDIG FOR AT LETTE UNIONEN TIL ORAI1 OG AKTIVERE TILFØRSLEN AF CA2+, DER DRIVES AF INTRACELLULÆRE AFLEJRINGER (SOCE). STIM1-PHOSPHORYLATIONEN I SER575-, SER608- OG SER621-RESTERNE FØRER SÅLEDES TIL, AT MIKROTUBULEENDEN UDSKILLES, HVILKET MULIGGØR AGGREGERING AF STIM1 I AGGREGATER (KLYNGER) SOM ET SKRIDT FORUD FOR UNIONEN TIL ORAI1. MEN, VORES HYPOTESE STATER, AT FULD KONTROL AF KANAL AKTIVERING SKYLDES POST-TRANSLATIONELLE MODIFIKATIONER AF BEGGE PROTEINER, DA ORAI1 ER OGSÅ ET PHOSPHOPROTEIN. SELV OM NOGET ORAI1-FOSFAT ER KENDT FOR MASSESPEKTROMETRIASSAYS I STOR SKALA, HAR INDLEDENDE FORSØG UDFØRT AF VORES GRUPPE I HEK293-CELLER GIVET OS MULIGHED FOR AT IDENTIFICERE POSFORESIDUOS I ORAI1, DER IKKE ER BESKREVET TIL DATO, FOR HVILKE DE ANSVARLIGE KINASER IKKE ER KENDT, ELLER FUNKTIONEN AF DETTE FOSFOR. FOR ALT DETTE OG UNDER FORUDSÆTNING AF, AT ORAI1 PHOSPHORYLATION KAN SPILLE EN CENTRAL ROLLE I GRADUERINGEN AF DENS AKTIVITET OG DERFOR MODULERE DE PROCESSER, DER ER AFHÆNGIGE AF CA2+ NÆVNT OVENFOR, ER HOVEDFORMÅLET MED DETTE PROJEKT AT DEFINERE ORAI'S PHOSFORESIDUOS1'S PROFIL I FORSKELLIGE METABOLISKE SITUATIONER, IDENTIFIKATION AF DE ANSVARLIGE KINASER OG FOSFORILACIONS FYSIOLOGISKE FUNKTION UNDER HENSYNTAGEN TIL: (1) AKTIVITETEN AF ORAI1 SOM EN KANAL AF CA2+, (2) DENS SUBCELLULÆRE PLACERING, 3) INTERAKTIONEN MED STIM1 OG 4) DANNELSEN AF KOMPLEKSER MED ANDRE PROTEINER, DER ER AFHÆNGIGE AF DISSE PHOSPHORYLEREDE RESTER, VED HJÆLP AF HEK293-CELLER. DESUDEN VIL VIRKNINGEN AF DENNE PHOSPHORYLATION PÅ CELLEMIGRATIONSPROCESSER, EPITEL-MESENCHYMAOVERGANG OG CELLEDIFFERENTIERING VED HJÆLP AF ETABLEREDE CELLELINJER BLIVE UNDERSØGT. MED ALT DETTE HAR VI TIL HENSIGT AT KENDE DE MOLEKYLÆRE BASER FOR AKTIVERINGEN AF SOCE, DENS MODULATION VED PHOSPHORYLATION OG IDENTIFIKATION AF MULIGE MÅL AF POTENTIEL TERAPEUTISK INTERESSE FOR SYSTEMET STIM1-ORAI1. (Danish)
17 August 2022
0 references
CA2±RIIPPUVAINEN SOLUNSISÄINEN SIGNAALI ON USEIDEN SOLUTAPAHTUMIEN VALVONTAMEKANISMI. TÄSSÄ MIELESSÄ STIM1- JA ORAI1-PROTEIINEISTA MUODOSTUVA KOMPLEKSI ON VÄLTTÄMÄTÖN CA2±SYÖTÖN HALLITSEMISEKSI JA SEN VUOKSI VAPAIDEN SYTOSOLIC CA2±TASOJEN VALVOMISEKSI. STIM1 ON PROTEIINI, JOKA SIJAITSEE PÄÄASIASSA ENDOPLASMAATTISEN RETIKULUMIN KALVOSSA, JOSSA SE TOIMII CA2±TASOJEN ANTURINA TÄSSÄ OSASTOSSA JA ETTÄ OLOSUHTEISSA, JOISSA CA2+:NSISÄISET TASOT TYHJENEVÄT, PLASMAKALVON CA2±KANAVAT AKTIVOIVAT NIIHIN FYYSISEN UNIONIN AVULLA. NÄISTÄ CA2±KANAVISTA ON ORAI1, JOKA SÄÄTELEE CA2+: N TULOA JA JOKA YHDESSÄ SEN AKTIVAATTORIN, STIM1: N KANSSA OSALLISTUU CA2±RIIPPUVAISIIN PHENOMENES-VALMISTEISIIN, KUTEN SOLUJEN SIIRTYMISEEN, ERIYTYMISEEN TAI PROLIFERAATIOON, JA ON OLEMASSA TUOREITA TIETOJA, JOTKA LIITTYVÄT NÄIDEN KAHDEN PROTEIININ SOLUJEN MUUNTUMISEEN MESENKYMAALISTEN FENOTYYPPIEN (EPITHELIUM-MESENCHYMA-SIIRTYMÄ) SEKÄ KASVAIN-LINE METATASISIN KANSSA. SIKSI NÄIDEN LIIKENNEJÄRJESTELMIEN MUKAUTTAMINEN JA CA2±SYTOSOLITASOJEN VALVONTA OVAT KESKEISIÄ SOLUSIGNAALEISSA. TÄSSÄ MIELESSÄ RYHMÄMME ON KUVANNUT, ETTÄ STIM1 FOSFORYLAATIO DIANA-JÄÄMISSÄ ERK1/2-AKTIIVISUUDESTA ON MEKANISMI, JOLLA AKTIVOIDAAN TÄMÄ PROTEIINI, JOKA ON TARPEEN UNIONIN ORAI1:N HELPOTTAMISEKSI JA SOLUNSISÄISTEN ESIINTYMIEN (SOCE) YLLÄPITÄMÄN CA2+:N SYÖTÖN AKTIVOIMISEKSI. NÄIN OLLEN SER575, SER608- JA SER621-JÄÄMIEN STIM1-FOSFORYLAATIO JOHTAA SEN HAJOAMISEEN MIKROTUBULEPÄÄSTÄ, MIKÄ MAHDOLLISTAA STIM1:N AGGREGAATEISSA (KLUSTEREISSA) AGGREGAATEISSA (KLUSTEREISSA) AGGREGAATTIEN (KLUSTERIEN) AGGREGOINNIN VAIHEENA ENNEN UNIONIN ORAI1:TÄ. OLETTAMUKSESSAMME TODETAAN KUITENKIN, ETTÄ KANAVAN AKTIVOITUMISEN TÄYDELLINEN HALLINTA JOHTUU MOLEMPIEN PROTEIINIEN TRANSLAATIOMUUTOKSISTA, KOSKA ORAI1 ON MYÖS FOSFOPROTEIINI. VAIKKA JOTKUT ORAI1-FOSFORIT TUNNETAAN LAAJAMITTAISISTA MASSASPEKTROMETRIAKOKEISTA, RYHMÄMME HEK293-SOLUISSA TEKEMÄT ALUSTAVAT KOKEET OVAT ANTANEET MEILLE MAHDOLLISUUDEN TUNNISTAA POSFORESIDUOS ORAI1: SSÄ, JOTA EI OLE TÄHÄN MENNESSÄ KUVATTU, JONKA VASTUULLISET KINAASIT EIVÄT OLE TIEDOSSA, EIKÄ TÄMÄN FOSFORIN TOIMINTAA. KAIKEN TÄMÄN OSALTA JA OLETTAEN, ETTÄ ORAI1 FOSFORYLAATIO VOISI OLLA KESKEISESSÄ ASEMASSA SEN TOIMINNAN MUKAUTTAMISESSA JA SITEN MODULOIDA EDELLÄ MAINITUSTA CA2+:STA RIIPPUVAT PROSESSIT, TÄMÄN HANKKEEN PÄÄTAVOITTEENA ON MÄÄRITELLÄ ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 PROFIILI ERI METABOLISISSA TILANTEISSA, VASTUULLISTEN KINAASIEN TUNNISTAMINEN JA TÄMÄN FOSFORILACIONIN FYSIOLOGINEN TEHTÄVÄ OTTAEN HUOMIOON: (1) ORAI1:N AKTIIVISUUS KANAVANA CA2+, 2) SEN SUBSELLULAARINEN SIJAINTI, 3) VUOROVAIKUTUS STIM1:N KANSSA JA 4) KOMPLEKSIEN MUODOSTUMINEN NÄISTÄ FOSFORYLOIDUISTA JÄÄMISTÄ RIIPPUVAISTEN MUIDEN PROTEIINIEN KANSSA KÄYTTÄEN HEK293-SOLUJA. LISÄKSI TUTKITAAN TÄMÄN FOSFORYLAATION VAIKUTUSTA SOLUSIIRTYMISPROSESSIIN, EPITEELI-MESENCHYMA-SIIRTYMÄÄ JA SOLUJEN ERILAISTUMISTA VAKIINTUNEILLA SOLULINJOILLA. KAIKKI TÄMÄ AIOMME TIETÄÄ MOLEKYYLIPOHJAT AKTIVOIMINEN SOCE, SEN MODULAATIO FOSFORYLAATIO, JA TUNNISTAA MAHDOLLISET KOHTEET MAHDOLLISESTI TERAPEUTTISTA HYÖTYÄ JÄRJESTELMÄN STIM1-ORAI1. (Finnish)
17 August 2022
0 references
IS-SINJALAR INTRAĊELLULARI DIPENDENTI FUQ CA2Ħ JIRRAPPREŻENTA MEKKANIŻMU TA’ KONTROLL GĦAL DIVERSI AVVENIMENTI ĊELLULARI. F’ DAN IS- SENS, IL- KUMPLESS IFFURMAT MILL- PROTEINI STIM1 U ORAI1 HUWA ESSENZJALI GĦALL- KONTROLL TA ' L- INFLUSS TA ' CA2+ U GĦALHEKK GĦALL- KONTROLL TAL- LIVELLI TA ' CA2+ ĦIELSA. STIM1 HUWA PROTEINA LI TINSAB L-AKTAR FIL-MEMBRANA TAR-RETIKULU ENDOPLASMATIKU FEJN JAĠIXXI BĦALA SENSUR TAL-LIVELLI TAS-CA2+ F’DAN IL-KOMPARTIMENT, U LI TAĦT KUNDIZZJONIJIET TA’ TNAQQIS TAL-LIVELLI INTRALUMINALI TAS-CA2+ JATTIVA L-KANALI TAS-CA2+ TAL-MEMBRANA TAL-PLAŻMA PERMEZZ TA’ UNJONI FIŻIKA GĦALIHOM. FOST DAWN IL-KANALI CA2+ HEMM ORAI1, LI JIRREGOLA L-INFLUSS TA’ CA2+, U LI FLIMKIEN MAL-ATTIVATUR TIEGĦU, STIM1, HUWA INVOLUT F’PHENOMENES DIPENDENTI CA2Ħ BĦALL-MIGRAZZJONI, ID-DIFFERENZJAZZJONI, JEW IL-PROLIFERAZZJONI TAĊ-ĊELLOLI, U HEMM DATA REĊENTI LI TIRRELATA DAWN IŻ-ŻEWĠ PROTEINI MAT-TRASFORMAZZJONI TAĊ-ĊELLOLI F’FENOTIPI MESENKIMALI (TRANŻIZZJONI TAL-EPITELJU-MESENKIMA), KIF UKOLL METATASIS TAL-LINJA TAT-TUMUR. GĦALHEKK, IL-MODULAZZJONI TA’ DAWN IS-SISTEMI TA’ TRASPORT U L-KONTROLL TAL-LIVELLI ĊITOSOLIĊI TA’ CA2+ HUMA KRUĊJALI FIS-SINJALAR ĊELLULARI. F’DAN IS-SENS IL-GRUPP TAGĦNA DDESKRIVA LI L-FOSFORILAZZJONI TA’ STIM1 FIR-RESIDWI TAD-DIJANA MILL-ATTIVITÀ ERK1/2 HIJA MEKKANIŻMU GĦALL-ATTIVAZZJONI TA’ DIN IL-PROTEINA, MEĦTIEĠA BIEX TIFFAĊILITA L-UNJONI GĦAL ORAI1, U TATTIVA L-INPUT TA’ CA2+ IMĦADDMA MINN DEPOŻITI INTRAĊELLULARI (SOCE). GĦALHEKK, IL-FOSFORILAZZJONI STIM1 FIR-RESIDWI SER575, SER608 U SER621 TWASSAL GĦAD-DIŻASSOĊJAZZJONI TAGĦHA TAT-TARF TAL-MIKROTUBULI, LI TIPPERMETTI L-AGGREGAZZJONI TA’ STIM1 F’AGGREGATI (RAGGRUPPAMENTI) BĦALA PASS QABEL L-UNJONI MAL-ORAI1. MADANKOLLU, L-IPOTEŻI TAGĦNA TIDDIKJARA LI L-KONTROLL SĦIĦ TAL-ATTIVAZZJONI TAL-KANALI HUWA DOVUT GĦAL MODIFIKI POSTTRASLAZZJONALI TAŻ-ŻEWĠ PROTEINI, PERESS LI ORAI1 HUWA WKOLL FOSFOPROTEINA. GĦALKEMM XI FOSFORU ORAI1 HUWA MAGĦRUF GĦAL ASSAĠĠI TA’ SPETTROMETRIJA TAL-MASSA FUQ SKALA KBIRA, PROVI PRELIMINARI MWETTQA MILL-GRUPP TAGĦNA F’ĊELLOLI HEK293 IPPERMETTEWLNA NIDENTIFIKAW POSFORESIDUOS F’ORAI1 MHUX DESKRITT SAL-LUM, LI GĦALIH IL-KINAŻI RESPONSABBLI MHUMIEX MAGĦRUFA, U LANQAS IL-FUNZJONI TA’ DAN IL-FOSFRU. GĦAL DAN KOLLU, U JEKK WIEĦED JASSUMI LI L-FOSFORILAZZJONI ORAI1 JISTA’ JKOLLHA RWOL EWLIENI FIL-MODULAZZJONI TAL-ATTIVITÀ TAGĦHA U GĦALHEKK TIMMODULA L-PROĊESSI LI JIDDEPENDU FUQ CA2+ IMSEMMIJA HAWN FUQ, L-OBJETTIV EWLIENI TA’ DAN IL-PROĠETT HUWA LI JIDDEFINIXXI L-PROFIL TA’ ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 F’SITWAZZJONIJIET METABOLIĊI DIFFERENTI, L-IDENTIFIKAZZJONI TAL-KINAŻI RESPONSABBLI, U L-FUNZJONI FIŻJOLOĠIKA TA’ DIN IL-FOSFORILACION FILWAQT LI JITQIESU: (1) L- ATTIVITÀ TA ‘ORAI1 BĦALA KANAL TA’ CA2+, (2) IL- POST SUBĊELLULARI TAGĦHA, (3) L- INTERAZZJONI MA ‘STIM1 U (4) IL- FORMAZZJONI TA’ KUMPLESSI MA ‘PROTEINI OĦRA LI JIDDEPENDU FUQ DAWN IR- RESIDWI FOSFORILATI, BL- UŻU TA’ ĊELLULI HEK293. BARRA MINN HEKK, SE JIĠI STUDJAT L-IMPATT TA’ DIN IL-FOSFORILAZZJONI FUQ IL-PROĊESSI TAL-MIGRAZZJONI TAĊ-ĊELLOLI, IT-TRANŻIZZJONI TAL-EPITELJU-MESENCHYMA, U D-DIFFERENZJAZZJONI TAĊ-ĊELLOLI BL-UŻU TA’ LINJI TA’ ĊELLOLI STABBILITI. B’DAN KOLLU BEĦSIEBNA NKUNU NAFU L-BAŻIJIET MOLEKULARI TAL-ATTIVAZZJONI TA’ SOCE, IL-MODULAZZJONI TAGĦHA PERMEZZ TAL-FOSFORILAZZJONI, U L-IDENTIFIKAZZJONI TA’ MIRI POSSIBBLI TA’ INTERESS TERAPEWTIKU POTENZJALI FIS-SISTEMA STIM1-ORAI1. (Maltese)
17 August 2022
0 references
CA2± ATKARĪGĀ INTRACELULĀRĀ SIGNALIZĀCIJA IR KONTROLES MEHĀNISMS DAUDZIEM ŠŪNU NOTIKUMIEM. ŠAJĀ ZIŅĀ KOMPLEKSS, KO VEIDO STIM1 UN ORAI1 PROTEĪNI, IR BŪTISKS CA2+ PIEPLŪDUMA KONTROLEI UN TĀDĒJĀDI BRĪVĀ CITOZOLA CA2+ LĪMEŅA KONTROLEI. STIM1 IR OLBALTUMVIELA, KAS GALVENOKĀRT ATRODAS ENDOPLAZMAS RETIKULĀTA MEMBRĀNĀ, KUR TAS DARBOJAS KĀ CA2+ LĪMEŅA SENSORS ŠAJĀ NODALĪJUMĀ, UN CA2+ INTRALUMINĀLĀ LĪMEŅA IZSĪKŠANAS APSTĀKĻOS PLAZMAS MEMBRĀNAS CA2+ KANĀLUS AKTIVIZĒ AR FIZISKU SAVIENĪBU. STARP ŠIEM CA2+ KANĀLIEM IR ORAI1, KAS REGULĒ CA2+ PIEPLŪDUMU UN KAS KOPĀ AR TĀ AKTIVATORU STIM1 IR IESAISTĪTS CA2± ATKARĪGĀS PHENOMENES, PIEMĒRAM, ŠŪNU MIGRĀCIJA, DIFERENCIĀCIJA VAI PROLIFERĀCIJA, UN IR JAUNĀKIE DATI, KAS SAISTA ŠOS DIVUS PROTEĪNUS AR ŠŪNU TRANSFORMĀCIJU MESENHIMĀLA FENOTIPOS (EPITĒLIJA-MESENĪMAS PĀREJA), KĀ ARĪ AUDZĒJU LĪNIJAS METATASIS. TĀPĒC ŠO TRANSPORTA SISTĒMU MODULĀCIJA UN CA2+ CITOSOLISKO LĪMEŅU KONTROLE IR GALVENAIS ŠŪNU SIGNĀLS. ŠAJĀ ZIŅĀ MŪSU GRUPA IR APRAKSTĪJUSI, KA STIM1 FOSFORILĒŠANA DIANA ATLIEKĀS NO ERK1/2 AKTIVITĀTES IR ŠĀ PROTEĪNA AKTIVIZĒŠANAS MEHĀNISMS, KAS NEPIECIEŠAMS, LAI VEICINĀTU SAVIENĪBU ORAI1 UN AKTIVIZĒTU CA2+ IEVADI, KO DARBINA INTRACELULĀRĀS NOGULSNES (SOCE). TĀDĒJĀDI STIM1 FOSFORILĀCIJA SER575, SER608 UN SER621 ATLIEKĀS IZRAISA MIKROCAURULĪŠU GALU DISOCIĀCIJU, ĻAUJOT STIM1 AGREGĒT AGREGĀTOS (KOPĀS) KĀ SOLI PIRMS SAVIENĪBAS UZ ORAI1. TOMĒR MŪSU HIPOTĒZE LIECINA, KA KANĀLU AKTIVIZĒŠANAS PILNĪGA KONTROLE IR SAISTĪTA AR ABU PROTEĪNU PĒCTRANSLĀCIJAS MODIFIKĀCIJU, JO ORAI1 IR ARĪ FOSFOPROTEĪNS. LAI GAN DAŽI ORAI1 FOSFORI IR ZINĀMI LIELA MĒROGA MASSPEKTROMETRIJAS TESTOS, MŪSU GRUPAS VEIKTIE PROVIZORISKIE PĒTĪJUMI HEK293 ŠŪNĀS IR ĻĀVUŠI IDENTIFICĒT POSFORESIDUOS ORAI1, KAS LĪDZ ŠIM NAV APRAKSTĪTS UN PAR KURU ATBILDĪGĀS KINĀZES NAV ZINĀMAS, NE ARĪ ŠĪ FOSFORA FUNKCIJA. ATTIECĪBĀ UZ VISU IEPRIEKŠ MINĒTO UN PIEŅEMOT, KA ORAI1 FOSFORILĒŠANAI VARĒTU BŪT BŪTISKA NOZĪME TĀ DARBĪBAS MODULĀCIJĀ UN TĀDĒJĀDI MODULĒT PROCESUS, KAS IR ATKARĪGI NO IEPRIEKŠ MINĒTAJIEM CA2+, ŠĀ PROJEKTA GALVENAIS MĒRĶIS IR DEFINĒT ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 PROFILU DAŽĀDĀS VIELMAIŅAS SITUĀCIJĀS, ATBILDĪGO KINĀŽU NOTEIKŠANU UN ŠĀ FOSFORILACION FIZIOLOĢISKO FUNKCIJU, ŅEMOT VĒRĀ: (1) ORAI1 KĀ CA2+ KANĀLA AKTIVITĀTE, 2) TĀ APAKŠŠŪNU ATRAŠANĀS VIETA, 3) MIJIEDARBĪBA AR STIM1 UN 4) KOMPLEKSU VEIDOŠANĀS AR CITĀM OLBALTUMVIELĀM, KAS ATKARĪGAS NO ŠĪM FOSFORILĒTAJĀM ATLIEKĀM, IZMANTOJOT HEK293 ŠŪNAS. TURKLĀT TIKS PĒTĪTA ŠĪS FOSFORILĀCIJAS IETEKME UZ ŠŪNU MIGRĀCIJAS PROCESIEM, EPITĒLIJA-MESENHĪMAS PĀREJU UN ŠŪNU DIFERENCIĀCIJU, IZMANTOJOT NOTEIKTAS ŠŪNU LĪNIJAS. AR TO VISU MĒS PLĀNOJAM ZINĀT SOCE AKTIVIZĒŠANAS MOLEKULĀRĀS BĀZES, TĀS MODULĀCIJU AR FOSFORILĒŠANU UN IESPĒJAMO TERAPEITISKO INTEREŠU MĒRĶU NOTEIKŠANU SISTĒMĀ STIM1-ORAI1. (Latvian)
17 August 2022
0 references
CA2± ZÁVISLÉ VNÚTROBUNKOVÉ SIGNALIZÁCIA PREDSTAVUJE KONTROLNÝ MECHANIZMUS PRE POČETNÉ BUNKOVÉ UDALOSTI. V TOMTO ZMYSLE JE KOMPLEX VYTVORENÝ PROTEÍNMI STIM1 A ORAI1 NEVYHNUTNÝ NA KONTROLU PRÍLIVU CA2+, A TÝM AJ NA KONTROLU VOĽNÝCH CYTOSÓLOVÝCH HLADÍN CA2+. STIM1 JE BIELKOVINA NACHÁDZAJÚCA SA PREVAŽNE V MEMBRÁNE ENDOPLAZMATICKÉHO RETIKULA, KDE PÔSOBÍ AKO SNÍMAČ HLADÍN CA2+ V RÁMCI TOHTO ODDELENIA A ŽE ZA PODMIENOK VYČERPANIA VNÚTROHLINÍKOVÝCH HLADÍN CA2+ AKTIVUJE CA2+ KANÁLY PLAZMOVEJ MEMBRÁNY PROSTREDNÍCTVOM FYZIKÁLNEJ ÚNIE. MEDZI TÝMITO KANÁLMI CA2+ JE ORAI1, KTORÝ REGULUJE PRÍLIV CA2+, A KTORÝ SPOLU S AKTIVÁTOROM, STIM1, JE ZAPOJENÝ DO CA2±DEPENDENT PHENOMENES, AKO JE MIGRÁCIA BUNIEK, DIFERENCIÁCIA ALEBO PROLIFERÁCIA, A EXISTUJÚ NAJNOVŠIE ÚDAJE, KTORÉ SPÁJAJÚ TIETO DVA PROTEÍNY S BUNKOVOU TRANSFORMÁCIOU MESENCHYMÁLNYCH FENOTYPOV (EPITHELIUM-MESENCHYMA PRECHOD), AKO AJ NÁDOROVEJ LÍNIE METATASIS. MODULÁCIA TÝCHTO TRANSPORTNÝCH SYSTÉMOV A KONTROLA CYTOSÓLOVÝCH HLADÍN CA2+ SÚ PRETO KĽÚČOM K BUNKOVEJ SIGNALIZÁCII. V TOMTO ZMYSLE NAŠA SKUPINA OPÍSALA, ŽE FOSFORYLÁCIA STIM1 V REZÍDUÁCH DIANY Z AKTIVITY ERK1/2 JE MECHANIZMOM NA AKTIVÁCIU TEJTO BIELKOVINY, KTORÁ JE POTREBNÁ NA UĽAHČENIE ÚNIE PRE ORAI1 A AKTIVÁCIU VSTUPU CA2+ PREVÁDZKOVANÉHO INTRACELULÁRNYMI DEPOZITMI (SOCE). FOSFORYLÁCIA STIM1 V REZÍDUÁCH SER575, SER608 A SER621 TEDA VEDIE K DISOCIÁCII KONCA MIKROTUBULOV, ČO UMOŽŇUJE AGREGÁCIU STIM1 V KAMENIVE (KLASTRE) AKO KROK PRED VSTUPOM DO ÚNIE NA ORAI1. NAŠA HYPOTÉZA VŠAK UVÁDZA, ŽE ÚPLNÁ KONTROLA AKTIVÁCIE KANÁLA JE SPÔSOBENÁ POSTTRANSLAČNÝMI ÚPRAVAMI OBOCH BIELKOVÍN, PRETOŽE ORAI1 JE TIEŽ FOSFOPROTEÍN. HOCI JE URČITÝ FOSFOR ORAI1 ZNÁMY ROZSIAHLYMI SKÚŠKAMI HMOTNOSTNEJ SPEKTROMETRIE, PREDBEŽNÉ SKÚŠKY VYKONANÉ NAŠOU SKUPINOU V BUNKÁCH HEK293 NÁM UMOŽNILI IDENTIFIKOVAŤ POSFORESIDUOS V ORAI1, PRE KTORÉ NIE SÚ ZNÁME ZODPOVEDNÉ KINÁZY, ANI FUNKCIU TOHTO FOSFORU. VZHĽADOM NA VŠETKY TIETO SKUTOČNOSTI A ZA PREDPOKLADU, ŽE FOSFORYLÁCIA ORAI1 BY MOHLA ZOHRÁVAŤ KĽÚČOVÚ ÚLOHU PRI MODULÁCII SVOJEJ ČINNOSTI, A TÝM MODULOVAŤ PROCESY ZÁVISLÉ OD VYŠŠIE UVEDENÝCH CA2+, HLAVNÝM CIEĽOM TOHTO PROJEKTU JE DEFINOVAŤ PROFIL ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 V RÔZNYCH METABOLICKÝCH SITUÁCIÁCH, IDENTIFIKÁCIU ZODPOVEDNÝCH KINÁZ A FYZIOLOGICKÚ FUNKCIU TOHTO FOSFORILACIONU S PRIHLIADNUTÍM NA: (1) AKTIVITA ORAI1 AKO KANÁL CA2+, (2) JEHO SUBCELULÁRNE UMIESTNENIE, (3) INTERAKCIA SO STIM1 A (4) TVORBA KOMPLEXOV S INÝMI PROTEÍNMI ZÁVISLÝMI OD TÝCHTO FOSFORYLOVANÝCH REZÍDUÍ S POUŽITÍM HEK293 BUNIEK. OKREM TOHO SA BUDE SKÚMAŤ VPLYV TEJTO FOSFORYLÁCIE NA PROCESY MIGRÁCIE BUNIEK, PRECHOD EPITELIUM-MESENCHYMA A DIFERENCIÁCIU BUNIEK POMOCOU ZAVEDENÝCH BUNKOVÝCH LÍNIÍ. S TÝM VŠETKÝM CHCEME POZNAŤ MOLEKULÁRNE ZÁKLADY AKTIVÁCIE SOCE, JEJ MODULÁCIU FOSFORYLÁCIOU A IDENTIFIKÁCIU MOŽNÝCH CIEĽOV POTENCIÁLNEHO TERAPEUTICKÉHO ZÁUJMU V SYSTÉME STIM1-ORAI1. (Slovak)
17 August 2022
0 references
CA2 ± LÉIRÍONN COMHARTHAÍOCHT NEAMHSPLEÁCH INTRACELLULAR MEICNÍOCHT RIALAITHE LE HAGHAIDH IMEACHTAÍ CEALLACHA IOMADÚLA. SA CHIALL SIN, TÁ AN COIMPLÉASC ATÁ DÉANTA AG PRÓITÉINÍ STIM1 AGUS ORAI1 RIACHTANACH CHUN INSREABHADH CA2+ A RIALÚ AGUS, DÁ BHRÍ SIN, CHUN RIALÚ A DHÉANAMH AR LEIBHÉIL SAOR IN AISCE CITOSOLIC CA2+. IS PRÓITÉIN É STIM1 ATÁ SUITE DEN CHUID IS MÓ I SCANNÁN AN REICILIM INOPLASMATAIGH INA NGNÍOMHAÍONN SÉ MAR BHRAITEOIR LEIBHÉIL CA2+ LAISTIGH DEN URRANN SIN, AGUS GO NGNÍOMHACHTAÍONN SÉ BEALAÍ CA2+ DEN SCANNÁN PLASMA TRÍ BHÍTHIN AN AONTAIS FHISICIÚIL DÓIBH FAOI CHOINNÍOLLACHA ÍDITHE NA LEIBHÉAL INLONRACH CA2+. I MEASC NA GCAINÉAL CA2+ SIN TÁ ORAI1, A RIALAÍONN INSREABHADH CA2+, AGUS A BHFUIL BAINT AIGE, MAR AON LENA GHNÍOMHAÍ, STIM1, LE CA2 ± FEINIMÉIN CHLEITHIÚNACHA AMHAIL IMIRCE CILLE, DIFREÁIL, NÓ IOMADÚ, AGUS TÁ SONRAÍ LE DÉANAÍ A BHAINEANN LEIS AN DÁ PHRÓITÉIN SIN LE CLAOCHLÚ CILLE I BHFEINITÍOPAÍ MESENCHYMAL (AISTRIÚ EPIITHELIUM-MESENCHYMA), CHOMH MAITH LE METATASIS MEALL-LÍNE. DÁ BHRÍ SIN, TÁ MODHNÚ NA GCÓRAS IOMPAIR SIN AGUS RIALÚ NA LEIBHÉAL CITOSOLIC CA2+ RÍTHÁBHACHTACH I GCOMHARTHAÍOCHT CHEALLACHA. SA CHIALL SIN, TÁ CUR SÍOS DÉANTA AG ÁR NGRÚPA GUR SÁSRA É FOSFARÚCHÁN STIM1 IN IARMHAIR DIANA Ó GHNÍOMHAÍOCHT ERK1/2 CHUN AN PHRÓITÉIN SIN A GHNÍOMHACHTÚ, AR SÁSRA É ATÁ RIACHTANACH CHUN AN TAONTAS A ÉASCÚ DO ORAI1, AGUS CHUN IONCHUR CA2+ ARNA OIBRIÚ AG TAISCÍ IONCHEALLACHA (SOCE) A GHNÍOMHACHTÚ. DÁ BHRÍ SIN, MAR THORADH AR FHOSFARÚCHÁN STIM1 IN IARMHAIR SER575, SER608 AGUS SER621, DÍTHIOMSAÍTEAR AN FOIRCEANN MICREATÚIL, RUD A FHÁGANN GUR FÉIDIR STIM1 A CHOMHIOMLÁNÚ I GCOMHIOMLÁIN (BRAISLÍ) MAR CHÉIM ROIMH AN AONTAS CHUIG ORAI1. MAR SIN FÉIN, STÁIT HIPITÉIS GO BHFUIL SMACHT IOMLÁN AR GHNÍOMHACHTÚ CAINÉAL MAR GHEALL AR MHODHNUITHE IAR-TRANSLATIONAL AN DÁ PRÓITÉINÍ, MAR IS ORAI1 FREISIN PHOSPHOPROTEIN. CÉ GO BHFUIL ROINNT FOSFAR ORAI1 AR EOLAS LE HAGHAIDH MEASÚNACHTAÍ MAIS-SPEICTRIMÉADRACHTA AR SCÁLA MÓR, TÁ RÉAMHTHRIALACHA A RINNE ÁR NGRÚPA I GCEALLA HEK293 TAR ÉIS DÚINN POSFORESIDUOS A AITHINT I ORAI1 NACH BHFUIL CUR SÍOS ORTHU GO DTÍ SEO, NACH BHFUIL NA KINASES FREAGRACH AR EOLAS, NÁ FEIDHM AN FHOSFAIR SEO. CHUIGE SIN GO LÉIR, AGUS AG GLACADH LEIS GO BHFÉADFADH RÓL LÁRNACH A BHEITH AG FOSFARÚCHÁN ORAI1 I MODHNÚ A GHNÍOMHAÍOCHTA AGUS DÁ BHRÍ SIN NA PRÓISIS ATÁ AG BRATH AR CA2+ A LUAITEAR THUAS A MHODHNÚ, IS É PRÍOMHCHUSPÓIR AN TIONSCADAIL SEO PRÓIFÍL ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 A SHAINIÚ I GCÁSANNA MEITIBILEACHA ÉAGSÚLA, SAINAITHINT NA KINASES FREAGRACHA, AGUS FEIDHM FISEOLAÍOCH AN FOSFORILACION SEO AGUS AN MÉID SEO A LEANAS Á CHUR SAN ÁIREAMH: (1) GNÍOMHAÍOCHT ORAI1 MAR CHAINÉAL CA2+, (2) A SHUÍOMH FOCHEALLACH, (3) AN T-IDIRGHNÍOMHÚ LE STIM1 AGUS (4) FOIRMIÚ COIMPLÉISC LE PRÓITÉINÍ EILE ATÁ AG BRATH AR NA HIARMHAIR FHOSFARÚLAITHE SIN, AG BAINT ÚSÁIDE AS CEALLA HEK293. INA THEANNTA SIN, DÉANFAR STAIDÉAR AR THIONCHAR AN FHOSFAIRITHE SEO AR PHRÓISIS IMIRCE CILLE, AR AISTRIÚ EPITHELIUM-MESENCHYMA, AGUS AR DHIFREÁIL CILLE AG BAINT ÚSÁIDE AS LÍNTE CILLE BUNAITHE. LEIS SEO GO LÉIR AR INTINN AGAINN A FHIOS AG NA BOINN MHÓILÍNEACH DE GHNÍOMHACHTÚ SOCE, A MHODHNÚ TRÍ PHOSPHORYLATION, AGUS A AITHINT SPRIOCANNA FÉIDEARTHA LEAS TEIRIPEACH FÉIDEARTHA SA CHÓRAS STIM1-ORAI1. (Irish)
17 August 2022
0 references
CA2±ZÁVISLÉ INTRACELULÁRNÍ SIGNALIZACE PŘEDSTAVUJE KONTROLNÍ MECHANISMUS PRO ČETNÉ BUNĚČNÉ UDÁLOSTI. V TOMTO SMYSLU JE KOMPLEX TVOŘENÝ PROTEINY STIM1 A ORAI1 NEZBYTNÝ PRO KONTROLU PŘÍLIVU CA2+, A TÍM I PRO KONTROLU VOLNÝCH CYTOSOLICKÝCH HLADIN CA2+. STIM1 JE PROTEIN, KTERÝ SE NACHÁZÍ PŘEVÁŽNĚ V MEMBRÁNĚ ENDOPLAZMATICKÉHO RETIKULA, KDE PŮSOBÍ JAKO SENZOR HLADIN CA2+ V TOMTO ODDĚLENÍ A KTERÝ ZA PODMÍNEK VYČERPÁNÍ HLADINY CA2+ INTRALUMINAL AKTIVUJE CA2+ KANÁLY PLAZMATICKÉ MEMBRÁNY PROSTŘEDNICTVÍM FYZICKÉ UNIE K NIM. MEZI TYTO CA2+ KANÁLY PATŘÍ ORAI1, KTERÝ REGULUJE PŘÍLIV CA2+ A KTERÝ SPOLU SE SVÝM AKTIVÁTOREM, STIM1, JE ZAPOJEN DO CA2± ZÁVISLÝCH PHENOMENES, JAKO JE BUNĚČNÁ MIGRACE, DIFERENCIACE NEBO PROLIFERACE, A EXISTUJÍ NEJNOVĚJŠÍ ÚDAJE, KTERÉ SE TÝKAJÍ TĚCHTO DVOU PROTEINŮ NA BUNĚČNOU TRANSFORMACI MESENCHYMÁLNÍCH FENOTYPŮ (EPITHELIUM-MESENCHYMA TRANSITION), JAKOŽ I NÁDOROVÉ LINIE METATASIS. MODULACE TĚCHTO TRANSPORTNÍCH SYSTÉMŮ A KONTROLA CA2+ CYTOSOLICKÝCH HLADIN JSOU TEDY KLÍČOVÉ PRO BUNĚČNOU SIGNALIZACI. V TOMTO SMYSLU NAŠE SKUPINA POPSALA, ŽE FOSFORYLACE STIM1 V REZIDUÍCH DIANY Z AKTIVITY ERK1/2 JE MECHANISMUS PRO AKTIVACI TOHOTO PROTEINU, KTERÝ JE NEZBYTNÝ PRO USNADNĚNÍ UNIE DO ORAI1, A AKTIVUJE VSTUP CA2+ PROVOZOVANÝ INTRACELULÁRNÍMI LOŽISKY (SOCE). FOSFORYLACE STIM1 V REZIDUÍCH SER575, SER608 A SER621 TAK VEDE K JEHO DISOCIACI KONCE MIKROTUBULU, COŽ UMOŽŇUJE AGREGACI STIM1 V KAMENIVA (KLASTRECH) JAKO KROK PŘED UNIÍ A ORAI1. NICMÉNĚ, NAŠE HYPOTÉZA UVÁDÍ, ŽE PLNÁ KONTROLA AKTIVACE KANÁLU JE ZPŮSOBENA POSTTRANSLAČNÍ MODIFIKACÍ OBOU PROTEINŮ, PROTOŽE ORAI1 JE TAKÉ FOSFOPROTEIN. PŘESTOŽE JSOU NĚKTERÉ FOSFORY ORAI1 ZNÁMÉ ROZSÁHLÝMI HMOTNOSTNÍMI SPEKTROMETRICKÝMI ZKOUŠKAMI, PŘEDBĚŽNÉ ZKOUŠKY PROVEDENÉ NAŠÍ SKUPINOU V BUŇKÁCH HEK293 NÁM UMOŽNILY IDENTIFIKOVAT POSFORESIDUOS V ORAI1 DOSUD NEPOPSANÝCH, PRO KTERÉ NEJSOU ZNÁMY ODPOVĚDNÉ KINÁZY, ANI FUNKCE TOHOTO FOSFORU. ZA PŘEDPOKLADU, ŽE BY FOSFORYLACE ORAI1 MOHLA HRÁT KLÍČOVOU ÚLOHU PŘI MODULACI JEJÍ ČINNOSTI, A TEDY MODULOVAT PROCESY ZÁVISLÉ NA CA2+, JE HLAVNÍM CÍLEM TOHOTO PROJEKTU DEFINOVAT PROFIL ORAI’S FHOSFORESIDUOS1 V RŮZNÝCH METABOLICKÝCH SITUACÍCH, IDENTIFIKACI ODPOVĚDNÝCH KINÁZ A FYZIOLOGICKOU FUNKCI TÉTO FOSFORILACION S PŘIHLÉDNUTÍM K: (1) AKTIVITA ORAI1 JAKO KANÁLU CA2+, (2) JEHO SUBCELULÁRNÍHO UMÍSTĚNÍ, 3) INTERAKCE SE STIM1 A 4) TVORBA KOMPLEXŮ S JINÝMI BÍLKOVINAMI ZÁVISLÝMI NA TĚCHTO FOSFORYLOVANÝCH REZIDUÍCH POMOCÍ HEK293 BUNĚK. KROMĚ TOHO BUDE ZKOUMÁN DOPAD TÉTO FOSFORYLACE NA PROCESY MIGRACE BUNĚK, PŘECHOD EPITELU A MESENCHYMU A DIFERENCIACI BUNĚK POMOCÍ ZAVEDENÝCH BUNĚČNÝCH LINIÍ. S TÍM VŠÍM CHCEME ZNÁT MOLEKULÁRNÍ BÁZE AKTIVACE SOCE, JEJÍ MODULACI FOSFORYLACÍ A IDENTIFIKACI MOŽNÝCH CÍLŮ POTENCIÁLNÍHO TERAPEUTICKÉHO ZÁJMU V SYSTÉMU STIM1-ORAI1. (Czech)
17 August 2022
0 references
A SINALIZAÇÃO INTRACELLULAR CA2±DEPENDENTE REPRESENTA UM MECANISMO DE CONTROLO PARA EVENTOS CELULARES NUMEROS. Neste sentido, o COMPLEXO FORMADO PELAS PROTEÍNAS STIM1 E ORAI1 É ESSENCIAL PARA O CONTROLO DA INFLUXA CA2+ E, POR ISSO, PARA O CONTROLO DOS NÍVEIS CITOSÓLICOS CA2+ LIVRES. O STIM1 é uma proteína localizada principalmente na membrana do retículo endoplasmático, onde atua como um sensor de níveis CA2+ dentro deste compartimento, e que, em condições de absorção dos níveis intraluminais CA2+, ativa os canais CA2+ da membrana de plasma por meios de união física com eles. Entre estes canais de CA2+ encontra-se a ORAI1, que regula a influência de CA2+ e que, juntamente com o seu agente, STIM1, está envolvida em fenômenos de CA2±dependentes, tais como a MIGRAÇÃO CELULAR, a DIFERENCIAÇÃO OU A PROLIFERAÇÃO, e há dados recentes que relacionam estas duas proteínas com a TRANSFORMAÇÃO CELULAR em fenótipos menquimais (TRANSIÇÃO EPTÉLIMA-MESENQUIMA), bem como com a METATASE DE TUM-LINA. Por conseguinte, a MODULAÇÃO DOS SISTEMAS DE TRANSPORTE E O CONTROLO DOS NÍVEIS CITOSÓLICOS CA2+ SÃO PRINCIPAIS NA SINALIZAÇÃO CELULAR. NESTE SENTIDO, O NOSSO GRUPO DESCRIU QUE A FOSFORILAÇÃO STIM1 EM RESÍDUOS DE DIANA DA ATIVIDADE ERK1/2 É UM MECANISMO PARA ATIVAR ESTA PROTEÍNA, NECESSÁRIA PARA FACILITAR A UNIÃO EM ORAI1, E ATIVAR A PRODUÇÃO DE CA2+ OPERADA POR DEPÓSITOS INTRACELLULARES (SOCE). Assim, a FOSFORILAÇÃO STIM1 NOS RESÍDUOS SER575, SER608 E SER621 LEVA À SUA DISSOCIAÇÃO DO FINAL MICROTÚBULO, PERMITINDO A AGREGAÇÃO DO STIM1 EM AGREGADOS (CLUSTERS) COMO PASSO ANTES DA UNIÃO À ORAI1. No entanto, a nossa hipótese afirma que o controlo total da actividade de canal é devido a modificações pós-translacional de ambas as proteínas, como ORAI1 é também uma fosfoproteína. Embora alguns fósseis de orai1 sejam conhecidos para ataques de espetrometria de massa de grande escala, os julgamentos preliminares realizados pelo nosso grupo em células HEK293 permitiram-nos identificar os fósseis em orai1 não descritos até à data, para os quais os tipos responsáveis não são conhecidos, nem a função deste fosforo. Por tudo isto, e assumindo que a fosforilação da ORAI1 pode desempenhar um papel fundamental na modificação da sua actividade e, por conseguinte, modificar os processos dependentes da CA2+ acima mencionados, o principal objectivo deste projecto consiste em definir o perfil das FOSFORESIDUOS1 da ORAI em diferentes situações metabólicas, a identificação das espécies responsáveis e a função fisiológica desta fosforilação tendo em conta: (1) A ATIVIDADE DA ORAI1 COMO CANAL DE CA2+, (2) A SUA LOCALIZAÇÃO SUBCELLULAR, (3) A INTERAÇÃO COM O ESTIM1 E (4) A FORMAÇÃO DE COMPLEXOS COM OUTRAS PROTEÍNAS DEPENDENTES NESSES RESÍDUOS FOSFORILADOS, COM A UTILIZAÇÃO DE CÉLULAS HEK293. Além disso, o impacto desta fosforilação nos processos de migração celular, na transição epitelial-messênquima e na diferenciação celular utilizando linhas celulares estabelecidas será esgotado. Com tudo isto pretendemos conhecer as bases moleculares da actividade da sociedade, a sua modulação por fosforilação e a identificação de possíveis objectivos de interesse terapêutico potencial no sistema STIM1-ORAI1. (Portuguese)
17 August 2022
0 references
CA2±SÕLTUV RAKUSISENE SIGNAALIMINE ON PALJUDE RAKUSÜNDMUSTE KONTROLLMEHHANISM. SELLES MÕTTES ON PROTEIINIDE STIM1 JA ORAI1 MOODUSTUNUD KOMPLEKS OLULINE CA2+ SISSEVOOLU KONTROLLIMISEKS JA SEEGA VABA TSÜTOSOOLILISE CA2+ SISALDUSE KONTROLLIMISEKS. STIM1 ON VALK, MIS ASUB PEAMISELT ENDOPLASMAATILISE RETIKULUMI MEMBRAANIS, KUS SEE TOIMIB SELLES SEKTSIOONIS CA2+ TASEME ANDURINA, NING CA2+ INTRALUMINAALSE TASEME VÄHENEMISE TINGIMUSTES AKTIVEERIB SEE PLASMAMEMBRAANI CA2+ KANALID FÜÜSILISE LIITUMISE KAUDU. NENDE CA2+ KANALITE HULGAS ON ORAI1, MIS REGULEERIB CA2+ SISSEVOOLU JA MIS KOOS AKTIVAATORI STIM1GA OSALEB CA2±SÕLTUVATES PHENOMENESIDES, NAGU RAKKUDE RÄNNE, DIFERENTSEERUMINE VÕI PROLIFERATSIOON, NING ON HILJUTISI ANDMEID, MIS SEOSTAVAD NEID KAHTE VALKU RAKKUDE TRANSFORMATSIOONIGA MESENHÜÜMIDE FENOTÜÜPIDES (EPITEELIUMI-MESENHÜÜMI ÜLEMINEK) JA KASVAJALIINI METATASISES. SEETÕTTU ON NENDE TRANSPORDISÜSTEEMIDE MODULATSIOON JA CA2+ TSÜTOSOOLI TASEME KONTROLL RAKUSIGNAALIDE PUHUL VÕTMETÄHTSUSEGA. SELLES MÕTTES ON MEIE RÜHM KIRJELDANUD, ET STIM1 FOSFORÜÜLIMINE DIANA JÄÄKIDES ERK1/2 AKTIIVSUSEST ON MEHHANISM SELLE VALGU AKTIVEERIMISEKS, MIS ON VAJALIK LIIDULE ORAI1 KAASAAITAMISEKS JA RAKUSISESTE MAARDLATE (SOCE) JUHITAVA CA2+ SISENDI AKTIVEERIMISEKS. SEEGA PÕHJUSTAB STIM1 FOSFORÜÜLIMINE SER575, SER608 JA SER621 JÄÄKIDES MIKROTUUBULI OTSA DISSOTSIEERUMIST, VÕIMALDADES STIM1 LIITMIST TÄITEMATERJALIDEKS (KLASTRITEKS) SAMMUNA ENNE LIITU ORAI1 SUHTES. MEIE HÜPOTEESI KOHASELT ON KANALI AKTIVEERIMISE TÄIELIK KONTROLL TINGITUD MÕLEMA VALGU TRANSLATSIOONIJÄRGSEST MODIFIKATSIOONIST, KUNA ORAI1 ON KA FOSFOPROTEIIN. KUIGI MÕNED ORAI1 FOSFOR ON TUNTUD SUUREMAHULISTE MASSISPEKTROMEETRILISTE TESTIDE POOLEST, ON MEIE RÜHMA POOLT HEK293 RAKKUDES LÄBI VIIDUD EELKATSED VÕIMALDANUD MEIL TUVASTADA POSFORESIDUOS ORAI1S, MIDA EI OLE SENI KIRJELDATUD, MILLE PUHUL VASTUTAVAD KINAASID EI OLE TEADA, EGA SELLE FOSFORI FUNKTSIOONI. EELDADES, ET ORAI1 FOSFORÜÜLIMINE VÕIB MÄNGIDA OLULIST ROLLI OMA TEGEVUSE ÜMBERSUUNAMISEL JA SEEGA KOHANDADA EESPOOL NIMETATUD CA2+ST SÕLTUVAID PROTSESSE, ON PROJEKTI PEAMINE EESMÄRK MÄÄRATLEDA ORAI PHOSFORESIDUOS1 PROFIIL ERINEVATES METABOOLSETES OLUKORDADES, MÄÄRATA KINDLAKS VASTUTAVAD KINAASID JA FOSFORILACIONI FÜSIOLOOGILINE FUNKTSIOON, VÕTTES ARVESSE JÄRGMIST: (1) ORAI1 AKTIIVSUS CA2+ KANALINA, 2) SELLE RAKUALUNE ASUKOHT, 3) KOOSTOIME STIM1GA JA 4) KOMPLEKSIDE MOODUSTUMINE MUUDEST FOSFORÜÜLITUD JÄÄKIDEST SÕLTUVATE VALKUDEGA, KASUTADES HEK293 RAKKE. LISAKS UURITAKSE SELLE FOSFORÜÜLIMISE MÕJU RAKKUDE MIGRATSIOONI PROTSESSIDELE, EPITEELI-MESENHÜÜMI ÜLEMINEKULE JA RAKKUDE DIFERENTSEERUMISELE VÄLJAKUJUNENUD RAKULIINIDE ABIL. SELLE KÕIGEGA KAVATSEME TEADA SOCE’I AKTIVEERIMISE MOLEKULAARSEID ALUSEID, SELLE MODULEERIMIST FOSFORÜÜLIMISE TEEL JA VÕIMALIKE TERAPEUTILISTE SIHTMÄRKIDE KINDLAKSTEGEMIST SÜSTEEMIS STIM1-ORAI1. (Estonian)
17 August 2022
0 references
A CA2±FÜGGŐ INTRACELLULÁRIS JELÁTVITEL SZÁMOS SEJTES ESEMÉNY KONTROLLMECHANIZMUSÁT JELENTI. EBBEN AZ ÉRTELEMBEN A STIM1 ÉS ORAI1 FEHÉRJÉKBŐL ÁLLÓ KOMPLEX NÉLKÜLÖZHETETLEN A CA2+ BEÁRAMLÁS SZABÁLYOZÁSÁHOZ, ÉS EZÁLTAL A SZABAD CITOZOL CA2+ SZINTEK SZABÁLYOZÁSÁHOZ. A STIM1 OLYAN FEHÉRJE, AMELY FŐKÉNT AZ ENDOPLAZMATIKUS RETIKULUM MEMBRÁNJÁBAN TALÁLHATÓ, AHOL EBBEN A REKESZBEN CA2+ SZINTEK ÉRZÉKELŐJEKÉNT MŰKÖDIK, ÉS A CA2+ INTRALUMINÁLIS SZINTEK KIMERÜLÉSE ESETÉN A PLAZMAMEMBRÁN CA2+ CSATORNÁIT FIZIKAI UNIÓ SEGÍTSÉGÉVEL AKTIVÁLJA. EZEK KÖZÖTT A CA2+ CSATORNÁK KÖZÖTT AZ ORAI1, AMELY SZABÁLYOZZA A CA2+ BEÁRAMLÁSÁT, ÉS AMELY AKTIVÁTORÁVAL EGYÜTT A STIM1, RÉSZT VESZ A CA2±FÜGGŐ PHENOMENES-BEN, PÉLDÁUL A SEJTVÁNDORLÁSBAN, A DIFFERENCIÁLÓDÁSBAN VAGY A PROLIFERÁCIÓBAN, ÉS VANNAK OLYAN FRISS ADATOK, AMELYEK E KÉT FEHÉRJÉT A MESENCHYMÁLIS FENOTÍPUSOK SEJTTRANSZFORMÁCIÓJÁHOZ (EPITHELIUM-MESENCHYMA ÁTMENET), VALAMINT A TUMOR-LINE METATASIS-HOZ KAPCSOLJÁK. EZÉRT EZEKNEK A TRANSZPORTRENDSZEREKNEK A MODULÁCIÓJA ÉS A CA2+ CITOSZOLIKUS SZINTEK SZABÁLYOZÁSA KULCSFONTOSSÁGÚ A SEJTJELEZÉSBEN. EBBEN AZ ÉRTELEMBEN KÉPVISELŐCSOPORTUNK LEÍRTA, HOGY AZ ERK1/2 AKTIVITÁSBÓL SZÁRMAZÓ DIANA-MARADÉKOK STIM1 FOSZFORILÁCIÓJA OLYAN MECHANIZMUS E FEHÉRJE AKTIVÁLÁSÁRA, AMELY SZÜKSÉGES AHHOZ, HOGY AZ UNIÓT MEGKÖNNYÍTSE AZ ORAI1-IG, ÉS AKTIVÁLJA AZ INTRACELLULÁRIS LERAKÓDÁSOKKAL (SOCE) MŰKÖDTETETT CA2+ INPUTOT. ÍGY A SER575, SER608 ÉS SER621 MARADÉKOKBAN LÉVŐ STIM1 FOSZFORILÁCIÓ A MIKROTUBULUS VÉGÉNEK DISSZOCIÁCIÓJÁHOZ VEZET, AMI LEHETŐVÉ TESZI A STIM1 AGGREGÁTUMOKBAN (KLASZTEREKBEN) TÖRTÉNŐ AGGREGÁTUMOKBAN (KLASZTEREKBEN) TÖRTÉNŐ AGGREGÁTUMOKBAN (AZ ORAI1-IG) TÖRTÉNŐ AGGREGÁCIÓJÁT MEGELŐZŐ LÉPÉSKÉNT AZ ORAI1-RE. HIPOTÉZISÜNK AZONBAN AZT ÁLLÍTJA, HOGY A CSATORNA AKTIVÁLÁSÁNAK TELJES ELLENŐRZÉSE MINDKÉT FEHÉRJE TRANSZLÁCIÓS UTÁNI MÓDOSÍTÁSAINAK KÖSZÖNHETŐ, MIVEL AZ ORAI1 IS FOSZFOPROTEIN. BÁR NÉHÁNY ORAI1 FOSZFOR NAGYLÉPTÉKŰ TÖMEGSPEKTROMETRIAI VIZSGÁLATOKRÓL ISMERT, A CSOPORTUNK ÁLTAL A HEK293 SEJTEKBEN VÉGZETT ELŐZETES VIZSGÁLATOK LEHETŐVÉ TETTÉK SZÁMUNKRA, HOGY AZONOSÍTSUK A POSFORESIDUOS-T A MAI NAPIG NEM LEÍRT ORAI1-BEN, AMELYRE VONATKOZÓAN A FELELŐSSÉGTELJES KINÁZOK NEM ISMERTEK, SEM ENNEK A FOSZFORNAK A FUNKCIÓJÁT. MINDEZT ILLETŐEN, ÉS FELTÉTELEZVE, HOGY AZ ORAI1 FOSZFORILÁCIÓ KULCSSZEREPET JÁTSZHAT A TEVÉKENYSÉGÉNEK MODULÁCIÓJÁBAN, ÉS ÍGY A FENT EMLÍTETT CA2±TÓL FÜGGŐEN MODULÁLHATJA A FOLYAMATOKAT, A PROJEKT FŐ CÉLJA AZ ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 PROFILJÁNAK MEGHATÁROZÁSA KÜLÖNBÖZŐ ANYAGCSERE-HELYZETEKBEN, A FELELŐS KINÁZOK AZONOSÍTÁSA ÉS A FOSFORILACION ÉLETTANI FUNKCIÓJÁNAK MEGHATÁROZÁSA, FIGYELEMBE VÉVE: (1) AZ ORAI1 AKTIVITÁSA A CA2+ CSATORNÁJAKÉNT, (2) ANNAK SZUBCELLULÁRIS ELHELYEZKEDÉSE, (3) KÖLCSÖNHATÁS A STIM1-GYEL ÉS (4) KOMPLEXEK KÉPZŐDÉSE MÁS FEHÉRJÉKKEL, AMELYEK FÜGGENEK EZEKTŐL A FOSZFORILÁLT MARADÉKANYAGOKTÓL, HEK293 SEJTEK FELHASZNÁLÁSÁVAL. EZEN TÚLMENŐEN TANULMÁNYOZNI FOGJÁK ENNEK A FOSZFORILÁCIÓNAK A SEJTVÁNDORLÁSI FOLYAMATOKRA, AZ EPITHELIUM-MESENCHYMA TRANSZFORMÁCIÓRA ÉS A MEGHATÁROZOTT SEJTVONALAK ALKALMAZÁSÁVAL TÖRTÉNŐ SEJTDIFFERENCIÁLÁSRA GYAKOROLT HATÁSÁT. MINDEZEK ALAPJÁN SZERETNÉNK MEGISMERNI A SOCE AKTIVÁLÁSÁNAK MOLEKULÁRIS BÁZISAIT, ANNAK FOSZFORILÁCIÓVAL TÖRTÉNŐ MODULÁCIÓJÁT, VALAMINT A STIM1-ORAI1 RENDSZERBEN LEHETSÉGES TERÁPIÁS ÉRDEKLŐDÉSRE SZÁMOT TARTÓ LEHETSÉGES CÉLPONTOK AZONOSÍTÁSÁT. (Hungarian)
17 August 2022
0 references
CA2± ЗАВИСИМ ВЪТРЕКЛЕТЪЧЕН СИГНАЛ ПРЕДСТАВЛЯВА КОНТРОЛЕН МЕХАНИЗЪМ ЗА МНОЖЕСТВО КЛЕТЪЧНИ СЪБИТИЯ. В ТОЗИ СМИСЪЛ КОМПЛЕКСЪТ, ОБРАЗУВАН ОТ ПРОТЕИНИ STIM1 И ORAI1, Е ОТ СЪЩЕСТВЕНО ЗНАЧЕНИЕ ЗА КОНТРОЛА НА ПРИТОКА НА CA2+ И СЛЕДОВАТЕЛНО ЗА КОНТРОЛА НА СВОБОДНИТЕ ЦИТОЗОЛНИ НИВА НА CA2+. STIM1 Е ПРОТЕИН, НАМИРАЩ СЕ ПРЕДИМНО В МЕМБРАНАТА НА ЕНДОПЛАЗМАТИЧНИЯ РЕТИКУЛУМ, КЪДЕТО ДЕЙСТВА КАТО СЕНЗОР ЗА НИВАТА НА CA2+ В РАМКИТЕ НА ТОВА ОТДЕЛЕНИЕ И ЧЕ В УСЛОВИЯТА НА ИЗЧЕРПВАНЕ НА ИНТРАЛУМИНАЛНИТЕ НИВА НА CA2+ АКТИВИРА CA2+ КАНАЛИТЕ НА ПЛАЗМЕНАТА МЕМБРАНА ЧРЕЗ ФИЗИЧЕСКИ СЪЮЗ КЪМ ТЯХ. СРЕД ТЕЗИ CA2+ КАНАЛИ Е ORAI1, КОЙТО РЕГУЛИРА ПРИТОКА НА CA2+, И КОЙТО ЗАЕДНО СЪС СВОЯ АКТИВАТОР STIM1, УЧАСТВА В CA2±ЗАВИСИМИ PHENOMENES, КАТО КЛЕТЪЧНА МИГРАЦИЯ, ДИФЕРЕНЦИАЦИЯ ИЛИ ПРОЛИФЕРАЦИЯ, И ИМА СКОРОШНИ ДАННИ, КОИТО СВЪРЗВАТ ТЕЗИ ДВА ПРОТЕИНА С КЛЕТЪЧНАТА ТРАНСФОРМАЦИЯ В МЕЗЕНХИМНИ ФЕНОТИПОВЕ (ЕПИТЕЛИУМ-МЕСЕНХИМЕН ПРЕХОД), КАКТО И ТУМОРНО-ЛИНЕЙНА METATASIS. СЛЕДОВАТЕЛНО МОДУЛАЦИЯТА НА ТЕЗИ ТРАНСПОРТНИ СИСТЕМИ И КОНТРОЛЪТ НА НИВАТА НА CA2+ ЦИТОЗОЛИ СА ОТ КЛЮЧОВО ЗНАЧЕНИЕ ЗА КЛЕТЪЧНОТО СИГНАЛИЗИРАНЕ. В ТОЗИ СМИСЪЛ НАШАТА ГРУПА ОПИСА, ЧЕ ФОСФОРИЛАЦИЯТА НА STIM1 В DIANA ОСТАТЪЦИ ОТ АКТИВНОСТТА НА ERK1/2 Е МЕХАНИЗЪМ ЗА АКТИВИРАНЕ НА ТОЗИ ПРОТЕИН, НЕОБХОДИМ ЗА УЛЕСНЯВАНЕ НА СЪЮЗА ЗА ORAI1 И ЗА АКТИВИРАНЕ НА ВХОДА НА CA2+, УПРАВЛЯВАН ОТ ВЪТРЕКЛЕТЪЧНИ ОТЛАГАНИЯ (SOCE). ПО ТОЗИ НАЧИН ФОСФОРИЛАЦИЯТА STIM1 В ОСТАТЪЧНИТЕ ВЕЩЕСТВА ОТ SER575, SER608 И SER621 ВОДИ ДО ДИСОЦИАЦИЯ НА КРАЯ НА МИКРОТУБУЛАТА, КОЕТО ПОЗВОЛЯВА АГРЕГИРАНЕТО НА STIM1 В ИНЕРТНИ МАТЕРИАЛИ (КЛЪСТЕРИ) КАТО СТЪПКА ПРЕДИ СЪЮЗА С ORAI1. ВЪПРЕКИ ТОВА, НАШАТА ХИПОТЕЗА ГЛАСИ, ЧЕ ПЪЛНИЯТ КОНТРОЛ НА АКТИВИРАНЕТО НА КАНАЛА СЕ ДЪЛЖИ НА ПОСТТРАНСЛАЦИОННИ МОДИФИКАЦИИ НА ДВАТА ПРОТЕИНА, ТЪЙ КАТО ORAI1 СЪЩО Е ФОСФОПРОТЕИН. ВЪПРЕКИ ЧЕ НЯКОИ ORAI1 ФОСФОР СА ИЗВЕСТНИ ЗА МАЩАБНИ МАСОВИ СПЕКТРОМЕТРИЧНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ, ПРЕДВАРИТЕЛНИТЕ ИЗПИТВАНИЯ, ПРОВЕДЕНИ ОТ НАШАТА ГРУПА В КЛЕТКИ HEK293, НИ ПОЗВОЛИХА ДА ИДЕНТИФИЦИРАМЕ POSFORESIDUOS В ORAI1 НЕОПИСАНИ ДО МОМЕНТА, ЗА КОИТО ОТГОВОРНИТЕ КИНАЗИ НЕ СА ИЗВЕСТНИ, НИТО ФУНКЦИЯТА НА ТОЗИ ФОСФОР. ЗА ВСИЧКО ТОВА И АКО СЕ ПРИЕМЕ, ЧЕ ФОСФОРИЛАЦИЯТА ORAI1 МОЖЕ ДА ИГРАЕ КЛЮЧОВА РОЛЯ В МОДУЛАЦИЯТА НА НЕГОВАТА ДЕЙНОСТ И СЛЕДОВАТЕЛНО ДА МОДУЛИРА ПРОЦЕСИТЕ, ЗАВИСЕЩИ ОТ СПОМЕНАТИЯ ПО-ГОРЕ CA2+, ОСНОВНАТА ЦЕЛ НА ТОЗИ ПРОЕКТ Е ДА СЕ ОПРЕДЕЛИ ПРОФИЛЪТ НА PHOSFORESIDUOS1 НА ORAI В РАЗЛИЧНИ МЕТАБОЛИТНИ СИТУАЦИИ, ИДЕНТИФИЦИРАНЕТО НА ОТГОВОРНИТЕ КИНАЗИ И ФИЗИОЛОГИЧНАТА ФУНКЦИЯ НА ТОЗИ FOSFORILACION, КАТО СЕ ВЗЕМАТ ПРЕДВИД: (1) АКТИВНОСТТА НА ORAI1 КАТО КАНАЛ НА CA2+, (2) НЕГОВОТО СУБКЛЕТЪЧНО МЕСТОПОЛОЖЕНИЕ, (3) ВЗАИМОДЕЙСТВИЕТО СЪС STIM1 И (4) ОБРАЗУВАНЕТО НА КОМПЛЕКСИ С ДРУГИ ПРОТЕИНИ, ЗАВИСЕЩИ ОТ ТЕЗИ ФОСФОРИЛИРАНИ ОСТАТЪЦИ, КАТО СЕ ИЗПОЛЗВАТ КЛЕТКИ HEK293. ОСВЕН ТОВА ЩЕ БЪДЕ ПРОУЧЕНО ВЪЗДЕЙСТВИЕТО НА ТОВА ФОСФОРИЛИРАНЕ ВЪРХУ ПРОЦЕСИТЕ НА КЛЕТЪЧНА МИГРАЦИЯ, ЕПИТЕЛ-МЕЗЕНХИМНИЯ ПРЕХОД И КЛЕТЪЧНАТА ДИФЕРЕНЦИАЦИЯ С ПОМОЩТА НА УСТАНОВЕНИ КЛЕТЪЧНИ ЛИНИИ. С ВСИЧКО ТОВА ВЪЗНАМЕРЯВАМЕ ДА ЗНАЕМ МОЛЕКУЛЯРНИТЕ ОСНОВИ НА АКТИВИРАНЕТО НА SOCE, НЕГОВАТА МОДУЛАЦИЯ ЧРЕЗ ФОСФОРИЛАЦИЯ И ИДЕНТИФИЦИРАНЕТО НА ВЪЗМОЖНИ ЦЕЛИ ОТ ПОТЕНЦИАЛЕН ТЕРАПЕВТИЧЕН ИНТЕРЕС В СИСТЕМАТА STIM1-ORAI1. (Bulgarian)
17 August 2022
0 references
CA2± PRIKLAUSOMAS INTRALĄSTELINIS SIGNALIZAVIMAS YRA DAUGELIO LĄSTELIŲ REIŠKINIŲ KONTROLĖS MECHANIZMAS. ŠIUO POŽIŪRIU KOMPLEKSAS, KURĮ SUDARO STIM1 IR ORAI1 BALTYMAI, YRA LABAI SVARBUS CA2+ ANTPLŪDŽIO KONTROLEI IR LAISVOJO CITOZOLIO CA2+ KONCENTRACIJOS KONTROLEI. STIM1 YRA BALTYMAS, ESANTIS DAUGIAUSIA ENDOPLAZMINIO RETIKULO MEMBRANOJE, KUR JIS VEIKIA KAIP CA2+ LYGIO JUTIKLIS ŠIAME SKYRIUJE, IR KAD, IŠEIKVOJUS CA2+ INTRALIUMINESCENCINĮ LYGĮ, SUŽADINAMAS PLAZMOS MEMBRANOS CA2+ KANALAI, NAUDOJANT JIEMS FIZINĘ SĄJUNGĄ. TARP ŠIŲ CA2+ KANALŲ YRA ORAI1, KURIS REGULIUOJA CA2+ SRAUTĄ IR KURIS KARTU SU JO AKTYVATORIUMI STIM1 DALYVAUJA CA2± PRIKLAUSOMUOSE PHENOMENES, PVZ., LĄSTELIŲ MIGRACIJA, DIFERENCIACIJA AR PROLIFERACIJA, IR YRA NAUJAUSIŲ DUOMENŲ, KURIE SIEJA ŠIUOS DU BALTYMUS SU MEZENCHIMALINIŲ FENOTIPŲ LĄSTELIŲ TRANSFORMACIJA (EPITHELIUM-MESENCHYMA PERĖJIMAS), TAIP PAT NAVIKO LINIJA METATASIS. TODĖL ŠIŲ TRANSPORTO SISTEMŲ MODULIAVIMAS IR CA2+ CITOZOLIO LYGIŲ KONTROLĖ YRA RAKTAS Į KORINĮ SIGNALĄ. ŠIA PRASME MŪSŲ GRUPĖ APIBŪDINO, KAD STIM1 FOSFORILINIMAS DIANA LIEKANOMIS, SUSIDARIUSIOMIS DĖL ERK1/2 AKTYVUMO, YRA ŠIO BALTYMO AKTYVAVIMO MECHANIZMAS, BŪTINAS SIEKIANT PALENGVINTI SĄJUNGĄ ORAI1 IR SUAKTYVINTI CA2+, VEIKIANČIOS LĄSTELĖSE (SOCE), ĮVEDIMĄ. TAIGI DĖL STIM1 FOSFORILINIMO SER575, SER608 IR SER621 LIEKANOMIS MIKROVAMZDELIŲ GALAS DIFERENCIJUOJAMAS, TODĖL STIM1 GALIMA SUJUNGTI Į NERŪDINES MEDŽIAGAS (KLASTERIUS) KAIP ŽINGSNĮ PRIEŠ SĄJUNGAI PRADEDANT ORAI1. TAČIAU MŪSŲ HIPOTEZĖJE TEIGIAMA, KAD VISA KANALŲ AKTYVACIJOS KONTROLĖ ATSIRANDA DĖL ABIEJŲ BALTYMŲ PAKEITIMŲ PO TRANSLIACIJŲ, NES ORAI1 TAIP PAT YRA FOSFOPROTEINAS. NORS KAI KURIE ORAI1 FOSFORAI ŽINOMI ATLIEKANT DIDELIO MASTO MASIŲ SPEKTROMETRIJOS TYRIMUS, MŪSŲ GRUPĖS HEK293 LĄSTELĖSE ATLIKTI PRELIMINARŪS TYRIMAI LEIDO MUMS NUSTATYTI IKI ŠIOL NEAPRAŠYTUS ORAI1 POSFORESIDUOS, KURIŲ ATSAKINGOS KINAZĖS NĖRA ŽINOMOS, NEI ŠIO FOSFORO FUNKCIJĄ. ATSIŽVELGIANT Į VISA TAI IR DARANT PRIELAIDĄ, KAD ORAI1 FOSFORILINIMAS GALĖTŲ ATLIKTI PAGRINDINĮ VAIDMENĮ MODULIUOJANT JO VEIKLĄ IR TAIP MODULIUOJANT NUO CA2+ PRIKLAUSOMUS PROCESUS, PAGRINDINIS ŠIO PROJEKTO TIKSLAS YRA APIBRĖŽTI ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 PROFILĮ ESANT SKIRTINGOMS MEDŽIAGŲ APYKAITOS SITUACIJOMS, NUSTATYTI ATSAKINGAS KINAZES IR FIZIOLOGINĘ ŠIOS FOSFORILACION FUNKCIJĄ, ATSIŽVELGIANT Į: (1) ORAI1 KAIP CA2+ KANALO AKTYVUMAS, 2) JO SUBLĄSTELINĖ VIETA, 3) SĄVEIKA SU STIM1 IR 4) KOMPLEKSŲ SUSIDARYMAS SU KITAIS BALTYMAIS, KURIE PRIKLAUSO NUO ŠIŲ FOSFORILINTŲ LIKUČIŲ, NAUDOJANT HEK293 LĄSTELES. BE TO, BUS TIRIAMAS ŠIO FOSFORILINIMO POVEIKIS LĄSTELIŲ MIGRACIJOS PROCESAMS, EPITELIO MEZENCHIMOS PERĖJIMUI IR LĄSTELIŲ DIFERENCIACIJAI NAUDOJANT NUSTATYTAS LĄSTELIŲ LINIJAS. SU VISA TAI MES KETINAME ŽINOTI MOLEKULINES BAZES SOCE AKTYVACIJOS, JOS MODULIAVIMAS FOSFORILINIMO, IR GALIMŲ TAIKINIŲ GALIMO TERAPINIO SUSIDOMĖJIMO SISTEMOS STIM1-ORAI1 NUSTATYMAS. (Lithuanian)
17 August 2022
0 references
CA2± OVISNA UNUTARSTANIČNA SIGNALIZACIJA PREDSTAVLJA KONTROLNI MEHANIZAM ZA BROJNE STANIČNE DOGAĐAJE. U TOM JE SMISLU KOMPLEKS KOJI ČINE PROTEINI STIM1 I ORAI1 NEOPHODAN ZA KONTROLU PRILJEVA CA2+, A TIME I ZA KONTROLU BESPLATNIH CITONSKIH RAZINA CA2+. STIM1 JE PROTEIN KOJI SE UGLAVNOM NALAZI U MEMBRANI ENDOPLAZMATSKOG RETIKULUMA GDJE DJELUJE KAO SENZOR RAZINA CA2+ U OVOM ODJELJKU I KOJI U UVJETIMA ISCRPLJIVANJA CA2+ INTRALUMINALNIH RAZINA AKTIVIRA CA2+ KANALE PLAZME MEMBRANE FIZIČKOM UNIJOM. MEĐU TIM CA2+ KANALIMA JE ORAI1, KOJI REGULIRA PRILJEV CA2+, A KOJI JE ZAJEDNO SA SVOJIM AKTIVATOROM, STIM1, UKLJUČEN U CA2± OVISNE PHENOMENES POPUT MIGRACIJE STANICA, DIFERENCIJACIJE ILI PROLIFERACIJE, A POSTOJE NOVIJI PODACI KOJI POVEZUJU TA DVA PROTEINA S TRANSFORMACIJOM STANICA U MESENHIMALNIM FENOTIPOVIMA (PRIJELAZ EPITEL-MESENCHYMA), KAO I METATASIS. STOGA SU MODULACIJA TIH TRANSPORTNIH SUSTAVA I KONTROLA RAZINA CA2+ CITOSOLNIH STANICA KLJUČNI U STANIČNOJ SIGNALIZACIJI. U TOM SMISLU NAŠA JE GRUPA OPISALA DA JE FOSFORILACIJA STIM1 U OSTACIMA DIANE IZ AKTIVNOSTI ERK1/2 MEHANIZAM ZA AKTIVACIJU TOG PROTEINA, POTREBAN ZA OLAKŠAVANJE UNIJE U ORAI1 I AKTIVIRANJE UNOSA CA2+ KOJIM UPRAVLJAJU UNUTARSTANIČNE NASLAGE (SOCE). STOGA FOSFORILACIJA STIM1 U OSTACIMA SER575, SER608 I SER621 DOVODI DO NJEGOVE DISOCIJACIJE KRAJA MIKROTUBULA, ČIME SE OMOGUĆUJE AGREGACIJA STIM1 U AGREGATIMA (KLASTERIMA) KAO KORAK PRIJE UNIJE NA ORAI1. MEĐUTIM, NAŠA HIPOTEZA NAVODI DA JE POTPUNA KONTROLA AKTIVACIJE KANALA POSLJEDICA POSTTRANSLACIJSKIH MODIFIKACIJA OBA PROTEINA, BUDUĆI DA JE ORAI1 TAKOĐER FOSFOPROTEIN. IAKO SU NEKI ORAI1 FOSFOR POZNATI PO TESTOVIMA MASOVNE SPEKTROMETRIJE VELIKIH RAZMJERA, PRELIMINARNA ISPITIVANJA KOJA JE NAŠA SKUPINA PROVELA U STANICAMA HEK293 OMOGUĆILA SU NAM DA IDENTIFICIRAMO POSFORESIDUOS U ORAI1 KOJI DO DANAS NIJE OPISAN, ZA KOJE ODGOVORNE KINAZE NISU POZNATE, NITI FUNKCIJA OVOG FOSFORA. ZA SVE TO I POD PRETPOSTAVKOM DA BI FOSFORILACIJA ORAI1 MOGLA IMATI KLJUČNU ULOGU U MODULACIJI SVOJE AKTIVNOSTI I STOGA MODULIRATI PROCESE OVISNE O PRETHODNO NAVEDENOM CA2+, GLAVNI JE CILJ OVOG PROJEKTA DEFINIRATI PROFIL ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 U RAZLIČITIM METABOLIČKIM SITUACIJAMA, IDENTIFIKACIJU ODGOVORNIH KINAZA I FIZIOLOŠKU FUNKCIJU OVE FOSFORILACION, UZIMAJUĆI U OBZIR: (1) AKTIVNOST ORAI1 KAO KANALA CA2+, (2) NJEGOVA PODSTANIČNA LOKACIJA, (3) INTERAKCIJA SA STIM1 I (4) STVARANJE KOMPLEKSA S DRUGIM PROTEINIMA KOJI OVISE O TIM FOSFORILIRANIM OSTACIMA, KORISTEĆI HEK293 STANICE. OSIM TOGA, PROUČAVAT ĆE SE UTJECAJ OVE FOSFORILACIJE NA PROCESE MIGRACIJE STANICA, PRIJELAZ EPITELA I MESENHIMA TE DIFERENCIJACIJU STANICA POMOĆU USPOSTAVLJENIH STANIČNIH LINIJA. UZ SVE TO NAMJERAVAMO ZNATI MOLEKULARNE BAZE AKTIVACIJE SOCEA, NJEGOVU MODULACIJU FOSFORILACIJOM I UTVRĐIVANJE MOGUĆIH CILJEVA OD POTENCIJALNOG TERAPIJSKOG INTERESA U SUSTAVU STIM1-ORAI1. (Croatian)
17 August 2022
0 references
CA2±BEROENDE INTRACELLULÄR SIGNALERING REPRESENTERAR EN STYRMEKANISM FÖR MÅNGA CELLULÄRA HÄNDELSER. I DETTA AVSEENDE ÄR KOMPLEXET BILDAT AV STIM1- OCH ORAI1-PROTEINER VÄSENTLIGT FÖR KONTROLL AV CA2±INFLÖDE OCH DÄRMED FÖR KONTROLL AV FRIA CYTOSOLISKA CA2±NIVÅER. STIM1 ÄR ETT PROTEIN SOM HUVUDSAKLIGEN LIGGER I MEMBRANET I DET ENDOPLASMATISKA RETIKULUMET DÄR DET FUNGERAR SOM EN SENSOR FÖR CA2±NIVÅER I DETTA FACK OCH ATT UNDER FÖRHÅLLANDEN DÄR CA2+ INTRALUMINALNIVÅER TÖMS AKTIVERAS CA2±KANALERNA I PLASMAMEMBRANET GENOM FYSISK UNION TILL DEM. BLAND DESSA CA2±KANALER ÄR ORAI1, SOM REGLERAR TILLSTRÖMNINGEN AV CA2+, OCH SOM TILLSAMMANS MED SIN AKTIVATOR, STIM1, ÄR INVOLVERAD I CA2±BEROENDE PHENOMENES SÅSOM CELLMIGRATION, DIFFERENTIERING ELLER PROLIFERATION, OCH DET FINNS NYA DATA SOM RELATERAR DESSA TVÅ PROTEINER TILL CELLTRANSFORMATION I MESENKYMALA FENOTYPER (EPITHELIUM-MESENCHYMA ÖVERGÅNG), LIKSOM TUMÖR-LINE METATASIS. DÄRFÖR ÄR MODULERING AV DESSA TRANSPORTSYSTEM OCH KONTROLL AV CA2+ CYTOSOLNIVÅER NYCKELN TILL CELLULÄR SIGNALERING. I DETTA AVSEENDE HAR VÅR GRUPP BESKRIVIT ATT STIM1-FOSFORYLERING I DIANARESTER FRÅN ERK1/2-AKTIVITETEN ÄR EN MEKANISM FÖR ATT AKTIVERA DETTA PROTEIN, SOM ÄR NÖDVÄNDIG FÖR ATT UNDERLÄTTA UNIONEN TILL ORAI1, OCH AKTIVERA INMATNINGEN AV CA2+ SOM DRIVS AV INTRACELLULÄRA FYNDIGHETER (SOCE). STIM1-FOSFORYLERINGEN I RESTHALTERNA SER575, SER608 OCH SER621 LEDER SÅLEDES TILL ATT MIKROTUBULEÄNDEN DISSOCIERAS, VILKET GÖR DET MÖJLIGT ATT AGGREGERA STIM1 I AGGREGAT (KLUSTER) SOM ETT STEG FÖRE UNIONEN TILL ORAI1. VÅR HYPOTES SÄGER DOCK ATT FULL KONTROLL AV KANALAKTIVERING BEROR PÅ POSTTRANSLATIONELLA MODIFIERINGAR AV BÅDA PROTEINERNA, EFTERSOM ORAI1 OCKSÅ ÄR ETT FOSFOPROTEIN. ÄVEN OM VISSA ORAI1-FOSFOR ÄR KÄNDA FÖR STORSKALIGA MASSPEKTROMETRITESTER, HAR PRELIMINÄRA FÖRSÖK SOM UTFÖRTS AV VÅR GRUPP I HEK293 CELLER GJORT DET MÖJLIGT FÖR OSS ATT IDENTIFIERA POSFORESIDUOS I ORAI1 SOM INTE BESKRIVITS HITTILLS, FÖR VILKA DE ANSVARIGA KINASERNA INTE ÄR KÄNDA, ELLER FUNKTIONEN AV DENNA FOSFOR. FÖR ALLT DETTA, OCH OM MAN ANTAR ATT ORAI1-FOSFORYLERING SKULLE KUNNA SPELA EN NYCKELROLL I MODULERINGEN AV DESS VERKSAMHET OCH DÄRFÖR MODULERA DE PROCESSER SOM ÄR BEROENDE AV CA2+ SOM NÄMNS OVAN, ÄR HUVUDSYFTET MED DETTA PROJEKT ATT DEFINIERA PROFILEN FÖR ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 I OLIKA METABOLISKA SITUATIONER, IDENTIFIERINGEN AV DE ANSVARIGA KINASERNA OCH FYSIOLOGISKA FUNKTIONEN HOS DENNA FOSFORILACION MED BEAKTANDE AV FÖLJANDE: (1) AKTIVITETEN HOS ORAI1 SOM KANAL FÖR CA2+, (2) DESS SUBCELLULÄRA LÄGE, (3) INTERAKTIONEN MED STIM1 OCH (4) BILDANDET AV KOMPLEX MED ANDRA PROTEINER SOM ÄR BEROENDE AV DESSA FOSFORYLERADE RESTER, MED HJÄLP AV HEK293 CELLER. DESSUTOM KOMMER EFFEKTEN AV DENNA FOSFORYLERING PÅ CELLMIGRATIONSPROCESSER, EPITEL-MESENCHYMA-ÖVERGÅNG OCH CELLDIFFERENTIERING MED ETABLERADE CELLINJER ATT STUDERAS. MED ALLT DETTA HAR VI FÖR AVSIKT ATT KÄNNA TILL DE MOLEKYLÄRA GRUNDERNA FÖR AKTIVERINGEN AV SOCE, DESS MODULERING GENOM FOSFORYLERING, OCH IDENTIFIERINGEN AV MÖJLIGA MÅL AV POTENTIELLT TERAPEUTISKT INTRESSE FÖR SYSTEMET STIM1-ORAI1. (Swedish)
17 August 2022
0 references
CA2±SEMNALIZAREA INTRACELULARĂ DEPENDENTĂ REPREZINTĂ UN MECANISM DE CONTROL PENTRU NUMEROASE EVENIMENTE CELULARE. ÎN ACEST SENS, COMPLEXUL FORMAT DIN PROTEINELE STIM1 ȘI ORAI1 ESTE ESENȚIAL PENTRU CONTROLUL AFLUXULUI DE CA2+ ȘI, PRIN URMARE, PENTRU CONTROLUL NIVELURILOR CITOSOLICE LIBERE DE CA2+. STIM1 ESTE O PROTEINĂ SITUATĂ ÎN PRINCIPAL ÎN MEMBRANA RETICULULUI ENDOPLASMATIC, UNDE ACȚIONEAZĂ CA UN SENZOR AL NIVELURILOR CA2+ ÎN CADRUL ACESTUI COMPARTIMENT ȘI CARE, ÎN CONDIȚII DE EPUIZARE A NIVELURILOR INTRALUMINALE DE CA2+, ACTIVEAZĂ CANALELE CA2+ ALE MEMBRANEI PLASMATICE PRIN INTERMEDIUL UNEI UNIUNI FIZICE. PRINTRE ACESTE CANALE CA2+ SE NUMĂRĂ ORAI1, CARE REGLEAZĂ AFLUXUL DE CA2+, ȘI CARE, ÎMPREUNĂ CU ACTIVATORUL SĂU, STIM1, ESTE IMPLICAT ÎN PHENOMENES CA2±DEPENDENTE, CUM AR FI MIGRAREA CELULARĂ, DIFERENȚIEREA SAU PROLIFERAREA, ȘI EXISTĂ DATE RECENTE CARE SE REFERĂ LA ACESTE DOUĂ PROTEINE LA TRANSFORMAREA CELULARĂ ÎN FENOTIPURILE MEZENCHIMALE (TRANZIȚIA EPITHELIUM-MESENCHYMA), PRECUM ȘI METATASIS CU LINIE TUMORALĂ. PRIN URMARE, MODULAREA ACESTOR SISTEME DE TRANSPORT ȘI CONTROLUL NIVELURILOR CITOSOLICE CA2+ SUNT ESENȚIALE ÎN SEMNALIZAREA CELULARĂ. ÎN ACEST SENS, GRUPUL NOSTRU A DESCRIS CĂ FOSFORILAREA STIM1 ÎN REZIDUURILE DIANA DIN ACTIVITATEA ERK1/2 ESTE UN MECANISM DE ACTIVARE A ACESTEI PROTEINE, NECESAR PENTRU A FACILITA UNIUNII SĂ ORAI1 ȘI SĂ ACTIVEZE APORTUL DE CA2+ OPERAT PRIN DEPOZITE INTRACELULARE (SOCE). ASTFEL, FOSFORILAREA STIM1 ÎN REZIDUURILE SER575, SER608 ȘI SER621 CONDUCE LA DISOCIEREA CAPĂTULUI MICROTUBULULUI, PERMIȚÂND AGREGAREA STIM1 ÎN AGREGATE (CLUSTERE) CA ETAPĂ ANTERIOARĂ UNIUNII CĂTRE ORAI1. CU TOATE ACESTEA, IPOTEZA NOASTRĂ AFIRMĂ CĂ CONTROLUL DEPLIN AL ACTIVĂRII CANALULUI SE DATOREAZĂ MODIFICĂRILOR POST-TRALAȚIONALE ALE AMBELOR PROTEINE, DEOARECE ORAI1 ESTE, DE ASEMENEA, O FOSFOPROTEINĂ. DEȘI UNII FOSFOR ORAI1 SUNT CUNOSCUȚI PENTRU TESTELE DE SPECTROMETRIE DE MASĂ LA SCARĂ LARGĂ, TESTELE PRELIMINARE EFECTUATE DE GRUPUL NOSTRU ÎN CELULELE HEK293 NE-AU PERMIS SĂ IDENTIFICĂM POSFORESIDUOS ÎN ORAI1 NEDESCRIS PÂNĂ ÎN PREZENT, PENTRU CARE KINAZELE RESPONSABILE NU SUNT CUNOSCUTE, NICI FUNCȚIA ACESTUI FOSFOR. PENTRU TOATE ACESTEA ȘI PRESUPUNÂND CĂ FOSFORILAREA ORAI1 AR PUTEA JUCA UN ROL-CHEIE ÎN MODULAREA ACTIVITĂȚII SALE ȘI, PRIN URMARE, MODULEAZĂ PROCESELE DEPENDENTE DE CA2+ MENȚIONATE MAI SUS, OBIECTIVUL PRINCIPAL AL ACESTUI PROIECT ESTE DE A DEFINI PROFILUL PHOSFORESIDUOS1 AL LUI ORAI ÎN DIFERITE SITUAȚII METABOLICE, IDENTIFICAREA KINAZELOR RESPONSABILE ȘI FUNCȚIA FIZIOLOGICĂ A ACESTEI FOSFORILACION, LUÂND ÎN CONSIDERARE: (1) ACTIVITATEA ORAI1 CA CANAL DE CA2+, (2) LOCALIZAREA SA SUBCELULARĂ, (3) INTERACȚIUNEA CU STIM1 ȘI (4) FORMAREA DE COMPLEXE CU ALTE PROTEINE DEPENDENTE DE ACESTE REZIDUURI FOSFORILATE, FOLOSIND CELULE HEK293. ÎN PLUS, VA FI STUDIAT IMPACTUL ACESTEI FOSFORILĂRI ASUPRA PROCESELOR DE MIGRAȚIE CELULARĂ, TRANZIȚIA EPITELIULUI-MESENCHIMULUI ȘI DIFERENȚIEREA CELULELOR FOLOSIND LINII CELULARE STABILITE. CU TOATE ACESTEA, INTENȚIONĂM SĂ CUNOAȘTEM BAZELE MOLECULARE ALE ACTIVĂRII SOCE, MODULAREA SA PRIN FOSFORILARE ȘI IDENTIFICAREA UNOR POSIBILE ȚINTE DE INTERES TERAPEUTIC POTENȚIAL ÎN SISTEM STIM1-ORAI1. (Romanian)
17 August 2022
0 references
CA2±ODVISNO ZNOTRAJCELIČNO SIGNALIZACIJO PREDSTAVLJA NADZORNI MEHANIZEM ZA ŠTEVILNE CELIČNE DOGODKE. V TEM SMISLU JE KOMPLEKS, KI GA TVORITA PROTEINI STIM1 IN ORAI1, BISTVEN ZA NADZOR PRITOKA CA2+ IN S TEM ZA NADZOR PROSTIH CITOSOLNIH KONCENTRACIJ CA2+. STIM1 JE BELJAKOVINA, KI SE NAHAJA VEČINOMA V MEMBRANI ENDOPLAZMATSKEGA RETIKULUMA, KJER DELUJE KOT SENZOR RAVNI CA2+ V TEM PREDELKU, IN DA V POGOJIH IZČRPANJA ZNOTRAJLUMINALNIH RAVNI CA2+ AKTIVIRA KANALE CA2+ PLAZEMSKE MEMBRANE S FIZIČNO UNIJO. MED TEMI KANALI CA2+ JE ORAI1, KI URAVNAVA DOTOK CA2+ IN KI SKUPAJ S SVOJIM AKTIVATORJEM STIM1 SODELUJE V CA2± ODVISNIH PHENOMENES, KOT SO CELIČNA MIGRACIJA, DIFERENCIACIJA ALI PROLIFERACIJA, IN OBSTAJAJO NEDAVNI PODATKI, KI POVEZUJEJO TI DVE BELJAKOVINI S TRANSFORMACIJO CELIC V MESENHIMSKIH FENOTIPIH (EPITELIJ-MESENCHYM PREHOD), KOT TUDI METATASIS V TUMORSKI LINIJI. ZATO STA MODULACIJA TEH TRANSPORTNIH SISTEMOV IN KONTROLA CA2+ CITOSOLNIH RAVNI KLJUČNEGA POMENA ZA CELIČNO SIGNALIZACIJO. V TEM SMISLU JE NAŠA SKUPINA OPISALA, DA JE FOSFORILACIJA STIM1 V OSTANKIH DIANE IZ AKTIVNOSTI ERK1/2 MEHANIZEM ZA AKTIVIRANJE TE BELJAKOVINE, KI JE POTREBEN, DA SE UNIJI OLAJŠA ORAI1 IN AKTIVIRA VNOS CA2+, KI GA UPRAVLJAJO ZNOTRAJCELIČNI DEPOZITI (SOCE). FOSFORILACIJA STIM1 V OSTANKIH SER575, SER608 IN SER621 TAKO VODI DO DISOCIACIJE KONCA MIKROTUBULOV, KAR OMOGOČA ZDRUŽEVANJE STIM1 V AGREGATIH (GROZDI) KOT KORAK PRED UNIJO NA ORAI1. VENDAR PA NAŠA HIPOTEZA NAVAJA, DA JE POPOLN NADZOR NAD AKTIVACIJO KANALA POSLEDICA POSTTRANSLACIJSKIH SPREMEMB OBEH BELJAKOVIN, SAJ JE ORAI1 TUDI FOSFOPROTEIN. ČEPRAV SO NEKATERI ORAI1 FOSFOR ZNANI PO OBSEŽNIH MASNIH SPEKTROMETRIČNIH TESTIH, SO PREDHODNI PRESKUSI, KI JIH JE IZVEDLA NAŠA SKUPINA V CELICAH HEK293, OMOGOČILI IDENTIFIKACIJO POSFORESIDUOS V ORAI1, KI DO DANES NI OPISAN, ZA KATERE ODGOVORNI KINAZE NISO ZNANI, NITI FUNKCIJE TEGA FOSFORJA. PRI VSEM TEM IN OB PREDPOSTAVKI, DA BI FOSFORILACIJA ORAI1 LAHKO IMELA KLJUČNO VLOGO PRI MODULACIJI SVOJE DEJAVNOSTI IN S TEM SPREMINJALA PROCESE, KI SO ODVISNI OD ZGORAJ NAVEDENEGA CA2+, JE GLAVNI CILJ TEGA PROJEKTA OPREDELITI PROFIL ORAI’S PHOSFORESIDUOS1 V RAZLIČNIH PRESNOVNIH SITUACIJAH, IDENTIFIKACIJO ODGOVORNIH KINAZ IN FIZIOLOŠKO FUNKCIJO TEGA FOSFORILACIJA OB UPOŠTEVANJU: (1) AKTIVNOST ORAI1 KOT KANALA CA2+, (2) NJEGOVA PODCELIČNA LEGA, (3) INTERAKCIJA S STIM1 IN (4) TVORBA KOMPLEKSOV Z DRUGIMI BELJAKOVINAMI, ODVISNIMI OD TEH FOSFORILIRANIH OSTANKOV, Z UPORABO CELIC HEK293. POLEG TEGA BO PREUČEN VPLIV TE FOSFORILACIJE NA PROCESE MIGRACIJE CELIC, PREHOD EPITELIJA-MESENHIMA IN DIFERENCIACIJO CELIC Z UPORABO UVELJAVLJENIH CELIČNIH LINIJ. Z VSEM TEM NAMERAVAMO POZNATI MOLEKULARNE OSNOVE AKTIVACIJE SOCE, NJENO MODULACIJO S FOSFORILACIJO IN OPREDELITEV MOŽNIH CILJEV POTENCIALNEGA TERAPEVTSKEGA INTERESA V SISTEMU STIM1-ORAI1. (Slovenian)
17 August 2022
0 references
CA2±ZALEŻNY SYGNAŁ WEWNĄTRZKOMÓRKOWY REPREZENTUJE MECHANIZM KONTROLNY DLA LICZNYCH ZDARZEŃ KOMÓRKOWYCH. W TYM SENSIE KOMPLEKS UTWORZONY PRZEZ BIAŁKA STIM1 I ORAI1 MA ZASADNICZE ZNACZENIE DLA KONTROLI NAPŁYWU CA2+, A TYM SAMYM DLA KONTROLI WOLNEGO CYTOSOLIKU CA2+. STIM1 JEST BIAŁKIEM ZNAJDUJĄCYM SIĘ GŁÓWNIE W BŁONIE RETIKULUM ENDOPLAZMATYCZNEGO, GDZIE DZIAŁA JAKO CZUJNIK POZIOMU CA2+ W TEJ KOMORZE, ORAZ ŻE W WARUNKACH WYCZERPANIA POZIOMU WEWNĄTRZŚWIETLNEGO CA2+ AKTYWUJE KANAŁY CA2+ BŁONY PLAZMOWEJ ZA POMOCĄ FIZYCZNEJ UNII DLA NICH. WŚRÓD TYCH KANAŁÓW CA2+ JEST ORAI1, KTÓRY REGULUJE NAPŁYW CA2+, I KTÓRY WRAZ Z JEGO AKTYWATOREM, STIM1, JEST ZAANGAŻOWANY W CA2± ZALEŻNYCH PHENOMENES, TAKICH JAK MIGRACJA KOMÓREK, RÓŻNICOWANIE, LUB PROLIFERACJI, I ISTNIEJĄ NAJNOWSZE DANE, KTÓRE ODNOSZĄ SIĘ TE DWA BIAŁKA DO TRANSFORMACJI KOMÓREK W FENOTYPACH MESENCHYMAL (EPITHELIUM-MESENCHYMA PRZEJŚCIA), A TAKŻE GUZ-LINE METATASIS. DLATEGO TEŻ MODULACJA TYCH SYSTEMÓW TRANSPORTOWYCH I KONTROLA POZIOMÓW CYTOSOLOWYCH CA2+ MAJĄ KLUCZOWE ZNACZENIE W SYGNALIZOWANIU KOMÓRKOWYM. W TYM SENSIE NASZA GRUPA OPISAŁA, ŻE FOSFORYLACJA STIM1 W POZOSTAŁOŚCIACH DIANY Z AKTYWNOŚCI ERK1/2 JEST MECHANIZMEM AKTYWACJI TEGO BIAŁKA, NIEZBĘDNYM DO UŁATWIENIA UNII DO ORAI1 I AKTYWACJI WEJŚCIA CA2+ OBSŁUGIWANEGO PRZEZ WEWNĄTRZKOMÓRKOWE ZŁOŻA (SOCE). W ZWIĄZKU Z TYM FOSFORYLACJA STIM1 W POZOSTAŁOŚCIACH SER575, SER608 I SER621 PROWADZI DO JEJ DYSOCJACJI KOŃCA MIKROTUBULU, CO POZWALA NA AGREGACJĘ STIM1 W KRUSZYWACH (KLASTRACH) NA ETAPIE POPRZEDZAJĄCYM UNIĘ DO ORAI1. JEDNAK NASZA HIPOTEZA STWIERDZA, ŻE PEŁNA KONTROLA AKTYWACJI KANAŁÓW WYNIKA Z POTRANSLACYJNYCH MODYFIKACJI OBU BIAŁEK, PONIEWAŻ ORAI1 JEST RÓWNIEŻ FOSFOPROTEINĄ. CHOCIAŻ NIEKTÓRE FOSFORU ORAI1 SĄ ZNANE Z BADAŃ SPEKTROMETRII MASOWEJ NA DUŻĄ SKALĘ, WSTĘPNE BADANIA PRZEPROWADZONE PRZEZ NASZĄ GRUPĘ W KOMÓRKACH HEK293 POZWOLIŁY NAM ZIDENTYFIKOWAĆ POSFORESIDUOS W ORAI1 NIEOPISANE DO TEJ PORY, DLA KTÓRYCH ODPOWIEDZIALNE KINAZY NIE SĄ ZNANE, ANI FUNKCJI TEGO FOSFORU. W ZWIĄZKU Z TYM I ZAKŁADAJĄC, ŻE FOSFORYLACJA ORAI1 MOGŁABY ODGRYWAĆ KLUCZOWĄ ROLĘ W MODULACJI SWOJEJ DZIAŁALNOŚCI, A TYM SAMYM MODULOWAĆ PROCESY ZALEŻNE OD WYŻEJ WYMIENIONEGO CA2+, GŁÓWNYM CELEM TEGO PROJEKTU JEST ZDEFINIOWANIE PROFILU PHOSFORESIDUOS1 ORAI W RÓŻNYCH SYTUACJACH METABOLICZNYCH, IDENTYFIKACJA ODPOWIEDZIALNYCH KINAZ I FIZJOLOGICZNA FUNKCJA TEJ FOSFORILACION, BIORĄC POD UWAGĘ: (1) AKTYWNOŚĆ ORAI1 JAKO KANAŁU CA2+, (2) JEGO LOKALIZACJI PODKOMÓRKOWEJ, (3) INTERAKCJA Z STIM1 I (4) TWORZENIE KOMPLEKSÓW Z INNYMI BIAŁKAMI ZALEŻNYMI OD TYCH FOSFORYLOWANYCH POZOSTAŁOŚCI, PRZY UŻYCIU KOMÓREK HEK293. PONADTO ZBADANY ZOSTANIE WPŁYW TEJ FOSFORYLACJI NA PROCESY MIGRACJI KOMÓREK, PRZEJŚCIE NABŁONKA-MESENCHYMA I RÓŻNICOWANIE KOMÓREK PRZY UŻYCIU USTALONYCH LINII KOMÓRKOWYCH. DZIĘKI TEMU ZAMIERZAMY POZNAĆ MOLEKULARNE PODSTAWY AKTYWACJI SOCE, JEJ MODULACJI PRZEZ FOSFORYLACJĘ ORAZ OKREŚLENIE MOŻLIWYCH CELÓW O POTENCJALNYM ZNACZENIU TERAPEUTYCZNYM W SYSTEMIE STIM1-ORAI1. (Polish)
17 August 2022
0 references
Badajoz
0 references
20 December 2023
0 references
Identifiers
BFU2014-52401-P
0 references