Modulation of the miR 17-92 cluster as a mechanism to restore specific cytotoxic cell response to antigens associated with hepatocellular carcinoma (Q3202991): Difference between revisions
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| label / de | label / de | ||||||||||||||
Modulation des Clusters miR 17-92 als Mechanismus zur Wiederherstellung einer spezifischen zytotoxischen Zellreaktion auf Antigene im Zusammenhang mit hepatozellulärem Karzinom | |||||||||||||||
| Property / summary | |||||||||||||||
Ziele: 1) Quantifizieren Sie die Häufigkeit und Wirksamkeit bestimmter zytotoxischer T-Lymphozyten (TCL) gegen Hepatokarzinom-assoziierte Antigene (AAH) im peripheren und intrahepatischen Kompartiment von Patienten mit Hepatokarzinom (HC), 2) Analysieren Sie den Phenotyp, der mit Erschöpfung und Apoptose in diesen Zellen verbunden ist, und deren Beziehung mit der Expression von Cluster miR 17-92, 3) Analyse der Wirkung von In-vitro-Block mit AntimiR-Cluster miR 17-92 auf die Wirkung spezifischer LTC-spezifischer AAH. Methodik: Bei Patienten mit HC HLA-A2+ werden periphere mononukleare Blutzellen (CMSP) und Leber (MIHC) isoliert. Die Häufigkeit spezifischer LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) und des spezifischen LTC-Cytomegalovirus (CMV) (pp65 495-504) [Kontrollgruppe] wird durch Kennzeichnung von CMSP und HMIH mit multimeren HLA-A2/epitop-Komplexen und Anti-CD8-Antikörpern quantifiziert. Die TAME (Tetramer-assoziierte magnetische Anreicherung) wird verwendet, um Zellen häufig >10-7 im Vergleich zum gesamten CMSP zu erkennen. Diese Zellen analysieren den mit Erschöpfung verbundenen Phänotyp (CD127, PD-1, TRAF1), Apoptose (Mcl-1, Bim) und bewerten die Effektorkapazitäten (spezifische Antigenproliferation, Interferon-Produktion und Zytotoxizität (CD107a)). Diese Analysen werden mittels Durchflusszytometrie durchgeführt. Durch Sortierungstechnik werden spezifische LTC-Aahs isoliert, um ihre RNA zu erhalten, und nach der Retro-Transkription auf cDNA wird der miR 17-92-Cluster verstärkt. Der Ausdruck des Clusters miR 17-92 wird mit dem Phänotyp von Erschöpfung und Apoptose erstickt. Wird eine positive chorelation zwischen diesen Phänotypen und dem miR 17-92-Cluster beobachtet, wird der miR 17-92-Cluster mit geeigneter Anti-miR zur Wiederherstellung der Effektoraktivität bestimmter LTC-Aahs in vitro blockiert. (German) | |||||||||||||||
| Property / summary: Ziele: 1) Quantifizieren Sie die Häufigkeit und Wirksamkeit bestimmter zytotoxischer T-Lymphozyten (TCL) gegen Hepatokarzinom-assoziierte Antigene (AAH) im peripheren und intrahepatischen Kompartiment von Patienten mit Hepatokarzinom (HC), 2) Analysieren Sie den Phenotyp, der mit Erschöpfung und Apoptose in diesen Zellen verbunden ist, und deren Beziehung mit der Expression von Cluster miR 17-92, 3) Analyse der Wirkung von In-vitro-Block mit AntimiR-Cluster miR 17-92 auf die Wirkung spezifischer LTC-spezifischer AAH. Methodik: Bei Patienten mit HC HLA-A2+ werden periphere mononukleare Blutzellen (CMSP) und Leber (MIHC) isoliert. Die Häufigkeit spezifischer LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) und des spezifischen LTC-Cytomegalovirus (CMV) (pp65 495-504) [Kontrollgruppe] wird durch Kennzeichnung von CMSP und HMIH mit multimeren HLA-A2/epitop-Komplexen und Anti-CD8-Antikörpern quantifiziert. Die TAME (Tetramer-assoziierte magnetische Anreicherung) wird verwendet, um Zellen häufig >10-7 im Vergleich zum gesamten CMSP zu erkennen. Diese Zellen analysieren den mit Erschöpfung verbundenen Phänotyp (CD127, PD-1, TRAF1), Apoptose (Mcl-1, Bim) und bewerten die Effektorkapazitäten (spezifische Antigenproliferation, Interferon-Produktion und Zytotoxizität (CD107a)). Diese Analysen werden mittels Durchflusszytometrie durchgeführt. Durch Sortierungstechnik werden spezifische LTC-Aahs isoliert, um ihre RNA zu erhalten, und nach der Retro-Transkription auf cDNA wird der miR 17-92-Cluster verstärkt. Der Ausdruck des Clusters miR 17-92 wird mit dem Phänotyp von Erschöpfung und Apoptose erstickt. Wird eine positive chorelation zwischen diesen Phänotypen und dem miR 17-92-Cluster beobachtet, wird der miR 17-92-Cluster mit geeigneter Anti-miR zur Wiederherstellung der Effektoraktivität bestimmter LTC-Aahs in vitro blockiert. (German) / rank | |||||||||||||||
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| Property / summary: Ziele: 1) Quantifizieren Sie die Häufigkeit und Wirksamkeit bestimmter zytotoxischer T-Lymphozyten (TCL) gegen Hepatokarzinom-assoziierte Antigene (AAH) im peripheren und intrahepatischen Kompartiment von Patienten mit Hepatokarzinom (HC), 2) Analysieren Sie den Phenotyp, der mit Erschöpfung und Apoptose in diesen Zellen verbunden ist, und deren Beziehung mit der Expression von Cluster miR 17-92, 3) Analyse der Wirkung von In-vitro-Block mit AntimiR-Cluster miR 17-92 auf die Wirkung spezifischer LTC-spezifischer AAH. Methodik: Bei Patienten mit HC HLA-A2+ werden periphere mononukleare Blutzellen (CMSP) und Leber (MIHC) isoliert. Die Häufigkeit spezifischer LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) und des spezifischen LTC-Cytomegalovirus (CMV) (pp65 495-504) [Kontrollgruppe] wird durch Kennzeichnung von CMSP und HMIH mit multimeren HLA-A2/epitop-Komplexen und Anti-CD8-Antikörpern quantifiziert. Die TAME (Tetramer-assoziierte magnetische Anreicherung) wird verwendet, um Zellen häufig >10-7 im Vergleich zum gesamten CMSP zu erkennen. Diese Zellen analysieren den mit Erschöpfung verbundenen Phänotyp (CD127, PD-1, TRAF1), Apoptose (Mcl-1, Bim) und bewerten die Effektorkapazitäten (spezifische Antigenproliferation, Interferon-Produktion und Zytotoxizität (CD107a)). Diese Analysen werden mittels Durchflusszytometrie durchgeführt. Durch Sortierungstechnik werden spezifische LTC-Aahs isoliert, um ihre RNA zu erhalten, und nach der Retro-Transkription auf cDNA wird der miR 17-92-Cluster verstärkt. Der Ausdruck des Clusters miR 17-92 wird mit dem Phänotyp von Erschöpfung und Apoptose erstickt. Wird eine positive chorelation zwischen diesen Phänotypen und dem miR 17-92-Cluster beobachtet, wird der miR 17-92-Cluster mit geeigneter Anti-miR zur Wiederherstellung der Effektoraktivität bestimmter LTC-Aahs in vitro blockiert. (German) / qualifier | |||||||||||||||
point in time: 9 December 2021
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Revision as of 20:39, 9 December 2021
Project Q3202991 in Spain
| Language | Label | Description | Also known as |
|---|---|---|---|
| English | Modulation of the miR 17-92 cluster as a mechanism to restore specific cytotoxic cell response to antigens associated with hepatocellular carcinoma |
Project Q3202991 in Spain |
Statements
44,000.0 Euro
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55,000.0 Euro
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80.0 percent
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1 January 2016
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16 December 2018
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SECRETARIA GENERAL DEL SERVICIO DE SALUD DE CASTILLA-LA MANCHA
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40°44'24.00"N, 2°30'21.35"W
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19130
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Objetivos: 1) Cuantificar la frecuencia y capacidad efectora de linfocitos T citotóxicos (LTC) específicos contra antígenos asociados a hepatocarcinoma (AAH) en el compartimento periférico e intrahepático de pacientes con hepatocarcinoma (HC), 2) Analizar el fenotipo asociado a agotamiento y apoptosis en estas células y su relación con la expresión del cluster miR 17-92, 3) Analizar el efecto del bloqueo in-vitro con anti-miR del cluster miR 17-92 sobre la capacidad efectora de LTC específicos contra AAH. Metodología: En pacientes con HC HLA-A2+ se aislaran células mononucleares de sangre periférica (CMSP) e hígado (CMIH). Se cuantificará la frecuencia de LTC-AAH específicos (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) y LTC-citomegalovirus (CMV) específicos (pp65 495-504) [Grupo control], mediante marcaje de CMSP y CMIH con complejos multiméricos HLA-A2/epítopo y anticuerpos anti-CD8. Se utilizará la técnica TAME ( Tetramer associated magnetic enrichment ) que permite detectar células con frecuencia>10-7 respecto al total de CMSP. En estas células se analizará el fenotipo asociado a agotamiento (CD127, PD-1, TRAF1), apoptosis (Mcl-1, Bim) y se evaluarán las capacidades efectoras (proliferación antígeno específica, producción de interferón-? y citotoxicidad (CD107a)). Estos análisis se realizaran mediante citometría de flujo. Mediante técnica de sorting se aislaran LTC-AAH específicos para obtener su RNA y tras retro-transcripción a cDNA, se amplificará el cluster miR 17-92. Se corelacionará la expresión del cluster miR 17-92 con el fenotipo de agotamiento y apoptosis. En caso de observarse una corelación positiva entre estos fenotipos y el cluster miR 17-92, se bloqueará in-vitro el cluster miR 17-92 con anti-miR apropiados para restaurar la actividad efectora de los LTC-AAH específicos. (Spanish)
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Objectives: 1) Quantify the frequency and effector capacity of specific cytotoxic T-lymphocytes (TCL) against hepatocarcinoma-associated antigens (AAH) in the peripheral and intrahepatic compartment of patients with hepatocarcinoma (HC), 2) Analyse the phenotype associated with depletion and apoptosis in these cells and its relationship with the expression of cluster miR 17-92, 3) Analyse the effect of in-vitro block with anti-miR cluster miR 17-92 on the effect of specific LTC-specific AAH. Methodology: In patients with HC HLA-A2+, peripheral blood mononuclear cells (CMSP) and liver (MIHC) are isolated. The frequency of specific LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) and specific LTC-cytomegalovirus (CMV) (pp65 495-504) [Control group] shall be quantified by marking of CMSP and HMIH with multimeric HLA-A2/epitope complexes and anti-CD8 antibodies. The TAME (Tetramer associated magnetic enrichment) technique will be used to detect cells frequently >10-7 compared to the total CMSP. These cells will analyse the phenotype associated with exhaustion (CD127, PD-1, TRAF1), apoptosis (Mcl-1, Bim) and evaluate the effector capacities (specific antigen proliferation, interferon-? production and cytotoxicity (CD107a)). These analyses will be performed by flow cytometry. By sorting technique specific LTC-AAHs are isolated to obtain their RNA and after retro-transcription to cDNA, the miR 17-92 cluster will be amplified. The expression of the miR 17-92 cluster will be choreolated with the phenotype of exhaustion and apoptosis. In case a positive chorelation is observed between these phenotypes and the miR 17-92 cluster, the miR 17-92 cluster with appropriate anti-miR to restore effector activity of specific LTC-AAHs will be blocked in-vitro. (English)
13 October 2021
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Objectifs: 1) Quantifier la fréquence et la capacité effectrice des lymphocytes T cytotoxiques spécifiques (TCL) contre les antigènes associés à l’hépatocarcinome (AAH) dans le compartiment périphérique et intra-hépatique des patients atteints d’hépatocarcinome (HC), 2) Analyser le phénotype associé à la déplétion et à l’apoptose dans ces cellules et sa relation avec l’expression du cluster miR 17-92, 3) Analyser l’effet du bloc in vitro avec un cluster anti-miR miR 17-92 sur l’effet d’AHAH spécifique au LTC. Méthodologie: Chez les patients atteints de HC HLA-A2+, les cellules mononucléaires du sang périphérique (CMSP) et le foie (MIHC) sont isolés. La fréquence des LTC-AAH spécifiques (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) et des LTC-cytomegalovirus spécifiques (CMV) (pp65 495-504) [groupe de contrôle] doit être quantifiée par marquage du CMSP et du HMIH avec des complexes multimériques HLA-A2/épitope et des anticorps anti-CD8. La technique TAME (enrichissement magnétique associé au tétramère) sera utilisée pour détecter les cellules fréquemment >10-7 par rapport au CMSP total. Ces cellules analyseront le phénotype associé à l’épuisement (CD127, PD-1, TRAF1), à l’apoptose (Mcl-1, Bim) et évalueront les capacités effectrices (prolifération spécifique des antigènes, production d’interféron-? et cytotoxicité (CD107a)). Ces analyses seront effectuées par cytométrie de flux. Par la technique de tri, des LTC-aahs spécifiques sont isolés pour obtenir leur ARN et après la rétrotranscription vers l’ADNc, la grappe miR 17-92 sera amplifiée. L’expression de l’amas miR 17-92 sera choréolée par le phénotype de l’épuisement et de l’apoptose. Dans le cas où une chorélation positive est observée entre ces phénotypes et le groupe miR 17-92, le groupe miR 17-92 avec anti-miR approprié pour restaurer l’activité effectrice de certains LTC-aahs sera bloqué in-vitro. (French)
5 December 2021
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Ziele: 1) Quantifizieren Sie die Häufigkeit und Wirksamkeit bestimmter zytotoxischer T-Lymphozyten (TCL) gegen Hepatokarzinom-assoziierte Antigene (AAH) im peripheren und intrahepatischen Kompartiment von Patienten mit Hepatokarzinom (HC), 2) Analysieren Sie den Phenotyp, der mit Erschöpfung und Apoptose in diesen Zellen verbunden ist, und deren Beziehung mit der Expression von Cluster miR 17-92, 3) Analyse der Wirkung von In-vitro-Block mit AntimiR-Cluster miR 17-92 auf die Wirkung spezifischer LTC-spezifischer AAH. Methodik: Bei Patienten mit HC HLA-A2+ werden periphere mononukleare Blutzellen (CMSP) und Leber (MIHC) isoliert. Die Häufigkeit spezifischer LTC-AAH (NY-ESO-1157, MAGE-A3271, Glypican3144) und des spezifischen LTC-Cytomegalovirus (CMV) (pp65 495-504) [Kontrollgruppe] wird durch Kennzeichnung von CMSP und HMIH mit multimeren HLA-A2/epitop-Komplexen und Anti-CD8-Antikörpern quantifiziert. Die TAME (Tetramer-assoziierte magnetische Anreicherung) wird verwendet, um Zellen häufig >10-7 im Vergleich zum gesamten CMSP zu erkennen. Diese Zellen analysieren den mit Erschöpfung verbundenen Phänotyp (CD127, PD-1, TRAF1), Apoptose (Mcl-1, Bim) und bewerten die Effektorkapazitäten (spezifische Antigenproliferation, Interferon-Produktion und Zytotoxizität (CD107a)). Diese Analysen werden mittels Durchflusszytometrie durchgeführt. Durch Sortierungstechnik werden spezifische LTC-Aahs isoliert, um ihre RNA zu erhalten, und nach der Retro-Transkription auf cDNA wird der miR 17-92-Cluster verstärkt. Der Ausdruck des Clusters miR 17-92 wird mit dem Phänotyp von Erschöpfung und Apoptose erstickt. Wird eine positive chorelation zwischen diesen Phänotypen und dem miR 17-92-Cluster beobachtet, wird der miR 17-92-Cluster mit geeigneter Anti-miR zur Wiederherstellung der Effektoraktivität bestimmter LTC-Aahs in vitro blockiert. (German)
9 December 2021
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Guadalajara
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Identifiers
PI15_00074
0 references