Modulation of the miR 17-92 cluster as a mechanism to restore specific cytotoxic cell response to antigens associated with hepatocellular carcinoma (Q3202991)
Jump to navigation
Jump to search
Project Q3202991 in Spain
| Language | Label | Description | Also known as |
|---|---|---|---|
| English | Modulation of the miR 17-92 cluster as a mechanism to restore specific cytotoxic cell response to antigens associated with hepatocellular carcinoma |
Project Q3202991 in Spain |
Statements
44,000.0 Euro
0 references
55,000.0 Euro
0 references
80.0 percent
0 references
1 January 2016
0 references
16 December 2018
0 references
SECRETARIA GENERAL DEL SERVICIO DE SALUD DE CASTILLA-LA MANCHA
0 references
40°44'24.00"N, 2°30'21.35"W
0 references
19130
0 references
Objetivos: 1) Cuantificar la frecuencia y capacidad efectora de linfocitos T citotóxicos (LTC) específicos contra antígenos asociados a hepatocarcinoma (AAH) en el compartimento periférico e intrahepático de pacientes con hepatocarcinoma (HC), 2) Analizar el fenotipo asociado a agotamiento y apoptosis en estas células y su relación con la expresión del cluster miR 17-92, 3) Analizar el efecto del bloqueo in-vitro con anti-miR del cluster miR 17-92 sobre la capacidad efectora de LTC específicos contra AAH. Metodología: En pacientes con HC HLA-A2+ se aislaran células mononucleares de sangre periférica (CMSP) e hígado (CMIH). Se cuantificará la frecuencia de LTC-AAH específicos (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) y LTC-citomegalovirus (CMV) específicos (pp65 495-504) [Grupo control], mediante marcaje de CMSP y CMIH con complejos multiméricos HLA-A2/epítopo y anticuerpos anti-CD8. Se utilizará la técnica TAME ( Tetramer associated magnetic enrichment ) que permite detectar células con frecuencia>10-7 respecto al total de CMSP. En estas células se analizará el fenotipo asociado a agotamiento (CD127, PD-1, TRAF1), apoptosis (Mcl-1, Bim) y se evaluarán las capacidades efectoras (proliferación antígeno específica, producción de interferón-? y citotoxicidad (CD107a)). Estos análisis se realizaran mediante citometría de flujo. Mediante técnica de sorting se aislaran LTC-AAH específicos para obtener su RNA y tras retro-transcripción a cDNA, se amplificará el cluster miR 17-92. Se corelacionará la expresión del cluster miR 17-92 con el fenotipo de agotamiento y apoptosis. En caso de observarse una corelación positiva entre estos fenotipos y el cluster miR 17-92, se bloqueará in-vitro el cluster miR 17-92 con anti-miR apropiados para restaurar la actividad efectora de los LTC-AAH específicos. (Spanish)
0 references
Objectives: 1) Quantify the frequency and effector capacity of specific cytotoxic T-lymphocytes (TCL) against hepatocarcinoma-associated antigens (AAH) in the peripheral and intrahepatic compartment of patients with hepatocarcinoma (HC), 2) Analyse the phenotype associated with depletion and apoptosis in these cells and its relationship with the expression of cluster miR 17-92, 3) Analyse the effect of in-vitro block with anti-miR cluster miR 17-92 on the effect of specific LTC-specific AAH. Methodology: In patients with HC HLA-A2+, peripheral blood mononuclear cells (CMSP) and liver (MIHC) are isolated. The frequency of specific LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) and specific LTC-cytomegalovirus (CMV) (pp65 495-504) [Control group] shall be quantified by marking of CMSP and HMIH with multimeric HLA-A2/epitope complexes and anti-CD8 antibodies. The TAME (Tetramer associated magnetic enrichment) technique will be used to detect cells frequently >10-7 compared to the total CMSP. These cells will analyse the phenotype associated with exhaustion (CD127, PD-1, TRAF1), apoptosis (Mcl-1, Bim) and evaluate the effector capacities (specific antigen proliferation, interferon-? production and cytotoxicity (CD107a)). These analyses will be performed by flow cytometry. By sorting technique specific LTC-AAHs are isolated to obtain their RNA and after retro-transcription to cDNA, the miR 17-92 cluster will be amplified. The expression of the miR 17-92 cluster will be choreolated with the phenotype of exhaustion and apoptosis. In case a positive chorelation is observed between these phenotypes and the miR 17-92 cluster, the miR 17-92 cluster with appropriate anti-miR to restore effector activity of specific LTC-AAHs will be blocked in-vitro. (English)
13 October 2021
0 references
Objectifs: 1) Quantifier la fréquence et la capacité effectrice des lymphocytes T cytotoxiques spécifiques (TCL) contre les antigènes associés à l’hépatocarcinome (AAH) dans le compartiment périphérique et intra-hépatique des patients atteints d’hépatocarcinome (HC), 2) Analyser le phénotype associé à la déplétion et à l’apoptose dans ces cellules et sa relation avec l’expression du cluster miR 17-92, 3) Analyser l’effet du bloc in vitro avec un cluster anti-miR miR 17-92 sur l’effet d’AHAH spécifique au LTC. Méthodologie: Chez les patients atteints de HC HLA-A2+, les cellules mononucléaires du sang périphérique (CMSP) et le foie (MIHC) sont isolés. La fréquence des LTC-AAH spécifiques (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) et des LTC-cytomegalovirus spécifiques (CMV) (pp65 495-504) [groupe de contrôle] doit être quantifiée par marquage du CMSP et du HMIH avec des complexes multimériques HLA-A2/épitope et des anticorps anti-CD8. La technique TAME (enrichissement magnétique associé au tétramère) sera utilisée pour détecter les cellules fréquemment >10-7 par rapport au CMSP total. Ces cellules analyseront le phénotype associé à l’épuisement (CD127, PD-1, TRAF1), à l’apoptose (Mcl-1, Bim) et évalueront les capacités effectrices (prolifération spécifique des antigènes, production d’interféron-? et cytotoxicité (CD107a)). Ces analyses seront effectuées par cytométrie de flux. Par la technique de tri, des LTC-aahs spécifiques sont isolés pour obtenir leur ARN et après la rétrotranscription vers l’ADNc, la grappe miR 17-92 sera amplifiée. L’expression de l’amas miR 17-92 sera choréolée par le phénotype de l’épuisement et de l’apoptose. Dans le cas où une chorélation positive est observée entre ces phénotypes et le groupe miR 17-92, le groupe miR 17-92 avec anti-miR approprié pour restaurer l’activité effectrice de certains LTC-aahs sera bloqué in-vitro. (French)
5 December 2021
0 references
Ziele: 1) Quantifizieren Sie die Häufigkeit und Wirksamkeit bestimmter zytotoxischer T-Lymphozyten (TCL) gegen Hepatokarzinom-assoziierte Antigene (AAH) im peripheren und intrahepatischen Kompartiment von Patienten mit Hepatokarzinom (HC), 2) Analysieren Sie den Phenotyp, der mit Erschöpfung und Apoptose in diesen Zellen verbunden ist, und deren Beziehung mit der Expression von Cluster miR 17-92, 3) Analyse der Wirkung von In-vitro-Block mit AntimiR-Cluster miR 17-92 auf die Wirkung spezifischer LTC-spezifischer AAH. Methodik: Bei Patienten mit HC HLA-A2+ werden periphere mononukleare Blutzellen (CMSP) und Leber (MIHC) isoliert. Die Häufigkeit spezifischer LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) und des spezifischen LTC-Cytomegalovirus (CMV) (pp65 495-504) [Kontrollgruppe] wird durch Kennzeichnung von CMSP und HMIH mit multimeren HLA-A2/epitop-Komplexen und Anti-CD8-Antikörpern quantifiziert. Die TAME (Tetramer-assoziierte magnetische Anreicherung) wird verwendet, um Zellen häufig >10-7 im Vergleich zum gesamten CMSP zu erkennen. Diese Zellen analysieren den mit Erschöpfung verbundenen Phänotyp (CD127, PD-1, TRAF1), Apoptose (Mcl-1, Bim) und bewerten die Effektorkapazitäten (spezifische Antigenproliferation, Interferon-Produktion und Zytotoxizität (CD107a)). Diese Analysen werden mittels Durchflusszytometrie durchgeführt. Durch Sortierungstechnik werden spezifische LTC-Aahs isoliert, um ihre RNA zu erhalten, und nach der Retro-Transkription auf cDNA wird der miR 17-92-Cluster verstärkt. Der Ausdruck des Clusters miR 17-92 wird mit dem Phänotyp von Erschöpfung und Apoptose erstickt. Wird eine positive chorelation zwischen diesen Phänotypen und dem miR 17-92-Cluster beobachtet, wird der miR 17-92-Cluster mit geeigneter Anti-miR zur Wiederherstellung der Effektoraktivität bestimmter LTC-Aahs in vitro blockiert. (German)
9 December 2021
0 references
Doelstellingen: 1) Kwantificeer de frequentie en effectorcapaciteit van specifieke cytotoxische T-lymfocyten (TCL) tegen hepatocarcinoom-geassocieerde antigenen (AAH) in het perifere en intrahepatische compartiment van patiënten met hepatocarcinoom (HC), 2) Analyseer het fenotype geassocieerd met depletie en apoptose in deze cellen en zijn relatie met de expressie van cluster miR 17-92, 3) Analyseer het effect van in-vitroblok met anti-miR cluster miR 17-92 op het effect van specifieke LTC-specifieke AAH. Methodologie: Bij patiënten met HC HLA-A2+ worden perifere mononucleaire bloedcellen (CMSP) en lever (MIHC) geïsoleerd. De frequentie van specifieke LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) en specifiek LTC-cytomegalovirus (CMV) (pp65 495-504) [controlegroep] wordt gekwantificeerd door CMSP en HMIH te markeren met multimeer HLA-A2/epitope complexen en anti-CD8 antilichamen. De TAME (tetrameer geassocieerde magnetische verrijking) techniek zal worden gebruikt om cellen vaak >10-7 te detecteren in vergelijking met de totale CMSP. Deze cellen analyseren het fenotype geassocieerd met uitputting (CD127, PD-1, TRAF1), apoptose (Mcl-1, Bim) en evalueren de effectorcapaciteiten (specifieke antigeenproliferatie, interferon-? productie en cytotoxiciteit (CD107a)). Deze analyses zullen worden uitgevoerd door flow cytometrie. Door het sorteren van techniek specifieke LTC-aahs worden geïsoleerd om hun RNA te verkrijgen en na retro-transcriptie aan cDNA, zal de miR 17-92 cluster worden versterkt. De expressie van de miR 17-92 cluster zal worden gechoreoleerd met het fenotype van uitputting en apoptose. Als er een positieve chorelatie wordt waargenomen tussen deze fenotypen en de miR 17-92 cluster, zal het miR 17-92 cluster met passende anti-miR om effectoractiviteit van specifieke LTC-aahs te herstellen in-vitro worden geblokkeerd. (Dutch)
17 December 2021
0 references
Obiettivi: 1) Quantificare la frequenza e la capacità dell'effetto dei linfociti T citotossici specifici (TCL) contro gli antigeni associati all'epatocarcinoma (AAH) nel compartimento periferico e intraepatico dei pazienti con epatocarcinoma (HC), 2) Analizzare il fenotipo associato con deplezione e apoptosi in queste cellule e la sua relazione con l'espressione del cluster miR 17-92, 3) Analizzare l'effetto del blocco in vitro con il cluster anti-miR miR 17-92 sull'effetto di AAH specifico LTC-specifico. Metodologia: Nei pazienti con HC HLA-A2+, le cellule mononucleari del sangue periferico (CMSP) e del fegato (MIHC) sono isolate. La frequenza di specifici LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) e di specifici LTC-citomegalovirus (CMV) (pp65 495-504) [gruppo di controllo] deve essere quantificata mediante marcatura di CMSP e HMIH con complessi HLA-A2/epitopi multimerici e anticorpi anti-CD8. La tecnica TAME (tetramero associato all'arricchimento magnetico) sarà utilizzata per rilevare frequentemente cellule >10-7 rispetto al CMSP totale. Queste cellule analizzeranno il fenotipo associato all'esaurimento (CD127, PD-1, TRAF1), apoptosi (Mcl-1, Bim) e valuteranno le capacità dell'effettore (proliferazione antigene specifica, produzione di interferone? e citotossicità (CD107a)). Queste analisi saranno effettuate mediante citometria a flusso. Mediante tecnica di smistamento specifici LTC-aahs sono isolati per ottenere il loro RNA e dopo retro-trascrizione a cDNA, il miR 17-92 cluster sarà amplificato. L'espressione del miR 17-92 cluster sarà coreolata con il fenotipo di esaurimento e apoptosi. Nel caso in cui si osservi una corelazione positiva tra questi fenotipi e il cluster miR 17-92, il cluster miR 17-92 con anti-miR appropriato per ripristinare l'attività dell'effettore di specifici LTC-aahs sarà bloccato in-vitro. (Italian)
16 January 2022
0 references
Στόχοι: 1) Προσδιορίστε τη συχνότητα και την ικανότητα αποτελέσματος συγκεκριμένων κυτταροτοξικών Τ-λεμφοκυττάρων (TCL) έναντι των αντιγόνων που σχετίζονται με το ηπατοκαρκίνωμα (AAH) στο περιφερικό και ενδοηπατικό διαμέρισμα των ασθενών με ηπατοκαρκίνωμα (HC), 2) Αναλύστε το φαινότυπο που σχετίζεται με την εξάντληση και την απόπτωση σε αυτά τα κύτταρα και τη σχέση του με την έκφραση του συμπλέγματος miR 17-92, 3) Αναλύστε την επίδραση του in-vitro μπλοκ με το σμήνος miR 17-92 anti-miR στην επίδραση του συγκεκριμένου LTC-ειδικού AAH. Μεθοδολογία: Σε ασθενείς με HC HLA- A2+, τα μονοπυρηνικά κύτταρα του περιφερικού αίματος (CMSP) και το ήπαρ (MIHC) απομονώνονται. Η συχνότητα των ειδικών LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) και του ειδικού LTC-κυτομεγαλοϊού (CMV) (pp65 495-504) [ομάδα ελέγχου] ποσοτικοποιείται με σήμανση των CMSP και HMIH με πολυμερή σύμπλοκα HLA-A2/επιτόπου και αντισώματα αντι-CD8. Η τεχνική TAME (συνδεόμενος με το τετραμερές μαγνητικό εμπλουτισμό) θα χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση των κυττάρων συχνά > 10-7 σε σύγκριση με το συνολικό CMSP. Τα κύτταρα αυτά θα αναλύσουν τον φαινότυπο που σχετίζεται με την εξάντληση (CD127, PD-1, TRAF1), την απόπτωση (Mcl-1, Bim) και θα αξιολογήσουν τις ιδιότητες του αποτελέσματος (συγκεκριμένος πολλαπλασιασμός αντιγόνων, παραγωγή ιντερφερόνης-; και κυτταροτοξικότητα (CD107a)). Οι αναλύσεις αυτές θα πραγματοποιούνται με κυτταρομετρία ροής. Με την τεχνική διαλογής οι συγκεκριμένες LTC-aahs απομονώνονται για να λάβουν το RNA τους και μετά την αναδρομική μεταγραφή σε cDNA, η συστάδα miR 17-92 θα ενισχυθεί. Η έκφραση της συστάδας miR 17-92 θα πραγματοποιηθεί με τον φαινότυπο της εξάντλησης και της απόπτωσης. Σε περίπτωση που παρατηρηθεί θετική χορογραφία μεταξύ αυτών των φαινοτύπων και της συστάδας miR 17-92, η συστάδα miR 17-92 με κατάλληλη αντι-miR για την αποκατάσταση της δραστικότητας συγκεκριμένων LTC-aahs θα μπλοκαριστεί in-vitro. (Greek)
18 August 2022
0 references
Målsætninger: 1) Kvantificer hyppigheden og effektorkapaciteten af specifikke cytotoksiske T-lymfocytter (TCL) mod hepatocarcinom-associerede antigener (AAH) i perifere og intrahepatiske rum hos patienter med hepatocarcinom (HC), 2) Analyse af fænotypen forbundet med udtømning og apoptose i disse celler og dens sammenhæng med ekspressionen af klynge miR 17-92, 3) Analyse af effekten af in-vitro-blok med anti-miR-klynge miR 17-92 på virkningen af specifik LTC-specifik AAH. Metode: Hos patienter med HC HLA- A2+ isoleres perifere mononukleære blodceller (CMSP) og lever (MIHC). Hyppigheden af specifikke LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) og specifik LTC-cytomegalovirus (CMV) (pp65 495-504) [Kontrolgruppe] kvantificeres ved mærkning af CMSP og HMIH med multimeriske HLA-A2/epitope-komplekser og anti-CD8-antistoffer. TAME (tetramer associeret magnetisk berigelse) vil blive anvendt til at detektere celler ofte > 10-7 sammenlignet med den samlede CMSP. Disse celler vil analysere fænotypen forbundet med udmattelse (CD127, PD-1, TRAF1), apoptose (Mcl-1, Bim) og evaluere effektorens kapacitet (specifik antigenproliferation, interferon-? produktion og cytotoksicitet (CD107a)). Disse analyser udføres ved hjælp af flowcytometri. Ved sortering teknik isoleres specifikke LTC-aaher for at opnå deres RNA, og efter retro-transkription til cDNA forstærkes miR 17-92-klyngen. Udtrykket af miR 17-92 klyngen vil blive koreoleret med fænotypen af udmattelse og apoptose. Hvis der observeres en positiv korrelation mellem disse fænotyper og miR 17-92-klyngen, blokeres miR 17-92-klyngen med passende anti-miR for at genoprette effektoraktiviteten af specifikke LTC-aahs in-vitro. (Danish)
18 August 2022
0 references
Tavoitteet: 1) Määritetään spesifisten sytotoksisten T-lymfosyyttien (TCL) esiintymistiheys ja vaikutuskyky hepatokarsinoomaan liittyviä antigeenejä (AAH) vastaan hepatokarsinoomaa (HC) sairastavien potilaiden perifeerisessä ja intrahepaatisessa osassa, 2) Analysoidaan näiden solujen vajeeseen ja apoptoosin aiheuttamaan fenotyyppiin liittyvää fenotyyppiä ja sen suhdetta klusterin miR 17–92 ilmentymiseen, 3) Analysoidaan in vitro -blokin vaikutusta anti-miR-klustereiden miR 17–92 kanssa spesifisen LTC-spesifisen AAH:n vaikutukseen. Menetelmät: HC HLA-A2±potilailla eristetään perifeerisen veren mononukleaarisolut (CMSP) ja maksa (MIHC). Spesifisen LTC-AAH:n (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) ja spesifisen LTC-sytomegaloviruksen (CMV) (pp65 495–504) [valvontaryhmä] esiintymistiheys on kvantifioitava merkitsemällä CMSP ja HMIH monimeerisillä HLA-A2/epitope-yhdisteillä ja anti-CD8-vasta-aineilla. TAME-tekniikkaa (tetrameeriin liittyvä magneettirikastus) käytetään solujen havaitsemiseen usein > 10–7 verrattuna CMSP:n kokonaismäärään. Nämä solut analysoivat uupumukseen (CD127, PD-1, TRAF1), apoptoosia (Mcl-1, Bim) liittyvää fenotyyppiä ja arvioivat vaikutuskykyjä (spesifinen antigeenien proliferaatio, interferoni? -tuotanto ja sytotoksisuus (CD107a)). Nämä analyysit tehdään virtaussytometrialla. Lajittelutekniikalla spesifiset LTC-aahit eristetään RNA:n saamiseksi, ja sen jälkeen miR 17–92 klusteri vahvistetaan cDNA: lle retrotranscriptionn jälkeen. MiR 17–92 -klusterin ilmentymä koreoloituu sammumisen ja apoptoosin fenotyypillä. Jos näiden fenotyyppien ja miR:n 17–92 klusterin välillä havaitaan positiivinen koreaatio, miR 17–92 -klusteri, jossa on sopiva anti-miR tiettyjen LTC-aahien tehon palauttamiseksi, estetään in vitro. (Finnish)
18 August 2022
0 references
Għanijiet: 1) Kwantifika l-frekwenza u l-kapaċità ta’ effettur ta’ limfoċiti-T ċitotossiċi speċifiċi (TCL) kontra antiġeni assoċjati ma’ epatokarċinoma (AAH) fil-kompartiment periferali u intraepatiku ta’ pazjenti b’epatokarċinoma (HC), 2) Analiżi tal-fenotip assoċjat ma’ tnaqqis u apoptożi f’dawn iċ-ċelloli u r-relazzjoni tiegħu mal-espressjoni ta’ cluster miR 17–92, 3) Analiżi tal-effett ta’ blokka in-vitro ma’ raggruppament miR 17–92 kontra l-miR fuq l-effett ta’ AAH speċifika għal LTC speċifiku. Metodoloġija: F’pazjenti b’HC HLA-A2+, iċ-ċelluli mononukleari tad-demm periferali (CMSP) u l-fwied (MIHC) jiġu iżolati. Il-frekwenza ta’ LTC-AAH speċifiku (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) u LTC-cytomegalovirus speċifiku (CMV) (pp65 495–504) [Grupp ta’ kontroll] għandha tiġi kkwantifikata bl-immarkar ta’ CMSP u HMIH b’kumplessi multimeriċi HLA-A2/epitope u antikorpi anti-CD8. It-teknika TAME (arrikkiment manjetiku assoċjat mat-tetramer) se tintuża biex jiġu individwati ċ-ċelloli ta’ spiss >10–7 meta mqabbla mas-CMSP totali. Dawn iċ-ċelloli ser janalizzaw il-fenotip assoċjat mal-eżawriment (CD127, PD-1, TRAF1), apoptożi (Mcl-1, Bim) u jevalwaw il-kapaċitajiet tal-effettur (proliferazzjoni speċifika tal-antiġeni, produzzjoni u ċitotossiċità tal-interferon-? (CD107a)). Dawn l-analiżi se jsiru permezz ta’ ċitometrija tal-fluss. Bit-teknika tal-issortjar LTC-aahs speċifiċi jiġu iżolati biex jiksbu l-RNA tagħhom u wara r-retrotraskrizzjoni għal cDNA, il-grupp miR 17–92 se jiġi amplifikat. L-espressjoni tar-raggruppament miR 17–92 se tiġi kkoreolata bil-fenotip ta’ eżawriment u apoptożi. F’każ li tkun osservata kororilazzjoni pożittiva bejn dawn il-fenotipi u l-grupp miR 17–92, il-grupp miR 17–92 b’anti-miR xieraq biex terġa’ tinkiseb l-attività tal-effettur ta’ LTC-aahs speċifiku jiġi mblukkat in-vitro. (Maltese)
18 August 2022
0 references
Mērķi: 1) Noteiktu citotoksisko T-limfocītu (TCL) biežumu un efektora spēju noteikt ar hepatokarcinomu saistītiem antigēniem (AAH) perifērajā un intraakapiskajā nodalījumā pacientiem ar hepatokarcinomu (HC), 2) analizēt fenotipu, kas saistīts ar izsīkumu un apoptozi šajās šūnās, un tā saistību ar miR 17–92 kopas izpausmi; 3) analizēt in vitro bloka ietekmi ar anti-miR kopu miR 17–92 uz specifiska LTC specifiska AAH ietekmi. Metodika: Pacientiem ar HC HLA-A2+ izolētas perifēro asiņu mononukleārās šūnas (CMSP) un aknas (MIHC). Specifiskā LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) un specifiskā LTC-citomegalovīrusa (CMV) (pp65 495–504) [kontroles grupa] biežumu nosaka, iezīmējot CMSP un HMIH ar multimēriskiem HLA-A2/epitope kompleksiem un anti-CD8 antivielām. TAME (ar tetramēru saistīta magnētiskā bagātināšana) metode tiks izmantota, lai noteiktu šūnas bieži > 10–7 salīdzinājumā ar kopējo CMSP. Šīs šūnas analizēs fenotipu, kas saistīts ar izsīkumu (CD127, PD-1, TRAF1), apoptozi (Mcl-1, Bim) un novērtēs efektora spējas (specifisko antigēnu proliferāciju, interferona ražošanu un citotoksicitāti (CD107a)). Šīs analīzes veic ar plūsmas citometriju. Šķirojot metodi, tiek izolētas specifiskas LTC-aahs, lai iegūtu to RNS, un pēc retrotranskripcijas uz cDNS tiks pastiprināts miR 17–92 klasteris. MiR 17–92 klastera izteiksme tiks horeolēta ar izsīkuma fenotipu un apoptozi. Ja starp šiem fenotipiem un miR 17–92 kopu novēro pozitīvu horelāciju, in vitro tiks bloķēts miR 17–92 klasteris ar atbilstošu anti-miR, lai atjaunotu specifisku LTC-aahu efektora aktivitāti. (Latvian)
18 August 2022
0 references
Ciele: 1) Kvantifikácia frekvencie a efektorovej kapacity špecifických cytotoxických T-lymfocytov (TCL) proti antigénom spojeným s hepatokarcinómom (AAH) v periférnom a intrahepatálnom priestore pacientov s hepatokarcinómom (HC), 2) Analyzujte fenotyp spojený s depléciou a apoptózou v týchto bunkách a jeho vzťah s expresiou klastra miR 17 – 92, 3) Analyzujte účinok in vitro bloku s anti-miR klastrom miR 17 – 92 na účinok špecifického AAH špecifického LTC. Metodika: U pacientov s HC HLA-A2+ sú izolované mononukleárne bunky v periférnej krvi (CMSP) a pečeň (MIHC). Frekvencia špecifických LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) a špecifického LTC-cytomegalovírusu (CMV) (pp65 495 – 504) [kontrolná skupina] sa vyčísli označením CMSP a HMIH multimerickými HLA-A2/epitopovými komplexmi a anti-CD8 protilátkami. Technika TAME (tetramérové magnetické obohacovanie) sa bude používať na detekciu buniek často > 10 – 7 v porovnaní s celkovým CMSP. Tieto bunky budú analyzovať fenotyp spojený s vyčerpaním (CD127, PD-1, TRAF1), apoptózou (Mcl-1, Bim) a vyhodnotia kapacity efektora (špecifická proliferácia antigénu, produkcia interferónu? a cytotoxicita (CD107a)). Tieto analýzy sa budú vykonávať prietokovou cytometriou. Metódou triedenia špecifické LTC-aahs sú izolované na získanie ich RNA a po retro-prepise na cDNA, bude miR 17 – 92 klaster zosilnený. Expresia klastra miR 17 – 92 bude choreolizovaná fenotypom vyčerpania a apoptózy. V prípade pozitívnej chorelácie medzi týmito fenotypmi a klastrom miR 17 – 92 sa in vitro zablokuje klaster miR 17 – 92 s vhodnou anti-miR na obnovenie efektorovej aktivity špecifických LTC-aahs. (Slovak)
18 August 2022
0 references
Cuspóirí: 1) Minicíocht agus cumas éifeachta T-lymphocytes cíteatocsaineacha ar leith (TCL) i gcoinne antigens hepatocarcinoma-bhainteach (AAH) in urrann imeallach agus intrahepatic na n-othar a bhfuil hepatocarcinoma (HC), 2) Anailís a dhéanamh ar an bhfenotype a bhaineann le hídiú agus apoptosis sna cealla seo agus a ghaol le cnuasaigh miR 17-92 a léiriú, 3) Déan anailís ar éifeacht bloc in-vitro le braisle frith-miR miR 17-92 maidir le héifeacht AAH sonrach LTC-sonrach. Modheolaíocht: In othair a bhfuil HC HLA-A2 +, cealla mononuclear fola imeallacha (CMSP) agus ae (MIHC) scoite amach. Déanfar minicíocht LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) agus LTC-cytomegalovirus (CMV) (pp65 495-504) [Grúpa Rialaithe] a chainníochtú trí CMSP agus HMIH a mharcáil le coimpléisc HLA-A2/epitope multimeric agus antasubstaintí frith-CD8. Úsáidfear teicníc TAME (teitreamadóir a bhaineann le saibhriú maighnéadach) chun cealla a bhrath go minic > 10-7 i gcomparáid leis an CMSP iomlán. Déanfaidh na cealla seo anailís ar an bhfeinitíopa a bhaineann le hídiú (CD127, PD-1, TRAF1), apoptosis (Mcl-1, Bim) agus déanfaidh siad meastóireacht ar na hacmhainneachtaí éifeachtóra (leathadh sonrach antaiginí, táirgeadh interferon-? agus cíteatocsaineacht (CD107ú)). Déanfar na hanailísí sin trí chíteaiméadracht sreafa. De réir teicníc sórtáil LTC-aahs sonracha scoite amach a fháil a RNA agus tar éis ais-tras-scríobh chuig cDNA, beidh an miR 17-92 braisle a amplified. Déanfar léiriú an bhraisle miR 17-92 a choreolated le feinitíopa ídiú agus apoptosis. I gcás ina mbreathnaítear ar chorelation dearfach idir na feinitíopaí seo agus an bhraisle miR 17-92, cuirfear bac in-vitro ar an mbraisle miR 17-92 le frith-miR iomchuí chun gníomhaíocht éifeachtach LTC-aahs ar leith a athbhunú. (Irish)
18 August 2022
0 references
Cíle: 1) Množství frekvence a efektorové kapacity specifických cytotoxických T-lymfocytů (TCL) proti antigenům spojeným s hepatokarcinomem (AAH) v periferním a intrahepatickém prostředí pacientů s hepatokarcinomem (HC), 2) Analýza fenotypu spojeného s deplecí a apoptózou v těchto buňkách a jeho vztah k expresi clusteru miR 17–92, 3) Analyzujte účinek in-vitro bloku s antimiR clusterem miR 17–92 na účinek specifického AAH specifického pro LTC. Metodika: U pacientů s HC HLA- A2+ jsou izolovány mononukleární buňky periferní krve (CMSP) a játra (MIHC). Frekvence specifických LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) a specifického LTC-cytomegaloviru (CMV) (pp65 495–504) [kontrolní skupina] musí být kvantifikována označením CMSP a HMIH multimerickými komplexy HLA-A2/epitope a anti-CD8 protilátky. Technika TAME (tetramerové magnetické obohacení) bude použita k detekci buněk často >10–7 ve srovnání s celkovým CMSP. Tyto buňky analyzují fenotyp související s vyčerpáním (CD127, PD-1, TRAF1), apoptózou (Mcl-1, Bim) a vyhodnotí kapacity efektoru (specifická proliferace antigenu, tvorba interferonu a cytotoxicita (CD107a)). Tyto analýzy budou prováděny průtokovou cytometrií. Pomocí metody třídění jsou izolovány specifické LTC-aah, aby se získaly RNA, a po retro přepisu na cDNA se cluster miR 17–92 zesiluje. Exprese klastru miR 17–92 bude choreografována fenotypem vyčerpání a apoptózy. V případě, že je pozorována pozitivní chorelace mezi těmito fenotypy a klastrem miR 17–92, bude klastr miR 17–92 s vhodným antimiR pro obnovení účinnosti specifických LTC-aahů zablokován in vitro. (Czech)
18 August 2022
0 references
Objetivos: 1) Quantificar a frequência e a capacidade efetora de linfócitos T citotóxicos específicos (TCL) contra antígenos associados ao hepatocarcinoma (AAH) no compartimento periférico e intra-hepático de pacientes com hepatocarcinoma (HC), 2) Analisar o fenótipo associado à depleção e apoptose nessas células e sua relação com a expressão do cluster miR 17-92, 3) Analisar o efeito do bloqueio in vitro com o aglomerado anti-miR miR 17-92 sobre o efeito da AAH específica para LTC. Metodologia: Em doentes com HC HLA-A2+, as células mononucleares do sangue periférico (CMSP) e o fígado (MIHC) são isolados. A frequência de LTC-AAH específicos (NY-ESO1157, MAGE-A3271, Glypican3144) e LTC-citomegalovírus específico (CMV) (pp65 495-504) [grupo de controlo] deve ser quantificada por marcação de CMSP e HMIH com complexos HLA-A2/epitope multiméricos e anticorpos anti-CD8. A técnica TAME (enriquecimento magnético associado ao tetrámero) será usada para detetar células com frequência >10-7 em comparação com o CMSP total. Estas células analisarão o fenótipo associado à exaustão (CD127, PD-1, TRAF1), apoptose (Mcl-1, Bim) e avaliarão as capacidades efetoras (proliferação específica de antígenos, produção de interferão-? e citotoxicidade (CD107a)). Essas análises serão realizadas por citometria de fluxo. Pela técnica de classificação LTC-aahs específicos são isolados para obter seu RNA e após retrotranscrição para cDNA, o aglomerado miR 17-92 será amplificado. A expressão do aglomerado miR 17-92 será coreolada com o fenótipo de exaustão e apoptose. Caso se observe uma coreação positiva entre estes fenótipos e o aglomerado miR 17-92, o aglomerado miR 17-92 com anti-miR apropriado para restaurar a atividade efetora de LTC-aahs específicos será bloqueado in-vitro. (Portuguese)
18 August 2022
0 references
Eesmärgid: 1) määrake spetsiifiliste tsütotoksiliste T-lümfotsüütide (TCL) sagedus ja toimevõime hepatokartsinoomiga seotud antigeenide (AAH) vastu hepatokartsinoomiga patsientide perifeerses ja intrahepaatilises kambris (HC); 2) Analüüsige nende rakkude ammendumisega ja apoptoosiga seotud fenotüüpi ja selle seost klastri miR 17–92 ekspressiooniga; 3) Analüüsige anti-miR klastri miR 17–92 toimet spetsiifilise LTC-spetsiifilise AAH toimele. Metoodika: HC HLA-A2+ patsientidel isoleeritakse perifeerse vere mononukleaarsed rakud (CMSP) ja maks (MIHC). Spetsiifilise LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) ja spetsiifilise LTC-tsütomegaloviiruse (CMV) (pp65 495–504) [kontrollirühm] esinemissagedus määratakse kindlaks, märgistades CMSP ja HMIH multimeersete HLA-A2/epitoopide komplekside ja CD8-vastaste antikehadega. TAME (tetrameeriga seotud magnetilise rikastamise) tehnikat kasutatakse rakkude tuvastamiseks sageli > 10–7 võrreldes kogu CMSPga. Need rakud analüüsivad ammendumisega (CD127, PD-1, TRAF1), apoptoosiga (Mcl-1, Bim) seotud fenotüüpi ning hindavad efekti võimet (spetsiifiline antigeeni proliferatsioon, interferoon? tootmine ja tsütotoksilisus (CD107a)). Need analüüsid tehakse voolutsütomeetriliselt. Sorteerimistehnika abil isoleeritakse spetsiifilised LTC-aahsid, et saada nende RNA, ja pärast retro-trascripteerimist cDNA-ks võimendatakse miR 17–92 klastrit. MiR 17–92 klastri ekspressioon koreotakse ammendumise ja apoptoosi fenotüübiga. Kui täheldatakse positiivset korrelatsiooni nende fenotüüpide ja miR 17–92 klastri vahel, blokeeritakse in-vitro miR 17–92 klaster koos sobiva anti-miR-iga, et taastada teatud LTC-aahside mõjuvõi aktiivsus. (Estonian)
18 August 2022
0 references
Célkitűzések: 1) számszerűsítse a hepatocarcinómában (HC) szenvedő betegek perifériás és intrahepatikus rekeszében a specifikus citotoxikus T-limfociták (TCL) gyakoriságát és hatáserősségét a hepatocarcinomával kapcsolatos antigénekkel (AAH) szemben, 2) elemezze az ezekben a sejtekben a deplécióval és apoptózissal összefüggő fenotípust és annak kapcsolatát a klaszter miR 17–92 expressziójával, 3) elemezze az in vitro blokk és az anti-miR klaszter miR 17–92 hatását a specifikus LTC-specifikus AAH hatásra. Módszertan: HC HLA-A2+ betegekben a perifériás vér mononukleáris sejtjei (CMSP) és máj (MIHC) izoláltak. A specifikus LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) és a specifikus LTC-cytomegalovírus (CMV) (65 495–504) [ellenőrző csoport] gyakoriságát a CMSP és HMIH multimer HLA-A2/epitope komplexekkel és anti-CD8 antitestekkel való jelölésével kell számszerűsíteni. A TAME (tetramerhez kapcsolódó mágneses dúsítás) technikát a teljes CMSP-hez képest gyakran >10–7 sejtek kimutatására használják. Ezek a sejtek elemzik a kimerültséghez (CD127, PD-1, TRAF1), apoptózishoz (Mcl-1, Bim) társuló fenotípust, és értékelik az effektor kapacitását (speciális antigénproliferáció, interferon-? termelés és citotoxicitás (CD107a)). Ezeket az elemzéseket áramlási citometriával kell elvégezni. A válogatás technikával specifikus LTC-aah-kat izolálnak, hogy megkapják az RNS-t, és a cDNS-re való retro-transcription után a miR 17–92 fürt felerősödik. A miR 17–92 klaszter kifejeződése a kimerültség és az apoptózis fenotípusával koreolálódik. Amennyiben ezek a fenotípusok és a miR 17–92 fürt között pozitív korreláció figyelhető meg, a miR 17–92 klasztert, amely megfelelő anti-miR-t tartalmaz az egyes LTC-aah-k effektor aktivitásának helyreállítására, in vitro blokkolni kell. (Hungarian)
18 August 2022
0 references
Цели: 1) Количество на честотата и ефективността на специфични цитотоксични Т-лимфоцити (TCL) срещу хепатокарцином-асоциирани антигени (AAH) в периферното и интрахепатичното отделение на пациенти с хепатокарцином (HC), 2) анализиране на фенотипа, свързан с изчерпването и апоптозата в тези клетки, и връзката му с експресията на клъстера miR 17—92, 3) Анализ на ефекта на in-vitro блок с анти-miR клъстер miR 17—92 върху ефекта на специфичния LTC-специфичен AAH. Методология: При пациенти с HC HLA-A2+ се изолират мононуклеарни клетки от периферна кръв (CMSP) и черен дроб (MIHC). Честотата на специфични LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) и специфичен LTC-цитомегаловирус (CMV) (pp65 495—504) [контролна група] се определя чрез маркиране на CMSP и HMIH с многомерни HLA-A2/епитопи и анти-CD8 антитела. Техниката TAME (свързано с тетрамер магнитно обогатяване) ще се използва за откриване на клетки често >10—7 в сравнение с общия CMSP. Тези клетки анализират фенотипа, свързан с изтощението (CD127, PD-1, TRAF1), апоптоза (Mcl-1, Bim) и оценяват капацитета на ефектора (специфична пролиферация на антигени, производство на интерферон-? и цитотоксичност (CD107a). Тези анализи се извършват чрез поточна цитометрия. Чрез техника за сортиране специфични LTC-ааи са изолирани за получаване на РНК и след ретро транскрипция на cDNA ще бъде усилен клъстерът miR 17—92. Експресията на клъстера miR 17—92 ще бъде хореолирана с фенотипа на изтощение и апоптоза. В случай, че се наблюдава положителна хорелация между тези фенотипове и клъстера miR 17—92, ще бъде блокиран in-vitro клъстерът miR 17—92 с подходящ анти-miR за възстановяване на ефективността или активността на специфични LTC-ахове. (Bulgarian)
18 August 2022
0 references
Tikslai: 1) Nustatykite specifinių citotoksinių T-limfocitų (TCL) dažnį ir efektorinę talpą su hepatokarcinoma susijusiems antigenams (AAH) hepatokarcinoma (HC) sergančių pacientų periferiniame ir intrahepatiniame skyriuje, 2) Analizuokite fenotipo, susijusio su šių ląstelių sumažėjimu ir apoptoze, ir jo ryšio su klasteriniu miR 17–92 ekspresija, 3) analizuokite in-vitro bloko poveikį anti-miR klasterių miR 17–92 poveikiui specifinio LTC specifinio AAH poveikiui. Metodika: Pacientams, sergantiems HC HLA-A2+, išskiriamos vienbranduolės periferinio kraujo ląstelės (CMSP) ir kepenys (MIHC). Specifinio LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) ir specifinio LTC-citomegaloviruso (CMV) (pp65 495–504) [Kontrolinė grupė] dažnis nustatomas pažymint CMSP ir HMIH multimeriniais HLA-A2/epitope kompleksais ir anti-CD8 antikūnais. TAME (tetramero magnetinio sodrinimo) metodas bus naudojamas aptikti ląsteles dažnai >10–7, palyginti su bendru CMSP. Šios ląstelės analizuos fenotipą, susijusį su išsekimu (CD127, PD-1, TRAF1), apoptozę (Mcl-1, Bim) ir įvertins efekto pajėgumus (specifinį antigenų proliferaciją, interferono gamybą ir citotoksiškumą (CD107a)). Šios analizės bus atliekamos taikant srauto citometriją. Rūšiuojant specifinius LTC-aahs yra izoliuoti, kad gautų jų RNR, o po retro transkripcijos į cDNA, miR 17–92 klasteris bus sustiprintas. MiR 17–92 klasterio išraiška bus choreoliuota su išsekimo ir apoptozės fenotipu. Jei tarp šių fenotipų ir miR 17–92 klasterių pastebima teigiama chorelacija, in vitro bus užblokuotas miR 17–92 klasteris su atitinkamu anti-miR, kad būtų atkurtas specifinių LTC-aahs efekto aktyvumas. (Lithuanian)
18 August 2022
0 references
Ciljevi: 1) Kvalificirati učestalost i efektornu sposobnost specifičnih citotoksičnih T-limfocita (TCL) protiv antigena povezanih s hepatokarcinomom (AAH) u perifernom i intrahepatičkom odjeljku bolesnika s hepatokarcinomom (HC), 2) analizirati fenotip povezan s osiromašenjem i apoptozom u tim stanicama i njegovu povezanost s ekspresijom klaster miR 17 – 92, 3) Analizirati učinak in-vitro bloka s anti-miR klaster miR 17 – 92 na učinak specifičnog AAH specifičnog za LTC. Metodologija: U bolesnika s HC HLA-A2+, izolirane su mononuklearne stanice periferne krvi (CMSP) i jetra (MIHC). Učestalost specifičnih LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) i specifičnog LTC-citomegalovirusa (CMV) (pp65 495 – 504) [kontrolna skupina] kvantificira se označivanjem CMSP-a i HMIH-a s multimeričkim HLA-A2/epitope kompleksima i anti-CD8 antitijelima. Tehnika TAME (magnetsko obogaćivanje povezano s tetramerom) koristit će se za otkrivanje stanica često > 10 – 7 u usporedbi s ukupnim CMSP-om. Te će stanice analizirati fenotip povezan s iscrpljenošću (CD127, PD-1, TRAF1), apoptozom (Mcl-1, Bim) i procijeniti kapacitete efektora (specifična proliferacija antigena, proizvodnja interferona-? i citotoksičnost (CD107a)). Te će se analize provoditi pomoću protočne citometrije. Sortiranjem specifični LTC-aahovi su izolirani kako bi dobili svoju RNK, a nakon retro-transcription na cDNA, miR 17 – 92 klaster će biti pojačan. Izražaj skupine MIR 17 – 92 bit će povezan s fenotipom iscrpljenosti i apoptoze. U slučaju pozitivne korelacije između tih fenotipova i skupine MR 17 – 92, skupina miR 17 – 92 s odgovarajućim anti-miR-om za vraćanje efektora određenih LTC-aaah će biti blokirana in-vitro. (Croatian)
18 August 2022
0 references
Mål: 1) Kvantifiera frekvensen och effektkapaciteten hos specifika cytotoxiska T-lymfocyter (TCL) mot hepatocarcinomassocierade antigener (AAH) i det perifera och intrahepatiska kompartmentet hos patienter med hepatocarcinom (HC), 2) Analysera fenotypen associerad med utarmning och apoptos i dessa celler och dess samband med uttrycket av kluster miR 17–92, 3) Analysera effekten av in vitro-block med anti-miR-kluster miR 17–92 på effekten av specifik LTC-specifik AAH. Metod: Hos patienter med HC HLA-A2+ isoleras perifera mononukleära blodceller (CMSP) och lever (MIHC). Frekvensen av specifika LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) och specifikt LTC-cytomegalovirus (CMV) (pp65 495–504) [kontrollgrupp] ska kvantifieras genom märkning av CMSP och HMIH med multimera HLA-A2/epitopkomplex och anti-CD8-antikroppar. TAME-tekniken (tetramer associerad magnetisk anrikning) kommer att användas för att detektera celler ofta >10–7 jämfört med den totala CMSP. Dessa celler kommer att analysera fenotypen associerad med utmattning (CD127, PD-1, TRAF1), apoptos (Mcl-1, Bim) och utvärdera effektorns kapacitet (specifik antigenproliferation, interferon-? produktion och cytotoxicitet (CD107a)). Dessa analyser kommer att utföras med flödescytometri. Genom att sortera teknik specifika LTC-aahs isoleras för att erhålla sin RNA och efter retro-transcription till cDNA, kommer miR 17–92 klustret att förstärkas. Uttrycket för klustret miR 17–92 kommer att koreolas med fenotypen av utmattning och apoptos. Om en positiv korelation observeras mellan dessa fenotyper och klustret miR 17–92 blockeras klustret miR 17–92 med lämplig anti-miR för att återställa effektoraktiviteten hos specifika LTC-aahs in vitro. (Swedish)
18 August 2022
0 references
Obiective: 1) Cuantificarea frecvenței și capacității efectoare a limfocitelor T citotoxice specifice (TCL) împotriva antigenelor asociate hepatocarcinomului (AAH) în compartimentul periferic și intrahepatic al pacienților cu hepatocarcinom (HC), 2) Analizați fenotipul asociat cu depleția și apoptoza în aceste celule și relația sa cu expresia clusterului miR 17-92, 3) Analizați efectul blocului in vitro cu cluster miR 17-92 anti-miR asupra efectului AAH specific LTC. Metodologie: La pacienții cu HC HLA-A2+, celulele mononucleare din sângele periferic (CMSP) și ficatul (MIHC) sunt izolate. Frecvența LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) și a virusului citomegalovirusului LTC specific (CMV) (pp65 495-504) [grupul de control] se cuantifică prin marcarea CMSP și HMIH cu complexe multimerice HLA-A2/epitope și anticorpi anti-CD8. Tehnica TAME (îmbogățire magnetică asociată cu tetramer) va fi utilizată pentru a detecta celulele frecvent >10-7 în comparație cu CMSP total. Aceste celule vor analiza fenotipul asociat cu epuizarea (CD127, PD-1, TRAF1), apoptoza (Mcl-1, Bim) și vor evalua capacitățile efectorului [proliferarea antigenului specific, producția de interferon? și citotoxicitatea (CD107a)]. Aceste analize vor fi efectuate prin citometrie de curgere. Prin tehnica de sortare specifice LTC-aahs sunt izolate pentru a obține ARN-ul lor și după retro-tranificare la ADNC, clusterul miR 17-92 va fi amplificat. Expresia clusterului miR 17-92 va fi corelată cu fenotipul epuizării și apoptozei. În cazul în care se observă o corelație pozitivă între aceste fenotipuri și grupul miR 17-92, grupul miR 17-92 cu anti-miR adecvat pentru a restabili activitatea efectoare a specificilor LTC-aah va fi blocat in vitro. (Romanian)
18 August 2022
0 references
Cilji: 1) Kvantificirati pogostnost in efektorsko zmogljivost specifičnih citotoksičnih T-limfocitov (TCL) proti antigenom, povezanim s hepatokarcinomom (AAH), v perifernem in intrahepatičnem predelu bolnikov s hepatokarcinomom (HC), 2) Analizirati fenotip, povezan z izčrpavanjem in apoptozo v teh celicah, in njegovo povezavo z izražanjem skupin miR 17–92, 3) Analizirati učinek in vitro bloka z miR proti miR 17–92 na učinek specifičnega AAH, specifičnega za LTC. Metodologija: Pri bolnikih s HC HLA-A2+ so izolirane mononuklearne celice periferne krvi (CMSP) in jetra (MIHC). Pogostnost specifičnega LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) in specifičnega LTC-citomegalovirusa (CMV) (pp65 495–504) [kontrolna skupina] se količinsko opredeli z označevanjem CMSP in HMIH z multimernimi kompleksi HLA-A2/epitope in protitelesi proti CD8. Tehnika TAME (povezana s tetramerom magnetne obogatitve) se bo uporabljala za odkrivanje celic pogosto > 10–7 v primerjavi s celotnim CMSP. Te celice bodo analizirale fenotip, povezan z izčrpanostjo (CD127, PD-1, TRAF1), apoptozo (Mcl-1, Bim) in ovrednotile kapacitete efektorja (specifična proliferacija antigena, proizvodnja interferona? in citotoksičnost (CD107a)). Te analize se bodo izvajale s pretočno citometrijo. S tehniko razvrščanja so specifični LTC-aahi izolirani, da dobijo RNK, in po retro-transkripciji na cDNA se bo množica miR 17–92 povečala. Izraz miR 17–92 bo koreoliran s fenotipom izčrpanosti in apoptoze. Če se med temi fenotipi in skupino miR 17–92 opazi pozitivna korelacija, bo in vitro blokiran skupek miR 17–92 z ustreznim anti-miR-om za ponovno vzpostavitev efektorne aktivnosti specifičnih LTC-aahs. (Slovenian)
18 August 2022
0 references
Cele: 1) Należy określić częstotliwość i skuteczność swoistych cytotoksycznych limfocytów T (TCL) przeciwko antygenom związanym z wątrobakiem (AAH) w przedziale obwodowym i wewnątrzwątrobowym pacjentów z wątrobakiem (HC), 2) Analizować fenotyp związany z wyczerpaniem się i apoptozą w tych komórkach i jego związek z ekspresją miR 17-92, 3) Analiza wpływu bloku in-vitro z klastrem anty-miR miR 17-92 na wpływ specyficznego AAH specyficznego dla LTC. Metodyka: U pacjentów z HC HLA-A2+ komórki jednojądrowe krwi obwodowej (CMSP) i wątroba (MIHC) są izolowane. Częstość występowania swoistych LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) i swoistych LTC-cytomegalovirus (CMV) (pp65 495-504) [grupa kontrolna] określa się ilościowo poprzez oznaczenie CMSP i HMIH za pomocą multimerycznych kompleksów HLA-A2/epitope i przeciwciał anty-CD8. Technika TAME (wzbogacenie magnetyczne związane z tetramerem) będzie wykorzystywana do wykrywania komórek często > 10-7 w porównaniu z całkowitym CMSP. Komórki te przeanalizują fenotyp związany z wyczerpaniem (CD127, PD-1, TRAF1), apoptozą (Mcl-1, Bim) i ocenią właściwości czynnika (specyficzne proliferacje antygenów, produkcja interferonu i cytotoksyczność (CD107a)). Analizy te będą wykonywane za pomocą cytometrii przepływu. Poprzez technikę sortowania specyficzne LTC-aahs są izolowane w celu uzyskania ich RNA, a po retro-trankrypcji do cDNA, klaster miR 17-92 zostanie wzmocniony. Wyrażenie klastra miR 17-92 zostanie choreolowane fenotypem wyczerpania i apoptozy. W przypadku zaobserwowania pozytywnej chorelacji pomiędzy tymi fenotypami a klasterem miR 17-92, klaster miR 17-92 z odpowiednim anty-miR w celu przywrócenia aktywności efektorowej określonych LTC-aahs zostanie zablokowany in-vitro. (Polish)
18 August 2022
0 references
Guadalajara
0 references
Identifiers
PI15_00074
0 references