Development of a high-performance reprogramming platform based on oocyte extracts packaged in liposomes (Q3164493)
Jump to navigation
Jump to search
Project Q3164493 in Spain
| Language | Label | Description | Also known as |
|---|---|---|---|
| English | Development of a high-performance reprogramming platform based on oocyte extracts packaged in liposomes |
Project Q3164493 in Spain |
Statements
24,000.0 Euro
0 references
48,000.0 Euro
0 references
50.0 percent
0 references
1 January 2015
0 references
31 March 2019
0 references
UNIVERSIDAD DE LERIDA
0 references
41°36'53.14"N, 0°37'36.41"E
0 references
25120
0 references
Aunque es relativamente fácil generar células pluripotenciales inducidas (iPSCs), sus aberraciones genéticas y potencial oncogenicidad limitan su uso en medicina regenerativa. Por otra parte, la generación de células madre embrionarias (ESCs) a través de la transferencia nuclear (SCNT) es muy ineficiente, requiere un gran número de ovocitos de buena calidad y, en humanos, se asocia a limitaciones éticas y logísticas. Como alternativa, varios estudios han demostrado que la permeabilización e incubación de células somáticas con extractos de ovocito tanto de especies inferiores (Xenopus, Drosophila) como de mamíferos (ratón, cerdo) induce su reprogramación evidenciada por la expresión de marcadores de pluripotencia. No obstante, este tipo de estudios también precisan de la utilización de un número muy elevado de ovocitos, siendo impracticable con muestras de origen humano. Proponemos la utilización de un dispositivo microfluídico para generar liposomas a partir de extractos de ovocito y dirigir la fusión controlada de liposomas individuales a células somáticas. Nuestra hipótesis es que la fusión controlada de un volumen crítico de extracto de ovocito a cada célula somática puede inducir su eficiente reprogramación. El perfil epigenético y transcriptómico de las células tratadas con ovocitos se comparará a los perfiles de células somáticas tratadas con liposomas sin el correspondiente extracto, ESCs y iPSCs. Proponemos optimizar este sistema usando células de ratón para luego reprogramar células de origen humano con ovocitos homólogos. La implementación de esta plataforma con éxito nos permitirá generar células madre de origen humano y la oportunidad sin precedentes de estudiar los factores del ovocito responsables de la reprogramación. (Spanish)
0 references
Although it is relatively easy to generate induced pluripotential cells (iPSCs), its genetic aberrations and oncogenic potential limit its use in regenerative medicine. On the other hand, the generation of embryonic stem cells (ESCs) through nuclear transfer (NSTS) is very inefficient, requires a large number of good quality oocytes and, in humans, is associated with ethical and logistical limitations. Alternatively, several studies have shown that permeabilisation and incubation of somatic cells with oocyte extracts from both lower species (Xenopus, Drosophila) and mammals (mouse, pig) induce their reprogramming evidenced by the expression of pluripotence markers. However, this type of study also requires the use of a very high number of oocytes, being impracticable with samples of human origin. We propose the use of a microfluidic device to generate liposomes from oocyte extracts and direct the controlled fusion of individual liposomes to somatic cells. Our hypothesis is that the controlled fusion of a critical volume of oocyte extract into each somatic cell can induce its efficient reprogramming. The epigenetic and transcriptomic profile of oocyte-treated cells shall be compared to somatic cell profiles treated with liposomes without the corresponding extract, ESCs and iPSCs. We propose to optimise this system using mouse cells and then reprogram cells of human origin with homologous oocytes. The successful implementation of this platform will allow us to generate stem cells of human origin and the unprecedented opportunity to study the oocyte factors responsible for reprogramming. (English)
12 October 2021
0 references
Bien qu’il soit relativement facile de générer des cellules pluripotentielles induites (iPSC), ses aberrations génétiques et son potentiel oncogénique limitent son utilisation en médecine régénérative. D’autre part, la production de cellules souches embryonnaires (CSE) par transfert nucléaire (NSTS) est très inefficace, nécessite un grand nombre d’ovocytes de bonne qualité et, chez l’homme, est associée à des limitations éthiques et logistiques. Par ailleurs, plusieurs études ont montré que la perméabilisation et l’incubation de cellules somatiques avec des extraits d’ovocytes provenant d’espèces inférieures (Xenopus, Drosophila) et de mammifères (souris, porcs) induisent leur reprogrammation démontrée par l’expression de marqueurs de pluripotence. Cependant, ce type d’étude nécessite également l’utilisation d’un très grand nombre d’ovocytes, étant impraticable avec des échantillons d’origine humaine. Nous proposons l’utilisation d’un dispositif microfluidique pour générer des liposomes à partir d’extraits d’ovocytes et diriger la fusion contrôlée des liposomes individuels vers des cellules somatiques. Notre hypothèse est que la fusion contrôlée d’un volume critique d’extrait d’ovocyte dans chaque cellule somatique peut induire sa reprogrammation efficace. Le profil épigénétique et transcriptomique des cellules traitées aux ovocytes doit être comparé aux profils cellulaires somatiques traités avec des liposomes sans l’extrait, les ESC et les iPSC correspondants. Nous proposons d’optimiser ce système en utilisant des cellules de souris, puis de reprogrammer des cellules d’origine humaine avec des ovocytes homologues. La mise en œuvre réussie de cette plateforme nous permettra de générer des cellules souches d’origine humaine et l’occasion sans précédent d’étudier les facteurs d’ovocytes responsables de la reprogrammation. (French)
4 December 2021
0 references
Obwohl es relativ einfach ist, induzierte pluripotenzielle Zellen (iPSCs) zu erzeugen, beschränken seine genetischen Aberrationen und das onkogene Potenzial seine Verwendung in der regenerativen Medizin. Andererseits ist die Erzeugung embryonaler Stammzellen (ESC) durch Kerntransfer (NSTS) sehr ineffizient, erfordert eine große Anzahl von hochwertigen Oozyten und ist beim Menschen mit ethischen und logistischen Einschränkungen verbunden. Alternativ haben mehrere Studien gezeigt, dass die Permeabilisation und Inkubation von somatischen Zellen mit Oozytenextrakten aus beiden unteren Arten (Xenopus, Drosophila) und Säugetieren (Maus, Schwein) ihre Neuprogrammierung durch die Expression von Pluripotenzmarkern beweist. Diese Art von Studie erfordert jedoch auch die Verwendung einer sehr hohen Anzahl von Oozyten, die mit Proben menschlichen Ursprungs undurchführbar ist. Wir schlagen die Verwendung eines mikrofluidischen Geräts vor, um Liposomen aus Oozytenextrakten zu erzeugen und die kontrollierte Fusion einzelner Liposomen zu somatischen Zellen zu lenken. Unsere Hypothese ist, dass die kontrollierte Fusion eines kritischen Volumens von Oozytenextrakt in jede somatische Zelle ihre effiziente Neuprogrammierung induzieren kann. Das epigenetische und transkriptomische Profil der mit Oozyten behandelten Zellen ist mit somatischen Zellprofilen, die mit Liposomen behandelt werden, ohne den entsprechenden Extrakt, ESCs und iPSCs zu vergleichen. Wir schlagen vor, dieses System mit Mauszellen zu optimieren und dann Zellen menschlichen Ursprungs mit homologen Oozyten neu zu programmieren. Die erfolgreiche Umsetzung dieser Plattform ermöglicht es uns, Stammzellen menschlicher Herkunft zu generieren und die beispiellose Gelegenheit zu untersuchen, die für die Neuprogrammierung verantwortlichen Oozytenfaktoren zu untersuchen. (German)
9 December 2021
0 references
Hoewel het relatief gemakkelijk is om geïnduceerde pluripotentiële cellen (iPSC’s) te genereren, beperken de genetische afwijkingen en oncogene potentie het gebruik ervan in regeneratieve geneeskunde. Anderzijds is de generatie van embryonale stamcellen (ESC’s) door middel van nucleaire overdracht (NSTS) zeer inefficiënt, vereist een groot aantal oöcyten van goede kwaliteit en wordt bij mensen geassocieerd met ethische en logistieke beperkingen. Als alternatief hebben verscheidene studies aangetoond dat permeabilisatie en incubatie van somatische cellen met oöcytenextracten van zowel lagere soorten (Xenopus, Drosophila) als zoogdieren (muis, varken) hun herprogrammering induceren, aangetoond door de expressie van pluripotentiemarkers. Dit type studie vereist echter ook het gebruik van een zeer groot aantal oöcyten, die onuitvoerbaar zijn bij monsters van menselijke oorsprong. Wij stellen het gebruik van een microfluidic apparaat voor om liposomen van oöcytenextracten te genereren en de gecontroleerde fusie van individuele liposomen aan somatische cellen te leiden. Onze hypothese is dat de gecontroleerde fusie van een kritisch volume van oöcytenextract in elke somatische cel zijn efficiënte herprogrammering kan induceren. Het epigenetische en transcriptomische profiel van oöcytenbehandelde cellen moet worden vergeleken met somatische celprofielen die met liposomen worden behandeld zonder het overeenkomstige extract, ESCs en iPSC’s. We stellen voor om dit systeem te optimaliseren met behulp van muiscellen en vervolgens cellen van menselijke oorsprong te herprogrammeren met homologe oöcyten. De succesvolle implementatie van dit platform zal ons in staat stellen om stamcellen van menselijke oorsprong te genereren en de ongekende kans om de oöcyten factoren die verantwoordelijk zijn voor de herprogrammering te bestuderen. (Dutch)
17 December 2021
0 references
Sebbene sia relativamente facile generare cellule pluripotenziali indotte (iPSC), le sue aberrazioni genetiche e il potenziale oncogenico ne limitano l'uso nella medicina rigenerativa. D'altro canto, la generazione di cellule staminali embrionali (ESC) attraverso il trasferimento nucleare (NSTS) è molto inefficiente, richiede un gran numero di ovociti di buona qualità e, nell'uomo, è associata a limitazioni etiche e logistiche. In alternativa, diversi studi hanno dimostrato che la permeabilizzazione e l'incubazione di cellule somatiche con estratti di ovociti sia di specie inferiori (Xenopus, Drosophila) che di mammiferi (topo, maiale) inducono la loro riprogrammazione evidenziata dall'espressione di marcatori pluripotenze. Tuttavia, questo tipo di studio richiede anche l'uso di un numero molto elevato di ovociti, essendo impraticabile con campioni di origine umana. Proponiamo l'uso di un dispositivo microfluidico per generare liposomi da estratti di ovociti e dirigere la fusione controllata dei singoli liposomi alle cellule somatiche. La nostra ipotesi è che la fusione controllata di un volume critico di estratto di ovocita in ogni cellula somatica possa indurre la sua efficace riprogrammazione. Il profilo epigenetico e trascrittomico delle cellule trattate con ovociti deve essere confrontato con i profili cellulari somatici trattati con liposomi senza il corrispondente estratto, ESC e iPSC. Proponiamo di ottimizzare questo sistema utilizzando cellule del mouse e poi riprogrammare cellule di origine umana con ovociti omologhi. La riuscita attuazione di questa piattaforma ci permetterà di generare cellule staminali di origine umana e l'opportunità senza precedenti di studiare i fattori ovociti responsabili della riprogrammazione. (Italian)
16 January 2022
0 references
Αν και είναι σχετικά εύκολο να δημιουργηθούν προκαλούμενα πολυδύναμα κύτταρα (iPSCs), οι γενετικές αποκλίσεις και οι ογκογόνοι δυνατότητες περιορίζουν τη χρήση του στην αναγεννητική ιατρική. Από την άλλη πλευρά, η παραγωγή εμβρυϊκών βλαστοκυττάρων (ESC) μέσω της μεταφοράς πυρηνικών όπλων (NSTS) είναι πολύ αναποτελεσματική, απαιτεί μεγάλο αριθμό ωοκυττάρων καλής ποιότητας και, στον άνθρωπο, συνδέεται με ηθικούς και υλικοτεχνικούς περιορισμούς. Εναλλακτικά, αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι η διαπερατοποίηση και η επώαση σωματικών κυττάρων με εκχυλίσματα ωοκυττάρων τόσο από χαμηλότερα είδη (Xenopus, Drosophila) όσο και από θηλαστικά (ποντίκι, χοίρος) προκαλούν τον επαναπρογραμματισμό τους που αποδεικνύεται από την έκφραση δεικτών πολυδυναμίας. Ωστόσο, αυτό το είδος μελέτης απαιτεί επίσης τη χρήση πολύ μεγάλου αριθμού ωοκυττάρων, τα οποία είναι ανέφικτα με δείγματα ανθρώπινης προέλευσης. Προτείνουμε τη χρήση μιας μικροφλουιδικής συσκευής για την παραγωγή λιποσωμάτων από εκχυλίσματα ωοκυττάρων και την κατεύθυνση της ελεγχόμενης σύντηξης μεμονωμένων λιποσωμάτων σε σωματικά κύτταρα. Η υπόθεση μας είναι ότι η ελεγχόμενη σύντηξη ενός κρίσιμου όγκου εκχυλίσματος ωοκυττάρων σε κάθε σωματικό κύτταρο μπορεί να προκαλέσει τον αποτελεσματικό επαναπρογραμματισμό του. Το επιγενετικό και μεταγραφικό προφίλ των κυττάρων που υποβάλλονται σε αγωγή με ωοκύτταρα συγκρίνεται με τα προφίλ σωματικών κυττάρων που υποβάλλονται σε αγωγή με λιποσώματα χωρίς το αντίστοιχο εκχύλισμα, ESC και iPSC. Προτείνουμε να βελτιστοποιηθεί αυτό το σύστημα χρησιμοποιώντας κύτταρα ποντικού και στη συνέχεια να επαναπρογραμματίσει κύτταρα ανθρώπινης προέλευσης με ομόλογα ωοκύτταρα. Η επιτυχής υλοποίηση αυτής της πλατφόρμας θα μας επιτρέψει να δημιουργήσουμε βλαστοκύτταρα ανθρώπινης προέλευσης και την άνευ προηγουμένου ευκαιρία να μελετήσουμε τους παράγοντες των ωοκυττάρων που ευθύνονται για τον επαναπρογραμματισμό. (Greek)
18 August 2022
0 references
Selv om det er relativt let at generere inducerede pluripotentialceller (iPSC), begrænser dets genetiske aberrationer og onkogene potentiale dets anvendelse i regenerativ medicin. På den anden side er dannelsen af embryonale stamceller (ESC'er) gennem nuklear overførsel (NSTS) meget ineffektiv, kræver et stort antal oocytter af god kvalitet og er i mennesker forbundet med etiske og logistiske begrænsninger. Alternativt har flere undersøgelser vist, at permeabilisering og inkubation af somatiske celler med oocytekstrakter fra både lavere arter (Xenopus, Drosophila) og pattedyr (mus, svin) fremkalder deres omprogrammering, hvilket fremgår af ekspressionen af pluripotensmarkører. Denne type undersøgelse kræver imidlertid også, at der anvendes et meget stort antal oocytter, hvilket ikke er praktisk muligt med prøver af human oprindelse. Vi foreslår, at der anvendes en mikrofluid anordning til at generere liposomer fra oocytekstrakter og lede den kontrollerede fusion af individuelle liposomer til somatiske celler. Vores hypotese er, at kontrolleret fusion af en kritisk mængde oocytekstrakt i hver somatiske celle kan fremkalde dens effektive omprogrammering. Den epigenetiske og transkriptomiske profil af oocytbehandlede celler skal sammenlignes med somatiske celleprofiler behandlet med liposomer uden det tilsvarende ekstrakt, ESC'er og iPSC'er. Vi foreslår at optimere dette system ved hjælp af museceller og derefter omprogrammere celler af menneskelig oprindelse med homologe oocytter. En vellykket gennemførelse af denne platform vil give os mulighed for at generere stamceller af menneskelig oprindelse og den hidtil usete mulighed for at undersøge de oocytfaktorer, der er ansvarlige for omprogrammering. (Danish)
18 August 2022
0 references
Vaikka indusoituneiden pluripotiaalisolujen (iPSC) luominen on suhteellisen helppoa, sen geneettiset poikkeamat ja onkogeeninen potentiaali rajoittavat sen käyttöä regeneratiivisessa lääketieteessä. Toisaalta alkion kantasolujen syntyminen ydinsiirtojen (NSTS) avulla on erittäin tehotonta, edellyttää suurta määrää laadukkaita munasoluja ja liittyy ihmisissä eettisiin ja logistisiin rajoituksiin. Vaihtoehtoisesti useat tutkimukset ovat osoittaneet, että somaattisten solujen permeabilisointi ja inkubointi munasoluuutteilla sekä alalajeista (Xenopus, Drosophila) että nisäkkäistä (hiiri, sika) saavat aikaan niiden uudelleenohjelmointia, mistä on osoituksena pluripotenssimerkkiaineiden ilmentyminen. Tämäntyyppinen tutkimus edellyttää kuitenkin myös erittäin suuren määrän munasoluja, jotka eivät ole käytännössä mahdollisia ihmisperäisten näytteiden kanssa. Ehdotamme mikrofluidilaitteen käyttöä liposomien tuottamiseksi munasoluuutteista ja yksittäisten liposomien hallitun fuusion ohjaamiseksi somaattisiin soluihin. Meidän hypoteesi on, että hallittu fuusio kriittisen määrän munasolun uutetta jokaiseen somaattiseen soluun voi aiheuttaa sen tehokas uudelleenohjelmointi. Munasoluilla käsiteltyjen solujen epigeneettistä ja transkrimaattista profiilia on verrattava somaattisiin soluprofiileihin, jotka on käsitelty liposomilla ilman vastaavaa uutetta, ESC- ja iPSC-yhdisteitä. Ehdotamme tämän järjestelmän optimointia hiiren soluilla ja sitten ihmisperäisten solujen uudelleenohjelmoimista homologisilla munasoluilla. Tämän foorumin onnistunut käyttöönotto antaa meille mahdollisuuden tuottaa ihmisperäisiä kantasoluja ja ennennäkemätön mahdollisuus tutkia uudelleenohjelmointiin johtaneita munasolutekijöitä. (Finnish)
18 August 2022
0 references
Għalkemm huwa relattivament faċli li jiġu ġġenerati ċelloli pluripotenzjali indotti (iPSCs), l-aberrazzjonijiet ġenetiċi u l-potenzjal onkoġeniku tiegħu jillimitaw l-użu tiegħu fil-mediċina riġenerattiva. Min-naħa l-oħra, il-ġenerazzjoni ta’ ċelloli staminali embrijoniċi (ESCs) permezz tat-trasferiment nukleari (NSTS) hija ineffiċjenti ħafna, teħtieġ għadd kbir ta’ ooċiti ta’ kwalità tajba u, fil-bnedmin, hija assoċjata ma’ limitazzjonijiet etiċi u loġistiċi. Alternattivament, diversi studji wrew li l-permeabilizzazzjoni u l-inkubazzjoni ta’ ċelloli somatiċi b’estratti tal-ooċiti kemm minn speċijiet aktar baxxi (Xenopus, Drosophila) kif ukoll minn mammiferi (ġurdien, majjali) jinduċu l-ipprogrammar mill-ġdid tagħhom evidenzjat mill-espressjoni ta’ markaturi pluripotenzali. Madankollu, dan it-tip ta’ studju jeħtieġ ukoll l-użu ta’ għadd kbir ħafna ta’ ooċiti, peress li mhuwiex prattikabbli b’kampjuni ta’ oriġini umana. Aħna nipproponu l-użu ta’ apparat mikrofluidiku biex jiġġenera liposomi minn estratti tal-ooċiti u jidderieġi l-fużjoni kkontrollata ta’ liposomi individwali għal ċelloli somatiċi. Ipoteżi tagħna hija li l-fużjoni kkontrollata ta ‘volum kritiku ta’ estratt tal-ooċiti f’kull ċellula somatika tista ‘tinduċi r-riprogrammar effiċjenti tagħha. Il-profil epiġenetiku u traskristomiku taċ-ċelloli ttrattati bl-ooċiti għandu jitqabbel mal-profili taċ-ċelloli somatiċi ttrattati bil-liposomi mingħajr l-estratt korrispondenti, l-ESCs u l-iPSCs. Aħna nipproponu li din is-sistema tiġi ottimizzata bl-użu ta’ ċelloli tal-ġurdien u mbagħad nirripprogrammaw iċ-ċelloli ta’ oriġini umana b’ooċiti omologi. L-implimentazzjoni b’suċċess ta’ din il-pjattaforma se tippermettilna niġġeneraw ċelloli staminali ta’ oriġini umana u l-opportunità bla preċedent li nistudjaw il-fatturi tal-ooċiti responsabbli għar-riprogrammazzjoni. (Maltese)
18 August 2022
0 references
Lai gan to ir salīdzinoši viegli radīt inducētās pluripotenciālās šūnas (iPSC), tās ģenētiskās aberācijas un onkogēnais potenciāls ierobežo tā izmantošanu reģeneratīvajā medicīnā. No otras puses, embriju cilmes šūnu (ESC) ģenerēšana, izmantojot kodola pārnesi (NSTS), ir ļoti neefektīva, prasa lielu skaitu labas kvalitātes oocītu un cilvēkiem ir saistīta ar ētiskiem un loģistikas ierobežojumiem. Alternatīvi, vairākos pētījumos pierādīts, ka somatisko šūnu permeabilizācija un inkubācija ar oocītu ekstraktiem no zemākām sugām (Xenopus, Drosophila) un zīdītājiem (peles, cūkas) izraisa to pārprogrammēšanu, ko apliecina pluripotences marķieru ekspresija. Tomēr šāda veida izpēte prasa arī ļoti lielu skaitu oocītu, kas nav praktiski iespējams ar cilvēka izcelsmes paraugiem. Mēs ierosinām izmantot mikrofluidisku ierīci, lai radītu liposomas no oocītu ekstraktiem un virzītu atsevišķu liposomu kontrolētu saplūšanu somatiskajās šūnās. Mūsu hipotēze ir tāda, ka kontrolēta oocītu ekstrakta kritiskā tilpuma saplūšana katrā somatiskā šūnā var izraisīt tā efektīvu pārprogrammēšanu. Oocītu šūnu epiģenētisko un transkriptomisko profilu salīdzina ar somatisko šūnu profiliem, kas apstrādāti ar liposomām bez atbilstošā ekstrakta, ESC un iPSC. Mēs ierosinām optimizēt šo sistēmu, izmantojot peles šūnas un pēc tam pārprogrammēt cilvēka izcelsmes šūnas ar homologiem oocītiem. Šīs platformas veiksmīga īstenošana ļaus mums radīt cilvēka izcelsmes cilmes šūnas un bezprecedenta iespēju pētīt oocītu faktorus, kas ir atbildīgi par pārprogrammēšanu. (Latvian)
18 August 2022
0 references
Hoci je relatívne jednoduché vytvárať indukované pluripotentiálne bunky (iPSC), ich genetické aberácie a onkogénny potenciál obmedzujú jeho použitie v regeneratívnej medicíne. Na druhej strane je tvorba embryonálnych kmeňových buniek (ESC) prostredníctvom jadrového prenosu (NSTS) veľmi neefektívna, vyžaduje si veľké množstvo kvalitných oocytov a u ľudí je spojená s etickými a logistickými obmedzeniami. Alternatívne sa vo viacerých štúdiách preukázalo, že permeabilizácia a inkubácia somatických buniek výťažkami z oocytov z nižších druhov (Xenopus, Drosophila) aj cicavcov (myš, ošípané) indukujú ich preprogramovanie doložené expresiou markerov pluripotencie. Tento typ štúdie si však vyžaduje aj použitie veľmi vysokého počtu oocytov, ktoré sú neuskutočniteľné so vzorkami ľudského pôvodu. Navrhujeme použitie mikrofluidného zariadenia na tvorbu lipozómov z oocytových extraktov a nasmerovanie riadenej fúzie jednotlivých lipozómov na somatické bunky. Naša hypotéza je, že riadená fúzia kritického objemu extraktu z oocytov do každej somatickej bunky môže vyvolať jeho efektívne preprogramovanie. Epigenetický a transkriptomický profil buniek ošetrených oocytmi sa porovnáva s somatickými bunkovými profilmi ošetrenými lipozómmi bez zodpovedajúceho extraktu, ESC a iPSC. Navrhujeme optimalizovať tento systém pomocou myších buniek a potom preprogramovať bunky ľudského pôvodu homológnymi oocytmi. Úspešná implementácia tejto platformy nám umožní vytvárať kmeňové bunky ľudského pôvodu a bezprecedentnú príležitosť študovať faktory oocytov zodpovedné za preprogramovanie. (Slovak)
18 August 2022
0 references
Cé go bhfuil sé sách éasca cealla pluripotential spreagtha (iPSCanna) a ghiniúint, a smionagar géiniteach agus a acmhainneacht oncogenic a úsáid i leigheas athghiniúnach a theorannú. Ar an taobh eile, tá giniúint gascheall suthacha (ESCs) trí aistriú núicléach (NSTS) an-neamhéifeachtúil, éilíonn sé líon mór úicítí ar ardchaighdeán agus, i ndaoine, tá baint aige le teorainneacha eiticiúla agus lóistíochta. De rogha air sin, léirigh roinnt staidéar go spreagann tréscaoilteacht agus gor cealla sómacha le heastóscáin oocyte ón dá speiceas níos ísle (Xenopus, Drosophila) agus ó mhamaigh (múiche, muc) a n-athchlárú a léiríonn léiriú marcóirí pluripotence. Mar sin féin, éilíonn an cineál seo staidéir freisin go n-úsáidfear líon an-ard úicítí, agus é neamhphraiticiúil le samplaí de bhunús daonna. Molaimid úsáid a bhaint as gléas micreafluairídeach chun liposomes a ghiniúint ó eastóscáin oocyte agus chun comhleá rialaithe liposomes aonair a dhíriú ar chealla sómacha. Is é ár hipitéis gur féidir leis an comhleá rialaithe de thoirt chriticiúil de sliocht oocyte isteach i ngach cill somatic induce a reprogramming éifeachtach. Déanfar próifíl eipigineach agus tras-scríbhinne na gceall atá cóireáilte le húicít a chur i gcomparáid le próifílí ceall sómach a chóireáiltear le liposomes gan an t-eastóscán comhfhreagrach, ESCanna agus iPSCanna. Molaimid an córas seo a bharrfheabhsú trí úsáid a bhaint as luchchealla agus ansin cealla de bhunús daonna a athchlárú le húicítí homalógacha. Cuirfidh cur chun feidhme rathúil an ardáin seo ar ár gcumas gaschealla de bhunús daonna a ghiniúint agus an deis gan fasach chun staidéar a dhéanamh ar na tosca oocyte atá freagrach as athchlárú. (Irish)
18 August 2022
0 references
I když je poměrně snadné vytvářet indukované pluripotenciální buňky (iPSC), jeho genetické aberace a onkogenní potenciál omezují jeho použití v regenerativní medicíně. Na druhé straně je tvorba embryonálních kmenových buněk (ESC) prostřednictvím jaderného přenosu (NSTS) velmi neefektivní, vyžaduje velké množství kvalitních oocytů a u lidí je spojena s etickými a logistickými omezeními. Alternativně několik studií prokázalo, že permeabilizace a inkubace somatických buněk pomocí extraktů z oocytů jak z nižších druhů (Xenopus, Drosophila), tak ze savců (myš, prase) indukují jejich přeprogramování doložené expresí markerů pluripotence. Tento typ studie však také vyžaduje použití velmi vysokého počtu oocytů, které nejsou proveditelné se vzorky lidského původu. Navrhujeme použití mikrofluidického zařízení k generování lipozomů z oocytových extraktů a nasměrování řízené fúze jednotlivých lipozomů do somatických buněk. Naší hypotézou je, že řízená fúze kritického objemu extraktu z oocytů do každé somatické buňky může vyvolat její efektivní přeprogramování. Epigenetický a transkriptomický profil buněk léčených oocyty se porovná se somatickými buněčnými profily ošetřenými lipozomy bez odpovídajícího extraktu, ESC a iPSC. Navrhujeme optimalizovat tento systém pomocí myších buněk a poté přeprogramovat buňky lidského původu homologními oocyty. Úspěšná implementace této platformy nám umožní vytvářet kmenové buňky lidského původu a nebývalou příležitost studovat faktory oocytů odpovědné za přeprogramování. (Czech)
18 August 2022
0 references
Embora seja relativamente fácil de gerar células pluripotenciais induzidas (iPSCs), suas aberrações genéticas e potencial oncogênico limitam seu uso na medicina regenerativa. Por outro lado, a geração de células estaminais embrionárias (ESCs) através da transferência nuclear (NSTS) é muito ineficiente, requer um grande número de oócitos de boa qualidade e, em humanos, está associada a limitações éticas e logísticas. Alternativamente, vários estudos mostraram que a permeabilização e incubação de células somáticas com extratos de oócitos de ambas as espécies inferiores (Xenopus, Drosophila) e mamíferos (ratinho, porco) induzem sua reprogramação evidenciada pela expressão de marcadores de pluripotência. No entanto, esse tipo de estudo também requer o uso de um número muito elevado de oócitos, sendo impraticável com amostras de origem humana. Propomos o uso de um dispositivo microfluídico para gerar lipossomas a partir de extratos de oócitos e direcionar a fusão controlada de lipossomas individuais para células somáticas. Nossa hipótese é que a fusão controlada de um volume crítico de extrato de oócitos em cada célula somática pode induzir sua eficiente reprogramação. O perfil epigenético e transcriptômico das células tratadas com oócitos deve ser comparado com os perfis de células somáticas tratados com lipossomas sem o respetivo extrato, ESC e iPSC. Propomos otimizar este sistema utilizando células de ratos e, em seguida, reprogramar células de origem humana com oócitos homólogos. A implementação bem sucedida desta plataforma nos permitirá gerar células-tronco de origem humana e a oportunidade sem precedentes de estudar os fatores oócitos responsáveis pela reprogramação. (Portuguese)
18 August 2022
0 references
Kuigi indutseeritud pluripotentsiaalseid rakke (iPSC) on suhteliselt lihtne genereerida, piiravad selle geneetilised aberratsioonid ja onkogeense potentsiaali kasutamine regeneratiivses meditsiinis. Teisest küljest on embrüonaalsete tüvirakkude loomine tuumasiirde teel väga ebatõhus, nõuab suurt hulka kvaliteetseid ootsüüte ning on inimestel seotud eetiliste ja logistiliste piirangutega. Teise võimalusena on mitmed uuringud näidanud, et somaatiliste rakkude permeabiliseerimine ja inkubeerimine nii madalamate liikide (Xenopus, Drosophila) kui ka imetajate (hiired, sead) ootsüütide ekstraktidega põhjustavad nende ümberprogrammeerimist, mida tõendab pluripotentse markerite ekspressioon. Kuid seda tüüpi uuring nõuab ka väga suure hulga ootsüütide kasutamist, mis on inimpäritolu proovide puhul teostamatu. Teeme ettepaneku kasutada mikrofluidset seadet, et luua liposoomid ootsüütide ekstraktidest ja suunata üksikute liposoomide kontrollitud sulatamine somaatilistesse rakkudesse. Meie hüpotees on, et kriitilise koguse ootsüütide ekstrakti kontrollitud liitmine igasse somaatilisesse rakusse võib esile kutsuda selle efektiivse ümberprogrammeerimise. Ootsüütidega töödeldud rakkude epigeneetiline ja transkriptoomne profiil võrreldakse liposoomidega töödeldud somaatiliste rakkude profiilidega ilma vastava ekstrakti, ESC ja iPSCdeta. Teeme ettepaneku optimeerida seda süsteemi hiirerakke kasutades ja seejärel ümber programmeerida inimpäritolu rakud homoloogsete ootsüütidega. Selle platvormi edukas rakendamine võimaldab meil luua inimpäritolu tüvirakke ja enneolematut võimalust uurida ümberprogrammeerimise eest vastutavaid ootsüütilisi tegureid. (Estonian)
18 August 2022
0 references
Bár viszonylag könnyű indukált pluripotenciális sejteket (iPSC-ket) előállítani, genetikai rendellenességei és onkogén potenciálja korlátozza a regeneratív gyógyszerekben való alkalmazását. Másrészt az embrionális őssejtek (ESC-k) nukleáris átvitelen (NSTS) keresztül történő generálása nagyon nem hatékony, számos jó minőségű petesejtet igényel, és az emberekben etikai és logisztikai korlátokkal jár. Másik lehetőségként több vizsgálat is kimutatta, hogy a szomatikus sejtek permeabilizációja és inkubálása mind az alsóbbrendű fajokból (Xenopus, Drosophila), mind az emlősökből (egér, sertés) származó oocytakivonatokkal a pluripotencia markerek kifejeződésével igazolt átprogramozást idézi elő. Az ilyen típusú vizsgálatok azonban nagyon nagy számú petesejt használatát is megkövetelik, amelyek emberi eredetű mintákkal kivitelezhetetlenek. Mikrofluidikus eszköz használatát javasoljuk a petesejtkivonatokból származó liposzómák előállítására és az egyes liposzómák szabályozott fúziójának szomatikus sejtekre történő irányítására. A feltételezésünk az, hogy egy kritikus mennyiségű oocyta kivonat szabályozott fúziója minden egyes szomatikus sejtbe kiválthatja annak hatékony újraprogramozását. A petesejtekkel kezelt sejtek epigenetikai és transzkriptomikus profilját össze kell hasonlítani a megfelelő kivonat, ESC és iPSC nélkül kezelt liposzómákkal kezelt szomatikus sejtprofilokkal. Javasoljuk, hogy optimalizáljuk ezt a rendszert egérsejtekkel, majd újraprogramozzuk az emberi eredetű sejteket homológ petesejtekkel. A platform sikeres végrehajtása lehetővé teszi számunkra, hogy emberi eredetű őssejteket termeljünk, és példátlan lehetőséget biztosítunk az átprogramozásért felelős oocita tényezők tanulmányozására. (Hungarian)
18 August 2022
0 references
Въпреки че е сравнително лесно да се генерират индуцирани плурипотенциални клетки (iPSCs), неговите генетични аберации и онкогенен потенциал ограничават употребата му в регенеративната медицина. От друга страна, генерирането на ембрионални стволови клетки чрез ядрен трансфер (NSTS) е много неефективно, изисква голям брой овоцити с добро качество и при хората е свързано с етични и логистични ограничения. Като алтернатива, няколко проучвания показват, че пермеабилизацията и инкубацията на соматични клетки с екстракти от овоцити от двата вида (Xenopus, Drosophila) и бозайници (мишка, прасе) предизвикват тяхното препрограмиране, доказано от експресията на маркерите за плурипотентност. Този вид изследване обаче изисква и използването на много голям брой овоцити, което е практически неосъществимо с проби от човешки произход. Предлагаме използването на микрофлуидно устройство за генериране на липозоми от овоцитни екстракти и насочване на контролираното сливане на отделни липозоми към соматични клетки. Нашата хипотеза е, че контролираното сливане на критичен обем овоцитен екстракт във всяка соматична клетка може да предизвика ефективното му препрограмиране. Епигенетичният и транскриптомният профил на третираните с овоцити клетки се сравняват със соматични клетъчни профили, третирани с липозоми без съответния екстракт, ESC и iPSC. Ние предлагаме да се оптимизира тази система с помощта на мишки клетки и след това препрограмиране на клетки от човешки произход с хомоложни овоцити. Успешното прилагане на тази платформа ще ни позволи да генерираме стволови клетки от човешки произход и безпрецедентната възможност да проучим овоцитните фактори, отговорни за препрограмирането. (Bulgarian)
18 August 2022
0 references
Nors tai yra gana lengva generuoti sukeltas pluripotentines ląsteles (iPSC), jos genetinės aberacijos ir onkogeninis potencialas riboja jo naudojimą regeneracinėje medicinoje. Kita vertus, embrioninių kamieninių ląstelių (ESK) generavimas branduolinį perdavimą (NSTS) yra labai neveiksmingas, reikalauja daug geros kokybės oocitų ir, kalbant apie žmones, yra susijęs su etiniais ir logistiniais apribojimais. Be to, keletas tyrimų parodė, kad somatinių ląstelių prasiskverbimas ir inkubavimas naudojant apatinių rūšių (Xenopus, Drosophila) ir žinduolių (pelės, kiaulės) oocitų ekstraktus sukelia jų perprogramavimą, kurį rodo pluripotence žymenų išraiška. Tačiau tokio tipo tyrimams taip pat reikia naudoti labai daug oocitų, o tai neįmanoma su žmogaus kilmės mėginiais. Siūlome naudoti mikrofluidinį prietaisą liposomoms generuoti iš oocitų ekstraktų ir nukreipti kontroliuojamą atskirų liposomų sintezę į somatines ląsteles. Mūsų hipotezė yra ta, kad kontroliuojamas kritinio tūrio oocitų ekstrakto suliejimas į kiekvieną somatinę ląstelę gali sukelti veiksmingą jo perprogramavimą. Oocitais apdorotų ląstelių epigenetinis ir transkriptominis profilis palyginamas su somatinių ląstelių profiliais, apdorotais liposomomis be atitinkamo ekstrakto, ESK ir iPSC. Siūlome optimizuoti šią sistemą naudojant pelės ląsteles ir tada perprogramuoti žmogaus kilmės ląsteles homologiniais oocitais. Sėkmingas šios platformos įgyvendinimas leis mums generuoti žmogaus kilmės kamienines ląsteles ir beprecedentę galimybę ištirti oocitų veiksnius, kurie yra atsakingi už perprogramavimą. (Lithuanian)
18 August 2022
0 references
Iako je relativno lako generirati inducirane pluripotencijalne stanice (iPSC), njegove genetske aberacije i onkogeni potencijal ograničavaju njegovu uporabu u regenerativnoj medicini. S druge strane, stvaranje embrionalnih matičnih stanica putem nuklearnog prijenosa (NSTS) vrlo je neučinkovito, zahtijeva velik broj kvalitetnih jajnih stanica i u ljudi je povezano s etičkim i logističkim ograničenjima. Alternativno, nekoliko je studija pokazalo da permeabilizacija i inkubacija somatskih stanica ekstraktima oocita iz obje niže vrste (Xenopus, Drosophila) i sisavaca (miša, svinja) potiču njihovo reprogramiranje o čemu svjedoči izražavanje markera pluripotence. Međutim, ova vrsta studije također zahtijeva korištenje vrlo velikog broja jajnih stanica, što je neizvedivo s uzorcima ljudskog podrijetla. Predlažemo korištenje mikrofluidnog uređaja za stvaranje liposoma iz ekstrakta oocita i usmjeravanje kontrolirane fuzije pojedinih liposoma na somatske stanice. Naša pretpostavka je da kontrolirana fuzija kritičnog volumena ekstrakta jajnih stanica u svaku somatsku stanicu može izazvati učinkovito reprogramiranje. Epigenetski i transkriptomski profil stanica liječenih jajnim stanicama uspoređuje se s profilima somatskih stanica liječenih liposomima bez odgovarajućeg ekstrakta, ESC-a i iPSC-a. Predlažemo optimizaciju ovog sustava korištenjem mišjih stanica, a zatim reprogramiranje stanica ljudskog podrijetla homolognim jajnim stanicama. Uspješna provedba ove platforme omogućit će nam stvaranje matičnih stanica ljudskog podrijetla i nezabilježenu priliku za proučavanje čimbenika oocita odgovornih za reprogramiranje. (Croatian)
18 August 2022
0 references
Även om det är relativt lätt att generera inducerade pluripotentialceller (iPSC), begränsar dess genetiska avvikelser och onkogena potential dess användning i regenerativ medicin. Å andra sidan är produktionen av embryonala stamceller genom kärnöverföring (NSTS) mycket ineffektiv, kräver ett stort antal oocyter av god kvalitet och är förknippat med etiska och logistiska begränsningar hos människor. Alternativt har flera studier visat att permeabilisering och inkubation av somatiska celler med oocytextrakt från både lägre arter (Xenopus, Drosophila) och däggdjur (mus, gris) inducerar deras omprogrammering, vilket framgår av uttryck av pluripotensmarkörer. Denna typ av undersökning kräver dock också användning av ett mycket stort antal oocyter, vilket är ogenomförbart med prover av mänskligt ursprung. Vi föreslår användning av en mikrofluidisk apparat för att generera liposomer från oocytextrakt och styra den kontrollerade fusionen av enskilda liposomer till somatiska celler. Vår hypotes är att den kontrollerade fusionen av en kritisk volym oocytextrakt i varje somatisk cell kan framkalla dess effektiva omprogrammering. Den epigenetiska och transkriptomiska profilen för oocytbehandlade celler ska jämföras med somatiska cellprofiler som behandlats med liposomer utan motsvarande extrakt, ESC och iPSC. Vi föreslår att detta system optimeras med hjälp av musceller och sedan omprogrammeras celler av mänskligt ursprung med homologa oocyter. Ett framgångsrikt genomförande av denna plattform kommer att göra det möjligt för oss att generera stamceller av mänskligt ursprung och den aldrig tidigare skådade möjligheten att studera de oocytfaktorer som är ansvariga för omprogrammering. (Swedish)
18 August 2022
0 references
Deși este relativ ușor să se genereze celule pluripotențiale induse (ICSP), aberațiile genetice și potențialul oncogenic limitează utilizarea sa în medicina regenerativă. Pe de altă parte, generarea de celule stem embrionare (ESC) prin transfer nuclear (NSTS) este foarte ineficientă, necesită un număr mare de oocite de bună calitate și, la om, este asociată cu limitări etice și logistice. Alternativ, mai multe studii au arătat că permeabilizarea și incubarea celulelor somatice cu extracte de ovocit atât de la speciile inferioare (Xenopus, Drosophila), cât și de la mamifere (șoarece, porc) induc reprogramarea acestora evidențiată prin exprimarea markerilor de pluripotență. Cu toate acestea, acest tip de studiu necesită, de asemenea, utilizarea unui număr foarte mare de oocite, fiind imposibil de realizat cu probe de origine umană. Propunem utilizarea unui dispozitiv microfluidic pentru a genera lipozomi din extractele de oocite și pentru a direcționa fuziunea controlată a lipozomilor individuali către celulele somatice. Ipoteza noastră este că fuziunea controlată a unui volum critic de extract de ovocit în fiecare celulă somatică poate induce reprogramarea eficientă a acesteia. Profilul epigenetic și transcripțional al celulelor tratate cu oocite se compară cu profilurile celulare somatice tratate cu lipozomi fără extractul corespunzător, CES și IPSC. Ne propunem să optimizăm acest sistem folosind celule de șoarece și apoi reprogramăm celule de origine umană cu ovocite omoloage. Implementarea cu succes a acestei platforme ne va permite să generăm celule stem de origine umană și oportunitatea fără precedent de a studia factorii oocite responsabili de reprogramare. (Romanian)
18 August 2022
0 references
Čeprav je razmeroma enostavno ustvariti inducirane pluripotencialne celice (iPSC), njegove genetske aberacije in onkogeni potencial omejujejo njegovo uporabo v regenerativni medicini. Po drugi strani pa je nastajanje embrionalnih matičnih celic (ESC) z jedrskim prenosom (NSTS) zelo neučinkovito, zahteva veliko število kakovostnih jajčnih celic in je pri ljudeh povezano z etičnimi in logističnimi omejitvami. Iz več študij je razvidno, da permeabilizacija in inkubacija somatskih celic z izvlečki oocitov obeh nižjih vrst (Xenopus, Drosophila) in sesalcev (miš, prašič) povzročita njihovo reprogramiranje, kar dokazuje izražanje pluripotence označevalcev. Vendar pa ta vrsta študije zahteva tudi uporabo zelo velikega števila jajčnih celic, ki jih vzorci človeškega izvora niso izvedljivi. Predlagamo uporabo mikrofluidne naprave za ustvarjanje liposomov iz izvlečkov jajčnih celic in usmerjanje nadzorovane fuzije posameznih liposomov v somatske celice. Naša hipoteza je, da nadzorovana fuzija kritičnega volumna ekstrakta oocitov v vsako somatsko celico lahko povzroči njeno učinkovito reprogramiranje. Epigenetski in transkriptomski profil celic, obdelanih z jajčnimi celicami, se primerja s somatskimi celičnimi profili, obdelanimi z liposomi brez ustreznega ekstrakta, ESC in iPSC. Predlagamo optimizacijo tega sistema z uporabo mišjih celic in nato reprogramirati celice človeškega izvora s homolognimi oociti. Uspešno izvajanje te platforme nam bo omogočilo, da ustvarimo izvorne celice človeškega izvora in priložnost brez primere za preučevanje faktorjev oocitov, ki so odgovorni za reprogramiranje. (Slovenian)
18 August 2022
0 references
Chociaż stosunkowo łatwe jest generowanie indukowanych pluripotencjalnych komórek (iPSC), jego aberracje genetyczne i potencjał onkogenny ograniczają jego stosowanie w medycynie regeneracyjnej. Z drugiej strony wytwarzanie embrionalnych komórek macierzystych (ESC) poprzez transfer jądrowy (NSTS) jest bardzo nieskuteczne, wymaga dużej liczby oocytów dobrej jakości, a u ludzi wiąże się z ograniczeniami etycznymi i logistycznymi. Alternatywnie, kilka badań wykazało, że permeabilizacja i inkubacja komórek somatycznych ekstraktami oocytowymi z gatunków niższych (Xenopus, Drosophila) i ssaków (mysz, świnia) powodują ich przeprogramowanie, czego dowodem jest ekspresja markerów pluripotencji. Jednak ten rodzaj badań wymaga również stosowania bardzo dużej liczby oocytów, co jest niewykonalne w przypadku próbek pochodzenia ludzkiego. Proponujemy zastosowanie urządzenia mikrofluidic do generowania liposomów z ekstraktów oocytów i kierowania kontrolowanego fuzji poszczególnych liposomów do komórek somatycznych. Nasza hipoteza jest taka, że kontrolowane połączenie krytycznej objętości ekstraktu oocytu w każdej komórce somatycznej może wywołać skuteczne przeprogramowanie. Profil epigenetyczny i transkryptomiczny komórek poddanych działaniu oocytów należy porównać z profilami komórek somatycznych poddanymi działaniu liposomów bez odpowiedniego ekstraktu, ESC i iPSC. Proponujemy optymalizację tego systemu za pomocą komórek myszy, a następnie przeprogramowanie komórek pochodzenia ludzkiego za pomocą oocytów homologicznych. Udane wdrożenie tej platformy pozwoli nam na generowanie komórek macierzystych pochodzenia ludzkiego oraz bezprecedensową możliwość badania czynników oocytowych odpowiedzialnych za przeprogramowanie. (Polish)
18 August 2022
0 references
Lleida
0 references
Identifiers
PI14_02184
0 references